益智仁盐炙后缩泉丸入血成分的分析

目的分析益智仁Alpinia oxyphylla Miq.盐炙后缩泉丸的入血成分。方法大鼠灌胃缩泉丸(含盐益智仁)石油醚部位后,通过HPLC结合LC-MS法比较含药血清和空白血清化学成分。结果共标定23种入血成分,并鉴定出其中7种,分别为杨芽黄素、白杨素、益智酮甲、7-表-香科酮、益智醇、圆柚酮及其代谢产物11,12-二羟基圆柚酮。结论所发现的入血成分可能是缩泉丸发挥药效的物质基础。     

白杨素对脑缺血-再灌注损伤的神经保护机制研究

目的：探索白杨素（Chrysin）对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用及其机制。方法：体外实验通过噻唑兰比色法（MTT比色法）检测白杨素对谷氨酸神经损伤细胞的保护作用;免疫荧光染色检测白杨素诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,MSC）相关神经营养因子的表达水平;体内药效学评价采用脑中动脉阻断法构建大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO）,对白杨素体内治疗脑缺血再灌注损伤作用进行评价。体内评价指标包括：神经功能评分、脑梗死体积、含水量,HE染色观察病理变化,免疫荧光染色检测大鼠脑组织脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）的表达水平。结果：白杨素对正常PC12细胞在实验浓度条件下未表现出细胞毒性,且在谷氨酸（10 mM）损伤模型中白杨素（药物浓度为10 μM）对损伤细胞具有保护作用;白杨素诱导MSC后不同时间细胞表面神经标志性蛋白：神经生长因子（NGF）、半乳糖神经酰胺（GalC）、巢蛋白（Nestin）、神经元特异烯醇化酶（NSE）、波形蛋白（Vimentin）均有不同程度的表达。体内实验中,与模型组相比,白杨素给药组改善了大鼠的神经功能缺损症状评分,减少脑梗死体积,改善了缺血半暗带损伤情况,上调了大鼠脑组织的神经营养因子NGF、BDNF蛋白的表达。结论：白杨素可通过上调神经营养因子NGF、BDNF表达量而对脑缺血-再灌注损伤具有一定的神经保护作用。     

基于化学模式识别的益智仁盐炙前后高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立益智仁盐炙前后的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，结合化学模式识别法比较益智仁盐炙前后的化学成分差异。方法 采用HPLC法建立益智仁生品及盐炙品的指纹图谱，应用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）对益智仁生品及盐炙品化学成分进行比较。结果 益智仁生品及盐炙品HPLC指纹图谱分别确定了30和32个共有峰，指认了其中8个色谱峰，分别是X2峰（5-羟甲基糠醛）、1号峰（原儿茶酸）、2号峰（原儿茶醛）、4号峰（表儿茶素）、21号峰（白杨素）、22号峰（山奈素）、25号峰（杨芽黄素）和26号峰（圆柚酮）。PCA及OPLS-DA结果显示，益智仁生品和盐炙品各聚为一类。VIP分析共筛选出12个成分是益智仁盐炙前后的差异标志物，分别是X1、26（圆柚酮）、16、3、X2(5-羟甲基糠醛)、25（杨芽黄素）、15、12、8、10、17、20号峰。结论 HPLC指纹图谱结合化学模式识别的方法准确可靠，可用于盐炙前后益智仁质量差异分析。     

中药益智仁化学成分的研究

从益智仁的丙酮提取物中分得7个化合物，其中一个为新的二芳基庚烷类化合物，通过光谱方法鉴定了其结构，命名为益智新醇（neonootkatol，Ⅶ），其它6个成分为杨芽黄素（tec－tochrysin，Ⅱ），益智酮甲（yakuchinoneA，Ⅳ），益智酮乙（yakuchinoneB，Ⅴ）和诺卡酮（nootka－tone，Ⅵ），β-谷自醇（Ⅰ），胡萝卜甙（Ⅲ），后2者为首次从该植物中分得。     

益智仁HPLC指纹图谱与其抗氧化活性

目的建立益智仁Alpinae Oxyphyllae Fructus HPLC指纹图谱,并研究其抗氧化活性。方法 HPLC法建立指纹图谱,通过相似度分析、聚类分析、主成分分析进行评价,DPPH法测定其抗氧化活性。结果 HPLC指纹图谱中有24个共有峰,相似度在0.974以上,其中12、19和21号色谱峰确定为白杨素、杨芽黄素和圆柚酮。10批样品均具有抗氧化活性,但都弱于维生素C。结论该方法指纹色谱峰更多,分离度更高,而且分离时间更合适。     

基于CXCR4启动子的中药有效成分高通量筛选细胞模型构建和应用

目的以CXCR4基因启动子为靶点,建立促干细胞归巢药物筛选细胞模型,并对中药单体进行筛选。方法将人CXCR4基因启动子序列(279 bp)插入荧光素酶报告基因载体p GL4.17-Basic中,构建重组质粒p GL4.17-CXCR4,与内参质粒p RL-TK共转染293细胞,经验证CXCR4启动子转录活性后,单细胞克隆培养以获得稳转细胞株,并用于候选中药单体1~10的筛选,最后应用Western blot验证所筛选出的中药单体促进间充质干细胞(MSCs)中CXCR4表达的作用。结果成功建立药物筛选细胞模型,筛选出候选单体6提高CXCR4启动子活性的作用最强,Western blot结果证实候选单体6可明显促进MSCs中CXCR4的表达。结论本研究建立的药物筛选细胞模型能实现对潜在促进干细胞归巢中药有效成分的高通量筛选。     

HPLC测定益智仁以及其盐灸炮制品中白杨素和圆柚酮含量＊

目的 建立益智仁中白杨素和圆柚酮的高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法，并比较益智仁以及其盐灸炮制品中白杨素和圆柚酮含量的变化。方法 采用HPLC，色谱柱为YMC-Pack C₁₈（250 × 4.6 mm，5 μm），以0.3%磷酸水-乙腈为流动相，梯度洗脱，检测波长为250 nm，柱温30℃，流速 0.6 mL·min^-1，进样量15 μL。结果 白杨素在0.518-10.36 mg.mL^-1范围内呈良好线性关系（r = 0.999 8），平均回收率为101.45%；圆柚酮在20.26-405.10 mg.mL^-1范围内呈良好的线性关系（r = 0.999 9），平均回收率为104.14%。结论 建立的HPLC含量测定方法快速、准确，重复性好，可用于益智仁中化学成分的定量分析。益智仁与其炮制品盐益智仁在白杨素含量上具有显著差异（P < 0.05），但圆柚酮含量上并无显著差异。     

高良姜叶中的化学成分

目的:研究高良姜叶中的化学成分。方法:高良姜叶经低温烘干粉碎,粉末样品中加入甲醇(1∶50),超声提取3次,合并提取液。样品经适当稀释后,注入液相色谱-质谱联用仪(LC-MS/MS),在电喷雾离子源正离子模式下(ESI+),采用多反应监测模式(MRM)对可能的化合物进行针对性分析。结果:在高良姜叶的甲醇提取液中共鉴定出分属于两类成分的16个化合物,其中黄酮类物质白杨素、乔松素、杨芽黄素、芹菜素、高良姜素、高良姜素-3-O-甲醚、金合欢素、山柰酚、山柰素、槲皮素、异鼠李素、芦丁。二芳基庚烷类成分包括益智酮甲、益智醇、六氢姜黄素和hannokinol。结论:本研究利用液相色谱-质谱联用技术确定了高良姜叶中的16种化学成分,尚有多种二芳基庚烷类成分需要分离鉴定。     

益智仁的UPLC指纹图谱研究

目的建立益智仁Alpiniae Oxyphyllae Fructus的超高效液相(UPLC)指纹图谱。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);以乙腈-甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;体积流量0.5 m L/min;样品室温度10℃;柱温30℃;检测波长254 nm;进样量2μL。结果首次建立了益智仁的UPLC特征指纹图谱共有模式,标定了20个共有峰,结合保留时间和紫外光谱分析,确定了原儿茶酸、α-羟甲基糠醛、oxyphyllenodiol A、teuhetenone A、teuhetenone B、白杨素、山柰素、杨芽黄素、圆柚酮共9个化合物。19批益智仁,其中15批的相似度在0.970以上。结论该方法快速、高效,可用于益智仁的质量评价。     

首乌益智胶囊调控血管性认知障碍大鼠GFAP和NGF表达的研究

目的：研究首乌益智胶囊对血管性认知障碍（VCI）模型大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经生长因子（NGF）表达的影响,并探讨其作用机制。方法：采用大脑中动脉栓塞（MCAO）再灌注法,制成大鼠VCI模型,随机分为首乌益智胶囊组、脑复康组、模型组,并设假手术组20只,分别给予相应的药物,28d后免疫组织化学法观察GFAP和NGF的表达。结果：首乌益智胶囊能显著增强VCI大鼠脑海马CA1区GFAP、NGF的表达,与脑复康组比较差异有极显著性。结论：首乌益智胶囊可调控、诱导星形胶质细胞的生成,促进星形胶质细胞分泌神经生长因子及其他活性物质,有利于血管性认知障碍的恢复。     

神经干细胞增殖的分子机制及中药干预研究进展

从中国知网、万方、PUBMED等数据库中检索有关神经干细胞增殖分子机制及中药干预的文献资料.通过整理、分析、总结发现内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,endogenous,NSCs)增殖受许多因素的调控,特别是与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、白细胞介素等细胞因子、Notch基因Wnt基因及其信号通路关系密切,且各调控因子之间相互作用、相互影响形成一个精密的调控网络.中药具有多组分多靶点多层次的特点和优势,针对内源性神经干细胞增殖进行药物筛选、组方优化和创新中药研究有重要意义,中药在促进神经干细胞增殖、治疗脑卒中和神经退行性疾病方面具有极好的应用前景.     

Chinese medicine induces neurite outgrowth in PC12 mutant cells incapable of differentiation

During continuous culture of neural PC12 cells, we obtained a drug-hypersensitive PC12 mutant cell that showed high stimulation of neurite outgrowth by various drugs. When several Chinese medicines such as shu-jing-huo-xie-tang and Wu-Ling-San were provided to these PC12 mutant cells, the frequency of nerve growth factor (NGF)-induced neurite outgrowth increased approximately 30-fold compared to NGF alone. Neurite outgrowth induced by NGF in PC12 cells is accompanied by sustained activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK); however, these Chinese medicines did not induce MAPK activity. The findings thus indicate that certain Chinese medicines may induce neurite outgrowth by a novel mechanism which is distinct from the NGF-activated pathway in PC12 mutant cells.     

中药联合干细胞疗法治疗缺血性脑卒中的研究进展

脑卒中是全球致死和致残的主要疾病之一,其中缺血性脑卒中是最常见的卒中类型。近年来,随着再生医学领域的发展,国内外对干细胞疗法的研究不断深入。研究证实,干细胞疗法,包括激活内源性神经干细胞和外源性干细胞移植,可以促进内源性神经和血管再生,修复神经损伤,从而改善神经功能,在缺血性脑卒中治疗领域具有广阔的应用前景。然而,该疗法存在细胞存活、迁移及分化率较低的问题,目前尚无有效解决方案。中医药治疗中风已有数千年历史,积累了丰富的临床经验,传统中药用于治疗缺血性脑损伤的疗效已得到肯定。近年来又有研究发现,中药对体内外多种干细胞的增殖、分化等生理活动有促进作用,中药联合干细胞疗法已用于多种疾病的治疗。进一步的研究发现,中药可激活缺血损伤脑组织内源性神经干细胞,促进神经自我修复,并对移植干细胞在体内的一系列生物活动有协同作用。笔者对近几年缺血性脑卒中治疗的研究进行整理、归纳、总结,从干细胞疗法角度对中药复方、单味药以及有效成分在缺血性脑卒中方面的研究进展进行综述,以期为中医药的研究提供新思路,并为中药的进一步深入开发应用提供参考。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

中药应用于内源性神经干细胞的实验研究进展

目的:概述中药应用于内源性神经干细胞的实验研究现状。方法:在万方数据、维普资讯和中国知网(CNKI)三大全文数据库中检索2001～2011所有关于中药和内源性神经干细胞实验研究的文献进行系统分析。结果:中药提取物、单味中药、复方中药均对神经干细胞的自我更新和定向分化具有显著的影响。结论:与目前干细胞研究着眼于移植和克隆相比,中药主要强调通过药物激活内源性干细胞、或调整干细胞微环境,进而改善再生反应,将中药中的小分子物质作为先导物质为神经干细胞的研究提供一种有效手段,显示了重大的研究意义及乐观的应用前景。     

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经NGF蛋白及NGF mRNA表达的影响

目的：观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经神经生长因子（nerve growth factor ,NGF）蛋白及NGF mRNA表达的影响。方法：采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱发2型糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组、甲钴胺组（1.97 mg·kg^-1）、糖痹康高、中、低剂量组（分别为生药4.175,8.35,16.7 g·kg^-1）,另设10只雄性SD大鼠为正常组,模型组和正常组给予蒸馏水,用不同剂量的糖痹康灌胃,并与甲钴胺对照,16周后取大鼠一侧坐骨神经,用免疫组化法检测坐骨神经中NGF蛋白的表达及采用RT-PCR方法检测坐骨神经组织中NGF mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组NGF蛋白及NGF mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,糖痹康中、高剂量组能升高 NGF蛋白及NGF mRNA表达（P<0.01）,糖痹康低剂量组能升高NGF mRNA表达（P<0.05）。结论：中药复方糖痹康能够促进糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经NGF mRNA的转录和蛋白的表达。     

Electroacupuncture Intervention Combined with Rat Nerve Growth Factor on Expression of Nestin and NeuN in MCAO Rats

Objective:To observe the effect of electroacupuncture(EA) on the expression of Nestin and Neuron specific nuclear protein antigen(neuron-specific protein,NeuN) at different time points after cerebral ischemia reperfusion injury.Methods:One hundred and fifty SD male rats were used to generate a one-side middle cerebral artery occlusion(MCAO) model using thread embolism method,then randomly divided them into the sham operation group,MCAO group,EA group,Nerve Growth Factor(NGF) group and EA+NGF group.The three benzene chloride tetrazolium(TTC) staining was used to detect the volume of cerebral infarction in the rats.Immunohistochemical staining was used to observe the expression of immune positive cell markers such as endogenous neural stem cell(NSC) marker protein Nestin,bromodeoxyuridine(Brdu) and NeuN on 1,7 and 14 days after cerebral ischemia in rats,and compared with the sham operation group.Results:TTC detection of the cerebral infarction volume showed that the nerve function injury score of the EA+ NGF group was significantly lower than MCAO group(P < 0.01).Ischemia led to severe loss of brain function,and EA+ NGF helped in the recovery of cerebral ischemia.Immunohistochemical results showed almost no expression of Nestin in the sham operation group;positive cells was expressed significantly higher Nestin on the 7th day(P < 0.05);then was peaked on the 14 th day.Nestin/BrdU labeled cells in the sham operation group showed minor expression,which was increased on the 7th day(P < 0.05) and was peaked on the 14 th day after ischemia.The differences were statistically significant on the 7th and 14 th day among the EA group,NGF group,EA+NGF group and MCAO group(P< 0.05).NeuN expression was higher in the sham operation group,and was increased on the 7th day after ischemia.NeuN/BrdU labeled cells showed higher expression in the sham operation group,the most obvious improvement was in the EA group,and the NGF and EA+NGF groups also showed significantly increased expression,while MCAO group showed the least.Conclusion:Protective effect of EA combined with NGF on cerebral ischemia reperfusion injury may induce nerve cell regeneration,accelerate proliferation of newborn cells,and promote differentiation of newborn cells,which is important for the recovery of nerve function.     

加减地黄饮子预处理对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经生长因子表达的影响

目的观察加减地黄饮子预处理对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经生长因子(NGF)表达的影响及其可能的神经元保护机制。方法采用栓线法制作大鼠局灶性脑缺血损伤模型(MCAO)。将120只Wistar大鼠随机分成6组:空白组、假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药对照组,每组20只。连续灌胃7 d后,进行手术操作。HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法观察大鼠脑组织NGF的表达。结果低剂量、高剂量加减地黄饮子均能保护梗死区神经细胞,细胞结构较完整;增强梗死区脑组织NGF的表达。结论加减地黄饮子预处理可对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元起保护作用,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织NGF表达及保护梗死区神经细胞结构有关。     

三七总皂苷在骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞中的调解作用研究

目的:探讨三七总皂苷在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的调解作用。方法:①实验材料:成年健康Wister大鼠(雌雄不限),SRF级,体质量(150±30)g;②实验方法:无菌的条件下从大鼠的股骨中分离并继代培养MSCs细胞,当传至第5代时,先用完全培养液[含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]进行预诱导,再更换无血清培养液(含三七总皂苷0.25g/L)进行诱导,采用免疫组织化学SABC法检测神经丝蛋白(NF-M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:①采用三七总皂苷诱导后,大多数MSCs呈神经元样细胞分化。经免疫组织化学鉴定,上述细胞表现为NSE、MAP-2和NF染色阳性,呈棕黄色,而GFAP染色阴性。②采用三七总皂苷进行诱导时,MSCs的胞体逐渐增大,并伸出细长的突起,在突起的末端出现分支,有些相邻细胞的突起还成网状连接。③三七总皂苷诱导MSCs转变为类似于神经元样的形态,经免疫组织化学鉴定,大多数细胞表现为NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43染色阳性,并在胞质和突起中有棕黄色的物质,而GFAP染色均为阴性。SABC法显示NSE和MAP-2阳性细胞数分别为(72.64±2.04)%和(73.5±2.17)%。结论:三七总皂苷在体外能使MSCs向神经元样细胞转化,且具有神经元样细胞的特性,这为MSCs治疗相关疾病提供了理论基础。