益骨胶囊含药血清对成骨细胞骨保护蛋白mRNA表达的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞骨保护蛋白mRNA的影响。方法:实验于2004-05/2005-02在广州暨南大学生命科学技术学院细胞与蛋白质工程实验室完成。选取12月龄SD雌性大鼠20只,随机分为2组。中药给药组(益骨胶囊由淫羊藿、当归、白芍、枸杞子等8味中药组成)和蒸馏水对照组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清,分离、培养新生大鼠的颅骨成骨细胞,传代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组),每组8孔,分别在培养24,48h时用反转录聚合酶链反应技术测定特异性电泳条带所显示成骨细胞中骨保护蛋白mRNA的相对表达量,酶联免疫法检测48,72和96h时200mL/L终浓度培养上清中骨保护蛋白的浓度。结果:两组动物各10只,均无亡失,所取血清正常用于细胞培养。①成骨细胞在接种4h后可见部分细胞贴壁、伸展。随培养时间延长,细胞伸出较多突起,细胞形态为单核,多边形及梭形,培养2d细胞基本全部贴壁,主要为梭形或多边形,培养6d左右基本贴满瓶壁,呈铺路石样排列。单层铺满培养瓶后可出现重叠生长,传代细胞大约15d天左右开始形成矿化结节。②特异性电泳条带显示益骨胶囊含药血清培养后24h和48h成骨细胞骨保护蛋白mRNA的表达均高于空白血清对照组犤(0.196±0.015,0.236±0.016),(0.152±0.018,0.206±0.022),P<0.01犦;③200mL/L终浓度的益骨胶囊含药血清培养后48,72和96h成骨细胞骨保护蛋白的表达明显高于空白血清对照组犤(0.1230±0.0128,0.1681±0.0130,0.1983±0.0186),(0.1067±0.0106,0.1385±0.0126,0.1588±0.0121),P<0.01或P<0.05犦。结论:益骨胶囊含药血清具有促进成骨细胞表达骨保护蛋白的作用。提示益骨胶囊能够通过对成骨细胞的影响而对骨吸收环节具有抑制作用,但是否对其他信号通路也有作用尚待研究。     

去势雌鼠骨计量学指标及星体积变化与益骨胶囊的干预作用

目的：观察益骨胶囊对去卵巢骨质疏松症大鼠骨计量学相关指标及星体积变化的影响。方法：本实验于2003-01／2004—06在暨南大学完成。选用32只SD雌性大鼠，随机分为4组假手术组、模型组、益骨胶囊高、低剂量预防组，每组8只，除假手术组其他24只大鼠制成骨质疏松症模型。术后3d开始灌药，假手术组、模型组每天给予生理盐水11．6mL／kg灌胃；益骨胶囊低剂量组、益骨胶囊高剂量组每天分别给予低(含生药1．0g／mL)、高(含生药3．0g／mL)剂量益骨胶囊溶液11．6mL／kg灌胃，全部大鼠在处死前第14，13，3，2d，分别给予皮下注射盐酸四环素25mg／kg和钙黄绿素5mg／kg，在骨表面形成黄色和绿色两层双荧光标记，动态观察2次注射期间骨形成的情况。术后24周处死全部大鼠，取胫骨近端经处理制作骨切片在荧光显微镜下观察，进行骨小梁结构基本参数测算及定量分析；取股骨远端经处理制作骨切片，苏木精一伊红染色后进行星体积测定。结果：①骨小梁指标：骨小梁面积(反映骨量的多少)模型组明显低于假手术组【(22．2&;#177;3．48)%，(41．13&;#177;4．47)％，P&;lt;0．01】，益骨胶囊组显著高于模型组【(36．08&;#177;6．06)%，【41．53&;#177;5．49)％，【22．21&;#177;3．48)％。P&;lt;0．01】，且高剂量组略高于假手术组【(41．53&;#177;5．49)％，(41．13&;#177;4．47)%；骨小梁宽度及数量(反映骨小梁结构形态及骨量变化)与连接点数模型组显著低于假手术组，益骨胶囊组明显高于模型组，高剂量组接近于假手术组；骨小梁分离度及游离末端数模型组显著高于假手术组，益骨胶囊组明显低于模型组。②骨矿化沉积率(代表成骨细胞的活性及每天骨矿化速度)：模型组明显高于假手术组【(1．95&;#177;0．21)．(1．52&;#177;0．11)μm／d，P&;lt;0．01】，益骨胶囊组显著高于假手术组【(1．74&;#177;0．14)，(1．78&;#177;0．16)，(1．52&;#177;0．11)μm／d，P&;lt;0．05】。③星体积(反应松质骨骨小梁和骨髓腔的大小)：模型组显著高于假手术组【(0．1430&;#177;0．0219)，(0．0723&;#177;0．0168)mm^3，P&;lt;0．01】，益骨胶囊组显著低于模型组【(0．0598&;#177;0．0127)，(0．0467&;#177;0．0106)，(0．1430&;#177;0．0219)mm^3，P&;lt;0．01】，且低剂量组和高剂量组均低于假手术组，高剂量组更为显著。结论：益骨胶囊能显著减少骨量丢失，改善骨质疏松模型大鼠的骨小梁结构，降低星体积，缩小骨小梁间隙，在提高骨形成速率的同时降低骨吸收速率．     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的：研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中，雌二醇对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)IA，IB mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用，试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制。方法：SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后，用1，25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化，17β-雌二醇(E2)处理培养细胞，观察E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体IA、IB mRNA、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响，β-actin作内对照半定量RT-PCR分析骨形态发生蛋白受体IA，IB mRNA的表达，以α-磷酸奈酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型腔原的含量。结果：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，且呈剂量依赖性，随E2浓度增加(0～1&;#215;10^3nmol／L)BMPR-IA mRNA从(27．0&;#177;3．4)％降至(17．0&;#177;1．8)％(t=5．2，P&;lt;0．01)和(9．3&;#177;1．6)％(t=9．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA随E2浓度增加而增加，从(2．0&;#177;0．8)％增至(4．8&;#177;1．5)％(t=3．3，P&;lt;0．05)和(17．2&;#177;2．2)％(t=13，P&;lt;0．01)。Northernblot结果显示在上述E2浓度时BMPR-IA mRNA的表达从4．21&;#177;0．36降至1．24&;#177;0．10(t=18．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA的表达从1．72&;#177;0．11增至3．73&;#177;0．31(t=12．2，P&;lt;0．01)。ALP活性随E2浓度增加而降低，从(42．6&;#177;2．5)U／g蛋白降至(17．9&;#177;2．0)U／g蛋白(t=15，P&;lt;0．01)，(10．8&;#177;1．5)U／g蛋白（t=22，P&;lt;0．01)和(3．6&;#177;0．7)U原蛋白(t=30，P&;lt;0．01)；细胞I型胶原的含量随E2浓度增加而减少。VanGieson染色由鲜红、淡红到黄色，红色越深，表明胶原越多。绪论：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，降低ALP的活性和Ⅰ型胶原含量，增加BMPR-IB mRNA的表达)。     

去势雌鼠抗骨质疏松治疗中骨重建的定量分析

目的：采用定量分析方法观察益骨胶囊治疗对去卵巢骨质疏松大鼠骨结构的影响。方法：本实验于2003—01／2004—06在暨南大学完成。32只SD雌性大鼠，通过卵巢切除术诱导骨质疏松模型，随机分为假手术组(打开腹腔，找到卵巢后并不切除)、模型组、益骨胶囊高、低剂量治疗组，每组8只。各组大鼠术后12周开始灌胃，1次／d，12周为1个疗程。假手术组、模型组每天给予生理盐水11．6mL／kg灌胃；益骨胶囊低剂量组、益骨胶囊高剂量组每天分别给予低、高剂量益骨胶囊溶液11．6mL／kg灌胃，益骨胶囊低剂量组为1．16g／100g(含生药1．0g／mL)，益骨胶囊高剂量组为3．48g／100g(含生药3．0g／mL)，全部大鼠在处死前第14，13，3，2天，分别给予皮下注射盐酸四环素2．5mg／kg和钙黄绿素5mg／kg，在骨表面形成黄色和绿色两层双荧光标记，以动态观察2次注射期间骨形成的情况。术后24周处死全部大鼠，取胫骨近端经处理制作骨切片在荧光显微镜下观察，进行骨小梁结构基本参数测算及定量分析；取股骨远端经处理制作骨切片。苏木精-伊红染色后测定星体积。结果：①益骨胶囊高剂量组骨小梁面积、宽度、数量、连接点数略低于或接近假手术组，高于模型组；益骨胶囊剂量组骨小梁分离度小于模型组，大于假手术组；益骨胶囊高、低剂量组骨小梁游离末端数均显著低于模型组，与假手术组相近。②骨矿化沉积率：模型组明显高于假手术组[(1．94&;#177;0．21)，(1．49&;#177;0．14)μm／d，P&;lt;0．01]，益骨胶囊低剂量组略低于模型组[(1．69&;#177;0．148)，(1．94&;#177;0．21μm／d，P&;lt;0．05]，高剂量组显著高于假手术组[(1．76&;#177;0．13)，(1．49&;#177;0．14)μm／d，P&;lt;0．01]。③星体积：模型组显著高于假手组[(0．1478&;#177;0．0211)，(0．0729&;#177;0．0169)mm^3，P&;lt;0．01]，益骨胶囊高、低剂量组显著低于模型组[(0．0618&;#177;0．0153)，(0．0818&;#177;0．0160)，(0．1478&;#177;0．0211)mm^3，P&;lt;0．01]。结论：益骨胶囊能明显改善骨质疏松模型大鼠的骨小梁结构，降低星体积，缩小骨小梁间隙，提高骨形成速率的同时降低骨吸收速率，最终增加骨量形成。     

不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA表达的影响

背量：绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明，研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关，后者可导致多种细胞因子生成增加，继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多。骨吸收增强。雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚。目的：研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中，17β-雌二醇对其核结合因子a1(Cbfa1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。设计：非随机对照研究。地点和对象：所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成，分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供。干预：1，25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化，用不同浓度[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]雌二醇对细胞分化过程进行干预。主要观察指标：应用半定量RT-PCR及Northern blot技术，观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1及PPAR-γ2 mRNA表达的影响。结果：雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1 mRNA的表达，雌二醇浓度为[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]时，Cbfa1 mRNA的表达量从(25．0&;#177;3．3)％降至(19．8&;#177;2．2)％(t=2．62，P&;lt;0．05)，(14．5&;#177;1．3)％(t=5．92,P&;lt;0．01)和(6．5&;#177;1．9)％(t=9．72，P&;lt;0．01)；雌二醇能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2 mRNA的表达，在上述雌二醇浓度时。PPAR-γ2 mRNA的表达从(1．75&;#177;0．5)％增至(9．5&;#177;2．1)％(t=7．18，P&;lt;0．01)和(19．3&;#177;3．0)％(t=11．5，P&;lt;0．01)；Northern blot结果显示随着雌二醇浓度的增加，Cbfa1 mRNA的表达量从4．42&;#177;0．39降至1．88&;#177;0．16(t=12．0，P&;lt;0．01)和1．19&;#177;0．11(t=15．8，P&;lt;0．01)；PPAR-γ2 mRNA的表达量从1．31&;#177;0．12增至2．81&;#177;0．22(t=10．5,P&;lt;0．01)和4．02&;#177;0．36(t=14．2，P&;lt;0．01)。细胞ALP活性明显受雌二醇的抑制，在上述雌二醇浓度时ALP的活性从(42．6&;#177;2．5)降至(3．6&;#177;0．7)U／g蛋白(t=29，P&;lt;0．01)。Ⅰ型胶原含量均随雌二醇浓度增加而降低。结论：雌二醇抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

不同浓度氟对兔成骨细胞细胞周期及凋亡的影响

目的：建立成骨细胞体外培养模型，并观察不同浓度的氟对成骨细胞增殖行为的影响，为氟治疗骨质疏松的研究提供实验依据。方法：用幼兔肋骨培养成骨细胞，并纯化、鉴定。用不同浓度的氟化钠处理(20，160，240，400μmol／L)，MTT法测定氟对成骨细胞增殖活性的影响：流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡的改变。结果：低浓度的氟(20μmol／L)在体外可显著促进成骨细胞增殖(作用24h后A值为：0．089&;#177;0．012，P&;lt;0．01)，不引起成骨细胞的凋亡，可使S期和G2／M期的细胞明显增多；高浓度的氟(160，240，400μmol／L)则抑制成骨细胞的增殖。(作用24h后的A值分别为：0．055&;#177;0．010，0．054&;#177;0．006，0．023&;#177;0.010，P&;lt;0．01)，引起成骨细胞的凋亡(9．53&;#177;2．10，24．43&;#177;3．03，P&;lt;0．01和32．63&;#177;1．17，P&;lt;0．05)，G2／M期细胞明显减少。结论：低浓度的氟可以促进成骨细胞的增殖；高浓度的氟抑制成骨细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，抑制细胞由S期向G2／M期转化。低浓度的氟可用于对骨质疏松的治疗。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

甲状腺功能亢进症患者骨代谢特征与结局

目的：分析甲状腺功能亢进症患者骨密度及骨代谢指标的改变，并与健康对照组比较。方法：采用双能X射线吸收法对2003-01／11青岛市海慈医院内分泌门诊及住院的73例甲状腺功能亢进患者和与患者年龄、性别及月经状况相匹配的73名健康对照者进行L2-4椎体和股骨近端骨密度测量，同时测定血清钙、碱性磷酸酶、甲状旁腺素、降钙素、计算甲状旁腺素／降钙素比值及24h尿钙值，比较其差异。结果：按意向处理分析，73例甲状腺功能亢进患者和73名健康对照者均完成检测，全部进入结果分析。①甲状腺功能亢进组24h尿钙、血情碱清性磷酸酶高于正常对照组[(6．56&;#177;2．48)mmol，(3296．20&;#177;664.47)nkat／L；(3．14&;#177;1.42)mmol，(1938．05&;#177;335．08)nkat／L，P&;lt;0．05]。②甲状腺功能亢进症组降钙素明显低于正常对照组[(10．47&;#177;4．67)，(31．26&;#177;10．57)μg/L，P&;lt;0．05]；甲状旁腺素／降钙素比值甲状腺功能亢进组明显高于正常对照组[(3．55&;#177;0．79)，(1．05&;#177;0．52)，P&;lt;0．05]。③甲状腺功能亢进症组患者L2-4骨密度测量值明显低于正常对照组[(0．80&;#177;0．07)，(0．81&;#177;0．11)，(0．82&;#177;0．09)g／cm^2；(0．91&;#177;0．1)．(0．90&;#177;0．09)，(0．90&;#177;0．08)g／cm%-^2；P&;lt;0．05]。④股骨近端的骨密度测量值明显低于正常对照组[(0．71&;#177;0．08)，(0．62&;#177;0．12)，(0．61&;#177;0．11)g／cm^2；(0．82&;#177;0．08)，(0．68&;#177;0．10)，(0.71&;#177;0．13)g／cm^2,P&;lt;0．05]。结论：甲状腺功能亢进症患者骨吸收和骨形成在高位运行，呈现高转换型骨代谢紊乱；且骨吸收作用大于骨形成，导致骨质疏松。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：研究HD02在大鼠慢性前脑缺血过程中对神经细胞凋亡的作用。方法：16～18个月SD大鼠64只，雄性，体质量300-350g。利用末端标记法和流式细胞仪，测定HD02干预前后脑缺血大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况，并检测Caspase-3免疫阳性细胞、Calcineurin和钙激活中性蛋白酶(Calpain)活性。结果：HD02有减少阳性凋亡细胞出现率[(5．404&;#177;1.38)％与模型对照组(12.72&;#177;3．45)％比较，t=4．84，P&;lt;0．01]及减少Caspase-3免疫阳性细胞表达(HD02组比模型对照组：缺血15d：7．10&;#177;1．90比12．55&;#177;3.30,t=3．86，P&;lt;0．01：缺血30d：4，60&;#177;1．15比9．50&;#177;4．20，t=4．67，P&;lt;0．01)，降低Calcineurin D02组比模型对照组：大脑皮质每克蛋白中含[(38．24&;#177;5．58)比(48．98&;#177;5.04)nmol／s，t=3.64，P&;lt;O．O1]；海马每克蛋白中含[(37．87&;#177;3．38)比(52．58&;#177;4．92)nmol／s，t=3．75，P&;lt;0．O1]和Calpain活性[大脑皮质每毫克蛋白中含(2．96&;#177;O．77)比(4．56&;#177;0．85)A／h，t=3．84，P&;lt;0．05]；海马每毫克蛋白中含[(2．90&;#177;0．28)比(4．91&;#177;0．94)A／h，t=3．97，P&;lt;0，01]的作用。结果：HD02有一定的抗神经细胞凋亡的作用．     

不同实验浓度补肾中药血清对人成骨细胞增殖及分化的促进作用

目的：采用补肾中药(鹿茸及骨碎补等)血清在体外培养人成骨细胞，观察其对成骨细胞分化增殖以及骨钙素水平的影响。方法：实验于2004—06／12在南方医科大学南方医院完成。SD系雄性大鼠4只，分为4组。分别灌服(以生药量计量)高浓度7．08g／mL、中浓度3．54g／mL、低浓度1．77g／mL的补肾中药，2次／d，每次2mL／只，对照组灌服等量生理盐水，连续灌胃3d，末次灌胃后2h在无菌条件下抽取分离大鼠血清，标记为补肾中药高、中、低浓度血清和对照血清。成人髂骨松质骨取材于南方医院脊柱骨科知情同意手术者。采用胰蛋白酶和胶原酶消化法，分离培养后取第3代人成骨细胞，分别加入含有高、中、低不同浓度补肾中药的大鼠血清培养48h。成骨细胞增殖及分化状况以流式细胞仪检测；成骨细胞分化的早期标记碱性磷酸酶活性以化学比色法检测，反映骨吸收及骨形成指标的骨钙素含量以放射免疫法检测。结果：进入统计分析的大鼠保持为4只，无缺失值。①成骨细胞细胞增殖指数：经高、中、低浓度补肾中药血清干预组明显高于对照组（27．96&;#177;5．43，30．78&;#177;5．05，23．91&;#177;5．75，18．53&;#177;3．91．P&;lt;0．01)．以中浓度补肾血清作用更明显。②成骨细胞的碱性磷酸酶活性(金氏单位)：高、中、低3种浓度补肾中药血清干预组明显高于对照组(42&;#177;0．8，38&;#177;1．1，31&;#177;0．9，13&;#177;1．2，P&;lt;0．01)，以高浓度补肾血清作用最明显，且呈剂量依赖性。③骨钙素检测显示：高、中、低3种不同浓度的补肾中药血清组含量显著高于对照组【(4．7&;#177;0．5)，(4．4&;#177;0．7)，(3．2&;#177;0．4)，(1．9&;#177;0．2)mg／L，P&;lt;0．01】，且呈剂量依赖性。结论：补肾中药血清能促进成骨细胞增殖分化，提高碱性磷酸酶活性，增强骨钙素分泌而促进骨形成，在实验浓度内呈剂量依赖性。     

双龙接骨丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨中药复方制剂双龙接骨丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法：双龙接骨丸生药给大鼠灌胃，1次／d，共7d。于最后1次灌胃后2h处死，制备含药血清。以原代培养的大鼠成骨细胞为实验对象，采用不同浓度的含药血清刺激成骨细胞，四氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期的构成。结果：①双龙接骨丸30mL／L含药血清组细胞增殖率与空白对照组相比，差异无显著性意义(t=1．06，P&;gt;0．05)；50，100，250，500，750，1000mL／L含药血清组均可明显促进细胞增殖，与对照组相比，差异有显著性意义(统计学数值分别为t=2．53，P&;lt;0．05；t=3．09，3．32，3．54，3．87，4．12，P&;lt;0．01)。②细胞周期构成分析发现，100mL／L双龙接骨丸含药血清增加S期细胞比率，促进细胞进入分裂增殖期。结论：双龙接骨丸含药血清能有效促进成骨细胞的增殖。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)增殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响，酶标仪波长为450 nm。结果：培养24h，各组HSC增殖比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；培养48，72h，高、中、低剂量药物组HSCA值(0．47&;#177;0．02，0．55&;#177;0.07：0．46&;#177;0．02,0．58&;#177;0．08；0．51&;#177;0．03，0．69&;#177;0．07)与模型组(0．66&;#177;0．05和0．96&;#177;0.05)比较。差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；高、中剂量组药物组与对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48，72h后均能降低或抑制HSC的增殖，尤以高、中剂量作用明显。     

碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤后bcl-2及bax基因表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脊髓损伤后bcl-2和bax基因表达的影响。方法：利用Allen WD法以25gcf致伤SD大鼠脊髓制作损伤模型，经蛛网膜下腔导管于术后即刻，0.5，1．2，3，4，6,12，24，48h导管注入bFGF20μL(含bFGF200U)；对照组相同时间点注入等量生理盐水作对照。术后2，6，12，24，48h取损伤脊髓组织，采用免疫组化和原位杂交方法分别检测Bcl-2、Bax蛋白和bcl-2 mRNA基因的表达。结果：脊髓损伤后应用bFGF显著促进bcl-2基因的表达，2，6，12，24，48h Bcl-2平均光密度值分别为0.165&;#177;0.020,0.254&;#177;0.081，0．312&;#177;0．017,0.415&;#177;0．021，0．304&;#177;0．031，(P&;lt;0．01，t=2.729—9．279),Bax平均光密度值分别为0．034&;#177;0．021，0．184&;#177;0.014，0．204&;#177;0．014．0.216&;#177;0027，0．180&;#177;0.013(P&;lt;0.01，t=4．601～6，376),提高Bcl-2蛋白的含量，降低了Bax蛋白的水平，每组数据差异具有统计学意义。结论：bFGF通过促进bcl-2基因的表达、抑制Bax蛋白的表达抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡，从而保护脊髓组织，这可能是bFGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)结蛋白、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48，72h后，免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78．93&;#177;18．56，396．29&;#177;78．56；58．95&;#177;5．21，138．92&;#177;20．21；63．83&;#177;12．97，190．87&;#177;52．97；75．46&;#177;26．72，284．54&;#177;66．72)与模型组(119．69&;#177;23．84，528．79&;#177;26．84)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；培养48，72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较。差异也有显著性意义(P&;lt;0．05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

百草胶囊对大鼠体质量、血脂、小肠运动的影响

目的：研究百草胶囊的通便和降血脂作用。方法：采用复方地芬诺酯造成小鼠便秘模型，用高脂饲料造成大鼠高脂模型，分别观察百草胶囊的通便功能及降血脂作用。结果：百草胶囊高、中、低剂量组、对照组的墨汁推进率分别为(66．9&;#177;17．9)％，(66．3&;#177;12．9)％，(53．3&;#177;6．6)％，(68．5&;#177;7．9)％，均明显高于模型对照组(38．3&;#177;7．3)％(t=5．69，7．05，5．87，10．87，P&;lt;0．01)。高剂量组粪便粒数及重量分别为(27．8&;#177;11．4)粒和(0．48&;#177;0．23)g，均大于模型对照组(9．6&;#177;5．0)粒和(0、18&;#177;0．10)g(t=2．55，P&;lt;0．05，t=5．09，4．64，4．15，4．31，P&;lt;0．01)。百草胶囊明显促进便秘小鼠的小肠推进运动，增加小鼠所排粪便的粒数和重量，并缩短小鼠首便时间。百草胶囊高、中、低剂量组的大鼠血清总胆固醇分别为(2．40&;#177;0．36)，(2．28&;#177;0.34)，(2．38&;#177;0．45)mmol／L，均低于高脂对照组(3．854&;#177;0．67)mmol／L(t=2．064，2．13l，P&;lt;0．01)。血清三酰甘油分别为(0．39&;#177;0．08)，(0．38&;#177;0．10)，(0、33&;#177;0．12)mmol／L，均低于高脂对照组(0．54&;#177;0、15)mmol／L(t=2．101，2．079，P&;lt;0．01)。高剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇(0．64&;#177;0．11)mmol／L，高于高脂对照组(0．54&;#177;0．07)mmol／L(t=2．086，P&;lt;0．01)。百草胶囊能显著降低大鼠血清总胆固醇和三酰甘油含量，升高大鼠的血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结论：百草胶囊具有润肠通便和降血脂作用。     

抗感染组织工程化骨的生物特性

目的 探索抗感染组织工程化骨一期修复感染性骨折、骨缺损的新途径。方法 昆明小鼠84只，雄性，体重24—27g。其中30只于右侧股部肌袋植入利福平组织工程化骨做药物释放特性观察。54只以随机数字法分为A，B，C3组，每组18只。将植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋中。A组植入利福平组织工程化骨，B组植入单纯组织工程化骨，C组植入牛松质骨，做成骨活性观察。结果 ①此种材料21d内骨粒周围软组织的利福平浓度(1.8mg／L)高于金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(0．008—0．06mg／L)，而小鼠血药浓度很低。②此种材料的成骨活性与单纯组织工程化骨无明显差别(P&;gt;0．05)，均较单纯牛松质骨载体的成骨活性好(P&;lt;0．01)。碱性磷酸酶(μmol／s&;#183;kg)测定显示：7d A组43&;#177;12，B组48&;#177;10，C组22&;#177;5，F=7．56，P&;lt;0．01；14d A组65．3&;#177;3．2，B组63．0&;#177;2．8，C组18．2&;#177;2．7，F=34．86，P&;lt;0．01；28d A组122&;#177;20，B组133&;#177;12，C组27&;#177;7，F=53．86，P&;lt;0．01。结论 一定剂量的利福平组织工程化骨有较好的成骨活性和极好的抗感染能力。且能保持很低的血药浓度。     

益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织骨形态发生蛋白2表达的影响

背景：骨形态发生蛋白-2是高教骨诱导因子。骨形态发生蛋白-2诱导骨内、外膜和骨髓基质细胞分化为骨母细胞，有加强骨床再生能力的作用，还可以活化或诱导血管周围的间充质细胞分化为软骨和成骨细胞。 目的：观察益骨胶囊预防和治疗用药对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达的影响。 设计：随机分组设汁、对照实验。 单位：暨南大学附属第一医院中医科。 材料：实验于2003-03／10在暨南大学中药学实验室完成。动物：选择10月龄普通级雌性SD大鼠72只，体质量（380&;#177;20）R，由广东省医学蛮验动物中心提供（合格证号：粤检证字第2002A024号）。随机抽取24只分为假手术（腹部切口但不切除卵巢）预防用药组（12只）和治疗用药组（12只），余48只行腹部切口双侧卵巢切除术复制骨质疏松模型后随机分为4组：模型预防用药组、模型冶疗用药组、预防用药组、治疗用药组，每组12只。药物：益骨胶囊南淫羊藿、枸杞：产、熟地黄、牛膝等组成，深圳三九医药股份有限公司提供免煎颗粒，配制成水溶液，含生药1．0g／mL。干预：益骨胶囊预防用药于手术后3d即开始灌胃，假手术预防用药组、模型预防用药组灌胃生理盐水3ml、预防用药组灌胃益骨胶囊水溶液3mL，1次／d。共24周；益骨胶囊治疗用药于手术后第13周开始灌胃，假手术治疗用药组、模型治疗用药组灌胃生理盐水3mL、治疗用药组灌胃益骨胶囊水溶液3mL。1次／d，共12周。免疫组化方法检测骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达。 主要观察指标：骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值。 结果：大鼠造模24周时，模型预防用药组、预防用药组、假手术预防用药组大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值分别为81．84&;#177;10．01，124．46&;#177;6．55，130．15&;#177;10．09，模型预防用药组明显低于假手术预防用药组（P〈0．01），预防用药组显著高于模型预防用药组（P〈0．01），与假手术预防用药组相近（P〉0．05）。模型治疗用药组、治疗用药组、假手术治疗用药组大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值分别为77．97&;#177;10．35，110．32&;#177;8．69。131．79&;#177;12．10，模型治疗用药组明显低于假手术治疗用药组（P〈0．01），治疗用药组显著高于模型治疗用药组（P〈0．01），与假手术治疗用药组相近（P〉0．05）。 结论：益骨胶囊预防和治疗用药均能促进骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。