重组人乳铁蛋白在体外模拟胃肠环境中稳定性研究

目的 研究重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rHLF)分别在体外模拟胃液和模拟肠液中的消化稳定性.方法 采用模拟胃液和模拟肠液在体外建立模拟胃肠环境消化体系,测定重组人乳铁蛋白在胃肠环境中的稳定性.重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液中的浓度分别为5.0和2.0 mg/ml.在重组人乳铁蛋白与模拟胃/肠液反应后的0、15、30 s和1、2、5、10、20、30、60 min取样,根据SDS-PAGE凝胶电泳结果,判断重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液环境中的稳定性.结果 重组人乳铁蛋白在体外模拟胃液中2 min内降解,在模拟肠液中60 min内不能完全降解.结论 重组人乳铁蛋白在体外模拟人体胃肠环境中易被降解消化.     

外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性测定模型初探

目的　建立外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性的实验模型。方法　采用美国 1 995年药典提供的模拟胃液和模拟肠液配方 ,测定不同蛋白在胃肠环境中的稳定性。蛋白质在模拟胃 肠液中的浓度为 0 .5mg ml。在蛋白与模拟胃 肠液反应后的 0s、1 5s、30s、6 0s、2min、4min、8min、1 5min、30min和 6 0min准时取样 ,根据SDS PAGE凝胶电泳结果 ,判断蛋白质在模拟胃 肠液中的稳定性。结果　大豆胰蛋白酶抑制剂、牛 β 乳球蛋白A、牛 β 乳球蛋白B在模拟胃液中稳定存在 ,6 0min完全不降解 ;大豆血凝素 8min内绝大部分降解 ,但降解带 6 0min内仍有残留 ;花生血凝素 8min内降解 ;鸡卵粘蛋白、牛血清白蛋白、大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶均在 1 5s内降解。蛋白质在模拟肠液中的稳定性与模拟胃液不同。大豆胰蛋白酶抑制剂、牛 β 乳球蛋白A、牛β 乳球蛋白B、牛血清白蛋白、鸡卵粘蛋白、鸡卵清蛋白、大豆血凝素、花生血凝素在模拟肠液中 ,6 0min均不能完全降解 ;大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶及其降解带 6 0min内依然存在。结论　不同的外源蛋白在模拟胃 肠液中的稳定性不同 ,根据蛋白质稳定性差异 ,初步建立了评价外源蛋白在模拟胃 肠液中稳定性测定的模型     

转G10evo和Cry1Ab/Cry2Ab基因玉米GAB-3外源基因表达蛋白的消化稳定性

目的评价转G10evo、Cry1Ab/Cry2Ab基因抗虫耐草甘膦玉米(GAB-3)中的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中的消化稳定性。方法根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,对照或样品均以5 g/L进行模拟胃液消化,以2 g/L进行模拟肠液消化。于反应0 s、15 s、2 min、30 min和60 min时取出200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应。然后将消化后的对照及样品进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、染色并使用凝胶成像系统观察结果。结果作为稳定对照的大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃肠液中60 min未被消化,作为不稳定对照的酪蛋白(α-casein)在模拟胃肠液中15 s内全部消化。外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃液中2 min内完全消化,在模拟肠液中30 min内完全消化。结论转基因玉米(GAB-3)的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中不具有消化稳定性,容易被降解。     

转Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因“双抗12-5”玉米外源基因重组蛋白的消化稳定性研究

目的评价转Cry1Ab/Cry2Aj、G10evo(EPSPS)基因抗虫耐草甘膦玉米"双抗12-5"中的外源基因重组蛋白在模拟胃肠液中的消化稳定性。方法根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,样品或对照都以5 mg/ml的浓度模拟胃液消化,2 mg/ml的浓度模拟肠液消化。分别于反应0 s、15 s、2 min、30 min和60 min时取出200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应,再进行十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、染色并观察结果。结果大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃、肠液中60 min仍不能被全部消化,酪蛋白(α-casein)在模拟胃、肠液中0~15 s内全部消化,Cry1Ab/Cry2Aj重组蛋白在模拟胃、肠液中0~15 s内完全消化,G10evo(EPSPS)重组蛋白在模拟胃液中0~15 s内全部消化,在模拟肠液中2~30 min内全部消化。结论转Cry1Ab/Cry2Aj、G10evo(EPSPS)基因玉米的外源基因重组蛋白在模拟胃、肠液中不具有消化稳定性,容易被降解。     

食物蛋白质消化稳定性和热稳定性研究

目的建立体外模拟胃肠液消化稳定性试验和热稳定性试验方法,确定试验中的阳性和阴性参考蛋白质。方法在体外模拟胃肠液消化环境和热加工处理环境,通过SDS-PAGE凝胶电泳研究常见食物致敏原(鸡卵清蛋白OVA、牛β-乳球蛋白β-LG)、不常见食物致敏原(牛血清白蛋白BSA)和非致敏原(大豆脂肪水解酶LPE、马铃薯酸性磷酸酶PAP)在其中各观察时间点的降解情况。结果OVA在模拟胃肠液中60min不降解;β-LG在模拟胃液中60min不降解稳定存在,但在模拟肠液中30min内完全降解;BSA在模拟胃液中30min内完全降解,在模拟肠液中60min部分降解;PAP在模拟胃液中15s即完全降解,LPE在30s内完全降解;而在模拟肠液中,PAP60min完全不降解,LPE60min大部分降解。在热稳定性试验中,OVA、β-LG、BSA60min内不降解,PAP60min内完全降解。结论模拟胃液消化稳定性和热稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、PAP为非致敏原对照,模拟肠液消化稳定性试验中设OVA为常见致敏原对照、BSA为不常见致敏原对照、LPE为非致敏原对照。并据此初步建立体外消化稳定性和热稳定性试验方法。     

转CpTI基因大米在五指山小型猪体内消化稳定性的初步研究

目的建立五指山小型猪在体消化稳定性模型,评价转CpTI大米的胃肠消化稳定性。方法在五指山成年猪体内同时安置胃、肠瘘管,通过经口喂饲途径,以大豆作为阳性对照,测定不同时间点消化液的pH,采用蛋白凝胶电泳法分析测定不同时间点消化产物中的蛋白片段,比较转CpTI大米和亲本大米消化产物的区别。结果给样后胃液pH迅速中和至6.0左右,以后逐步降低,在4～6h后又开始回升,大豆引起胃液pH下降和回升时间均较米粉晚;13×103、17×103、34×103和50×103是大豆中几种相对消化稳定的蛋白片段,在5～6h的胃肠液中仍然能检测出高表达,其中50×103、34×103、17×103三个蛋白片段呈现胃液、肠液消化稳定性,而13kD呈现胃液消化稳定性;米粉给样0.25h后胃液中未检出任何耐受蛋白酶消化的片段或亚基,而亲本明恢86米粉和转CpTI基因米粉比较,无论是胃液或肠液中蛋白消化情况均无明显区别。结论利用五指山小型猪建立的在体消化稳定性模型是可行的,转CpTI基因米粉与亲本米粉在五指山小型猪胃液、肠液中的消化稳定性具有等同性。     

EPSPS蛋白和PAT蛋白的模拟胃液消化稳定性分析

目的研究5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase, EPSPS)蛋白和膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricina cetyltransferase, PAT)蛋白在模拟胃液中的消化稳定性。方法参照中华人民共和国国家标准(农业部869号公告-2-2007)模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法中模拟胃液的配方,在体外建立模拟胃液消化体系,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(dodecyl sulfate,sodium salt-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot),分析EPSPS蛋白和PAT蛋白在模拟胃液中不同消化时间点的降解情况。结果 EPSPS蛋白和PAT蛋白均在15 s内消化完全,SDS-PAGE和Western blot蛋白免疫印迹均未检测到蛋白残留,EPSPS蛋白和PAT蛋白在模拟胃液中极易被消化。结论 EPSPS蛋白和PAT蛋白经过胃液消化后,不具有免疫原性。     

喂饲转HJC-1和G6-EPSPS基因大米大鼠主要营养素吸收利用率试验研究

目的 研究转HJC-1和G6-EPSPS基因大米大鼠主要营养素吸收利用率.方法 将140只Wistar大鼠随机分为7组,每组20只,雌雄各半,即转基因大米低、中、高剂量3个组,亲本对照低、中、高剂量3个组和饲养对照组,相应饲料喂养7d.比较各组大鼠蛋白质功效比值及蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维素的表观消化率等.结果 除雄性亲本高剂量组蛋白质功效比值高于饲养对照组外,其他各组蛋白质功效比值与饲养对照组差别无统计学意义;除雌鼠转基因低剂量组的蛋白质表观消化率和雄鼠亲本低剂量组的脂肪表观消化率外,其他各组的蛋白质表观消化率、脂肪表观消化率、碳水化合物表观消化率、纤维素表观消化率均高于饲养对照组(P＜0.01);转基因各组与相应亲本对照组上述指标的差异均无统计学意义.结论 喂饲转HJC-1和G6-EPSPS基因大米和亲本对照大米的大鼠主要营养素(蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维素)吸收利用率基本具有实质等同性.     

转HJC-1和G6-EPSPS基因抗虫耐除草剂大米对BN大鼠致敏性评价

目的 利用BN大鼠对转HJC-1和G6-EPSPS基因抗虫耐草甘膦大米进行致敏性评价.方法 42只BN大鼠随机分为7组,每组6只,分别为溶剂对照组、饲养对照组、亲本大米组、转基因大米组、HJC表达蛋白组、G6表达蛋白组和阳性对照组.转基因大米组喂饲含70％转HJC-1和G6-EPSPS基因大米饲料,亲本大米组喂饲含70％的9746亲本大米饲料,表达蛋白组每天每只动物分别灌胃给予1.0 mg/ml HJC和G6蛋白各1 ml,阳性对照组每天每只灌胃给予1.0 mg/ml OVA溶液1 ml,溶剂对照组每天每只灌胃给予PBS 1 ml,连续42 d.各组动物饲料均不含卵蛋白.观察动物体重、行为、毛色、分泌物等毒性表现及死亡情况,每周称重并记录体重,分别于第28天和第42天使用ELISA试剂盒测定血清抗体IgG和IgE水平,试验结束时称重并计算脾和胸腺脏器系数.结果 实验期间各组动物进食正常,活动自如,未出现生病或死亡,各组动物体重及总增重差异无统计学意义.与溶剂对照组和饲养对照组比较,HJC和G6表达蛋白组、转基因大米组血清IgG、IgE抗体水平及脾和胸腺脏器系数差异均无统计学意义.阳性对照组血清IgG、IgE抗体水平高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 全食品喂饲及灌胃给予表达蛋白未发现转HJC-1和G6-EPSPS基因抗虫耐草甘膦大米对BN大鼠血清IgG和IgE抗体水平及免疫器官产生不良影响,未见其对BN大鼠具有潜在致敏性.     

治疗胃酸过多 替丁和拉唑哪个更好

正胃酸,少不得也多不得我们的胃每天都在持续分泌胃液,胃液呈酸性,是因为胃酸的存在。胃酸是胃腺壁细胞分泌的盐酸,在人体的消化吸收中发挥着重要作用。一是能激活胃蛋白酶原,使之转变为有活性的胃蛋白酶(消化分解食物的蛋白质),并为胃蛋白酶提供适宜的酸性环境;二是可抑制和杀死随食物进入胃内的细菌;三是盐酸进入小肠后能促进胰液、胆汁和小肠液     

维生素D受体和雌激素受体的基因与骨质疏松

骨质疏松症是以低骨量和骨组织微结构退化为特征的全身性疾病,与众多因素有关,而遗传是其中的重要决定因素。在目前研究的若干侯选基因中,维生素D受体基因与雌激素受体基因最受瞩目。该文就维生素D受体基因,雌激素受体基因与骨质疏松的关系及这两个基因之间的协同作用进行综述,从而阐明维生素D受体基因与雌激素受体基因在骨质疏松症发病机制中的作用。     

From gene to disease; HD gene and Huntington disease]

Huntington's disease (HD) is a late onset, incurable, autosomal dominantly-inherited, progressive neuropsychiatric disease, characterised by chorea, changes in personality, mood and behaviour, and dementia. Huntington's disease is a clinical diagnosis. The advent of DNA diagnosis has made predictive, prenatal and preimplantation testing possible for at-risk persons or asymptomatic carriers. The prevalence is estimated to be 3-10/100,000 among individuals of European descent; HD is less common in other ethnic groups. Huntington's disease is caused by an expanded trinucleotide CAG repeat in the HD gene on chromosome 4. The gene encodes for the protein huntingtin, with an as yet unknown function. The mutated huntingtin has an elongated stretch of glutamines which leads to a gain of function such as overactivity, excitotoxicity, or to interactions with other proteins.     

From gene to disease; hypophosphataemic rickets and the PHEX gene

X-linked hypophosphataemic rickets is associated with mutations in the PHEX gene on the short arm of the X chromosome, encoding a membrane-bound endoprotease which is predominantly expressed in osteoblasts. Defective PHEX function leaves phosphaturic peptides such as FGF23 uncleaved, enabling these peptides, known as phosphatonins, to fully exert their phosphaturic potential in the proximal tubule of the kidney. An autosomally inherited form of hypophosphataemic rickets is caused by mutations in the proteolytic processing site of FGF23 itself, while in tumour-induced osteomalacia overproduction of FGF23 and possibly other phosphatonins causes the processing capacity to be exceeded, resulting in phosphaturic hypophosphataemia and osteomalacia.     

SRY和maspin基因对胎儿游离DNA的检测效率

目的:探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记代替SRY基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性。方法:分别以SRY基因和不同甲基化状态的maspin基因序列为标记对孕妇和非妊娠女性血浆中的游离DNA进行PCR和甲基化PCR检测,并对结果进行统计学分析。结果:孕男胎孕妇血浆DNA标本中SRY基因的检出率为93.9%。u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)仅在妊娠组中被检测出,检出率88.3%。两检出率间的差异不具有统计学意义。m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和非妊娠组中的检出率无差异。结论:u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物,相对于以SRY基因作为标志物有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。     

From gene to disease; retinoblastoma and the RB1 gene]

Retinoblastoma is caused by mutations in the RB1 gene. The penetrance is 95%, as in approximately 5% of the mutation carriers, no second somatic mutation occurs in one of their retina cells during embryonic development. Molecular diagnosis is performed by a complete scanning of the RB1 coding sequence which includes flanking intronic sequences. Approximately 85% of pathogenic mutations can be identified.     

From gene to disease; pseudoxanthoma elasticum and the ABCC6 gene

Pseudoxanthoma elasticum (PXE) is a hereditary disease of the connective tissue characterized by progressive dystrophic mineralization of elastic fibres. PXE patients have skin lesions, may experience loss of visual acuity and cardiovascular complications. The inheritance pattern of PXE is almost always autosomal recessive. In less than 2% of the families, PXE may be inherited in an autosomal dominant fashion. PXE is caused by mutations in the ABCC6 (MRP6) gene. The R1141X mutation is by far the most common mutation; it has been identified in 19 patients, or 30% of all PXE-patients in the Netherlands. The molecular pathology of PXE is complicated by yet unknown factors causing a variable clinical expression of the disease. In 80% of the 110 PXE patients the authors studied, at least one ABCC6 mutation was found. Molecular diagnostics of PXE is especially useful to confirm the clinical diagnosis.