Hsp90潜在抑制剂姜黄素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的机制

目的:研究姜黄素对人宫颈癌细胞Hela的抑制作用及对Hsp90信号通路的影响.方法:MTT法检测姜黄素对Hela细胞的增殖抑制作用.划痕实验检测姜黄素对细胞浸润侵袭的影响.流式细胞术检测姜黄素促进细胞凋亡的效果.Western blotting检测姜黄素对Hela细胞内Hsp90、Hsp70、AKT及Her-2蛋白表达的影响.结果:作用48h后,姜黄素对Hela细胞的增殖抑制呈现出显著的剂量依赖性(P＜0.01),当药物浓度为100 μmol/L时抑制率达到(87.5 ±3.5)％,IC50值为(41.8 ±2.3)μmol/L.划痕实验表明,姜黄素能抑制细胞的浸润和迁移.流式细胞结果显示,姜黄素能有效的促进Hela细胞凋亡,40 μmol/L组细胞的凋亡率即从原来的(10.3±0.6)％提高至(19.1±1.5)％(P＜0.05),当药物浓度达到100 μmol/L时凋亡率达到(55.8±2.6)％.Westem blotting结果显示,姜黄素能引起Hsp70蛋白表达上调,并促进Hsp90下游客户蛋白AKT及Her-2降解.结论:姜黄素表现出较强的抗Hela细胞活性,其机制可能是通过抑制Hsp90活性,影响相关信号通路引起的.     

Erufosine对胃癌细胞及骨髓细胞增殖抑制的影响

背景与目的:PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤转化、进展及放化疗抵抗密切相关.因此,此通路是一个潜在的肿瘤靶点.小分子化合物Erufosine为Akt抑制剂,能抑制多种肿瘤细胞生长.本研究观察小分子化合物Erufosine对胃癌细胞和正常骨髓细胞的增殖及对信号传导分子Akt表达的影响,并探讨其对癌细胞的作用机制.方法:使用MTS方法观察胃癌AGS细胞在Erufosine作用下的增殖抑制,计算其IC50及IC90值:在种植胃癌AGS瘤鼠尾静脉内注射Erufosine,定量计数胃癌AGS细胞、人及鼠骨髓细胞的骨髓克隆形成实验(colony forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM)数,用Western blot法检测Erufosine对AGS瘤细胞Akt表达的影响.结果:Erufosine对胃癌AGS细胞的增殖有明显抑制作用,AGS细胞的IC50和IC90分别为(5.8±2.6)μmol/L和(13.5±4.6) μmol/L;人骨髓细胞的IC50和IC90分别为(96.5±32.6)μ mol/L和(232.8±42.8)μmol/L,鼠骨髓细胞的IC50和IC90分别为(65.5±28.6) μmol/L和(228.8±54.8)μmol/L,与对肿瘤细胞的抑制相比,Erufosine对人和鼠骨髓细胞的毒性较低,两组IC50及IC90的差异均有统计学意义(P＜0.01).人和鼠骨髓细胞的CFU-GM抑制较低,人骨髓细胞的CFU-GM IC50和IC90分别为(86.5±18.6) μmol/L和(250.8±48.8)μmol/L,胃癌AGS细胞的CFU-GM IC50和IC90分别为(7.8±2.5) μmol/L和(13.6±3.6) μmol/L,抑制明显,两者的IC90相差约25倍,两组IC50及IC90的差异均有统计学意义(P＜0.01); Erufosine抑制胃癌AGS细胞的Akt表达.结论:Erufosine是对胃癌细胞具有明显抑制,且对骨髓有保护作用的新化合物.     

姜黄素诱导低分化鼻咽癌细胞株CNE-2Z的凋亡

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我国南方地区的高发肿瘤,发病早期的治疗主要是以放疗为主,而对晚期NPC患者则有必要进行适当的化疗。一些药物可通过诱导肿瘤细胞凋亡来达到治疗肿瘤的目的。本研究拟探讨姜黄素对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外增殖抑制作用及凋亡的影响。方法:不同浓度姜黄素处理CNE-2Z细胞,用噻唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率和IC50;用流式细胞术、Hoechest33258/碘化丙啶(PI)双染、琼脂糖电泳法观察细胞凋亡。结果:姜黄素能抑制CNE-2Z细胞的生长,其效果与姜黄素的浓度和作用时间有关,作用24h、48h、72h的IC50值为(24.05±0.47)、(19.20±0.17)、(7.35±0.50)μmol/L;5、10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,流式细胞术观察到细胞凋亡率分别为(4.9±3.2)%、(10.7±2.7)%和(14.7±0.5)%;10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,荧光染色可见细胞缩小,染色质固缩,核染色体碎裂等凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带。结论:姜黄素可诱导CNE-2Z细胞凋亡,姜黄素对CNE-2Z细胞具有增殖抑制作用。     

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的:探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法:采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果:姜黄素浓度在(15~35)μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在(1.25~5)μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加(P<0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低(P<0.05),Caspase-3 mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。     

姜黄素下调mTOR诱导人肺癌A549细胞自噬的研究

[目的]研究姜黄素诱导人肺癌A549细胞自噬现象及与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的关系。[方法]采用CCK-8法检测姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用;采用吖啶橙染色（AO）及转染GFP-LC3质粒荧光显微镜下观察姜黄素处理后A549细胞的自噬现象;采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链Ⅰ（LC3Ⅰ）、mTOR表达的变化。[结果]姜黄素对人肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且成明显的剂量—时间依赖关系。AO染色结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组及Rapa组细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组及3-MA组亮红色荧光比例下降。细胞转染GFP-LC3后姜黄素40μmol/L组和Rapa组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显;与姜黄素40μmol/L组相比,姜黄素40μmol/L＋3-MA组及3-MA组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显比例有所下降。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,姜黄素40μmol/L组作用24h后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著升高（P〈0.05）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达低于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。姜黄素40μmol/L组mTOR表达显著下降（P〈0.01）,姜黄素40μmol/L＋3-MA组mTOR表达高于姜黄素40μmol/L组（P〈0.05）。[结论]姜黄素能够明显抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬,同时还能够明显抑制mTOR蛋白的表达水平,其机理可能与mTOR的信号通路有关。     

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。     

姜黄素联合5-FU对胃癌MGC-803细胞生长的抑制作用

目的:探讨姜黄素联合低剂量5-FU对胃癌MGC-803细胞生长抑制作用是否达到或优于高剂量5-FU单用以及两药联合应用的效果。为临床上联合应用姜黄素和氟尿嘧啶治疗胃癌提供理论和实验依据。方法:用MTT检测姜黄素（20μmol/L）和不同剂量的5-FU（2、6、20、60μmol/L）联合或5-FU（10、100μmol/L）单独作用于体外培养的胃癌MGC-803细胞12h、24h、36h而产生的增殖抑制效应,并对实验数据进行方差分析和析因分析。结果:两种药物单用及联用时,均对体外培养人胃癌MGC-803细胞增殖有显著抑制作用（P<0.05）,且呈剂量时间依赖效应。姜黄素联合低剂量5-FU对胃癌MGC-803细胞的抑制作用优于高剂量5-FU单用（P<0.05）;两药有很好的协同作用（P<0.05）。结论:姜黄素联合低剂量5-FU对胃癌MGC-803生长的抑制作用优于高剂量5-FU单用;姜黄素与5-FU的联合用药对胃癌细胞的抑制呈协同作用。     

姜黄素衍生物体外抑制结肠癌细胞增殖侵袭作用

背景与目的:姜黄素(curcumin)是从天然植物姜黄中提取的酚类化合物,已证实其具有抗恶性肿瘤作用。近年人工合成的姜黄素衍生物被认为抗癌作用和生物利用度优于母体姜黄素,但是对于结肠癌细胞的作用鲜见报道。研究旨在比较天然植物姜黄素及其4种人工合成的衍生物T316、T62、T63、T6F4对结直肠癌细胞株Lovo和SW480的细胞毒性作用、增殖迁移抑制作用和核转录因子(NF-κB)活性表达的影响。方法:培养人结肠癌细胞系Lovo和SW480,然后通过MTT分析检测姜黄素及4种衍生物对结肠癌细胞株Lovo和SW480细胞毒性影响;细胞划痕实验检测对结肠癌细胞迁移抑制作用;软琼脂克隆形成实验检测对癌细胞克隆增殖影响;流式细胞技术检测对癌细胞凋亡的影响;并通过荧光素酶双报告基因法检测姜黄素及其衍生物对NF-κB活性表达的影响。结果:姜黄素对Lovo和SW480的半数有效抑制浓度(IC50)分别为(14.2±0.2)μmol/L和(10.6±0.7)μmol/L,分别是4种衍生物对Lovo和SW480的7.0~8.7倍和5.7~7.8倍(P<0.01)。不加任何药物时,Lovo 24 h迁移距离为(160.7±18.4)μm,SW480为(389.9±8.9)μm,但加入姜黄素及4种衍生物后,细胞迁移距离均明显缩短,距离最短是T63作用于Lovo时的(53.2±11.7)μm;T316作用于SW480时的(80.4±9.6)μm。4种衍生物的迁移距离明显短于姜黄素的迁移距离(P<0.05)。4种衍生物在抑制2株结肠癌细胞克隆形成方面也明显优于姜黄素母体(P<0.05)。通过流式细胞检测发现,姜黄素及4种衍生物诱导Lovo的凋亡率分别为(10.05±0.54)%、(55.32±2.86)%、(31.83±0.85)%、(26.01±0.44)%、(21.44±3.01)%,高于对照组的凋亡率(6.98±0.23)%(P<0.05);且4种衍生物诱导凋亡作用优于姜黄素(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测结果表明,姜黄素及其4种衍生物能下调TNF-α诱导的NF-κB的转录活性。结论:姜黄素和4种衍生物均能抑制结直肠癌细胞的增殖迁移力,促进结直肠癌细胞的凋亡,但4种衍生物的作用明显优于母体姜黄素。     

姜黄素抑制结肠癌SW480细胞的增殖及其机制

目的:研究姜黄素对人结肠癌SW480细胞增殖以及survivin、caspase-3和p-Akt表达的影响。方法:用不同浓度姜黄素(5～40μmol/L)作用SW480细胞24、48和72 h,MTT法检测姜黄素对SW480细胞生长的抑制作用,Western blotting法检测SW480细胞中survivin、caspase-3和p-Akt蛋白的表达。结果:姜黄素以剂量(5～40μmol/L)和时间(24～72 h)依赖的方式抑制SW480细胞的增殖(P<0.01),40μmol/L姜黄素作用72 h对SW480细胞生长的抑制率可达(75.86±3.93)%。姜黄素抑制SW480细胞中p-Akt、survivin蛋白的表达、促进caspase-3蛋白的表达,均呈时间和剂量依赖性;40μmol/L姜黄素作用SW480细胞48 h后p-Akt和survivin蛋白表达显著减少[(0.204±0.025)vs(0.367±0.035),P<0.01;(0.208±0.014)vs(0.385±0.034),P<0.01],caspase-3蛋白表达显著增加[(0.371±0.028)vs(0.127±0.023),P<0.01]。结论:姜黄素抑制SW480细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化、下调survivin和上调caspase-3蛋白的表达有关。     

白花蛇舌草注射剂联合紫杉醇对HO-8910和HeLa细胞生长抑制作用的研究

目的:研究白花蛇舌草注射液(ODI)联合紫杉醇(PTX)对人卵巢癌HO-8910PM细胞株与人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用.方法:用M1T法测定白花蛇舌草注射液及其联合紫杉醇分别作用于HO-8910和Hela细胞的生长抑制作用,并用IC50值进行评价.结果:ODI作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为8.88μg/ml和2.91μg/ml(按ODI总黄酮计);LY294002作用于HeLa与HO-8910细胞的IC50分别为43.92μg/ml和23.91 μg/ml;PTX作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为>100μmol/L与46.75μgmol/L;PTX联合ODIICl0(10%生长抑制浓度,ICl0)作用于HeLa和HO-8910细胞的IC50值分别为>100μmol/L与31.02μmol/L,PTX联合LY2940021C10作用于HeLa和HO-8910的IC50值分别为73.26μmol/L和36.01μmol/L.结论:ODI对HO-8910和HeLa细胞均有明显的生长抑制作用,且呈浓度依赖;无毒性剂量或ICl00DI联合PTX)(可明显增加HO-8910细胞对PTX的细胞毒作用或敏感性,但对HeLa细胞无明显影响.     

转铁蛋白修饰多柔比星脂质体靶向抑制乳腺癌细胞增殖的研究

目的：利用转铁蛋白（TF）修饰多柔比星脂质体,并探讨其对乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用薄膜超声法制备脂质体,利用硫酸梯度法制备多柔比星脂质体,然后采用后插入法制备 TF修饰多柔比星脂质体。激光共聚焦显微镜检测乳腺癌细胞 MCF-7和 MDA-MB-231对 TF-多柔比星脂质体的摄取,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT 法）检测 TF-多柔比星脂质体靶向作用 MCF-7和 MDA-MB-231细胞后的杀伤能力,软琼脂克隆集落实验检测 TF-多柔比星脂质体对 MCF-7和 MDA-MB-231细胞的生长抑制作用。结果激光共聚焦显微镜观察显示,MCF-7细胞和 MDA-MB-231细胞对 TF-多柔比星脂质体摄取率显著高于多柔比星脂质体;MTT 法检测结果则显示,TF-多柔比星脂质体对 MCF-7细胞[（20．8±3．2）μmol／L]和 MDA-MB-231细胞[（20．1±3．0）μmol／L]杀伤的 IC50显著低于多柔比星脂质体[（158．6±24．6）μmol／L;（160．1±25．1）μmol／L）]和游离多柔比星[（161．7±26．2）μmol／L;（166．9±27．0）μmol／L）],差异有统计学意义（F ＝116．03,P ＜0．001;F ＝75．29,P ＜0．001）。软琼脂克隆集落实验显示,TF-多柔比星脂质体对克隆集落的生长抑制显著优于多柔比星脂质体、游离多柔比星及对照组[MDA-MB-231细胞直径：（60．5±10．4）μm、（94．3±16．8）μm、（131．8±22．6）μm、（162．8±30．3）μm;MCF-7细胞直径：（31．8±5．5）μm、（62．1±11．1）μm、（108．6±18．6）μm、（157．4±29．3）μm],差异有统计学意义（F ＝87．17,P ＜0．0001;F ＝178．23,P ＜0．0001）。结论 TF-多柔比星脂质体对乳腺癌细胞体外增殖具有显著的抑制作用,能够高效、特异地杀死乳腺癌细胞,为体内治疗乳腺癌提供了一定的理论依据。     

芹菜素通过 PI3K/Akt 信号通路诱导 Hela 细胞凋亡

目的：初探芹菜素（Apigenin）对人宫颈癌细胞 Hela 的抑制机制。方法：MTT 法检测 Apigenin 对 Hela细胞的增殖抑制作用,实时无标记细胞分析技术测量 Apigenin 对 Hela 细胞生长曲线的影响。Western blot 检测 Apigenin 对 Hela 细胞中 PI3K/ Akt 信号通路的影响。结果：与阴性对照组相比,Apigenin 能显著抑制 Hela细胞的增殖（P <0.01）,当药物浓度为20μmol/ L 时抑制率达到（80.5±5.3）%,IC50值为（6.8±0.8）μmol/ L。细胞生长曲线反映,Apigenin 减缓了 Hela 细胞的增殖,对数期细胞经20μmol/ L Apigenin 处理后,细胞数量迅速下降。Western blot 结果显示,Apigenin 能显著抵抗 IGF -1引起的 Akt 激活但并不能降低 PI3K 的磷酸化水平。同时 Apigenin 还能降低 Bcl -2/ Bax 比例,提高 Caspase -3活性,启动细胞线粒体凋亡。结论：Apigenin可以通过 PI3K/ Akt 信号通路促进 Hela 细胞的凋亡。     

Identification and characterisation of a novel heat shock protein 90 inhibitor ONO4140

Heat shock protein (Hsp) 90 is a key component of the super-chaperone complex that maintains functionally active conformation of various client proteins. Many of these client proteins regulate important nodal points in multiple signalling pathways that promote cancer cell growth and survival. Inhibitors of Hsp90, therefore, have the potential of functioning as anti-cancer agents with pleiotropic effects. Identification of novel Hsp90 inhibitors with more favourable pharmacological properties is a priority in cancer therapy. To achieve this goal, we screened a compound library using a biochemical assay based on refolding of denatured firefly luciferase. The assay revealed high sensitivity, reliability and reproducibility with a Z-factor of 0.81 ± 0.17. Six Hsp90 inhibitory compounds identified by this screening with IC₅₀ values between 1.0 and 6 μM were further characterised for anti-proliferative activity by Cell Titer-Blue Cell Viability Assay using multiple tumour cell lines. Of particular interest was ONO4140 with lowest GI₅₀ values in three different cancer cell lines viz; DU-145, BT-474 and K562 cell lines. This study also revealed that short-term exposure of tumour cells with ONO4140 is sufficient to inhibit the catalytic activity of Hsp90, evaluated through disruption of Hsp90-p23 association by immunoprecipitation. This short term exposure appears to initiate events like degradation of Hsp90 client proteins such as ErbB2/Her-2 and Akt with concomitant inhibition of survival signalling leading to the apoptotic death of tumour cells as seen by western blotting and Caspase Glow-3,7 assay. The study also reveals that apoptosis following Hsp90 inhibition with ONO4140 occurs via Caspase9–Caspase3 intrinsic apoptotic pathway, a process that is likely triggered by inactivation of Akt. In conclusion, we have identified a novel class of synthetic compounds which show potent Hsp90 inhibitory action in preclinical studies. The discovery of this novel class of synthetic Hsp90 inhibitors with simple chemical backbone allows us to conduct further structural modifications to improve their potency and pharmacokinetic properties for use in cancer therapy.     

姜黄素对肝癌细胞凋亡及TNF-ɑ、IL-1β、IL-6炎性因子影响的机制研究

目的 探讨姜黄素对肝癌细胞凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、白介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)炎性因子的影响及机制.方法 采用5、10、20、40、80、160μmol/L的姜黄素处理人肝癌HepG2细胞24、48 h后,CCK8实验检测细胞的增殖情况,计算IC50值;50μmol/L的姜黄素处理HepG2细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Notch1、Hes1蛋白表达情况.结果 细胞抑制率随着姜黄素作用时间及浓度的增加显著升高.根据IC50值选择50μmol/L的姜黄素作为研究对象;以50μmol/L的姜黄素处理肝癌细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达明显高于对照组,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、Notch1、Hes1蛋白表达均明显低于对照组(P﹤0.01).结论 姜黄素可呈时间及剂量依赖式抑制人肝癌HepG2细胞增殖,可诱导细胞的凋亡,可通过降低TNF-ɑ、IL-1β、IL-6的表达达到抗炎作用,其机制与抑制Notch1信号通路有关.     

藤黄酸对人肾癌786－O细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察藤黄酸（Gambogic acid）对人肾癌786－O细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测藤黄酸对786－O细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测藤黄酸对786－O细胞凋亡的影响。Western blotting检测藤黄酸对786－O细胞内凋亡相关蛋白Bcl－2、Bax及NF－κB通路相关蛋白p65、IκB表达的影响。荧光显微镜观察藤黄酸对NF－κB活性的影响。结果：藤黄酸对786－O细胞的增殖抑制率具有显著的剂量依赖性,在作用48h后其 IC50值为（3．4±0．3）μmol／L。细胞凋亡实验发现,藤黄酸能有效的诱导786－O细胞凋亡,随药物浓度增加细胞凋亡比例逐渐增大,当药物浓度达到4．0μmol／L时凋亡率为（68．1±3．6）％。Western blotting发现藤黄酸能引起Bax蛋白的上调和Bcl－2蛋白的降解,与此同时能抵抗TNF－α诱导导致的IκB降解;荧光显微成像则进一步发现藤黄酸能阻止NF－κB入核。结论：实验表明,藤黄酸能诱导786－O细胞凋亡,主要机制可能是通过其对NF－κB的信号通路的抑制实现的。     

Hsp90抑制剂减弱肝癌耐药细胞株对索拉非尼诱导铁死亡的耐受性北大核心

目的:检测热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂协同索拉非尼(Sorafenib)对肝癌耐药细胞的作用机制,并研究其对Sorafenib诱导肝癌耐药细胞铁死亡的增敏效应。方法:MTT法检测格尔德霉素(Geldanamycin)联用Sorafenib在抑制HepG2/Sorafenib细胞增殖中的联合效应;流式细胞术检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化,以及Geldanamycin对细胞内ROS的协同诱导效应;FerroOrange染色法检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内二价铁离子水平变化;RT-PCR及Western blot实验检测Geldanamycin对铁死亡相关基因SLC7A11及GPX4等转录和表达的调节作用。结果:Geldanamycin可增强HepG2/Sorafenib耐药细胞株对Sorafenib的敏感性,经30 nmol/L浓度的Geldanamycin预处理后,Sorafenib的半数抑制率IC_(50)由原来的(2.6±0.1)×10^(3) nmol/L降为(37.2±6.9)nmol/L,变化差异显著(P<0.01)。当Sorafenib浓度高于32 nmol/L后,二者的联用指数CI小于0.2,表明Geldanamycin与Sorafenib联用处理HepG2/Sorafenib耐药细胞株具有强烈的协同效应;HepG2/Sorafenib耐药细胞株经30 nmol/L Geldanamycin预处理后,其细胞内的ROS水平可重新被Sorafenib诱导,相同浓度下与无Geldanamycin处理组比较,增强了4.2倍(P<0.01);30 nmol/L Geldanamycin可显著增强Sorafenib诱导HepG2/Sorafenib细胞内二价铁离子水平提高,提示其协同Sorafenib促细胞铁死亡作用;Geldanamycin能通过Akt-Nrf2途径下调SLC7A11蛋白的转录,并影响GPX4蛋白的表达。结论:抑制Hsp90能减弱肝癌耐药细胞株对Sorafenib诱导铁死亡的耐受性,其机制可能是通过阻断Akt/Nrf2介导的SLC7A11转录下调实现的。     

Effects of HIV protease inhibitor ritonavir on Akt-regulated cell proliferation in breast cancer.

PURPOSE: These studies were designed to determine whether ritonavir inhibits breast cancer in vitro and in vivo and, if so, how. EXPERIMENTAL DESIGN: Ritonavir effects on breast cancer cell growth were studied in the estrogen receptor (ER)-positive lines MCF7 and T47D and in the ER-negative lines MDA-MB-436 and MDA-MB-231. Effects of ritonavir on Rb-regulated and Akt-mediated cell proliferation were studied. Ritonavir was tested for inhibition of a mammary carcinoma xenograft. RESULTS: ER-positive estradiol-dependent lines (IC50, 12-24 micromol/L) and ER-negative (IC50, 45 micromol/L) lines exhibit ritonavir sensitivity. Ritonavir depletes ER-alpha levels notably in ER-positive lines. Ritonavir causes G1 arrest, depletes cyclin-dependent kinases 2, 4, and 6 and cyclin D1 but not cyclin E, and depletes phosphorylated Rb and Ser473 Akt. Ritonavir induces apoptosis independent of G1 arrest, inhibiting growth of cells that have passed the G1 checkpoint. Myristoyl-Akt, but not activated K-Ras, rescues ritonavir inhibition. Ritonavir inhibited a MDA-MB-231 xenograft and intratumoral Akt activity at a clinically attainable serum Cmax of 22 +/- 8 micromol/L. Because heat shock protein 90 (Hsp90) substrates are depleted by ritonavir, ritonavir effects on Hsp90 were tested. Ritonavir binds Hsp90 (K(D), 7.8 micromol/L) and partially inhibits its chaperone function. Ritonavir blocks association of Hsp90 with Akt and, with sustained exposure, notably depletes Hsp90. Stably expressed Hsp90alpha short hairpin RNA also depletes Hsp90, inhibiting proliferation and sensitizing breast cancer cells to low ritonavir concentrations. CONCLUSIONS: Ritonavir inhibits breast cancer growth in part by inhibiting Hsp90 substrates, including Akt. Ritonavir may be of interest for breast cancer therapeutics and its efficacy may be increased by sustained exposure or Hsp90 RNA interference.     

地塞米松影响结肠癌细胞对奥沙利铂与氟脲嘧啶化疗敏感性的实验研究*

目的:检测糖皮质激素受体在结肠癌组织及细胞株中的表达,探讨地塞米松共处理或预处理24h,结肠癌细胞株对奥沙利铂和氟脲嘧啶化疗敏感性的变化。方法:采用免疫组化检测糖皮质激素受体在61例结肠癌组织标本及4 种结肠癌细胞株中的表达;Hoechst33342 染色、流式细胞仪检测体外地塞米松对结肠癌细胞株的凋亡诱导作用;以MTT 法检测地塞米松共处理或预处理24h 后,结肠癌Lovo 细胞株对奥沙利铂和氟脲嘧啶化疗敏感性的变化。结果:在57.3% 的结肠癌组织标本中糖皮质激素受体呈阳性表达,在四种结肠癌细胞株中仅Lovo 和HCT-116表达糖皮质激素受体,HT- 29和SW- 480 细胞不表达。单独应用地塞米松后,对糖皮质激素受体阳性的Lovo 和HCT-116 细胞有较强的促凋亡作用,对不表达糖皮质激素受体的HT- 29和SW- 480 细胞作用则不明显。以1 ×10-4 mol/L的地塞米松处理Lovo 细胞24h,或与奥沙利铂共处理可使奥沙利铂的 IC 50从（13.7 ± 1.3）μ g/mL 降低至（5.9 ± 0.6）μ g/mL 和（4.8 ± 0.7）μ g/mL;同样处理可使氟脲嘧啶的IC 50从（72.2 ± 8.1）μ g/mL 降低至（21.1 ± 4.1）μ g/mL 和（18.6 ± 4.0）μ g/mL。结论:部分结肠癌组织及细胞株表达糖皮质激素受体。地塞米松体外作用能够促进糖皮质激素受体阳性的结肠癌细胞发生凋亡,与奥沙利铂和氟脲嘧啶预处理或共处理后可以增加结肠癌细胞的化疗敏感性。      

The Effect of Curcumin on Proliferation and Apoptosis in LNCaP Prostate Cancer Cells

OBJECTIVE To observe the effect of curcumin on proliferation and apop-tosis in the prostate cancer LNCaP cell line. METHODS The AXSYMTM system luciferase method was used to examine the effect of various concentratious of curcumin on the content of prostate specific antigen (PSA) in prostate cancer LNCaP cells. A pGL3-PSA luciferase expression vector, containing 640 bp DNA of the PSA gene 5' -promoter region was constructed and transfected into the LNCaP cells with lipofectin. By measuring luciferase activity, the effect of 10 μmol/L, 20 μmol/L, 30 and 40 μmol/L curcumin on the promoter was studied. Effects on cell growth and apoptosis were analyzed by microscopy, the MTT colorimetric assay and flow cytometry. Western-blotting was used to measure expression of the androgen receptor (AR) in the LNCaP cells treated with different concentrations of curcumin. RESULTS The results showed that the expression of PSA was inhibited as curcumin reduced the activity of luciferase. Curcumin also caused a sigificant concentration-dependent decrease in AR expession measured by Western -blotting. Cell growth was inhibited and apoptosis was induced. CONCLUSION By inhibiting AR expression, curcumin reduced the function of the PSA promoter and inhibited PSA protein expression. Curcumin decreased the cellular proliferation and induced apoptosis in LNCaP cells in a concention-dependent manner.     

小白菊内酯联合阿霉素抑制白血病Jurkat细胞增殖的实验研究

目的 探讨小白菊内酯（PTL）联合阿霉素（ADM）对成人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响及可能机制。方法 MTT法计算PTL和ADM 48h的半数抑制浓度（IC50）,检测PTL（4、8、16μmol／L）、ADM（0.25、0.5、1μmol／L）作用于Jurkat细胞48h的增殖抑制率;流式细胞仪检测ADM（0.25、0.5、1μmol／L）、PTL（4、8、16μmol／L）以及PTL（8μmol／L）联合ADM（0.5μmol／L）作用于Jurkat细胞48h的凋亡率;免疫组化法检测ADM（0.5μmol／L）、PTL（8μmo／L）以及PTL（8μmol／L）联合ADM（0.5μmol／L）作用于Jurkat细胞48h后核因子-κBp65（NF-κBp65）的蛋白表达。均设未加药的Jurkat细胞为对照组。结果 MTT法检测显示,PTL、ADM作用于Jurkat细胞48h的IC50分别为8.11μmol／L和0.53μmol／L。PTL、ADM抑制Jurkat细胞的增殖呈浓度依赖性,PTL联合ADM组对Jurkat细胞的增殖抑制率高于两单药组和对照组。流式细胞术检测显示,ADM、PTL单药诱导Jurkat细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而增高;PTL联合ADM组的细胞凋亡率为（84.50±5.64）％,显著高于两单药组和对照组（P＜0.05）。免疫组化检测显示,单药PTL及PTL联合ADM作用于Jurkat细胞48h后NF-κBp65蛋白的阳性积分明显低于对照组（P＜0.05）,ADM单药组明显高于对照组（P＜0.05）,PTL联合ADM组均明显低于单药组（P＜0.05）。结论 PTL可能通过抑制NF-κBp65蛋白表达,增强ADM抑制Jurkat细胞增殖能力,促进其凋亡。