塞来昔布通过阻断NF-кB信号通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期阻滞的相关研究

背景与目的:研究表明塞来昔布能抑制人乳腺癌细胞增殖、诱导其凋亡,但其对肿瘤细胞周期的作用机制尚不明确。本实验研究塞来昔布是否通过阻断NF-кB信号通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及周期产生影响。方法:MTT法和流式细胞术观察塞来昔布对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布的影响;应用RT-PCR和Western印迹法检测经塞来昔布干预该细胞24h后,细胞周期相关因子及NF-кB信号途径中p-IκBα的变化。结果:塞来昔布可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,呈时间剂量依赖性。高浓度塞来昔布可改变细胞进程,将其阻滞于G0/G1期。塞来昔布作用24h后,细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4呈剂量依赖性表达下降(P<0.05)。同时,细胞中p-IκBα表达随药物浓度增加而下降(P<0.05)。结论:塞来昔布能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-кB信号通路,进而下调其下游基因CyclinD1对细胞周期进行调控。     

塞来昔布通过阻断NF—κB信号通路诱导人乳腺癌细胞MDA—MB-231细胞周期阻滞的相关研究

背景与目的:研究表明塞来昔布能抑制人乳腺癌细胞增殖、诱导其凋亡,但其对肿瘤细胞周期的作用机制尚不明确.本实验研究塞来昔布是否通过阻断NF-κ B信号通路对人乳腺痛细胞MDA-MB-231增殖及周期产生影响.方法:MTT法和流式细胞术观察塞来昔布对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布的影响:应用RT-PCR和Western印迹法检测经塞来昔布干预该细胞24 h后,细胞周期相关因子及NF-κ B信号途径中p-Ⅰκ B α的变化.结果:塞来昔布可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,呈时间剂量依赖性.高浓度塞来昔布可改变细胞进程,将其阻滞于G0/G1期.塞来昔布作用24 h后,细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4呈剂量依赖性表达下降(P<0.05).同时,细胞中P-Ⅰκ B α表达随药物浓度增加而下降(P<0.05).结论:塞来昔布能显著抑SUMDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过抑制Ⅰκ B α的磷酸化阻断NF-κB信号通路,进而下调其下游基因CyclinD1对细胞周期进行调控.     

抗氧化剂PDTC对卡铂诱导宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法:体外培养HeLa细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、卡铂组和PDTC+卡铂联合组.各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化.结果:MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系;小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显提高细胞生长抑制率(P<0.01).FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组比较,宫颈癌HeLa细胞的凋亡率差异有统计学意义(P<0.01).HeLa细胞经PDTC作用后,G0/G1期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期;联合用药组使细胞周期进一步阻滞于G2/M期,且与对照组比较,降低了S期细胞比例(P<0.01).免疫细胞化学法检测结果显示,NF-κBp65在宫颈癌HeLa细胞中主要表达于细胞质,卡铂诱导24 h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而PDTC能够抑制此作用.结论:卡铂能够诱导NF-κBp65的活化.小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显增加对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率和细胞凋亡率.PDTC可能提高宫颈癌HeLa细胞对卡铂的敏感性.     

泰索帝联合塞来昔布对肺腺癌细胞增殖的影响

目的探讨泰索帝、塞来昔布单药以及联合用药对非小细胞肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法以人NSCLC细胞株A549作为研究对象,采用MTT,免疫组化以及FCM检测泰索帝和塞来昔布对非小细胞肺癌A549细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期和COX-2蛋白表达的影响。结果泰索帝在体外对NSCLC细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,48h最高65%,最低10%,联合塞来昔布(12.5μmol/l,25μmol/l)可以提高泰索帝的抑制率;经高剂量塞来昔布组(>50μmol/l)处理的细胞COX-2蛋白表达呈阴性,而低剂量组(12.5μmol/l,25μmol/l)以及联合用药组细胞COX-2蛋白表达呈阳性;塞来昔布(12.5μmol/l,25μmol/l)作用后,G0/G1期细胞比例增加,S、G2/M期比例下降,联合泰索帝可以提高细胞的凋亡率。结论泰索帝在体外对非小细胞肺癌细胞株的生长有明显的抑制作用,联合塞来昔布可以提高抑制率,诱导细胞凋亡,影响细胞周期的分布,但不是通过影响细胞内环氧化酶-2蛋白表达这一途径实现。     

塞来昔布对NB4细胞增殖、凋亡及VEGF表达的影响

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制.方法 不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况.采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RTPCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达.结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用.20～80 μmol/L塞来昔布作用24 h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05);塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05);RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF 1α的mRNA表达.结论 塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

塞来昔布联合奥曲肽对人胃癌多药耐药细胞生长的影响

背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)抑制剂塞来昔布及奥曲肽(octreotide)均对肿瘤细胞有抑制作用,本研究旨在探讨塞来昔布及其与奥曲肽联合对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR生长的影响。方法:塞来昔布组:塞来昔布浓度为1×10-4～1×10-8mol/L;奥曲肽组:奥曲肽浓度为1×10-5～1×10-9mol/L;合用组:塞来昔布在上述浓度范围内加1×10-6mol/L的奥曲肽;对照组:无血清RPMI-1640培养液。比较各实验组对SGC7901、SGC7901/ADR细胞生长的影响。采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测细胞的增殖;免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达;DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:塞来昔布较对照组明显降低SGC7901/ADR细胞的3H-TdR掺入,掺入值分别为(471.3±79.7)cpm及(917.5±130.8)cpm,塞来昔布与奥曲肽联合应用时,3H-TdR掺入值较单独用药(220.0±19.7)cpm下降53.3%。两药联合对SGC7901/ADR细胞DNA合成的抑制效应与塞郑文斌,等.塞来昔布联合奥曲肽来昔布的浓度呈显著正相关(r=0.996,P<0.001)。单用塞来昔布或联合用药都能明显降低SGC7901/ADR细胞PCNA的表达。单用塞来昔布时SGC7901/ADR细胞凋亡率为32.9%,当其与奥曲肽合用,凋亡率增加至5     

塞来昔布抑制宫颈癌Hela细胞的研究

目的 研究塞来昔布对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其抑制机制,探讨塞来昔布对宫颈癌的治疗意义.方法 Hela细胞分以下3组培养:Hela细胞对照组(A),仅用常规培养液(MEM)培养.塞来昔布设置2个浓度亚组,10 μmol/l(B1)、50 μmol/l(B2)在作用48h后用倒置相差显微镜观察各组细胞增殖状态,并用流式细胞仪检测COX-2蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,经塞来昔布作用的细胞形态和生长状态都有改变,细胞相对增长缓慢,随浓度的增长,细胞数呈递减的趋势;随着塞来昔布浓度的增加,COX-2蛋白的表达量明显减少,有显著性差异.结论 塞来昔布可能通过抑制COX-2蛋白的表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖.     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

环氧化酶-2抑制剂对肺癌细胞的增殖抑制和放射增敏的实验研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其对A549细胞的放射增敏作用.方法噻唑蓝(MTT)比色法检测塞来昔布对肺癌A549细胞存活的影响;流式细胞分析法(FCM)检测对A549细胞周期时相影响及凋亡的作用;体外培养克隆形成率的方法检测塞来昔布对A549细胞的放射增敏作用.结果塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,这种抑制作用有时间和剂量依赖性,50μmol/L处理24和72 h的抑制率分别为(4.27±1.33)%、(10.63±2.23)%,100μmol/L处理分别为(33.47±8.02)%、(61.97±7.32)%,主要是抑制增殖,使细胞聚集在G0/G1期,100μmol/L处理72 h还有细胞死亡.塞来昔布无凋亡诱导作用,也不增加放射诱导的凋亡.体外培养克隆存活曲线分析显示,100μmol/L塞来昔布处理24和72 h降低了各个照射剂量点的存活分数(72 h比24 h作用强),但在照射高剂量区更明显.对照、100μmol/L处理24、72 h在2 Gy剂量点的存活分数(SF2)分别为(0.53±0.06)、(0.52±0.11)和(0.46±0.05),处理24和72 h的放射增敏比为1.27和1.7(D0值比).结论塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G0/G1期,但无诱导凋亡作用.塞来昔布对肺癌A549细胞有放射增敏作用,在高照射剂量区增敏作用更为明显.     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。