RNA干扰技术中siRNA设计原则的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是近年发展起来的一项新技术,与内源mRNA同源的小片段外源双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)导入细胞,导致特定基因表达沉默,其中约2l～23 nt的小干扰RNA(short interference RNA,siRNA)是RNAi的重要效应分子。RNA干扰技术的应用关键在于siRNA的合理设计和有效转运系统。该文主要叙述了siRNA的设计原则。     

RNA研究进展

近10年来,人们对RNA领域有了更多更新的研究发现,RNA早已不再局限于编译蛋白质,它还影响着生物体的基因表达、细胞周期及个体发育过程。小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)和非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)对生物体的生命活动有着重要的调控作用。siRNA引起RNA干扰(RNA interference,RNAi),ncRNA在包括转录调节、染色体复制、RNA剪切及加工、维护mRNA稳定和     

RNA干扰技术的设计原则研究进展

RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术是近年发展起来的一项新技术，与内源mRNA同源的小片段外源双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)导入细胞，导致特定基因表达沉默，其中约21～23bp的小干扰RNA（short interference RNA, siRNA）是RNAi的重要效应分子。RNA干扰技术的应用关键在于siRNA的合理设计和有效转运系统。本文主要叙述了siRNA的设计原则。     

siRNA在自身免疫病治疗中的研究进展

小干扰RNA(siRNA)是RNA干扰(RNAi)的主要介导者,其通过双链RNA(dsRNA)使同源基因沉默,是以核酸为基础最广泛使用于治疗疾病的基因沉默技术。现今,siRNA已被应用于诸多研究领域,在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化等自身免疫病中的研究也日益增多。本文对siRNA的发现、siRNA介导的基因沉默机制以及siRNA在自身免疫性疾病治疗中的应用进行综述。     

RNAi及其实验技术进展

RNA干扰 (RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默 (PTGS)机制 ,具有普遍的生物学意义。dsRNA经DICER酶切割为 2 1～ 2 3核苷酸长的小分子干扰RNA片段 (siRNA) ,可以高效、特异地阻断体内特定基因表达 ,促使mRNA降解 ,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型。由于能够迅速而简单地制备某个基因功能缺失表型 ,RNAi实验技术的发展将为基因或蛋白功能研究、药物筛选、信号通路分析、基因治疗等提供新的重要研究手段和技术平台。     

VEGF siRNA的筛选、评价及siRNA的设计规则探讨

目的设计并评价9条VEGFsiRNA的干扰效果,并提出新的高效siRNA设计规则。方法用siRNA现有设计规则与计算机辅助结合共设计9条VEGFsiRNA序列,长度为19 bp。体外转录法构建9条VEGFsiRNA,通过脂质体介导转染神经胶质瘤U251细胞株,培养48 h,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量,分析9条VEGFsiRNA序列特征与其干扰效果的关系。结果用“H-b”指数可以量化VEGFmRNA二级结构;VEGF蛋白表达的抑制程度与“H-b”指数呈负相关(r=-0.498),靶向VEGFmRNA第386~406位置核苷酸的siRNA和第401~421位置核苷酸的siRNA的“H-b”指数小,抑制蛋白表达的效果好。siRNA正义链的第19个核苷酸碱基为A/U,且第6个核苷酸碱基为A,有较好的沉默靶基因的效果。siRNA的热动力学特征也影响其干扰效果,反义链第9~14位置的内部能量稳定性的均值(AIS)大,易于发挥干扰效果;siRNA反义链的结合能量越低,siRNA反义链与靶序列mRNA结合越稳定,有利于RNA诱导的沉默复合物(R ISC)剪切靶序列mRNA。结论成功地设计并合成VEGFsiRNA序列,能有效地抑制VEGF蛋白表达。     

小干扰RNA的设计及原理

RNA干扰技术在人类基因功能研究、药物靶点鉴定等方面备受青睐,并且具有潜在的临床应用价值。但只有设计合理的小干扰RNA (siRNA)才能高效、特异地抑制靶基因表达。本文总结了siRNA序列的一般特点以及设计siRNA的方法和相应原理,并介绍了如何利用实验手段,验证RNA干扰的有效性及特异性。从而促进RNA干扰技术的广泛开展。     

siRNA干扰铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达的研究

目的 探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响.方法 设计并合成4条小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4)序列,构建干扰RNA( short hair pin RNA,shRNA)表达载体,将带有siRNA质粒电转入PAO1和临床耐药株PAO3.应用E-test方法检测PAO1和PAO3抗生素MIC的变化.用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化.结果 经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功,并明显提高PAO和临床耐药株PAO3对抗生素的敏感性.RT-PCR结果显示干扰后的PAO1和临床耐药株PAO3 mexB基因表达明显下降(P＜0.05).结论 siRNA成功干扰MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性,为临床上治疗铜绿假单胞菌感染,降低其耐药性提供了新的思路.     

RNA干扰机制的分子生物学研究进展

RNA干扰（RNAi）是一种有效的基因沉默过程。其主要机制是指双链RNA（dsRNA）在RNase Ⅲ作用下形成小干扰RNA（siRNA），进而与相应蛋白结合形成RNA诱导沉默复合物（RISC），介导靶mRNA降解。此外，RNAi还可作用于转录水平和翻译水平。本文介绍了RNAi的发现及可能分子机制。     

靶向PCNA基因的小干扰RNA对鼻咽癌CNE2细胞周期的影响

目的： 研究小干扰RNA抑制PCNA基因表达后对鼻咽癌CNE2细胞株增殖及细胞周期的影响。方法: 利用体外合成法合成针对PCNA基因的小干扰RNA(siRNA)序列,应用脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,实时定量PCR(real-time PCR) 和免疫组织化学法观察siRNA干扰后细胞中PCNA mRNA水平和PCNA蛋白表达,倒置相差显微镜观察转染前后CNE2细胞的生长变化,流式细胞仪检测siRNA干扰后的细胞周期。结果: 在siRNA转染CNE2细胞后,细胞增殖受到抑制,蛋白表达不同程度降低,对PCNA mRNA水平的抑制达98.5%,细胞周期在G0/G1停滞。结论: siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应,抑制PCNA mRNA及蛋白表达,降低PCNA活性,抑制鼻咽癌细胞增殖,为鼻咽癌基因治疗提供了新的方法。     

RNA干扰技术及其应用

近来研究发现 ,真核细胞内某些双链RNA能高效、特异地结合、降解互补mRNA ,阻断特异基因的表达 ,介导高度序列特异性的基因沉默 ,导致细胞出现特定基因缺失的表型 ,此现象称为RNA干扰 (RNAinterference,RNAi) ,其中 2 1～ 2 5nt大小的短双链RNA称为siRNA(smallinterferingRNA) .siRNA与核酶复合体结合形成RNA诱导的沉默复合物 (RNA -inducedsilencingcomplex.RISC) .RISC通过碱基配对方式与靶mRNA结合 ,并在距离siRNA 3’端 12个碱基的位置切割、降解靶mRNA .RNAi具有高效性和序列特异性 ,已经成为功基因组研究的有力工具 ,并且有可能在某些疾病如肿瘤等的基因治疗中发挥重要作用 .     

探索小RNA的功能

基因表达的调控———决定于细胞内产生多少何种的蛋白质———是由无数不同的分子控制的.一种自然产生的调控分子是小的干扰RNA(siR NA) ,它选择性地中断按计划已认可的蛋白质的产生,这个过程称为RNA干扰.这些短的核苷酸延伸结合与其它细胞的蛋白质形成了一种RNA诱导的静止复合物,称为RISC ,它能定位并且破坏一种靶信使RNA—这种分子是把某种蛋白质的信息,从细胞核携带到它生成的细胞质位置.生物学家们在动植物中发现了几百种其它自然产生的短小调控RNA ,称为miRNAs .像siR NA ,他们也能通过类似的甚至可能是相同的RISC分子影…     

RNA干扰及其在哺乳动物基因功能研究中的应用

RNA干扰是由与靶基因序列同源的小的双链 RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。它能特异性地抑制某些基因的表达。小于 30 nt的小双链 RNA是哺乳动物 RNA干扰现象的中介因子。随着对 RNA干扰发生机制的深入研究 ,它作为一项遗传学技术已被应用于哺乳动物基因及蛋白质功能的研究 ,并在基因治疗中显示出巨大的潜力。得益于载体导入系统的发展 ,这项技术将有广阔的应用前景。     

RNA干扰--治疗HIV感染的新方法

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,特异性沉默内源或外源性同源基因的过程.RNAi的分子生物学特征当前已被用于抗HIV感染和治疗AIDS病.本文就RNAi抗HIV机制和近两年来RNAi在抗HIV-1感染方面的最新研究进展及在RNAi实验设计上需注意的问题等方面加以综述.     

RNA干扰抗人单股正链RNA病毒感染的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一种新兴的高效基因沉默工具,用于研究基因功能与基因表达调控领域,特异性地降低或关闭目的基因表达.近年来,针对病毒感染性疾病,尚无特别有效的防治方法.目前RNAi技术被广泛应用于抗病毒感染领域的研究,几种以RNAi为基础的抗病毒疗法目前正在进行不同时期的临床试验[1],有望成为抗病毒感染基因治疗的有效工具.     

miRNA与固有免疫

miRNA是近年来发现的一种小分子RNA,参与细胞分化、生长发育等多种生物学过程,与人类疾病密切相关。最近,有研究发现miRNA可以通过TLR的信号转导途径和细胞因子反应参与固有免疫。本文对miRNA和RNA干扰在固有免疫反应中的调控作用作一综述。     

RNA干扰的组织靶向性

RNA干扰是一种转录后基因沉默现象,可通过双链诱导使靶基因失活。为了增强对组织靶向性的治疗应用,目前研究有利用载体的特异性及基因重组构建进行调控作用于靶组织,也可以小分子基团特异性化学修饰小RNA双链或载体及其他微粒等方法提高组织靶向性。现已有部分RNA干扰治疗应用于临床,且通过组织靶向作用可拓展疾病治疗途径。     

RNA干扰技术治疗恶性肿瘤的靶点选择和靶向导入

一、RNA干扰技术的简介 RNA干扰（siRNA）是指小分子双链RNA抑制同源序列的基因表达的现象，是生物进化过程中保留下来的机制。早期的研究发现RNA干扰参与了植物细胞防御病毒感染和转位子侵袭的免疫反应。2001年Tuchl等发现siRNA能在哺乳动物细胞内高效沉默目标基因的表达，掀起了生命科学领域对siRNA的基础和应用研究的热潮。     

目标序列二级结构对RNA干扰效果的影响

目的探讨RNA二级结构对RNA干扰效果的影响,为RNA干扰靶序列的选择及设计有效siRNA提供依据。方法以K562细胞为模型,N-RAS基因mRNA为模板,分别针对二级结构茎区及二级结构环区设计4对siRNA,并分别采用RT-PCR、细胞活力检测及流式细胞检测等方法在RNA及细胞水平检测干扰效果差异。结果干扰结果表明,针对目标序列的siRNA均能对同源基因的表达产生一定程度的抑制,而针对二级结构环区目标序列的siR-NA干扰效果明显优于针对二级结构茎区的siRNA。结论RNA干扰效果与目标序列二级结构密切相关,在进行RNA干扰实验的目标序列选择时,应考虑二级结构的因素。     

RNA干扰技术及其应用

近来研究发现,真核细胞内某些双链RNA能高效、特异地结合、降解互补mRNA,阻断特异基因的表达,介导高度序列特异性的基因沉默,导致细胞出现特定基因缺失的表型,此现象称为RNA干扰(RNA interference, RNAi),其中21～25nt大小的短双链RNA称为siRNA(small interfering RNA).siRNA与核酶复合体结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex. RISC).RISC通过碱基配对方式与靶mRNA结合,并在距离siRNA 3'端12个碱基的位置切割、降解靶mRNA.RNAi具有高效性和序列特异性,已经成为功基因组研究的有力工具,并且有可能在某些疾病如肿瘤等的基因治疗中发挥重要作用.