三氧化二砷上调Maspin表达的初步研究

目的对三氧化二砷（As2O3）作用人食管癌细胞株Ec109前后Maspin蛋白的表达进行比较研究。方法采用免疫组化的方法检测As2O3处理Ec109前后Maspin蛋白的表达。结果未经As2O3处理的Ec109细胞Maspin蛋白表达水平较低（9．74％），经As2O3作用后Ec109细胞Maspin蛋白表达水平增加（23．16％），两者有显著性差异（P＜0．05）。结论As2O3抗肿瘤作用可能与上调maspin表达有关。     

三氧化二砷对淋巴瘤T2细胞株SHP-1基因的去甲基化作用

背景与目的:去甲基化作用可能是三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对抗造血系统恶性肿瘤的另一种机制.本研究探讨As2O3对淋巴瘤细胞系T2细胞中抑癌基因酪氨酸磷酸酶(SH2-containinphosphatase-1,SHP-1)的去甲基化作用及对T2细胞生长增殖的生物学影响.方法:T2细胞以As2O3或5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxyoytidine,5-AC)单独处理,或两药联合处理.采用甲基化特异性PCR、荧光定量PCR和Western检测As2O3处理前后SHP-1基因启动子过甲基化及其mRNA和蛋白表达状况、c-kit蛋白表达变化.MTT法检测细胞存活率.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:As2O3能逆转SHP-1基因启动子甲基化,使T2细胞SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,同时c-kit蛋白表达呈下降趋势;As2O3明显抑制T2细胞的增殖,随浓度增加及作用时间延长,其增殖抑制效应增加(P<0.05);2.5μmol/L浓度的As2O3作用T2细胞t,2,3d细胞增殖抑制率(9.8%,20.3%,47.5%)明显低于联合作用组(11.0%,36.7%.61.0%).As2O3可使T2细胞凋亡率增加,且随作用时间延长和浓度增加,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),联合作用组细胞凋亡率(1 d:17.3%;2 d:37.9%;3 d:67.9%)明显高于2.5 μmol/L As2O3单独作用组(6.1%,26.5%,50.9%).结论:As2O3能去除T2细胞中SHP-1基因甲基化,使其重新表达,并可能通过抑制c-kit受体及其信号转导路径的活化而抑制肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对EWS-FLi1融合蛋白的影响

目的:探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对融合蛋白EWS-FLi1表达的影响.方法:应用噻唑蓝(MTT)法、形态学观察、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)观察As2O3对体外生长的尤文肉瘤RD-ES细胞系生物行为的影响;应用半定量RT-PCR测定应用As2O3前后c-myc基因mRNA水平的变化;应用免疫细胞化学及固定化蛋白印迹法(Western blot)观察用药前后EWS-FLi1融合蛋白表达水平的变化.结果:As2O3对体外生长的RD-ES细胞系具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡.c-myc基因mRNA表达水平和EWS-FLi1融合蛋白表达量随As2O3作用时间延长逐渐降低.结论:常规治疗浓度的As2O3对体外生长的尤文肉瘤细胞具有明显的杀伤作用,其作用机制与改变线粒体膜通透性和抑制EWS-Fli1融合蛋白、降低c-myc基因表达有关.     

三氧化二砷对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及机制

目的探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide, As2O3）及As2O3与放射线联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用;分析二者联合对Eca109细胞周期和凋亡的影响,为As2O3的临床应用提供理论依据。方法MTT法观察放射线及As2O3单独及二者联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用,利用直线相关及直线回归拟合出照射组、As2O3组及联合组的直线,计算增敏比（sensitizing enhancement ratio, SER）;流式细胞术检测As2O3联合放射线对Eca109细胞周期和凋亡的影响;Western blot印记技术观察As2O3联合放射线对锰超氧化物歧化酶（Manganese superoxide dismutase, MnSOD）和细胞色素C（cytochrome C, cyt-C）蛋白表达的影响。结果As2O3能抑制食管癌Eca109细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;As2O3对食管癌Eca109细胞有明显的放射增敏作用;As2O3与放射线联合作用于Eca109细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD蛋白表达下降,而cyt-C蛋白表达未见明显变化。结论As2O3可能通过G2/M期阻滞,降低MnSOD蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡来增强放射线对细胞的杀伤作用。     

三氧化二砷对食管癌细胞侵袭、转移和血管形成的影响

目的　体外实验研究三氧化二砷(As2O3)对食管癌细胞侵袭转移及血管形成的影响及探讨其作用机制。方法　MTT法观察As2O3对ECA109细胞粘附能力的影响;用Boyden Chamber膜侵袭系统观察As2 O3 对ECA109 游走和侵袭以及诱导内皮细胞形成新生血管的影响;免疫细胞化学观察As2O3对ECA109细胞TGF- β1表达的影响。结果:As2O3作用后,ECA109细胞粘贴率降低(P<0.05),游走穿膜细胞数或侵袭穿膜细胞数均明显低于对照组,诱导内皮细胞形成管腔数及长度均低于对照组(P<0.05)。As2O3能降低TGF β1的表达。结论:As2 O3 能有效抑制食管癌侵袭转移及血管形成,其作用机制可能与通过降低TGF β1的表达,抑制食管癌细胞异质粘附、运动能力及血管形成有关。     

低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的： 观察三氧化二砷（As 2O 3）在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。 方法： CoCl 2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As 2O 3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As 2O 3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。 结果： 在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当（P>0.05）;而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱（P<0.05）。低氧下Eca109细胞周期出现G 0/G 1期阻滞、G 2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）,As 2O 3在低氧条件下可诱导G 2/M期阻滞、G 0/G 1期细胞比例减少。As 2O 3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As 2O 3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。 结论： 低氧条件下,As 2O 3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G 0/G 1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。     

三氧化二砷抑制肝癌Hep G2 细胞侵袭转移 及对RhoC 基因表达的影响

 目的　了解三氧化二砷(As2 O3 ) 对肝癌Hep G2 细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转 移基因RhoC 表达的影响,探讨As2O3 抑制肝癌细胞转移的机制。方法　分别采用MTT 法、Transwell 检测As2O3 对Hep G2 细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响; 采用RT2PCR、Western blot 方法检测As2O3 作 用前后Hep G2 细胞中RhoC 基因的表达及变化。结果　As2O3 作用后Hep G2 细胞黏附率、侵袭及侵袭 细胞数较对照组明显下降( P < 0. 05) 。As2O3 作用4 、6 、8 天后RhoC2mRNA 及蛋白表达水平逐渐下降 ( P < 0. 05) 。Hep G2 细胞中RhoC2mRNA 表达和蛋白表达具有相关性( r = 0. 92 , P = 0. 046) 。结论　 As2O3 可明显抑制Hep G2 细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;并可通过下调RhoC 基因的表达而抑制其 侵袭转移。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞侵袭转移及USP22蛋白表达的影响

目的:探究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响以及对HepG2细胞中USP22蛋白表达的影响,进一步完善其分子机制。方法:CCK8细胞增殖实验检测不同浓度As2O3在不同时间点对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕和Transwell方法检测HepG2细胞在不同浓度As2O3作用下侵袭转移能力的变化;Western blot检测As2O3作用下HepG2细胞中USP22蛋白的表达水平。结果:随着As2O3浓度和作用时间的增加,HepG2细胞增殖明显受到抑制。与对照组相比,24 h时分别用2、4、8 μmol/L的As2O3处理的HepG2细胞侵袭转移能力降低,细胞中USP22蛋白表达水平明显下降。结论:As2O3可抑制人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力,其分子机制可能与下调的USP22蛋白水平相关。     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞黏附、侵袭、转移能力的影响以及其机制。方法:采用MTT法观察人肝癌SMMC-7721细胞经As2O3作用前后对基底膜黏附能力的影响;Transwell膜侵袭系统观察SMMC-7721细胞经As2O3作用前后游走与穿透基底膜能力的改变。免疫细胞化学方法检测人肝癌细胞经As2O3作用前后CD44V6表达的改变。结果:As2O3能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞与m arigel的黏附、抑制细胞游走与穿透基底膜的作用(P<0.05),能抑制人肝癌细胞CD44v6的表达(P<0.05)。结论:As2O3具有抑制人肝癌细胞的侵袭、转移能力,其抑制作用可能与CD44v6的表达下调有关。     

三氧化二砷联合顺铂对人类非小细胞肺癌细胞生长及凋亡抑制基因XIAP表达的影响

背景与目的 在中国肺癌居各种肿瘤之首位,寻求肺癌有效的治疗方法已成为人们关注的热点.本研究探讨三氧化二砷(As2O3)注射液与顺铂(DDP)联合应用对人类非小细胞肺癌细胞的生长、细胞凋亡及其X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察As2O3注射液和/或DDP对人类非小细胞肺癌细胞H460生长的影响;应用流式细胞术观察As2O3注射液和/或DDP处理前后细胞凋亡率;应用半定量RT-PCR检测As2O3注射液和/或DDP处理前后H460细胞中XIAP mRNA表达变化.结果 与单药作用相比,As2O3与DDP联合应用可显著抑制H460的增殖,增加细胞的凋亡率,并对细胞XIAP mRNA表达有增强抑制的作用.结论 与单药相比较,As2O3注射液联合DDP能够明显提高非小细胞肺癌对化疗的敏感性,其机制可能与抑制非小细胞肺癌的凋亡抑制蛋白XIAP的表达有关.     

在CerbB-2表达不同的乳腺癌组织中Maspin的表达

目的　对CerbB 2表达不同的乳腺癌组织中肿瘤抑制基因Maspin的表达变化进行比较研究。方法　采用免疫组化SP染色法检测2 9例乳腺癌组织中Maspin蛋白的表达情况。结果　Maspin蛋白在CerbB 2阴性表达的乳腺癌组织中的高表达率为47% (7/15 ) ,在CerbB 2阳性表达的乳腺癌组织中的高表达率仅为7% (1/14 ) ,两者有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论　在CerbB 2表达不同的乳腺癌组织中Maspin表达亦存在显著差异,Maspin也可作为判定乳腺癌恶性程度及预后的指标。     

胃癌组织中Maspin 蛋白与血管内皮生长因子-C的表达及其相关性

 目的 探讨胃癌组织中Maspin蛋白与血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及其相关性。方法 收集哈尔滨医科大学附属肿瘤医院2002年～2003年间手术切除的胃癌组织石蜡标本61例,采用免疫组化技术检测胃癌组织中Maspin蛋白与血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达情况,结合临床病理特征进行分析,并探讨两者蛋白表达水平的相关性。结果 Maspin蛋白的阳性表达率为50.8%（31/61）。淋巴结转移阳性组织中Maspin蛋白的阳性表达率明显低于淋巴结转移阴性的组织（32.6%vs94.4%,P=0.000）。且Maspin蛋白在组织分化较低,TNM分期较晚,周围有肿瘤浸润的病例中表达率显著降低（P分别为0.018,0.011和0.028）。VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率为86.9%（53/61）。淋巴结转移阳性组织中VEGF-C蛋白的阳性表达率明显高于淋巴结转移阴性的组织（95.3%vs66.7%,P=0.006）。Maspin蛋白与VEGF-C在胃癌组织的表达存在负相关（Spearmanr=-0.429,P〈0.05）。结论 Maspin蛋白在胃癌组织中低表达,胃癌的浸润转移能力增强可能与Maspin蛋白表达下调、缺失相关;VEGF-C的高表达与肿瘤淋巴结转移关系密切;Maspin蛋白与VEGF-C在胃癌组织中的表达呈明显负相关。     

Disruption of cell-type-specific methylation at the Maspin gene promoter is frequently involved in undifferentiated thyroid cancers

Cancer-associated DNA hypomethylation is as prevalent as cancer-linked hypermethylation, but the biological significance of DNA hypomethylation in carcinogenesis is less understood. The expression of Maspin (mammary serpin) in differentiated normal cells is regulated by epigenetic modifications in a cell-type-specific manner. Paradoxical Maspin expression due to epigenetic modification has been addressed in several cancer cell types. To elucidate the role of the Maspin gene in thyroid cancer, we studied methylation status in the promoter region and its expression in six human undifferentiated thyroid cancer cell lines and in specimens from 92 primary thyroid tumors, consisting of six follicular adenomas, 56 well-differentiated thyroid cancers (WDTCs), 17 poorly differentiated thyroid cancers (PDTCs) and 13 undifferentiated thyroid cancers (UDTCs). Three of the six cell lines overexpressed Maspin mRNA and its protein product, but the remaining three did not. The methylation status at the promoter region was inversely correlated with Maspin expression. In Maspin-negative cell lines, Maspin expression was induced by treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine, a DNA demethylating agent. Immunoreactivity for Maspin protein was frequently detected in UDTCs (8/13, 62%) and PDTCs (7/17, 41%). Immunoreactivity for Maspin was diffusely positive in UDTCs, and was restricted to dedifferentiated components of the tumor in PDTCs. Positive immunoreactivity was infrequent in WDTCs (1/56, 2%), and all follicular adenomas and normal thyroid glands were completely negative. Their methylation status evaluated by the methylation-specific PCR method showed a good inverse correlation with their immunoreactivity in surgically resected specimens. Our data suggest that overexpression of Maspin by DNA hypomethylation is closely associated with morphological dedifferentiation in thyroid cancers.     

鼻咽癌中Maspin和Bmi-1基因表达及其临床意义

目的 探讨鼻咽癌组织中Maspin和Bmi-1的表达及其与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学法检测Maspin和Bmi-1在60例鼻咽癌及40例正常鼻咽组织中的表达情况,探讨两者表达的相关性及与鼻咽癌临床病理特征的关系。结果 Maspin在鼻咽癌及正常鼻咽组织中的阳性表达率分别为45.0%（27/60）和90.0%（36/40）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Bmi-1在鼻咽癌及正常鼻咽组织中的阳性表达率分别为75.0％（45／60）和25.0％（10／40）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Maspin和Bmi-1表达与年龄无关（P＞0.05）,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期有关 （P＜0.05）。Maspin与Bmi 1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关（r=-0.406,P＜0.05）。结论 Maspin和Bmi-1表达可能在鼻咽癌的发生、增殖和转移中起重要作用。     

人食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1 凋亡的变化

 目的 探讨人食管癌紫杉醇耐药细胞株凋亡的变化。方法 以体外诱导的人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1为模型,采用反转录—多聚酶链反应（RT-PCR）检测NF-κB-p65、bcl-2和caspase-3 mRNA的表达;应用免疫组织化学方法检测NF-κB-p65、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达;采用吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡变化。结果 RT-PCR法显示NF-κBmRNA和bcl-2 mRNA在Ec9706/P-1细胞中表达条带亮度强于Ec9706;caspase-3 mRNA在Ec9706/P-1细胞中条带亮度较Ec9706细胞弱。免疫组织化学方法显示NF-κB p65蛋白和Bcl-2蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率高于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）;Caspase 3蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率低于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。吖啶橙荧光染色法表明Ec9706/P-1细胞的凋亡率低于Ec9706细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1产生耐药可能与NF κB p65、Bcl 2表达水平升高,Caspase-3表达水平降低有关,其逃避凋亡而导致耐药。     

子宫内膜样腺癌组织中Maspin蛋白表达及其临床意义

目的探讨Maspin蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Envision TM二步法,检测67例子宫内膜样腺癌、30例子宫内膜不典型增生、18例正常子宫内膜组织中Maspin蛋白的表达情况。结果Maspin蛋白在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生、子宫内膜样腺癌中的阳性表达率分别为16.67%（3/18）、40.00%（12/30）、68.66%（46/67）,3组比较,有显著性差异（χ^2=18.17,P〈0.05）,Maspin蛋白表达与子宫内膜样腺癌的分期、脉管浸润和淋巴结转移相关,与患者年龄、组织学分级和肌层浸润深度无关。结论Maspin蛋白在子宫内膜样腺癌中呈高表达,但随着肿瘤的发展其表达水平下调,其在子宫内膜癌的发生、发展和转移过程中起着一定调控作用。     

Maspin protein expression correlates with tumor progression in non-muscle invasive bladder cancer

Maspin is a 42-kDa protein that belongs to the family of serine protease inhibitors. It is involved in various physiological processes. In cancer tissue, Maspin was found to influence angiogenesis, tumor growth, metastasis and the prognosis of tumor patients. This study was performed to analyze the involvement of Maspin in transitional cell carcinoma of the bladder as well as its prognostic impact in a large patient cohort. Specimens from 162 non-muscle invasive bladder cancer patients (pTa, 91; pT1, 71) treated by transurethral resection with a minimum 3-year follow-up (median 58.5 months) were included in the present investigation. Tissue microarrays were constructed, and the specimens were immunohistochemically stained for Maspin protein expression. Each tissue specimen was assessed on a staining scale ranging from 0 (no staining) to 300 (strong staining) and correlated with various clinicopathological parameters. Maspin protein expression predicted progression with a sensitivity of 95% and a specificity of 70% (p<0.001). In predicting recurrence, Maspin staining showed 52% sensitivity and 67% specificity (p<0.05). Kaplan-Meier analyses were performed, and a low Maspin protein expression was correlated with a higher incidence of tumor progression (p<0.0001). However, expression levels of Maspin protein did not distinguish between pTa and pT1 specimens. Multivariate analyses indicated Maspin expression as an independent factor for predicting progression (p<0.0001) and recurrence (p<0.05). The present results suggest that the Maspin protein expression is an independent prognostic indicator for predicting recurrence and progression to muscle invasive disease. This study further emphasizes a possible clinical role of this novel tumor suppressor gene in transitional cell carcinoma of the bladder.     

Maspin和MMP-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的探讨Maspin和MMP-2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测60例乳腺浸润性导管癌及20例正常乳腺组织中Maspin和MMP-2的表达。结果Maspin在乳腺浸润性导管癌中表达阳性率为45.0%,低于在正常乳腺组织中的表达阳性率95.0%(P<0.05);MMP-2在乳腺浸润性导管癌中表达阳性率为75.0%,高于在正常乳腺组织中的表达阳性率15.0%(P<0.05)。Maspin和MMP-2的表达均与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移相关(P<0.05),MMP-2的表达还与乳腺浸润性导管癌临床分期相关(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌中Maspin与MMP-2的表达呈负相关(r=-0.11,P<0.05)。结论 Maspin对乳腺浸润性导管癌的转移有抑制作用,MMP-2对乳腺浸润性导管癌的转移有促进作用,检测Maspin和MMP-2的表达可以成为判断乳腺浸润性导管癌浸润及转移能力的重要指标之一。     

HIF-1α靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究

目的:探究HIF-1α对食管鳞状细胞癌转移及血管生成的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR检测细胞HIF-1α和SP1 mRNA表达;Western blot检测细胞HIF-1α和SP1蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;体外血管生成实验检测人脐静脉血管内皮细胞HUVEC血管形成能力;ChIP-PCR实验检测HIF-1α和SP1启动子的结合。结果:与人食管上皮细胞HEEC相比,在食管鳞状细胞癌细胞Ec109、KYSE30、KYSE150和KYSE410中HIF-1α和SP1 mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.05）,其中Ec109细胞变化最为明显。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与oe-NC组相比,oe-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。HIF-1α靶向结合SP1启动子区。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与sh-HIF-1α+oe-NC组相比,sh-HIF-1α+oe-SP1组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。结论:HIF-1α通过靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成。