大鼠一次性经皮染毒毒死蜱的毒代动力学和毒效应学研究

目的:研究大鼠一次性经皮染毒毒死蜱(CPF)的毒代动力学和毒效应学特征。方法:成年雌性SD大鼠按体质量随机分成3个剂量组(69.75、139.5、279 mg/kg)和1个对照组(0 mg/kg),皮下注射染毒,各组在给药后3、6、12、24、48、72 h共6个时间点收集大鼠血液和大脑皮质样本,在0～24、0～48和0～72 h连续收集尿液样本。测定指标包括血清CPF浓度,血清和尿液3,5,6-三氯-2-吡啶(TCP)浓度以及血清和大脑皮质乙酰胆碱酯酶(AChE)活性。结果:经皮染毒CPF剂量越大,大鼠血清CPF和TCP浓度越高,尿TCP排出量越大,血和皮质AChE活性抑制越大;血清CPF浓度在6 h达峰值,血清TCP浓度在12～24 h达峰值,血AChE活性在24 h最低,大脑皮质AChE活性在24～48 h最低。各剂量组血清CPF的半衰期为29～48 h,0～72 h曲线下面积(AUC)为31～110 h·μmol/L;血清TCP的半衰期为28～54 h,0～72 h AUC值为897～3 450 h·μmol/L。血AChE活性和大脑皮质AChE活性呈正相关(P<0.01),且血中的抑制率大于大脑皮质(P<0.01)。用DoseResp函数拟合血清CPF和AChE活性,呈现出剂量反应关系。结论:CPF外暴露剂量与大鼠体内CPF、TCP和AChE活性相关,内暴露水平和血AChE活性存在剂量效应关系;尿TCP排出量可作为机体暴露水平的生物标志;血AChE活性是大脑皮质AChE活性的有效生物标志。     

结合体质量生长函数的幼年大鼠毒死蜱经口暴露PBTK/TD模型的研究

目的:结合体质量生长函数,构建幼年大鼠毒死蜱(CPF)经口暴露生理基础毒代动力学及毒效应学(PBTK/TD)模型,并进行验证。方法:首先进行模型构建与验证,包括划分模型房室,确定所需参数;拟合大鼠体质量生长函数方程;编写微分方程和软件程序;利用动物实验数据优化参数,进行参数灵敏度分析和模型验证。然后进行动物实验,21日龄雌性SD大鼠按体质量随机分成对照组和12.5、25.0、50.0 mg/kg剂量组,一次性经口灌胃毒死蜱,在给药后1、3、6、12和24 h收集大鼠血清和大脑皮质,并测定各个时间点的血清毒死蜱(CPF)和3,5,6-三氯-2-吡啶(TCP)浓度,血清和大脑皮质乙酰胆碱酯酶(AChE)活力。结果:实验数据显示血清CPF和TCP浓度随时间先上升后下降,在3 h到达峰值,血清和皮质AChE活力随时间先下降后上升,血清AChE在6 h达最低值,皮质AChE在12 h达最低值。模型曲线与实验结果的变化趋势一致,模型的拟合预测情况较好;外推时会出现高估或低估的情况。结论:本模型结构和参数设计合理,且具备一定的外推能力,适用于个体平均水平的预测,但模型仍需要进一步改进。     

毒死蜱和乐果联合染毒对大鼠胆碱酯酶活性的影响

目的： 研究毒死蜱和乐果联合染毒对大鼠血清和脑组织乙酰胆碱酯酶 (acetylcholinesterase,AChE)和丁酰胆碱酯酶 (butyrylcholinesterase,BuChE)活性的影响。方法：采用3×3析因设计,雌性SD大鼠按体质量随机分为9个剂量组和1个阴性对照组,每组10只。选用毒死蜱和乐果的无可见有害作用水平 (no observed adverse effect level,NOAEL)、1/100半数致死剂量 (median lethal dose,LD50)和1/50 LD50作为低、中、高3个剂量水平,分别为毒死蜱0.03、1.35、2.70 mg/ (kg·d),乐果1.20、3.25、6.50 mg/ (kg·d)。灌胃染毒30 d,染毒结束后,经乙醚麻醉,股动脉取血,脱臼处死,剥取大脑皮质和海马,使用胆碱酯酶试剂盒测定胆碱酯酶活性。结果：染毒30 d后,高剂量组大鼠胆碱酯酶活性低于对照组 (P＜0.05);析因设计方差分析显示,毒死蜱和乐果联合染毒,对大鼠血清和皮质AChE活性无交互影响;对海马AChE和血清、脑组织BuChE活性存在交互作用 (P＜0.01)。结论：经口染毒高剂量有机磷农药可显著抑制血清和脑组织的胆碱酯酶活性,两种有机磷农药混配后可对胆碱酯酶活性产生交互作用。     

三丁基锡暴露可使大鼠脑乙酰胆碱酯酶活性升高

背景与目的:检测三丁基锡(Tributyltin,TBT)对大鼠脑乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响,探讨AChE与TBT毒性作用的关系。材料与方法:SD大鼠共48只随机分为4组,每组12只,分别为对照组(0mg/kgTBT)和3个实验组(0.1、1、10mg/kgTBT),对大鼠进行灌胃染毒,在第4、8、12d时分别于各组中取4只大鼠的脑组织,测定AChE水平。结果:TBT能够引起大鼠脑AChE活性升高,随染毒剂量的升高和暴露时间的延长AChE活性升高趋势增强。结论:TBT诱导大鼠脑AChE活性升高可能与TBT的神经毒性相关。     

乙酰甲胺磷对雌性大鼠氧化损伤及卵巢功能的影响

背景与目的： 研究乙酰甲胺磷对雌性大鼠氧化损伤及卵巢功能的影响。 材料与方法: 30只健康成年SD雌性大鼠,随机分为5组,每组6只。实验组设高(47.25 mg/kg)、中(23.63 mg/kg)、低(11.81 mg/kg)3个不同剂量乙酰甲胺磷染毒组、阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(雌二醇,0.1 mg/kg)。染毒组和阴性对照组采用经口灌胃,阳性对照组采用腹腔注射染毒。检测大鼠动情周期、血清和卵巢组织中SOD和GST活性、GSH和MDA含量及卵巢组织形态等的改变。 结果: 与阴性对照组比较,乙酰甲胺磷高剂量染毒组大鼠动情周期延长,血清SOD活力升高,GSH含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。中、高剂量染毒组大鼠血清MDA含量均高于阴性对照组,高剂量染毒组GST活力显著低于阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。各染毒组卵巢组织匀浆中SOD活力均低于阴性对照组,各染毒组GST活力均高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低剂量染毒组卵巢组织GSH含量低于阴性对照组,高剂量染毒组MDA含量显著高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高剂量染毒组大鼠卵巢组织的病理改变主要表现为始基卵泡和初级卵泡增多,而次级卵泡和成熟卵泡较少见,且闭锁卵泡增多。 结论： 乙酰甲胺磷对雌性大鼠具有一定的生殖毒性,在高剂量(47.25 mg/kg)染毒下,可引起动情周期的紊乱、卵巢组织的病理学改变,抑制卵巢的抗氧化酶活性,诱导脂质过氧化。     

邻苯二甲酸二丁酯亚慢性染毒对大鼠睾丸Insl3 mRNA表达的影响

背景与目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)亚慢性染毒对青春期大鼠睾丸间质细胞功能标志物胰岛素样因子3(Insl3)mRNA表达水平的影响。材料与方法:青春期健康雄性SD大鼠72只,随机分为3组:溶剂对照组(玉米油),DBP 50 mg/kg和250 mg/kg剂量的染毒组,每组24只。隔日染毒,等体积灌胃,连续染毒90 d。分别于染毒后30、60和90 d各组随机选取8只大鼠处死。取睾丸、附睾、心、肝、脾、肾称重并计算脏器系数,放免法检测血清睾酮含量,实时荧光定量PCR法检测睾丸Insl3 mRNA表达。结果:DBP 250 mg/kg组染毒90 d肝脏系数显著大于对照组(P<0.05);50 mg/kg组染毒60 d大鼠血清睾酮水平较对照组显著升高(P<0.05),而250 mg/kg组比50 mg/kg组显著下降(P<0.01);各染毒组大鼠睾丸Insl3 mRNA表达水平较对照组显著下调(P<0.01),染毒30 d、60 d时DBP 250 mg/kg剂量组较DBP 50 mg/kg组显著下调(P<0.05),各染毒组睾丸Insl3 mRNA表达水平均随处理时间延长先下调而后上调,60 d较30 d显著降低(P<0.05),90 d较60 d显著升高(P<0.01)。结论:青春期大鼠DBP亚慢性暴露可干扰血清睾酮及睾丸Insl3 mRNA表达水平,对肝脏可能有潜在毒性。     

纳米二氧化钛经气管染毒对大鼠肝、肾的影响

背景与目的:探讨纳米二氧化钛(nano-TiO2,粒径50nm)经气管染毒对大鼠肝、肾的影响。材料与方法:选取24只SD大鼠,随机分为0.5、5.0、50.0mg/kgnano-TiO2组和对照组(0.15%氯化钠溶液)。经气管注入nano-TiO2(或NaCl溶液)染毒7d后处死,取股动脉血检测血常规及生化指标;计算肝、肾脏器系数;测定血浆、肝脏和肾脏的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力和丙二醛(MDA)含量;并进行组织病理学检查。结果:血常规、血生化和脏器系数各项检测指标染毒组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5.0、50.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠肾脏组织SOD活力与对照组相比明显降低(P<0.05),50.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠血浆及肾脏组织GSH-PX活力与对照组相比明显降低(P<0.05),0.5、5.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠肝脏组织MDA含量与对照组相比明显升高(P<0.05),而肝、肾组织未产生明显组织病理学改变。结论:经气管急性染毒后,nano-TiO2可引起肝、肾组织氧化应激作用,但未见肝肾功能及病理学损伤,其生物和毒理学意义有待进一步研究。     

乳酸钠对大鼠的亚慢性经皮毒性试验

目的： 观察大鼠连续经皮给予大剂量乳酸钠后的毒性靶器官及其损害的可逆性。方法：设溶剂对照组和乳酸钠高、中、低3个剂量组 (分别为2 000、1 000和500 mg/kg),实验组大鼠连续经皮涂抹乳酸钠90 d,溶剂对照组给予蒸馏水。于第7周、第13周和停止染毒后4周,每组剖杀部分大鼠做血液学、生化学、眼科、尿液检测,测量脏器湿重和脏器系数,并进行解剖病理学观察。结果：染毒第13周各剂量组大鼠血液钠离子、钙离子浓度升高,钾离子、氯离子浓度降低,膀胱腔内存在蛋白样物质聚集;高剂量组大鼠尿液中蛋白和胆红素浓度升高,比重降低。停止染毒后4周高剂量组大鼠血液钠离子浓度仍然较高。结论：乳酸钠染毒后大鼠出现电解质轻度紊乱和尿液异常、尿蛋白增加等变化,因此乳酸钠对大鼠具有一定的毒性作用。     

大气细颗粒物PM_(2.5)致Wistar大鼠肺部病变的研究北大核心CSCD

目的探讨大气细颗粒物(particulate matter,PM)PM_(2.5)致肺部病变机制。方法采用实时PM_(2.5)采集器进行PM_(2.5)收集,Wistar大鼠饲养于PM_(2.5)的全身暴露染毒系统,Wistar大鼠每日染毒4小时,共染毒9月,设立实验组及对照组;观察肺组织大体结构及HE染色观察;流式细胞术检测Wistar大鼠T细胞免疫功能、肺组织细胞凋亡、细胞周期及DNA指数;ELISA实验检测Wistar大鼠血清及肺灌洗液中CEA、CA125及Scc Ag表达水平。结果实验组肺组织以支气管向外周辐射状颜色发暗、偏黑,多处可见白色斑点和泡状凸起,边缘不规则白色隆起;HE染色结果,实验组肺组织纤维化,肺实变严重,肺泡充血,见大量炎性反应增生;实验组CD4/CD8比值显著高于对照组(P<0.05),血清及肺灌洗液中CA125的表达显著高于对照组(P<0.05),实验组肺组织细胞凋亡率显著低于对照组,而DNA指数显著增高(均P<0.05)。结论长期接触PM_(2.5)会造成肺组织出现不同程度结节,肺组织出现大范围炎性反应病变。     

2, 4-二氯苯氧乙酸对子代大鼠发育及脑组织的氧化损伤作用

目的:研究大鼠孕期和哺乳期暴露2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)对子代发育及脑组织脂质过氧化的损伤作用。方法:Wistar大鼠于受孕后第2天开始经口灌胃染毒2,4-D(0、25、50和100 mg/kg)直至仔鼠出生后第21天,每天1次,连续42 d。期间检测仔鼠生理及早期神经行为发育指标。断乳1周后处死仔鼠检测脑组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结果:与对照组相比,100 mg/kg剂量组仔鼠体质量从出生后14 d开始降低,50 mg/kg剂量组仔鼠体质量从出生后21 d开始降低,差异均有统计学意义(P<0.05),而其他各生理发育指标差异均无统计学意义(P>0.05)。神经行为测试中100 mg/kg剂量组仔鼠断崖回避、空中翻正及听觉惊愕的阳性发生率均明显低于对照组(P<0.05),出现神经行为发育迟缓。50和100 mg/kg剂量组仔鼠脑组织中MDA含量升高,100 mg/kg剂量组仔鼠脑组织GSH含量及GSH-Px的活性下降,与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:大鼠孕期和哺乳期暴露2,4-D致子代神经发育迟缓可能与2,4-D引起脑组织脂质过氧化损伤有关。     

毒死蜱对果蝇生长发育的影响

目的：研究毒死蜱（CPF）对果蝇生长发育的影响。方法：设定0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和4.0 mg/L共7个CPF浓度梯度对果蝇进行急性染毒,统计每组果蝇96 h死亡数,Probit法计算毒死蜱染毒96 h对果蝇的半数致死浓度（LC₅₀）,依据LC₅₀分别设置含毒死蜱0.04、0.08、0.16、0.32 mg/L的培养基,用其染毒果蝇后,检测雌、雄果蝇体质量变化,各浓度组随染毒时间延长雌雄果蝇体质量日增减量及各染毒时间段随浓度增加雌雄果蝇体质量变化。结果：CPF对雌果蝇的毒性（LC₅₀为0.447 mg/L）大于雄果蝇（LC₅₀为0.858 mg/L）。CPF各浓度在染毒不同时间对雌果蝇的体质量无显著影响（P>0.05）。0.04~0.32 mg/L CPF使雄果蝇体质量平均日减轻0.01 mg/d,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,存在明显时间-效应关系。雄果蝇对低浓度0.04 mg/L（LC₅₀的1/20）CPF极为敏感,体质量显著下降（0.04～0.08 mg）,雄果蝇在0.16 mg/L浓度染毒时体质量增加（0.02 mg）,染毒72或96 h时各浓度组体质量差异有统计学意义（P<0.05）,存在明显剂量-效应关系。结论：CPF使雄性果蝇体质量发生变化,反映CPF可对雄性果蝇生长发育生理生化指标产生相应的影响。     

过氧基异丙苯对雄性小鼠的自由基毒性与遗传毒性的研究

背景与目的： 过氧基异丙苯是实验室常用的自由基激发剂,本实验旨在了解过氧基异丙苯(Cumene hydroperoxide,CHP)的自由基毒性和遗传毒性,为制造氧化损伤疾病相关动物模型提供参考剂量。 材料与方法： 36只健康昆明种成年雄性小鼠,体重(38.3±7.8) g , 随机分为4 组。灌胃染毒,染毒剂量分别为2 000、500、125和0 μg/kg。每天1 次,每周5 d,共计40 d。实验结束后处死小鼠,观察小鼠骨髓微核、精子畸变率,测定睾丸组织匀浆中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、 总超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(Glutathion,GSH)的水平。 结果： CHP染毒各组小鼠体重有程度不同的减轻,随染毒剂量的增加,睾丸组织匀浆中MDA含量逐渐增加,T-SOD活力、 GSH含量逐渐降低,其中2 000 μg/kg体重染毒组睾丸组织匀浆中MDA含量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),500 μg/kg染毒组GSH含量、SOD活力与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);骨髓嗜多染红细胞微核及精子畸变率增高,2 000 μg/kg染毒组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。 结论： CHP对昆明种小鼠具有很强的自由基毒性和遗传毒性,CHP的自由基毒性引发的氧化损伤可能是其遗传毒性的重要机制。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的影响。方法:将80只5周龄SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)、DEHP高剂量组(1 500 mg/kg),每组雌雄各10只,每周染毒5 d,每天灌胃染毒1次,连续6周。末次染毒24 h后处死动物,提取睾丸或卵巢组织蛋白,应用Western blot分别检测睾丸组织中3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、卵泡刺激素受体(FSHR)及卵巢组织中黄体生成素受体(LHR)和GnRHR的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,雄鼠睾丸组织在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量时3β-HSD蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01);GnRHR蛋白表达水平在1 500 mg/kg剂量组显著下降(P均<0.01);FSHR蛋白表达水平在500和1 500 mg/kg组显著下降(P<0.05或P<0.01)。雌鼠卵巢组织在DEHP 100 mg/kg剂量组时LHR和GnRHR蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量组LHR表达水平比对照组下降25%~35%,GnRHR下降60%~80%(P<0.05或P<0.01)。结论:DEHP染毒可引起大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的改变,干扰大鼠体内性激素的代谢,推测此作用与DEHP的生殖毒性存在密切关系。     

术前脂蛋白水平与胃癌淋巴结转移的相关性及其对胃癌预后的预测价值

目的:探讨胃癌患者术前脂蛋白水平与淋巴结转移的相关性及其对胃癌预后的预测价值。方法:收集徐州医科大学附属医院于2015年8月至2018年8月期间收治的220例经病理学确诊的胃癌患者为胃癌组,另选取同期健康体检者或胃息肉患者100例作为对照组,对比两组血清脂蛋白（HDL-C、LDL-C、ApoA1等）水平差异,分析胃癌患者术前脂蛋白水平与胃癌淋巴结转移及临床病理参数的相关性,采用Kaplan-Meier法分析术前脂蛋白水平与生存的关系,利用Cox比例风险回归模型探讨其在胃癌预后中的预测价值。结果:与对照组相比,胃癌组LP(a)明显较高,HDL-C明显较低（P<0.05）;胃癌患者的血清HDL-C水平与肿瘤长径、淋巴结转移和肿瘤浸润深度显著相关（P<0.05）,而LDL-C则与性别和肿瘤分化程度显著相关（P<0.05）,ApoB与淋巴结转移有关（P<0.05）。生存分析结果显示,术前HDL-C水平≥1.40 mmol/L,ApoB水平≥0.90 g/L时,患者的生存期显著较长（P<0.05）。Cox比例风险回归模型结果显示,术前HDL-C和ApoB水平为胃癌患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。结论:胃癌患者血清ApoB和HDL-C水平异常,且与淋巴结转移有关。检测胃癌患者术前HDL-C和ApoB等指标有助于预测患者预后。     

32. Study the aneugenic effect of benzene on germ cell of animal and workers

Objective: To study the aneupoidy effect of benzene on germ cells of animal and humans. Method: The NIH adult female mice were treated with varies doses of benzene (942, 1881 and 3762mg/kg respectively) by single gavage and (706, 1922 and 4864mg/m3 respectively) by inhalation (2h/d, 15d), the ovulated oocytes were collected for conventional cytogenetic analyses, and the frequencies of aneuploidy were detected. The frequencies of aneuploidy in sperm of benzene exposed workers were detected by two color fluorescence in situ hybridization with digoxingenin labeled 9 chromosome probe(D9Z1) and biotin labeled 18 chromosome probe (D18Z1). Result: The frequencies of aneuploidy in MII oocytes were significantly increased over the control in three groups treated by inhalation (7.06%,7.50% and 7.76% respectively control 1.30%, P<0.05 ), a dose-dependent response was present, But in gavage groups only the high dose group was increased over that of control. P<0.05. The timeweight average air concentration (TWA) of benzene in the workplace was 86.49mg/m3, it was two fold higher than the national maximum allowable concentration. The concentration of urinary trans, trans-muconic acid (ttMA) in exposed group was significantly higher than that of control group. A total of 136 401 sperm nuclei in 14 exposed workers and 156 955 sperm nuclei in 16 control workers were counted. The results showed that the frequencies of disomic sperm for chromosome 9 and 18, and diploidy sperm in exposed-workers (0.168%, 0.055%, 0.073%, respectively) were statistically increased over that (0.050%、 0. 033% and 0.040%, respectively) of controls. P<0.05. The frequencies of nullisomic sperm for chromosome 9,18 in the exposed group (0.206%,0.068%) were statistically increased also over that (0.067%,0.048% respectively) of control. The frequency of overall numerical chromosome aberrations (0.570%) in tbe exposed group was increased over that of control(0.218%)P<0.05.Conclusion:An increased aneuploidy frequency of germ cell in animals and workers exposed to high doses benzene was demonstrated. Benzene is an aneugen for germ cells.