免疫比浊反应中标准曲线的线性拟合

众所周知 ,采用免疫比浊法检测如 C反应蛋白、免疫球蛋白、载脂蛋白 apo A1、apo B时 ,由于反应为非线性进程反应 ,采用单点或两点定标方式 ,构成的标准曲线都是一条直线 ,与实际反应曲线有较大不相符合 ,导致测定结果与实际值偏差较大 ;而采用多点定标方式、通过函数 -对数线性拟合 ,标准曲线为一 3次方曲线 ,能较好反应实际 ,测定结果准确性较好。现以检测 apo AI为例介绍如下。1　材料与方法1.1　日立 70 6 0生化分析仪。1.2　 RANDOX载脂蛋白试剂盒 ,批号 :30 34J。1.3　方法　以批号 :2 19L P(apo AI:2 .2 8g/ L,apo B:2 .15 g…     

时间分辨免疫荧光分析法影响因素初探

目的:探讨时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)定量检测乙型肝炎标志物的影响因素.方法:用时间分辨免疫荧光分析仪检测室温(20℃～25℃)下HBsAg,标准曲线C点和E点发光值日间变异;不同温度下HBsAg标准曲线C点和E点发光值;用两种浓度铕标工作液HBsAb标准曲线C点和E点发光值.结果:相同条件下HBsAg标准曲线C点和E点发光值日间变异较大,同浓度值的标准品在不同温度和用不同浓度的铕标工作液的情况下发光值有明显差异.结论:一种批号的试剂第一次做6点定标后,每次实验中必须做两点定标对标准曲线进行校正,且保证温度的恒定,准确稀释铕标记物等条件的一致,才能保证实验结果的准确.     

两点与五点定标对血清脂蛋白(a)测定的影响评价

目的: 评价免疫透射比浊法(ITA)两点与五点定标对血清脂蛋白(a)[LP(a)]测定的影响。方法: 分别用两点与五点定标校正分析系统测定130例临床血清样本LP(a)水平。结果: 按浓度(mg/L)分成5组,0~,100~,200~,300~,400~600,测定结果两点定标依次为102.22±4.06、174.98±35.11、280.11±38.36、408.13±44.44、526.42±36.69,五点定标依次为84.48±4.31、160.21±24.98、243.14±29.85、351.98±27.74、479.51±41.88,两点结果均高于五点(P<0.001)。结论: ITA法测定血清LP(a)应采用五点定标建立工作曲线,两点定标测定误差较大。     

定标方式对C-反应蛋白测定结果的影响

目的:比较不同定标方式对血清C-反应蛋白测定的影响。方法:分别采取六点和两点定标方式,用免疫透射比浊法检测6组不同浓度C-反应蛋白标准血清各30次。结果:两点定标6组测定结果分别为:(0.08±0.09)mg/dl,(0.81±0.11)mg/dl,(3.92±0.13)mg/dl,(7.50±0.12)mg/dl,(12.70±0.12)mg/dl,(27.69±0.03)mg/dl;六点定标的结果为:(0.02±0.12)mg/dl,(0.89±0.13)mg/dl,(3.88±0.11)mg/dl,(7.47±0.12)mg/dl,(12.18±0.13)mg/dl,(25.00±0.20)mg/dl。结论:两种定标方式对血清中C-反应蛋白的免疫透射比浊法的测定结果有显著性的影响。     

选择适合的新鲜血浆建立纤维蛋白原测定的标准曲线

目的 选择适合的新鲜血浆,建立纤维蛋白原测定的标准曲线,以确保检测结果的准确性。方法 以校正合格的ACL-Advance血凝分析仪为参考仪器,以其测定纤维蛋白原浓度分别为1．5g／L、2．0g／L、2．5g／L、3．0g／L、3．5g／L、4．0g／L的新鲜血浆为定标血浆,分别对SysmexCA-50血凝分析仪建立标准曲线,并比较两台仪器测定纤维蛋白原的结果。结果 纤维蛋白原浓度为2．5g／L、3．0g/L的定标血浆,建立SysmexCA-50血凝分析仪测定纤维蛋白原的标准曲线,两台仪器检测纤维蛋白原的结果差别无统计学意义（P〉0．05）,并且相关性良好。结论 纤维蛋白原浓度为2．5～3．0g／L的新鲜血浆为定标血浆,建立纤维蛋白原测定的标准曲线,可以确保检测结果的准确性。     

快速CRP测定的非线性曲线的应用

目的:应用非线性曲线快速测定末梢血CRP。方法:以不同浓度的CRP定标液作标准制作CRP快速测定的非线性曲线。结果:末梢血CRP浓度>80mg/L,非线性曲线测定的结果与单点定标测定的结果之间差异存在显著性,P<0.05。结论:末梢血快速CRP测定应以非线性曲线定标。     

如何检验GPT结果准确性

<正> 由于酶的高度不稳定性,受各种因素影响较大。目前国内还没有谷丙转氨酶质控,要想检测GPT标准曲线绘制准确性,标本结果检验准确性是不容易的。我们检验科生化室通过查找资料和平常工作经验的积累、摸索,总结出几点检测GPT准确性的方式,供给大家一块探讨。 目前血清谷丙转氨酶测定,仍是赖氏法,采用较多的是光电比色法和微量法。标准曲线绘制是相当重要     

血清载脂蛋白测定对评价肝病的临床价值

目的分析各种肝病患者血清HDL-C、apoAl及apoB100水平变化,探讨它们在肝病发展过程中的作用.方法采用直接酶法和免疫透射比浊法检测各种肝病患者血清HDL-C、apoAl,apoB100水平.结果各种肝病患者血清HDL-C、apoAl水平明显低于对照组,尤以肝硬化B、C级及重肝为显著.血清apoB100仅肝硬化及重肝病人明显低于对照组,而急肝、慢肝、肝癌患者血清apoB100轻度升高或接近正常.结论 HDL-C、apoAl,apoB100在肝病病情进展中起重要作用,其水平与肝损害程度密切相关.     

血清K+酶法测定单标准与双标准定标法的探讨

目的：探讨采用单标准及双标准定标法对酶法测定血清K^ 的影响。方法：在7170A生化仪上用酶法单标准（STD＝4.0mmol/L）和双标准或称差示分光光度法(STD1＝2.5mmol/L,STD2＝8.0mmol/L）分别定标对预先配制的10个不同浓度的标准液进行测定。结果：单标准定标测定绝对误差0.00－1.10mmol/L,平均0.36mmol/L;相对误差0.0％－13.4％,平均7.0％,双标准测定绝对误差0.00－0.15mmol/L,平均0.09mmol/L;相对误差0.0％－7.2%。结论：双标准定标法比单标准定标测定结果准确可靠,方法较标准曲线法简便实用。     

肝硬化患者血清载脂蛋白变化分析

目的:分析肝硬化患者肝功能与载脂蛋白的关系.方法:选择肝硬化患者145例,采用日本产日立7060型自动生化分析仪测定血清载脂蛋白及其他生化指标.结果:肝硬化患者血清apoAl浓度较对照组明显下降,P＜0.05.按肝功能的不同分级,比较apoAl、HDL指标,不同级别之间差异有显著性意义,而apoB、LDL指标差异无显著性意义.肝硬化患者的血清apoAl浓度与血清白蛋白、前白蛋白、胆碱酯酶成正相关,而与胆红素成负相关.结论:apoAl较apoB敏感,能更好地反映肝功能受损情况.     

应用实时荧光定量PCR测定AdEasy系统中重组腺病毒滴度

目的:确立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,对AdEasy系统中的重组腺病毒滴度进行测定.方法:采用Stratagene公司的AdEasyTM载体系统在293细胞中构建重组腺病毒,经10倍梯度稀释的病毒母液用以提取基因组DNA及空斑测定.以10倍梯度稀释的pAdEasy质粒作为标准模板进行实时PCR反应扩增六邻体基因片段,并绘制标准曲线.然后以上述的重组腺病毒DNA为模板,采用同样体系进行实时PCR反应,同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组腺病毒并对其进行了空斑测定.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线性范围为101～108拷贝.病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值,约为空斑滴度(pfu/ml)值的10倍.结论:荧光实时定量PCR方法可在较大的线性范围内检测重组腺病毒滴度,较之空斑法更为准确地反映了重组腺病毒的实际数量.     

国产电解质分析仪PANSTARE—555定标液的节约及电极寿命的延长使用

ＰＡＮＳＴＡＲＥ— 555是南京分析仪器厂生产具有Ｋ 、Ｎａ 、Ｃｌ- 、Ｃａ2 、ｐＨ值多项检测功能的分析仪。该仪器自动化程度高 ,自动检测、自动冲洗、自动一点 (每小时进行一次 ) ,二点 (每 6小时进行一次 )定标 ,并定时进行清洗循环 ,保持电极的湿润。冲洗及一点定标用Ａ液 ,二点定标用Ｂ液 ,仪器通常 2 4小时开机候检 ,因此对Ａ、Ｂ液的消耗较大。为此 ,我们采用一点定标Ａ液吸至测量室 ,再切断电源的方法 ,节约了定标液 ,又不影响测定结果 ,同时还减缓电极老化。1　材料与方法1 1　操作　　开机 ,冲洗电极测量通道 ,吸Ａ液至电极测…     

定标血清在酶催化浓度测定中的应用

目的:应用定标血清校正酶催化浓度的结果,观察采用国产试剂测定酶催化浓度的准确性.方法:采用国产试剂来测定定标血清和定值质控血清的GPT、GOT、CK、ALP、γ-GT、HBDH的浓度值及校正因数(K值).结果:用国产试剂测定定标血清和定值质控血清的六项酶的浓度,经K值校正后的结果靠近靶值.结论:应用酶标准物,可有效地保证酶催化浓度测定结果的准确性.     

酶法测定血清钾偶尔假性增高原因探讨及解决办法

目的　探讨酶法测定血清钾偶尔假性增高而与临床不符的原因及解决办法。方法　对酶法常规检测血清钾结果假性增高标本进行自动复检并观察其时间反应进程曲线 ,同时与ISE检测结果进行比较。结果　酶法测定血清钾偶尔会出现的检测结果假性增高与其时间反应进程曲线明显异常有关而与底物耗尽、标本内源性干扰及交叉污染无关。经自动复检其反应曲线正常且结果与ISE检测结果无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,相关性良好 (r =0 .95 )。结论　通过时间反应进程曲线可鉴别酶法测定血清钾是否属假性增高 ;酶法测定血清钾假性增高者基本可通过自动复检或ISE法获取正确的检测结果。     

7010A生化仪测钾酶法时间点位探讨

测定时间点(ΔT=T2-T1)应处在酶催化的零级反应阶段.正确选择时间位点对酶活性浓度的准确性至关重要,本文应用紫外酶法2PUNDT,2点定标在HITACHl71 70A型全自动生化分析仪上应用RANDoX试剂盒参数2-21-27时间位点与自设2-20-28时间位点进行比较,延长酶促反应时间,使底物反应彻底,提高了精密度和准确性.检测结果的重复性比较恒定.     

双标准曲线在免疫比浊法定量检测D-二聚体中应用

目的探讨双标准曲线在免疫比浊法定量检测D-二聚体(D-D)中的应用。方法应用D-D标准品在CA1500全自动血凝仪上建立两条D-D定量标准曲线，一条为未稀释标准曲线，另一条为预稀释标准曲线。在两条标准曲线模式下，分别对D-D高值质控血浆和临床收集的34例D-D异常升高血浆样本进行D-D测定。结果在未稀释标准曲线模式下，上述样本的D-D均不能直接测出；而在预稀释标准曲线模式下，所有样本D-D均可直接测出。结论在应用免疫比浊法进行D-D测定中，采用双标准曲线可以较好地解决D—D异常升高样本测不出结果的问题。     

实时荧光定量PCR检测大鼠组织Angptl3表达的标准曲线构建

目的:采用实时荧光定量PCR(染料法)建立检测SD大鼠组织血管生成素样蛋白3(Angiopoietin-related protein 3,Angptl3)表达量的标准曲线.方法:以SD大鼠肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR获得目的DNA片段,用T-A克隆方法将其装载到质粒pUCm-T上,经过转化、质粒提取获得标准品,并以此为模板梯度稀释进行Real-time PCRR反应,建立该方法的标准曲线.结果:Angptl3标准曲线相关系数为0.997 6,相关性较好;斜率为0.862 3,扩增效率适中.结论:成功构建了用Real-timePCR方法检测SD大鼠肝组织Angptl3表达量的标准曲线.     

纤维蛋白原平板法测定水蛭素活性

目的:报告一种新的水蛭素活性测定方法--纤维蛋白原平板法.方法:以纤维蛋白原作为底物,在纤维蛋白原平板上进行免疫扩散反应,精确测量沉淀圈直径,绘制标准凝血酶活力标准曲线.在标准曲线上查出凝血酶与水蛭素反应后的剩余凝血酶活力,计算出水蛭素活性.结果:系列活力浓度10、5.0、2.5、1.25、0.625、0.312 5 NIH/ml的标准凝血酶其免疫扩散沉淀圈直径与酶活力呈良好的线性关系(r=0.9959).结论:采用系列活力浓度的标准凝血酶与被水蛭素抑制后的剩余凝血酶同在一块纤维蛋白原平板上进行免疫扩散反应的方法,实验成本低,操作简便,结果客观,准确度较好.     

全自动生化仪测定ALT结果失真的分析

在日常全自动生化仪速率法检测ALT(丙氨酸氨基转移酶)工作中,有时测定值很低,同时TB等其他肝功检测项目测定值都很高.但稀释后再测定ALT结果却很高,大都超过线性范围,与稀释前相差甚远.为了寻找原因,要经常检查反应曲线,避免检验结果与实际不符.现报告如下:     

全自动生化分析仪测定ALT和AST结果失真的分析

目的探讨用全自动生化分析仪测定ALT和AST结果失真的原因以及解决的方法.方法用全自动生化分析仪7600速率法检测ALT和AST.结果有一些ALT和AST测定结果太低甚至为负值,反应曲线异常,经过稀释后测定,其结果与稀释前相差甚远.结论遇到过低的结果要寻找原因,经常察看反应曲线,避免报告结果与临床不符.