MAPK8基因在小鼠源性3T3-Ll脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化

[目的]观察小鼠源性3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中MAPK8基因表达水平的变化,探讨MAPK8基因与肥胖发生之间的关系.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的不同时段,采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中MAPK8基因的mRNA表达水平.[结果]MAPK8基因高表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐下调.MAPK8基因表达水平除在诱导分化前至第4 d、第2～5 d、第6～10 d时段内差异无显著性外,其余各时段间差异均有显著性(P＜0.05).[结论]MAPK8基因与肥胖发生有关,在3T3-L1细胞分化过程中表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚.     

人类肥胖相关新基因LYRMl在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化

[目的] 观察LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中表达水平的变化. [方法] 体外培养人前体脂肪细胞,采用RT-PCR及Western-Blot技术检测LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化不同阶段(前体脂肪细胞;0、2、6、12 d)核酸及蛋白水平的表达变化. [结果] LYRM1基因在分化第2 d(Day2)时核酸及蛋白表达水平均明显上调,与各时段的表达水平差异有显著性(P<0.01),其余各组之间差异无显著性(P>0.05). [结论] 初步揭示了LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化趋势.     

短链脂肪酸通过ANGPTL4、ANGPTL6分子抑制3T3-L1前脂肪细胞分化成熟及脂肪储存

目的研究短链脂肪酸(short chain fatty acids, SCFAs)是否直接影响3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟及脂肪储存,以及该过程中血管生成素样蛋白4(angioprotein-likeprotein4,ANGPTL4)和血管生成素样蛋白6(angioprotein-likeprotein6,ANGPTL6)分子mRNA和蛋白的表达变化,探讨SCFAs与脂肪细胞成熟及脂肪储存过程中ANGPTL4和ANGPTL6表达的相互关系。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,光镜及油红O染色观察SCFAs(乙酸或丙酸)干预对脂肪细胞分化成熟及脂滴形成的影响;并在诱导过程中(第0、4、8、12日)分别采用Real-time PCR和Western blot检测ANGPTL4、ANGPTL6的mRNA和蛋白表达水平。si-RNA转染技术检测是否ANGPTL4参与了乙酸和丙酸对脂肪细胞分化成熟的作用。结果光镜及油红O染色显示2 mmol/L乙酸或4 mmol/L丙酸干预明显抑制3T3-L1细胞的分化成熟及脂滴形成;在3T3-L1细胞分化成熟过程中,ANGPTL4、ANGPTL6的mRNA及蛋白表达随细胞成熟逐步下调;乙酸和丙酸处理组,细胞第8日和12日时ANGPTL4及ANGPTL6 mRNA水平及蛋白水平较对照组均显著升高(P<0.05)。ANGPTL4 si-RNA转染削弱了乙酸及丙酸对前脂肪细胞分化成熟的抑制。结论乙酸和丙酸能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟及脂肪储存,其机制可能经由ANGPTL4及ANGPTL6介导。[营养学报,2020,42(1):49-55,67]     

游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA表达的影响

目的 观察游离脂肪酸对3T3-L1细胞分化及insig2 mRNA基因表达的影响,进一步了解影响3T3-L1细胞分化成熟及insig2表达的因素,探讨insig2基因在脂肪细胞分化与代谢中的作用.方法 将3T3-L1细胞分为高脂组与对照组,分别置于低糖高脂与低糖环境中分化培养12 d,油红O染色计算染色阳性细胞面积,RT-PCR法测定insig2、ap2 mRNA的表达.结果 分化培养12 d后,油红O染色显示两组细胞均得到明显分化,但高脂组油红O染色阳性细胞面积较对照组明显升高(P<0.05).分化后,两组细胞ap2、insig2表达水平均较分化前明显升高(P>0.05),且高脂组较对照组上调明显(P<0.05). 结论 游离脂肪酸可促进3T3-L1细胞分化成熟与insig2表达;insig2在细胞内的表达水平可能与脂肪细胞成熟及分化程度相关.     

辛伐他汀对人骨髓基质细胞成骨、成脂分化的作用及其机制

[目的]研究辛伐他汀对体外培养的成人骨髓基质细胞成骨分化和成脂分化的影响,并探讨其作用机制。[方法]分离健康成人骨髓基质细胞进行培养,传代后骨分化诱导组和脂肪分化诱导组分别添加10-7mol/L的辛伐他汀,同时进行空白对照。实时荧光定量PCR检测转录因子Cbfa1在成骨细胞中的分化,PPARγ2和LPL在脂肪细胞分化过程中的表达;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测成骨细胞ALP比活性;流式细胞仪、油红O(oilredO)染色检测细胞成脂分化能力。[结果]骨分化诱导组Cbfa1表达(P﹤0.01)、ALP比活性(P﹤0.05)均高于对照组,脂肪分化诱导组PPARγ2(P﹤0.01)、LPL(P﹤0.05)表达均低于对照组;流式细胞仪脂肪细胞计数及脂肪细胞形成脂滴能力实验组均低于对照组。[结论]10-7mol/L辛伐他汀能促进Cbfa1的表达,增强成骨细胞ALP比活性和细胞外基质矿化;抑制PPARγ2、LPL的表达及脂肪细胞分化。     

3T3-L1细胞分化过程中线粒体含量和葡萄糖摄取的动态变化

目的对分化过程3T3-L1细胞脂质含量、线粒体含量及细胞对葡萄糖的摄取进行动态观察,为选择适宜分化时点的脂肪细胞进行肥胖研究提供有力证据。方法经典鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。分别于分化的第0、2、4、6、8、10、12日,对细胞进行油红O染色,分光光度法检测细胞内脂质含量;Mito-Tracker Green探针法检测分化过程中线粒体含量变化;2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,34羟氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)染色法直接观察细胞对葡萄糖摄取,葡萄糖氧化酶法测定培养基葡萄糖含量间接评价脂肪细胞对葡萄糖的摄取。结果 3T3-L1前脂肪细胞在分化第10日,镜下观察即有90%以上的细胞内可见大量脂滴呈"戒环样"分布。分化过程中3T3-L1细胞内脂质含量逐渐升高,线粒体含量逐渐增加,葡萄糖摄取逐步增强,至第10日趋于稳定。结论对于从成熟脂肪细胞的角度进行肥胖及其相关疾病的研究,选择分化第10日的3T3-L1脂肪细胞比较合理。     

TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达的影响

[目的]观察TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达水平以及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率的影响.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,应用不同浓度(10、25、50 ng/mL)重组TNF-α干预成熟脂肪细胞16 h,或以10 ng/mL重组TNF-α分别干预24、48、72 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测TNF-α干预后3T3-L1脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平;另外,采用[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测TNF-α干预24、48、72h后成熟脂肪细胞葡萄糖摄取率.[结果]1)不同浓度TNF-α均能显著上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达(P均<0.001),在0～25 ng/mL浓度范围内呈现浓度依赖性,随TNF-α干预浓度增高,NYGGF4小鼠同源基因的表达水平逐渐升高;2)TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因的表达调节具时间反应性,呈现随干预时间延长该基因表达逐渐上调的特征,10 ng/mL TNF-α干预人成熟脂肪细胞24 hNYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平即显著上调(P<0.001);3)TNF-α干预48 h,3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率与未干预组比较下降50%以上,干预72 h,胰岛素刺激的葡萄糖摄取受到进一步抑制.[结论]TNF-α可以上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因[目的]表达,抑制3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取.     

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。     

基因Ercc6l在P19胚胎癌细胞内的表达研究

[目的]探讨基因Ercc6l(excision repair cross-complementing rodent repair deficiency,complementation group6-like)在P19胚胎癌细胞分化过程中的表达情况。[方法]用二甲亚砜(DMSO)和视黄酸(RA)分别诱导P19细胞向心肌细胞方向和神经细胞方向分化,RT-PCR检测P19细胞诱导分化过程中Ercc6l mRNA的表达变化。[结果]RT-PCR检测表明,基因Ercc6l在未分化的P19细胞中不表达,但当P19细胞诱导分化为心肌细胞或神经细胞后,Ercc6l表达显著上调。[结论]Ercc6l在调控胚胎细胞分化和胚胎发育过程中具有重要作用。     

白介素-6和吡格列酮对脂肪因子URB表达的调控

目的探讨3T3-L1前脂肪细胞分化过程中新基因URB[(upregulated in bombesin receptor subtype-3(BRS-3)-deficient mice,缺乏铃蟾肽受体亚型3小鼠上调因子)的表达情况,以及在不同时点白介素-6(Interleukin-6,IL-6),吡格列酮(Pioglitazone,PIO)对其调节的作用。方法以不同浓度IL-6和PIO于各时段处理3T3-L1细胞,利用实时定量RT-PCR技术检测各条件下URB mRNA水平。同时油红O染色鉴定脂滴形成。结果(1)在正常分化过程中,URB mRNA和脂联素mRNA水平都是逐渐升高的。(2)IL-6对分化过程及分化成熟后脂肪细胞中URB基因的表达均具抑制作用,且呈剂量依赖性。(3)PIO能促进成熟后脂肪细胞的URB的表达,并改善IL-6的抑制作用。结论URB可能是影响能量代谢的一个重要脂肪因子和潜在的药理学靶位。     

3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的临床诊治及3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶基因新突变分析

目的探讨3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的主要临床表现、生化特点及3-羟基-3-甲基戊二酰裂解酶(HMGCL)基因突变检测结果。 方法收集2014年12月7日于北京大学第一医院儿科就诊的1例3-羟基-3-甲基戊二酸尿症患儿的临床病历资料为研究对象。采用回顾性研究方法分析该患儿的入院查体及辅助检查结果、诊疗情况;对患儿及父母进行HMGCL基因检测,并于患儿出院后6个月,对其进行随访。本研究遵循的程序符合北京大学第一医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,对患儿及其父母进行基因检测均获得受试对象及受试对象监护人的知情同意。 结果患儿年龄为1岁1个月,男性。因"不明原因腹泻、呕吐,反复呕血,发热2 d,昏迷3 h"收入本院。入院查体及辅助检查结果示：白细胞计数升高、肝功能损害、电解质紊乱、低血糖、凝血功能异常、低蛋白、血氨水平高、代谢性酸中毒;头颅MRI检查结果示：双侧侧脑室旁及双侧额颞顶皮层下异常信号。确诊为3-羟基-3-甲基戊二酸尿症。经限制蛋白质摄入,静脉滴注葡萄糖和左旋肉碱治疗后症状缓解。该患儿HMGCL基因c.509G >T(鸟嘌呤>胸腺嘧啶)发生点突变,c.348＋1G > C(鸟嘌呤>胞嘧啶)发生剪切位点突变,导致外显子拼接错误,其中c.509G >T是来自母亲的杂合突变,c.348＋1G > C是患儿新出现纯合突变,c.348＋1G > C剪切位点突变,导致第170位的半胱氨酸剪切突变为苯丙氨酸。出院后6个月后随访结果示：患儿年龄为1岁7个月,智力运动发育稍落后,但无明显倒退,无抽搐发作,全身情况良好,各项生化指标及尿3-羟基-3-甲基戊二酸水平降低。 结论3-羟基-3-甲基戊二酸尿症系少见的常染色体隐性遗传疾病,通过HMGCL基因检测及HMGCL基因分析不仅有助于诊断该病,对于指导家系遗传咨询及产前诊断亦至关重要。     

三维CT血管造影联合三维数字减影血管造影在颅内动脉瘤的临床应用研究

目的：研究联合应用三维CT血管造影(CTA)及三维数字减影血管造影(DSA)在颅内动脉瘤的诊断及治疗中的临床应用价值。方法：将27例高度怀疑颅内动脉瘤患者的三维CTA及三维DSA检查结果与外科手术治疗的最终结果进行对比,评价三维CTA及三维DSA在动脉瘤的检出率、三维形态与空间关系的显示能力。探讨联合应用三维CTA及三维DSA在颅内动脉瘤的诊断及治疗价值。结果：在27例疑似患者中有25例经外科手术治疗证实为动脉瘤,发现动脉瘤28个。三维CTA及三维DSA动脉瘤检出率上差异无统计学意义(x2=0.037,P＞0.05)。三维CTA对检出的动脉瘤可准确清楚地显示其三维形态及与周围颅骨的空间关系,三维DSA对颅内动脉瘤和动脉瘤的瘤颈、瘤体及动脉瘤与载瘤动脉关系显示清楚、准确。结论：在颅内动脉瘤影像学诊断上,三维CTA和三维DSA各有优势,两种检查方法互补可提高动脉瘤的检出率。联合应用三维CTA及三维DSA可为手术设计提供参考依据。     

Interferon-γ inductive effect of liposomes as an immunoadjuvant

Adjuvant effect of liposomes was compared to that of aluminium hydroxide (Alum) using ovalbumin (OVA) as a model antigen, and the difference in adjuvanticity of liposomes from Alum has been evaluated on the basis of cytokine production. Both adjuvants enhanced the IgG levels, but a remarkable difference was observed in the production of IgG subclass; Alum enhanced IgG1 levels, and liposomes enhanced IgG2a, IG2b, and IG3 levels. Further, Alum enhanced antigen-specific IgE levels, whereas liposomes did not. To clarify the difference in adjuvant effect of these adjuvants, secretion of cytokines, especially interferon-γ (IFN-γ) and interleukin-4 (IL-4) which regulate IgE production, was estimated ex vivo. Overnight culture of splenic cells obtained from mice immunized with liposomes encapsulating OVA elicits IFN-γ secretion, but not IL-4 secretion. On the other hand, the production of both cytokines was elevated by the immunization with OVA-Alum complex. The results indicate that the difference of adjuvant activity between liposomes and Alum may come from the difference in the secretion of IL-4 and that, consequently, a different class of antibody response is developed. More importantly, negatively charged liposomes containing phosphatidylserine remarkably promoted IFN-γ secretion compared to neutral liposomes.     

互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞的急性毒性作用

目的研究互隔交链孢酚(AOH)对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3的急性毒性作用。方法将对数生长期的NIH/3T3细胞分为10、50μmol/L AOH处理组和溶剂对照组,观察染毒细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究细胞存活率,采用彗星实验观察细胞的DNA损伤程度,利用流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响。结果细胞处理后,出现明显的细胞形态学变化。MTT结果表明,10、50μmol/L AOH处理组细胞抑制率(分别为19.88%,32.47%)显著高于溶剂对照组(P<0.05)。10、50μmol/L AOH组在彗星实验中细胞拖尾率为35.87%和71.83%,尾部DNA含量为(36.18±18.6)和(51.3±21.6),显著高于溶剂对照组的拖尾率(14.78%)和尾部DNA含量(21.29±15.60)(P<0.05);10μmol/L AOH处理组对NIH/3T3细胞周期影响不明显,而50μmol/L AOH处理组引起S期增高和明显的G2/M期阻滞(P<0.05)。结论AOH可诱导NIH/3T3细胞的DNA损伤、抑制细胞增殖,并诱导G2/M期细胞阻滞。     

门诊处方质控3+3+3+1及三级质控模式

南海区第四人民医院采用3+3+3+1模式,以固定的组织机构,明确的个人承担责任范畴,健全的层级管理关系,对发生在该院门诊电子处方实行实时监测、召回修改;随机抽检、重点监控;院级评估、诫勉奖惩的三级防控。不合理用药处方率下降,处方合格率上升。监管到位,措施落实,为实施《广东省阳光用药的通知》提供了切实可行办法。     

用NIH3T3细胞转化试验对松花江江水潜在致癌性的研究

为探讨松花江江水潜在致癌性，检测了哈尔滨市上游１５ｋｍ处江水对ＮＩＨ３ＴＨ３细胞的恶性转化作用。试验结果表明：乙醚提取各剂量均对细胞有一定毒性，能诱发典型的细胞转化灶，其转化率呈现剂量－效应关系。提示，该江水具有潜在致癌作用。     

Women's Health Medicine 3:3 (May-June 2006) Self-appraisal Women and the ovary

Women and the ovary: self-appraisal     

BALB／c－3T3细胞的体外微核试验

利用已建立的ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３哺乳类细胞株，对苯并（ａ）芘、环磷酰胺、２－氨基蒽、２．硝基芴、亚硝化煤尘提取物和纸烟烟雾凝聚物，用微核试验作了遗传毒性的测试。结果表明：ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞能活化某些前诱变物和前致癌物。看来ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞微核试验，不需加外源性活化系统，作为体外遗传毒性测试系统十分有用。ｐ＜０．０１，以下同。表２环磷酰胺诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞微核试验结果表３２－氨基蒽和２－硝基芴诱发ＲＡＬＲ／Ｃ－３Ｔ３细胞微核试验结果处理时间为４８ｈ表４亚硝化煤尘和纸烟烟雾提取物诱发ＢＡＴＢ／Ｃ３Ｔ３细胞微核试验结果煤尘组浓度以原有煤尘量表示。５０μｌ纸烟烟雾凝聚物贮备液加入１０ｍｌ培养液。１，２和４支／ｍｌ相当于每平皿加入１／２０，１／１０和１／５支烟的烟雾，处理时间均为４８ｈ。三、讨论细胞中微核的形成是罕见的细胞遗传学现象。体内微核试验中，微核细胞分布呈负二项或泊松分布［１１］。但是，体外微核试验中微核细胞的分布情况尚无报道。根据我们溶剂对照组的资料，大多数实验中均数大于方差，故在这些体外试验中微核细胞的分布似乎并不服从于负二项或泊松分布。为了确定准确的分布类型还需要更多的实验资料。     

一种扇形扫描三维超声成像系统三维重建方法

三维超声成像技术恢复了二维超声图像成像过程中丢弃的空间位置信息,提供了比二维超声图像更为丰富的临床诊断信息,已广泛应用于临床诊断领域.本文介绍了基于一维换能器阵列的超声三维重建过程,针对扇形扫描三维超声成像系统提出了一种减少三维重建环节的处理方法.     

甲基丙烯酸环氧丙酯对BALB/c 3T3细胞恶性转化的实验研究

利用建立的 BALB/c 3T3细胞转化系统进行甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)的细胞转化和裸鼠诱癌的实验研究。实验结果表明:GMA 可诱导 BALB/c 3T3细胞形态转化,并呈剂量-反应关系;从转化灶分离扩增细胞,经电镜扫描观察到转化细胞表面形态改变,可被植物凝集素 ConA凝集,并在半固体琼脂生长,在同品系裸鼠皮下形成了肿瘤,病理组织检查结果为分化程度较低的纤维肉瘤。GMA 有很强的诱导细胞恶性转化的能力,提示 GMA 有潜在的致癌危险性。