脂质体介导的^99mTc标记c—myc mRNA反义寡聚核苷酸链的生物学特性研究

目的：探索脂质体介导的^99mTc标记c-myc mRNA反义寡核苷酸链的生物学特性。方法：合成15bp的c-myc mRNA的反应，正义和无义寡核苷酸链，用三氯乙酸沉淀测定脂质体包裹的99mTc标的上述寡核苷酸链（简称为99mTc-DNA)和未用脂质体包裹的99mTc-DNA的血浆蛋白结合率。用BALB/c小鼠研究不同脂质体包裹的99Tc-DNA的生物学分布，用家兔研究脂质体介导的99mTc-DNA的药代动力学特性。结果：99mTc-DNA血浆蛋白结合率的范围为34．81％－70．53％，脂质体介导的99mTc-DNA的体内分布以网状内皮系统最高，胃，血和肠道其次，其余组织中放射性分 布较少，其药代动力学曲线符合开放二室模型，t1/2a约为2－5分钟，t1/2β约为100－150分钟，血浆清除率小于2ml/min，结论：99mTc-DNA的曲浆蛋白结合率高，脂质体介导的99mTc-DNA具有合适的生物半衰期，血浆清除块，是一种有开发潜力的放射性药物。     

脂质体介导的99mTc标记c-myc mRNA反义寡聚核苷酸链的生物学特性研究

目的　探索脂质体介导的 99m Tc标记 c- myc m RNA反义寡核苷酸链的生物学特性。方法　合成15 bp的 c- myc m RNA的反义、正义和无义寡核苷酸链 ,用三氯乙酸沉淀测定脂质体包裹的 99m Tc标记的上述寡核苷酸链 (简称为 99m Tc- DNA)和未用脂质体包裹的 99m Tc- DNA的血浆蛋白结合率。用 BAL B/ c小鼠研究不同脂质体包裹的 99m Tc- DNA的生物学分布。用家兔研究脂质体介导的 99m Tc- DNA的药代动力学特性。结果　 99m Tc- DNA的血浆蛋白结合率的范围为 34.81%～ 70 .5 3%。脂质体介导的 99m Tc- DNA的体内分布以网状内皮系统最高 ,胃、血和肠道其次 ,其余组织中放射性分布较少。其药代动力学曲线符合开放二室模型 ,t1 / 2α约为 2～ 5分钟 ,t1 / 2β约为 10 0～15 0分钟 ,血浆清除率小于 2 ml/ min。结论　 99m Tc- DNA的血浆蛋白结合率高 ,脂质体介导的 99m Tc- DNA具有合适的生物半衰期 ,血浆清除快 ,是一种有开发潜力的放射性药物     

脂质体介导的99mTc标记c-myc mRNA反义寡核苷酸的反义作用效果的研究

目的探讨脂质体介导的99mTc标记癌基因c-myc mRNA的反义寡核苷酸能否抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表达.方法合成15 bp的癌基因c-myc mRNA的反义、正义及无义寡核苷酸,用99mTc标记后(简称99mTc-DNA),一部分用脂质体包裹,以不同放射性强度的99mTc-DNA及脂质体包裹的99mTc-DNA转染细胞,于转染后不同时间测定细胞摄取率,在转染后18 h测定细胞返流比率,用四唑盐比色实验检测反义抑制细胞的生长状况,用流式细胞术测定癌蛋白的表达.结果在1～5 h内,细胞的摄取率随时间的延长而增加,脂质体包裹的99mTc-DNA的细胞摄取率明显高于未用脂质体包裹的99mTc-DNA.四唑盐比色实验,随着脂质体介导的99mTc-反义DNA剂量的增加,细胞数量逐渐减少,而正义、无义寡聚核苷酸组,细胞数量则没有减少的趋势.细胞的返流比率,反义、正义、无义寡核苷酸分别为39.51%、44.12%、63.92%.测定癌蛋白的荧光强度,反义寡核苷酸组2.9860±0.3733、正义寡核苷酸组4.2600±0.2218、无义寡核苷酸组5.2620±0.8562,反义寡聚核苷酸组的荧光强度明显低于正义和无义寡聚核苷酸组.结论脂质体介导的99mTc标记的反义寡核苷酸能抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表达.     

放射性碘标记反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究

目的:探讨用放射性碘标记的框架区(framework region mRNA,FR)mRNA反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)作为B细胞淋巴瘤反义显像剂及反义治疗药物的可能性.方法:通过氯胺-T法用碘[125Ⅰ]与碘[131Ⅰ]标记含酪胺的18聚体寡核苷酸获得125Ⅰ-或131Ⅰ-FR-ASON,建立荷人淋巴瘤裸鼠动物模型.将148 kBq125Ⅰ-FR-ASON(2～3μg)经尾静脉注入正常小鼠,于不同时间处死小鼠,测定不同组织及标准源的放射性计数.荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体包裹的3.33 MBq131Ⅰ-FR-ASON(7～9μg),分别于注射后不同时间进行单光子发射计算机断层(single photon emission computer tomography,SPECT)显像,以脂质体包裹的正义寡核苷酸作为对照,24 h显像后处死裸鼠,取出血液、重要器官和肿瘤组织,测定各组织的放射性计数,并计算每克组织摄取率及肿瘤与非肿瘤组织放射性摄取比值(T/NT).结果:125Ⅰ-FR-ASON注入正常小鼠体内后1 h,各脏器的放射性摄取达高峰,24 h基本清除.肝、胃和肠放射性分布最高,骨、肌肉、脑中放射性分布较少.荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体包裹的131Ⅰ标记ASON后立即用SPECT成像仅见肿瘤部位,1和2 h成像可见示踪剂从肿瘤到腹腔,24 h仍可见肿瘤显像.比较24 h反义组与正义组肿瘤的每克组织摄取率、T/NT均有显著性差异.结论:放射性碘标记ASON对淋巴瘤组织有很强的特异性,有望用于淋巴瘤反义显像和反义治疗的研究.     

脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式和生物学效应

bcl- 2基因是重要的抗凋亡和耐药基因 ,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用 bcl- 2反义核酸有望抑制bcl- 2基因的表达 ,促进细胞凋亡 ,提高肿瘤对化疗的敏感性。　目的　应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术 ,建立 HL6 0细胞摄入荧光素标记的 bcl- 2寡核苷酸的动力学模式 ,研究脂质体介导下 bcl- 2反义核酸对 HL6 0细胞的生物学效应 ,初步探讨脂质体的生物学作用。　方法　应用荧光素标记的寡核苷酸 ,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成 ,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和 bcl-2蛋白的表达 ,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布 ,3H-Td R掺入法和 MTT法检测 HL6 0细胞的生长 ,RT- PCR法检测细胞内 bcl- 2 m RNA的表达水平。　结果　 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时 ,两者可形成复合物。(2 )脂质体介导转染法显著提高 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入 ,当脂质体与寡核苷酸的质量比 (μg/ μg)为 2 .0 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的 40倍 ,而且 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关 ,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。 (2 )细胞内的寡核苷酸可向胞外转运 ,脂质体介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1 /2 约为 4h,     

99mTc标记法测定注射用脂质体包裹神经生长因子血药浓度及其药代动力学初步分析

目的　初步研究自制注射用脂质体包裹神经生长因子 (NGF)针在小鼠体内血药浓度及药代动力学。方法　将NGF用99mTc标记 ,利用同位素示踪法和SDS -PAGE电泳法测得NGF含量与放射性计数的线性关系 ,标记后的NGF用脂质体包裹后 ,静脉注射至小鼠体内 ,通过上述检测方法得到不同时段血浆中微量NGF浓度 ,使用 3P97软件分析药代动力学参数并初步分析组织分布。结果与结论　脂质体包裹99mTc -NGF针静脉注射后的小鼠体内代谢符合二隔室分布模型 ;按剂量 83 .5 μg/kg静脉注射后 ,测得t1 / 2α=0 .2 19h、t1 / 2 β=4.43h、AUC =182 .92 4ng·h·ml-1 。     

核素示踪反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究

目的研究^125I标记反义寡核苷酸在正常小鼠内的生物分布,比较脂质体介导^131I标记正义及反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠体内的显像,以探讨核素标记的AS0N作为反义显像剂及反义治疗药物的可能性。方法通过氯胺-T法进行^125I与^131I标记含酪胺的18聚体寡核苷酸,制作荷瘤裸鼠模型,将148kBq ^125I标记反义寡核苷酸（2μg～3μg）,尾静脉注入正常小鼠,于不同时间处死小鼠,测定不同组织及标准源的放射性计数。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导335MBq^131I标记反义寡核苷酸（7μg～9μg）,分别与注射后不同时间进行SPECT显像,以脂质体介导正义寡核苷酸作为对照,24h显像后处死全部裸鼠,取出血液、重要器官和肿瘤组织,测定各组织的放射性计数,并记算肿瘤与非肿瘤组织（T／NT）比值。结果^125I标记反义寡核苷酸注入正常小鼠体内后1h,各脏器达高峰,24h基本清除。肝、胃和肠放射性分布最高,骨、肌肉、脑中放射性分布较少。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导的^131I标记反义寡核苷酸后立即用SPEcT成像仅见肿瘤部位,1、2h成像可见示踪剂从肿瘤到腹腔,24h仍见肿瘤显像。比较24h正义组与反义组肿瘤的％1D／g、肿瘤／血液、肿瘤／肌肉,差异有统计学意义。结论^131标记AS0N对淋巴瘤肿瘤组织有很强的特异性,可用于淋巴瘤反义显像和反义治疗的研究,但仍需进行大量的临床应用前研究。     

荷乳腺癌小鼠c-myc mRNA反义寡核苷酸显像研究

目的 建立99mTc标记寡核苷酸的方法并用于荷乳腺癌小鼠反义寡核苷酸显像研究.方法 利用双功能螯合剂N-羟基琥珀酰亚胺-巯乙苷肽(S-Acetyl-NHS-MAG3)对一段15碱基c-myc mRNA反义寡核苷酸片段进行99mTc标记;对荷乳腺癌昆明种小鼠进行标记反义寡核苷酸生物学分布与显像研究.结果 生物学分布结果表明,相对于正义核酸而言,反义核酸在肿瘤组织中的摄取明显增高(P<0.05).在反义寡核苷酸显像组,肿瘤组织显像剂摄取活跃,肿瘤/肌肉比值最高可达5.5.在正义寡核苷酸显像组及阻断组,肿瘤组织均未出现明显的显像剂浓聚.结论 99mTc标记反义寡核苷酸有望成为一种新的显像剂,在分子水平上用于恶性肿瘤的早期、特异和无创性诊断.     

阳离子脂质体LipofectinTM对WT1反义核酸在K562细胞的摄入和胞内分布的影响

目的探讨阳离子脂质体LipofectinTM对WT1反义寡核苷酸(反义核酸)细胞摄入和胞内分布的影响. 方法采用阳离子脂质体介导WT1反义核酸转染K562细胞,应用流式细胞仪、荧光显微镜分别观察反义核酸的细胞摄入和胞内分布,RT-PCR检测处理前后WT1 mRNA表达水平. 结果 (1)脂质体提高K562细胞对反义核酸的摄入,细胞摄入率达70.9%,平均荧光强度提高6倍以上;脂质体介导转染反义核酸时其细胞浆中类核内体或溶酶体中的点状结构较非脂质体处理时大,胞核内有明显的荧光物质分布;(2)脂质体介导WT1反义核酸可下调WT1 mRNA水平. 结论阳离子脂质体可提高反义核酸的细胞摄入并改变其胞内分布,这可能是它增强反义核酸生物活性的机制.