塞来昔布对人肝癌细胞株增殖及凋亡的影响

[目的]探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对体外培养的肝癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用。[方法]培养肝癌细胞株hepG2,用不同浓度的塞来昔布进行干预,MTT法检测对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比,随着塞来昔布剂量和作用时间的增加,MTT显示细胞的吸光度值逐渐降低,塞来昔布作用24、36、48h,对hepG2细胞的中效抑制浓度(IC50)分别为94.2μmol/L、78.3μmol/L和55.7μmol/L,相关系数分别为0.97、0.94和0.99;随着塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,细胞的凋亡率升高;塞来昔布作用48h后,随着药物浓度的增加G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例下降。[结论]塞来昔布能抑制hepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖抑制及放疗增敏作用

目的探讨塞来昔布对肝癌细胞huh-7增殖抑制及放疗增敏作用。方法以人肝癌细胞株huh-7为研究对象,以塞来昔布和高能射线作为干预手段,采用四唑氮蓝还原法(MTT),检测不同浓度塞来昔布和作用不同时间对huh-7细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞技术,检测塞来昔布联合放疗对huh-7细胞凋亡和周期的影响。结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞huh-7生长有显著抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;塞来昔布对肝癌放疗具有明显增敏作用。与对照组比较,药物组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,G2/M变化无明显意义;照射组G2/M期细胞比例升高,联合组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论塞来昔布能提高人肝癌细胞株huh-7放疗敏感性作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布来实现的。     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞凋亡及环氧合酶-2表达的影响

背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,C0X-2)是花生四烯酸转变为前列腺素过程中的关键酶,在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要调控作用,近年来其被证实与宫颈癌的发生、发展、浸润、转移、复发和预后关系密切.塞来昔布作为一种选择性COX-2抑制剂,在肿瘤的预防和治疗中己显示其优越性和广阔前景.本研究通过观察塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞凋亡和COX-2表达的影响,探讨塞来昔布抗肿瘤的作用机制.方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,以倒置相差显微镜观察不同浓度塞来昔布作用不同时间下的HeLa细胞形态学变化;DAPI荧光化学法及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;Western blot检测C0X-2蛋白的表达.结果:HeLa细胞经塞来昔布处理后生长相对缓慢,出现典型细胞凋亡形态学改变,并随药物浓度增加及作用时间延长而显著改变.塞来昔布能诱导HeLa细胞凋亡,凋亡率随药物浓度增加而逐渐增高(F=46.810,P=0.002),DNA梯形条带明显,并呈浓度依赖性.塞来昔布呈时间及药物浓度依赖式降低COX-2蛋白的表达.结论:塞来昔布在体外通过抑制COX-2表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡.     

塞来昔布对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡和Survivin表达的影响

背景与目的:选择性COX-2抑制剂塞来昔布是近年来开发的新型非甾体类抗炎药。大量实验证明塞来昔布具有明显的抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用,这在结直肠肿瘤和家族性腺瘤性息肉病中已经得到了证实。本研究观察塞来昔布在体外对人胶质瘤细胞株U251的抑制增殖和诱导凋亡的作用,并探讨该作用与Survivin表达之间的关系。方法:用不同浓度塞来昔布溶液处理对数生长期的U251细胞,在倒置显微镜下动态观察瘤细胞的生长情况。用MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况。不同浓度塞来昔布处理U251细胞48h后,用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,免疫细胞化学法及Westernblot法检测各组细胞中Survivin蛋白的表达情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测各组细胞中survivinmRNA的表达水平。结果:塞来昔布处理后细胞出现明显凋亡样形态学改变。10~100μmol/L塞来昔布对U251细胞增殖均有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。塞来昔布处理U251细胞48h后,流式细胞检测结果显示出明显的细胞凋亡,凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;免疫细胞化学结果显示,对照组细胞...     

塞来昔布抑制NB4细胞增殖并诱导凋亡的体外研究

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用.方法 应用光镜和透射电镜观察细胞形态学改变;MTT法分析塞来昔布对细胞增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析;流式细胞仪检测不同浓度(0、20、40、80、120和160 μmol/L)塞来昔布处理24小时后细胞周期的变化以及凋亡情况.结果 镜下观察细胞出现凋亡形态学表现.MTT示塞来昔布对NB4细胞具有明显的增殖抑制作用,并具有时间和剂量依赖性.琼脂糖凝胶电泳见DNA片段化,形成典型梯状条带.流式细胞仪检测发现塞来昔布处理24小时后,随着作用浓度增加,NB4细胞凋亡率提高;同时细胞周期阻滞于G1/S期.结论 塞来昔布能够抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮陛蓝比色法（MTT）测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot 检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布（25～100μmol/L）均能抑制鼻咽癌CNE-2 细胞生长,呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示塞来昔布（25～75μmol/L）浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2 细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。Western blot 结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2 细胞后,Bcl -2 蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式。结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2 蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

二甲基塞来昔布抗肿瘤作用的研究进展

近年来,国内外大量文献报道,传统的非甾体抗炎药物塞来昔布可以通过COX-2依赖或非依赖机制在多种恶性肿瘤中发挥抗肿瘤作用。但是,塞来昔布通过抑制COX-2可以减少血管中前列环素的产生,从而导致血栓形成事件。而2,5-二甲基塞来昔布（DMC）作为塞来昔布的紧密衍生物,尽管缺乏COX-2抑制功能,显示出比塞来昔布高20%~50%的肿瘤抑制活性,并且可能避免心血管毒性,因此,可能更适合用于恶性肿瘤的治疗。其可以通过诱导内质网应激、抑制增殖、诱导细胞凋亡、影响细胞周期、抗血管生成以及增加药物敏感性等机制发挥肿瘤抑制活性。本文对二甲基塞来昔布抗肿瘤作用的研究进展进行了详尽综述,为相关研究提供参考。     

二甲基塞来昔布通过活性氧诱导乳腺癌细胞凋亡

目的:探讨二甲基塞来昔布（2,5-dimethyl celecoxib,DMC）对乳腺癌细胞凋亡的作用。方法:用DMC处理人乳腺癌BT-20和MCF-7细胞,检测细胞生存率、细胞凋亡情况、细胞内ROS的产生;Caspase凋亡通路相关蛋白表达水平;预处理ROS抑制剂NAC、Caspase通路抑制剂Z-VAD-Fmk,检测细胞内Caspase凋亡通路蛋白表达水平。结果:DMC对BT-20和MCF-7细胞呈现浓度及时间依赖性杀伤作用,并可以明显增加细胞的凋亡,且呈现浓度依赖性趋势;DMC可以显著增加BT-20和MCF-7细胞内ROS的产生和凋亡相关蛋白cleaved caspase-7、9的表达水平;另一组实验证明,预处理NAC和Z-VAD-Fmk,可以明显降低cleaved caspase-7、9的表达水平,且抑制剂NAC组的效果大于Z-VAD-Fmk组。结论:DMC通过ROS途径诱导乳腺癌细胞发生凋亡。     

西妥昔单抗联合塞来昔布对肺腺癌细胞KDR和AQP1表达的影响

背景与目的新辅助化疗是肺癌治疗的新进展,西妥昔单和合塞来昔布均是近年来新辅助化疗的常用药物,本研究旨在探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab)联合环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞株凋亡和KDR、AQP1表达的影响。方法 A549细胞培养于RPMI-1640培养液中,实验分为正常对照组、西妥昔单抗1 nmol/L组、塞来昔布25μmol/L组、西妥昔单抗1 nmol/L+塞来昔布25μmol/L组。药物干预细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞抑制率;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化;用Transwell小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化。采用RTPCR、Western blot检测KDR、AQP1基因和蛋白的表达情况。结果西妥昔单抗和塞来昔布对A549细胞增殖有明显的抑制作用,两制剂联合作用时抑制作用更强(P<0.01)。西妥昔单抗和塞来昔布均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高(P<0.01);联合用药与单独用药相比,可使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.01),进一步下调了KDR、AQP1基因和蛋白的表达(P<0.05),细胞侵袭力明显降低。结论西妥昔单抗和塞来昔布联合应用具有协同作用,可进一步抑制细胞的生长和迁移,下调了KDR、AQP1基因和蛋白的表达提示两药联合使用临床肺癌治疗可能具有很大的潜力。     

塞来昔布对胃癌细胞生长抑制及诱导凋亡的实验研究

目的：研究塞来昔布对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：12．5～100μM的塞来昔布处理胃癌细胞株SGC-7901 24小时后，用MTT法测定塞来昔布对胃癌细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及MDRl表达水平。结果：12．5～100μM的塞来昔布对胃癌细胞均有抑制作用，首先表现为S期阻滞，继而出现细胞凋亡，且呈剂量依赖性。胃癌细胞MDRl表达水平在12．5μM药物浓度作用时MDRl表达上调，25～100μM药物浓度作用时MDRl表达水平明显下调，且随药物浓度的增高，MDRl表达水平逐渐下降。结论：塞来昔布通过诱导细胞凋亡对胃癌细胞具有明显抑制作用，同时塞来昔布具有下调胃癌细胞MDRl表达，逆转多药耐药性的作用，但在药物浓度较低时，则为上调MDRl表达。     

威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的探讨威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法以NB4细胞为实验对象,1.0 μmol/L的三氧化二砷为阳性对照,0.01% DMSO为阴性对照,用不同浓度的威灵仙皂苷作为实验组,利用MTT法观察细胞的增殖抑制状态,瑞氏染色进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞凋亡率及进行细胞周期测定,Real-time PCR检测威灵仙皂苷干预细胞后PML-RARa mRNA的变化。结果不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞增殖,具有时间和浓度依赖性,但抑制率低于砷剂组。瑞氏染色可见典型凋亡细胞的形态学改变,与砷剂组有同样的改变。流式细胞术检测发现凋亡细胞随时间延长而增多,组间差异有统计学意义,凋亡率低于砷剂组。细胞周期测定提示G2期细胞增多,G1期细胞明显减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）。威灵仙皂苷作用后的NB4细胞PML-RARa mRNA的表达无统计学意义（P>0.05）。结论威灵仙皂苷可能通过诱导NB4细胞凋亡抑制细胞生长,可能的机制是通过细胞周期阻滞,但不影响PML-RARa mRNA的表达。     

槲皮素在体外对NB4细胞形态及VEGF分泌的影响

目的 探讨槲皮素对NB4细胞的形态、血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 以NB4细胞为研究对象,采用Wright染色法观察细胞形态学;Annecxin V标记检测细胞凋亡率;采用ELISA法检测VEGF含量水平。结果 （1）经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;（2）槲皮素处理后,NB4细胞凋亡率明显增加;（3）槲皮素处理后,NB4细胞显著降低VEGF的分泌水平。结论 槲皮素在体外能抑制白血病细胞NB4生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF。     

Effects of Celecoxib on Cycle Kinetics of Gastric Cancer Cells and Protein Expression of Cytochrome C and Caspase-9

Objective: This investigation aimed to determine effects of celecoxib on the cell cycle kinetics of the gastriccancer cell line MGC803 and the mechanisms involved by assessing expression of cytochrome C and caspase-9at the protein level. Methods: Cell proliferation of MGC803 was determined by MTT assay after treatment withcelecoxib. Apoptosis was assessed using fluorescence staining and cell cycle kinetics by flow cytometry. Westernblotting was used to detect the expression of caspase-9 protein and of cytochrome C protein in cell cytosol andmitochondria. Results: Celecoxib was able to restrain proliferation and induce apoptosis in a dose- and timedependentmanner, inducing G0/G1 cell cycle arrest, release of cytochrome C into the cytosol, and cleavageof pro-caspase-9 into its active form. Conclusion: Celecoxib can induce apoptosis in MGC803 cells through amechanism involving cell cycle arrest, mitochondrial cytochrome C release and caspase activation.     

Enhancement of sensitivity by bestatin of acute promyelocytic leukemia NB4 cells to all-trans retinoic acid

All-trans retinoic acid (ATRA) induces the differentiation of acute promyelocytic leukemia (APL) cells into neutrophils. We found that bestatin, an inhibitor of CD13/aminopeptidase N, enhanced the sensitivity of APL NB4 cells to ATRA at concentrations of 0.1–1000 ng/ml. A structurally different aminopeptidase N inhibitor, actinonin, also increased the effect of ATRA on differentiation, but an inactive stereoisomer of bestatin, (2R,3S)-AHPA-(R)-Leu, did not. Bestatin synergistically enhanced the cytostatic effect of ATRA on NB4 cells. Masking of the cell-surface CD13 by anti-CD13 antibody WM15 blocked the synergistic effect of bestatin and ATRA on differentiation. Thus bestatin, an immunomodulator clinically used for nonlymphocytic leukemia, synergistically increased the ATRA-induced differentiation of NB4 cells by inhibiting CD13/aminopeptidase N on the cell-surface.     

桂皮酸对NB4细胞增殖和分化作用的实验研究

目的探讨桂皮酸对NB4细胞的增殖和分化的作用.方法采用光镜观察形态变化,流式细胞术检测CD11b和CD33.结果桂皮酸作用NB4细胞后,可使NB4细胞增殖明显受抑,诱导NB4细胞向终未细胞分化;实验组与对照组的分化率差异明显(P＜0.01);CD11b表达升高,CD33表达下降(P＜0.05).结论桂皮酸对NB4细胞具有抑制增殖和诱导分化的作用.     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

塞来昔布诱导Ls174结肠腺癌细胞周期阻滞和凋亡

目的：观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布（Celecoxib）诱导结肠腺癌细胞株Ls174凋亡的作用及机制。方法：采用MTT法检测塞来昔布对Ls174细胞的增殖抑制作用，应用流式细胞仪检测塞来昔布对Ls174细胞凋亡和增殖周期的影响．并检测塞来昔布对Ls174细胞Caspase-3活性的影响。结果：塞来昔布抑制Ls174细胞增殖和诱导Ls174细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性，塞来昔布处理后的Ls174细胞G0／G1期百分比与对照组相比明显增高。塞来昔布能诱导Ls174细胞Caspase-3活性，并呈浓度和时间依赖性。结论：塞来昔布在体外能抑制Ls174细胞的增殖。诱导细胞凋亡，其作用与促进Caspase-3活性和阻滞细胞周期于G0／G1期有关。     

辛伐他汀对NB4细胞分化与凋亡的影响

 目的　探讨磁性纳米Fe3O4颗粒（Fe3O4-MNP）联合多柔比星（ADM）对Raji细胞的影响。方法　采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-κB的表达水平。结果　ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关（r＝0.412,P＝0.027;r＝0.523,P＝0.014）;12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76 % 比 14.85 %、35.08 %比 44.50 %、44 %比69.4 %,差异有统计学意义（P＝0.012、0.041、0.024）;Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-κB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义（t＝-54.416,P＝0.035;t＝33.963,P＝0.047）。结论　Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF -κB通路的激活有关。     

伊马替尼对NB4细胞株表达Fas、Caspase-3、bcl-2和Annexin-V的影响

目的观察伊马替尼（ST1571）体外对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB。凋亡的作用。方法用流式细胞仪检测NB。细胞在不同浓度ST1571处理后,在不同的时间抗凋亡基因bcl-2和凋亡基因Caspase-3、Fas、Annexin—V的表达水平。结果随着伊马替尼浓度的增加（0．5～5．0umol／L）,NB。细胞株表达bcl-2、Caspase-3、Annexin—V、Fas的变化分别南（10．22±0．62）降低至（5．82±0．52）,由（42．21±1．02）升高到（52．35±0．83）,由（25．42±1．21）升高到（37．84±0．63）,由（18．21±0．81）升高到（21．41±1．02）。随着伊马替尼（5．0umol／L）处理时间的增加（24、48、72h）,NB。细胞株表达bcl-2、Caspase-3、Annexin—V、Fas的变化分别由（5．81±0．52）降低至（2．51±0．43）,由（52.31±0．83）升高到（69．51±1．12）,由（37．81±0．93）升高到（78．62±0．83）,由（23．41±0．73）升高到（26．53±1．02）。结论伊马替尼能以剂量和时间依赖的方式诱导NB4细胞发生凋亡,但Fas的表达无变化。