甲状腺素对幼鼠脑TNF-α和TNFR1基因表达的影响

目的研究甲状腺素(T4)对幼鼠脑TNF-α和TNFR1基因表达的影响.方法采用丙基硫氧嘧啶灌胃制备甲状腺功能低下(甲低)孕鼠模型,出生后小鼠为先天性甲低鼠,另一组出生后即日起用腹腔注射T4,剂量为20 μg/(kg*d)(替代组),采用逆转录-聚合酶链反应检测出生后1,5,10 d幼鼠TNF-α和TNFR1基因的表达.结果在出生后第1 d甲低幼鼠脑TNF-α和TNFR1基因表达最高,随着鼠龄增长,表达降低;正常出生后第1 d幼鼠及替代组TNF-α和TNFR1基因表达较甲低组低.结论甲状腺素对TNF-α和TNFR1基因表达的影响在脑细胞凋亡中有重要的作用.     

甲状腺激素对仔鼠大脑皮质和海马细胞凋亡的影响

目的研究甲状腺素(T4)对发育期大鼠大脑皮质、海马细胞程序化死亡(PCD)的影响。方法采用甲巯咪唑(MM)复制甲状腺功能减退(甲减)孕鼠模型,出生后仔鼠为先天甲减鼠,同时设正常对照组:应用原位末端标记(TUNEL)方法检测出生后7、14、21d仔鼠大脑皮质、海马PCD阳性细胞。结果 (1)MM组各日龄仔鼠血清FT3、FT4水平明显低于对照组。(2)正常大鼠生后早期大脑皮质、海马均存在细胞凋亡,以生后7d TUNEL阳性细胞数最多,此后逐渐减低。甲减使各脑区各时点凋亡细胞数均明显增加。结论正常大鼠发育期大脑皮质和海马即存在细胞凋亡,甲状腺激素对大脑皮质、海马细胞凋亡有影响,可能是甲减性脑功能障碍的机制之一。     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑发育的损伤及CaMKⅡ表达的影响

目的观察碘缺乏及甲状腺功能减退大鼠仔鼠小脑发育的影响,以及对CaMKⅡ表达的影响。方法雌性Wistar大鼠,交配妊娠后,取孕鼠28只按体重随机分成对照组、甲状腺功能减退-1组、甲状腺功能减退-2组和碘缺乏组。自妊娠第6日起,对照组继续饲以普通饲料;甲减-1组、甲减-2组分别给予5ppm、15ppm丙基硫尿嘧啶饮水,饲以普通饲料;碘缺乏组饲以缺碘地区粮食配制的饲料,至仔鼠生后第28天(PN28)。PN7、PN14、PN21、PN28、PN42取仔鼠小脑皮质进行尼氏染色及CaMKⅡ蛋白免疫组化染色。结果 PN14、PN21、PN28及PN42各组大鼠仔鼠小脑神经元的尼氏小体的平均积分光密度值显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05);仔鼠小脑皮质CaMKⅡ表达均显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。结论碘缺乏和甲状腺功能减退可影响大鼠仔鼠小脑CaMKⅡ蛋白的表达,从而损害仔鼠小脑,导致脑神经发育障碍。     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑CaM和CaN表达的影响

目的观察碘缺乏及甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑发育的影响,以及对CaM、CaN表达的影响。方法W istar大鼠交配妊娠后,取孕鼠28只按体重随机分成对照组、甲状腺功能减退-1组、甲状腺功能减退-2组和碘缺乏组。自妊娠第6日起,对照组继续饲以普通饲料;甲减-1组、甲减-2组分别给予5 ppm、15 ppm丙基硫尿嘧啶饮水,饲以普通饲料;碘缺乏组饲以缺碘地区粮食配制的饲料,至仔鼠生后第28 d（PN28）。PN7、PN14、PN21、PN28、PN42取仔鼠小脑皮质进行CaM、CaN蛋白免疫组化染色。结果PN14、PN21、PN28及PN42时,甲减-2组和碘缺乏组仔鼠小脑皮质CaM的平均积分光密度值显著低于对照组和甲减-1组,具有统计学意义（P〈0.05）;碘缺乏组仔鼠小脑皮质CaN表达均显著高于对照组,具有统计学意义（P〈0.05）。结论碘缺乏和甲状腺功能减退可影响大鼠仔鼠小脑CaM、CaN蛋白的表达,从而损害仔鼠小脑,导致脑神经发育障碍。     

甲状腺激素对仔鼠大脑皮质中NO/cGMP信号转导通路的作用

目的研究甲状腺激素对大鼠仔鼠大脑皮质中一氧化氮(NO)水平、一氧化氮合酶(NOS)活性和环鸟苷酸(cGMP)水平的影响,为探讨甲状腺激素对神经系统发育的作用机制提供实验资料。方法取怀孕3d的SD大鼠10只,随机分为实验组与对照组。实验组饮含1%高氯酸钠的自来水,对照组饮自来水,直至仔鼠产下15d(其产下的仔鼠分别为甲状腺功能低下仔鼠及正常仔鼠)。采用放射免疫法测定仔鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)和仔鼠大脑皮质cGMP水平,采用硝酸还原酶法测仔鼠大脑皮质中NO水平,采用分光光度计法测NOS活性。结果实验组仔鼠血清FT3、FT4明显低于对照组(P<0.01)。实验组仔鼠大脑皮质中NO水平、NOS活性及cGMP水平也较对照组显著降低(P<0.01)。相关分析表明:血清FT3与大脑皮质中NO、cGMP水平呈显著正相关,r值分别为0.91、0.97,P<0.01;血清FT4与大脑皮质中NO、cGMP水平也呈显著正相关,r值分别为0.90、0.96,P<0.01;大脑皮质中NO与cGMP水平呈显著正相关,r值为0.90,P<0.01。结论甲状腺激素的缺乏可降低仔鼠大脑皮质中NO、cGMP水平,NO/cGMP信号转导系统在甲状腺功能低下导致脑发育障碍中发挥重要作用。     

甲状腺激素对大鼠大脑皮质及海马Bcl-2和Bax的影响

目的研究甲状腺素（T4）对发育期大鼠大脑皮质、海马细胞Bcl-2和Bax的影响。方法采用甲巯咪唑复制甲状腺功能减退（甲减）孕鼠模型，出生后仔鼠为先天性甲减鼠，T4替代组于仔鼠出生后即日起腹腔注射T4剂量为每天20μg／kg，同时设对照组；采用免疫组化染色检测出生后第7、14、21天仔鼠大脑皮质、海马Bcl-2和Bax蛋白。结果①甲疏咪唑组各日龄仔鼠血清FT3、FT4水平明显低于对照组。②对照组大鼠生后大脑皮质、海马有散在的Bax和Bcl-2阳性细胞，以生后第7天表达较高，此后随日龄增加渐降低，至生后第21天表达已很弱。甲减组各脑区Bcl-2阳性细胞减少，而Bax阳性细胞明显增加。T4替代后Bcl-2阳性细胞明显增加．Bax阳性细胞减少。结论①对照组大鼠发育期大脑皮质、海马Bcl-2和Bax表达阳性，且在不同发育时期表达不一致，至成年动物表达很弱，说明在大鼠正常发育过程中，Bcl-2和Bax呈一定时程变化规律。②甲减时大脑皮质和海马Bcl-2下调、Bax上调，及时T4替代治疗可以增强Bcl-2并降低Bax基因的表达。     

妊娠期亚临床甲减大鼠对子代学习记忆能力及脑发育相关基因表达的影响

目的 通过建立妊娠期亚临床甲状腺功能减退(甲减)孕鼠动物模型,观察母鼠亚临床甲减对仔鼠行为学改变的影响,并从脑发育相关基因表达方面探讨母体亚临床甲减导致胎儿脑发育障碍的机制.方法将60只SPF级雌性成年Wistar大鼠随机分成3组(每组n=20):(1)亚临床甲减组:手术切除甲状腺,于背部皮下植入微渗泵,L-T4装入泵中持续泵入;(2)甲减组:手术完全切除甲状腺,术后注入等量生理盐水,作为阳性对照;(3)正常对照组(假手术组):行甲状腺切除假手术,术后注入等量生理盐水.取仔鼠出生后第3、7及21天海马组织,以实时定量PCR法检测各时间点脑源性神经营养因子(BDNF)、神经细胞黏附分子(NCAM)mRNA表达;以Western印迹法检测BDNF、Rap1的蛋白含量;第40天仔鼠进行Morris水迷宫学习与记忆测试.结果(1)与正常对照组比较,亚临床甲减组的仔鼠第3天BDNF mRNA和蛋白表达减弱(均P＜0.05),NCAM mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);第21天Rap1蛋白表达明显增强(P＜0.05);水迷宫结果显示第44天逃避潜伏期明显高于对照组,第49天长时记忆试验中在目标象限游泳时间明显低于对照组(均P＜0.05).(2)与甲减组比较,亚临床甲减组的仔鼠出生后各时点BDNFmRNA及蛋白表达明显增强(P＜0.05或P＜0.01).Rap1蛋白表达明显降低(P＜0.05);水迷宫结果显示第44天逃避潜伏期明显低于甲减组,第49天长时记忆试验中在目标象限游泳时间明显高于甲减组(均P＜0.05).结论母体亚临床甲减的仔鼠空间学习能力及空间记忆能力均下降,其作用机制可能与甲状腺激素调控基因BDNF表达下调、Rap1表达升高有关.     

妊娠早期左旋甲状腺素治疗亚临床甲减母鼠可改善仔鼠神经智力发育

目的 探讨妊娠早期左旋甲状腺素治疗母鼠亚临床甲减对仔鼠大脑发育的影响.方法 90只Wistar雌鼠随机分成假手术对照组(C)、甲减组(CH)、亚临床甲减组(SCH)、亚临床甲减治疗Ⅰ组(妊娠第10天开始治疗,E10)、亚临床甲减治疗Ⅱ组(E13)、亚临床甲减治疗Ⅲ组(E17),检测仔鼠体重、甲状腺功能,行水迷宫实验、Nissl染色和免疫组化染色.结果 CH组及SCH组仔鼠体重低于C组仔鼠(P＜0.05),但E10、E13及E17治疗组体重均未受影响(P＞0.05).各组仔鼠甲状腺功能无区别(P＞0.05).CH、SCH及E17治疗组仔鼠逃避潜伏期比C组仔鼠延长(P＜0.05),海马CA1区及皮质神经元排列紊乱,海马锥体层增厚,辐射层较薄,神经细胞迁移位置异常,E10及E13治疗组与C组仔鼠无区别.结论孕鼠SCH能够对后代学习记忆能力造成损害,影响细胞构筑及大脑细胞迁移,在E13之前应用左旋甲状腺素治疗可有效改善后代学习记忆能力、细胞构筑及细胞迁移.     

锌对缺碘受孕大鼠和仔鼠甲状腺功能及脑发育影响的实验研究

目的观察锌对碘缺乏妊娠大鼠及仔鼠生长发育、甲状腺和脑形态与功能及相关激素的影响。方法用低碘饲料喂养Wistar雌性大鼠，同时设补碘、补复合锌、补葡萄糖酸锌、补碘加复合锌组。第90天时将动物模型进行交配，于第21天处死孕鼠，查活胎体质量、畸胎、死胎率和胚胎吸收率，对垂体、甲状腺称质量，测血清甲状腺激素、促性腺激素和性激素水平。各组仔鼠于生后第45天对垂体、甲状腺称质量，测脑组织蛋白质、DNA、RNA水平。结果缺碘组孕鼠尿碘低下，甲状腺肿大，T4、FT4降低（P〈0．01），T3、FT3升高（P〈0．01）；促性腺激素和性激素异常；胎鼠体质量降低，死胎、吸收胎增加；仔鼠体质量增长缓慢，甲状腺肿大，脑质量减轻，蛋白质、DNA、RNA水平减低，同时RNA／DNA和蛋白质／DNA比值降低（P〈0．01）。补锌组孕鼠甲状腺质量较缺碘组减轻（P〈0.01），甲状腺激素、促性腺激素和性激素部分恢复；胎鼠体质量增加，死胎和胚胎吸收率降低；仔鼠甲状腺肿大减轻，体质量增加，脑蛋白质、DNA、RNA水平和RNA／DNA、蛋白质／DNA比值升高（P〈0．01）。结论缺碘大鼠补锌降低甲状腺肿大程度；调节甲状腺激素、促性腺激素和性激素代谢紊乱；其生育的仔鼠甲状腺肿大减轻，大脑蛋白质、DNA、RNA水平增加。由此认为，补锌拮抗由缺碘所致的孕鼠生殖和胎鼠发育异常及仔鼠脑发育障碍。     

大鼠脑单胺氧化酶对甲状腺激素反应的实验观察

目的 探讨甲状腺激素对甲状腺功能低下（甲低）鼠脑单胺氧化酶（MAO）活性的影响和保护作用。方法 用1%NaClO4诱发大鼠甲状腺功能低下,实验组大鼠分别注射T3、T4,观察脑MAO活性变化,同时观察生后不同时期甲低仔鼠MAO活性。结果 甲低大鼠脑MAO活性增强,20日龄仔鼠MAO活性增加的百分比高于成熟鼠。注射T4脑MAO活性恢复,脑MAO活性与血清T4呈负相关。结论 大鼠甲低时脑MAO活性变化反映了MAO在维持大脑发育和功能上起重要作用,T4对脑MAO活性有保持作用。     

甲状腺激素调节仔鼠脑基因差异表达的研究

目的　研究甲状腺激素调节仔鼠脑基因的分子机制。方法　丙基硫氧嘧啶灌胃制备孕鼠甲状腺功能减退模型 ,部分胎鼠出生后予以 T4 替代治疗 ,采用消减抑制杂交技术构建甲状腺激素调节仔鼠脑基因的差异表达文库 ,对部分重组克隆进行序列分析。结果　随机测序 10个表达序列标签 ,同源性分析表明 5个表达序列标签未发现明确的同源物 ,其它表达序列标签与 CDC10 ,酸性核糖体蛋白 P0 ,actin等有较高同源性。结论　甲状腺激素调节仔鼠脑基因的差异表达谱的获得对阐明甲状腺激素对脑发育的分子机理有十分重要的意义     

Iodine supplementation for pregnancy and lactation-United States and Canada: recommendations of the american thyroid association.

The fetus is totally dependent in early pregnancy on maternal thyroxine for normal brain development. Adequate maternal dietary intake of iodine during pregnancy is essential for maternal thyroxine production and later for thyroid function in the fetus. If iodine insufficiency leads to inadequate production of thyroid hormones and hypothyroidism during pregnancy, then irreversible fetal brain damage can result. In the United States, the median urinary iodine (UI) was 168 microg/L in 2001-2002, well within the range of normal established by the World Health Organization (WHO), but whereas the UI of pregnant women (173 microg/L; 95% CI 75-229 microg/L) was within the range recommended by WHO (150-249 microg/L), the lower 95% CI was less than 150 microg/L. Therefore, until additional physiologic data are available to make a better judgment, the American Thyroid Association recommends that women receive 150 microg iodine supplements daily during pregnancy and lactation and that all prenatal vitamin/mineral preparations contain 150 microg of iodine.     

Increased expression of mitochondrial genes in human alcoholic brain revealed by differential display

Polymerase chain reaction (PCR)-based differential display was used to screen for alterations in gene expression in the mesolimbic system of the human alcoholic brain. Total RNA was extracted from the nucleus accumbens of five alcoholic and five control brains. A selected subpopulation of mRNA was reverse-transcribed to cDNA and amplified by PCR. A differentially expressed cDNA fragment was recovered, cloned, and sequenced. Full sequence analysis of this 467 bp fragment revealed 98.2% homology with the human mitochondrial 12S rRNA gene. Dot-blot analysis showed increased expression of this gene in nucleus accumbens and hippocampus, but not in the superior frontal cortex, primary motor cortex, caudate, and pallidus/putamen in a total of eight human alcoholic brains, compared with seven control brains. A similar increased expression was observed by dot-blot analysis, using RNA from the cerebral cortex of rats chronically treated with alcohol vapor. Hybridization of a 16S rRNA oligonucleotide probe indicated that the expression of both rRNAs genes was significantly increased in nucleus accumbens. These results indicate that chronic alcohol consumption induces alteration in expression of mitochondrial genes in selected brain regions. The altered gene expression may reflect mitochondrial dysfunction in the alcohol-affected brain.     

索曼染毒对大鼠脑组织乙酰胆碱受体m1和m4 mRNA表达的影响

目的研究慢性小剂量索曼(soman)染毒对大鼠海马和前额叶皮层乙酰胆碱受体m1和m4 mRNA表达的影响。方法以皮下注射索曼为大鼠染毒模型,雄性健康Wistar大鼠随机分为6μg/kg染毒组(6μg/kg)、10μg/kg染毒组(10μg/kg)、生理盐水对照组(相同体积的生理盐水),半数致死量对照组(大鼠在取样前注射一次索曼,剂量为100μg/kg),每组6只;除半数致死量染毒对照组外,均每日上午背部注射1次,共14 d。采用RT-PCR方法检测大鼠海马和前额叶皮层乙酰胆碱受体m1和m4 mRNA表达水平。结果乙酰胆碱受体m1和m4 mRNA的变化结果以OD乙酰胆碱受体m1(乙酰胆碱受体m4)/ODGAPDH表示,6μg/kg组大鼠前额叶皮层乙酰胆碱受体m1 mRNA为(0.250±0.016),10μg/kg组为(0.247±0.018),均显著低于生理盐水对照组(0.287±0.021)和半数致死量对照组(0.277±0.028)(P<0.05);海马乙酰胆碱受体m1 mRNA表达无明显变化(P>0.05),6μg/kg组为(0.275±0.022),10μg/kg组为(0.270±0.019),生理盐水对照组为(0.294±0.027),半数致死量对照组为(0.289±0.029)。6μg/kg组和10μg/kg组前额叶皮层乙酰胆碱受体m4 mRNA表达分别为(0.364±0.031)和(0.426±0.066),均显著高于生理盐水对照组(0.274±0.025)和半数致死量对照组(0.271±0.046)(P<0.01),6μg/kg组和10μg/kg组海马乙酰胆碱受体m4 mRNA表达分别为(0.627±0.030)和(0.671±0.074),均显著高于生理盐水对照组(0.528±0.031)和半数致死量对照组(0.531±0.054)(P<0.01)。在生理盐水对照组和半数致死量对照组间乙酰胆碱受体m1 mRNA和m4 mRNA表达水平均无显著差别(P>0.05)。结论小剂量索曼染毒致大鼠前额叶皮层乙酰胆碱受体m1mRNA表达下降,海马和前额叶皮层乙酰胆碱受体m4 mRNA表达增加,这种变化为索曼慢性作用的结果。索曼可能从基因水平影响乙酰胆碱M受体的表达,从而导致胆碱能系统功能下降及大鼠学习记忆障碍。     

Suppression of prion protein in livestock by RNA interference

Given the difficulty of applying gene knockout technology to species other than mice, we decided to explore the utility of RNA interference (RNAi) in silencing the expression of genes in livestock. Short hairpin RNAs (shRNAs) were designed and screened for their ability to suppress the expression of caprine and bovine prion protein (PrP). Lentiviral vectors were used to deliver a transgene expressing GFP and an shRNA targeting PrP into goat fibroblasts. These cells were then used for nuclear transplantation to produce a cloned goat fetus, which was surgically recovered at 81 days of gestation and compared with an age-matched control derived by natural mating. All tissues examined in the cloned fetus expressed GFP, and PCR analysis confirmed the presence of the transgene encoding the PrP shRNA. Most relevant, Western blot analysis performed on brain tissues comparing the transgenic fetus with control demonstrated a significant (>90%) decrease in PrP expression levels. To confirm that similar methodologies could be applied to the bovine, recombinant virus was injected into the perivitelline space of bovine ova. After in vitro fertilization and culture, 76% of the blastocysts exhibited GFP expression, indicative that they expressed shRNAs targeting PrP. Our results provide strong evidence that the approach described here will be useful in producing transgenic livestock conferring potential disease resistance and provide an effective strategy for suppressing gene expression in a variety of large-animal models.     

电针治疗对大鼠脑缺血再灌注中Annexin A1表达的影响

目的探讨电针治疗在大鼠脑缺血再灌注损伤中对Annexin A1表达的影响。方法 SD大鼠32只,随机分为对照组、缺血再灌注组、电针组、假手术组,每组8只。检测Annexin A1在大鼠脑组织中的表达变化及AnnexinA1转位结果。结果大鼠大脑中动脉栓塞60 min再灌注24h后,可出现明显的神经缺损性行为,在脑缺血前后以电针治疗可明显改善大脑损伤性行为异常。在海马CA1、CA2、CA3、齿状回、皮质区,缺血再灌注组大鼠Annex-in A1的表达较对照组明显升高,电针组大鼠Annexin A1的表达较缺血再灌注组明显下降(P<0.05)。在海马CA1、CA3、皮质区,缺血再灌注组大鼠Annexin A1核转位和膜转位较对照组明显上升;在海马CA1、CA3区,电针组大鼠Annexin A1核转位和膜转位较缺血再灌注组明显下降(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后Annexin A1表达上调,Annexin A1出现核转位和膜转位现象,电针可以逆转Annexin A1表达和转位。电针有可能通过调节Annexin A1的核转位和膜转位来改变神经元的凋亡。     

成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶突触结合蛋白I表达及T4替代治疗作用

目的 观察成年期甲状腺功能减退症(甲减)大鼠额叶突触结合蛋白I(synaptotagmin I,sytI)表达改变及不同剂量甲状腺素替代治疗的作用.方法 将44只大鼠按体质量随机分为甲减组、常规治疗组、大剂量治疗组、对照组,用丙基硫氧嘧啶(PTU)腹腔注射建立成年期大鼠甲减及治疗模型;放射免疫法测定4组大鼠血清甲状腺激素水平,免疫组织化学S-P法分析sytI蛋白在4组大鼠额叶分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层中的表达.结果 甲减组大鼠血清T3、T4[(0.34±0.04)、(43.01±2.95)nmol/L]显著低于对照组[(0.65±0.15)、(55.20±3.56)nmol/L,F值分别为6.026、4.503,P<0.05或<0.01],甲减组鼠syt I免疫反应产物在额叶分子层(0.018±0.010)、外颗粒层(0.020±0.007)、外锥体细胞层(0.013±0.008)、内颗粒层(0.011±0.005)、内锥体细胞层(0.024±0.013)均较对照组(0.028±0.010、0.031±0.010、0.028±0.010、0.022±0.008、0.038±0.013)明显减少(F值分别为5.697、8.965、14.668、13.597、6.807,P<0.05或<0.01).常规治疗组大鼠血清T3、T4[(0.63±0.05)、(55.04±3.77)nmoL/L]与对照组比较,差异无统计学意义(F值分别为3.162、0.367,P均>0.05),额叶分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层syt I蛋白表达(0.027±0.013、0.025±0.009、0.022±0.008、0.020±0.010、0.033±0.010)与对照组比较差异均无统计学意义(F值分别为0.094、2.208、2.467、0.350、0.693,P均>0.05);大剂量治疗组大鼠血清T3、T4[(1.11±0.10)、(96.68±6.42)nmol/L]显著高于对照组(F值分别为6.291、12.031,P均<0.01),额叶各层syt I蛋白表达(0.028±0.008、0.031±0.011、0.026±0.012、0.023±0.011、0.038±0.010)与对照组比较的差异均无统计学意义(F值分别为0.001、0.019、0.111、0.061、0.001,P均>0.05).结论 成年期甲减大鼠额叶内syt I蛋白表达减少,常规剂量甲状腺素替代治疗就能使其恢复至正常水平.