原癌基因HER2／neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。     

脆性X综合征与FMR－1基因

脆性Ｘ综合征（ＦＸ）患者的脆性位点（ＦＲＡＸＡ）与ＦＭＲ－１位点一致，脆性断点位于（ＣＧＧ）ｎ上，而ＦＭＲ－１突变有两类：（ＣＧＧ）ｎ重复数突变和点突变（或丢失）。同时表明ＦＭＲ－１５＇侧ＣｐＧ岛甲基化。并介绍ＴＦＭＲ－１（ＣＧＧ）ｎ突变分子生物学检测方法。     

诊断试验中患病构成比、灵敏度及特异度与准确度的数学关系及变化规律研究

本文研究患病构成比ＣＲＤ、灵敏度Ｓｅ及特异度Ｓｐ与准确度ＳＡｃ和标化准确度ＳＡｃ的数学关系，导出公式如下：Ａｃ＝Ｓｅ×ＣＲＤ＋Ｓｐ（１－ＣＲＤ）；Ａｃ与ＳＡｃ的关系如下：当ＣＲＤ＝５０％时，Ａｃ＝ＳＡｃ。分析了Ａｃ随Ｓｅ、Ｓｐ）和ＣＲＤ的变化规律，即：①当Ｓｅ＝Ｓｐ，无论ＣＲＤ大小，均有Ａｃ＝Ｓｅ＝Ｓｐ；当Ｓｅ＜ｓＰ，则Ａｃ随ＣＲＤ增大而变小；当Ｓｅ＞Ｓｐ，则Ａｃ随ＣＲＤ增大而增大。Ａｃ随ＣＲＤ变动的心减幅度△Ａｃ．ＣＲＤ用公式表示为：△Ａｃ．ＣＲＤ＝△ＣＲＤ（Ｓｅ－Ｓｐ），△ＣＲＤ为ＣＲＤ的增减量。②当ＣＲＤ不变，则Ａｃ随Ｓｅ和Ｓｐ增大而增大，Ａｃ随Ｓｅ和Ｓｐ改变的增减幅度△Ａｃ．ｓｅｓｐ为：△Ａｃ．ｓｅｓｐ＝ＣＲＤ（△Ｓｅ－△Ｓｐ）＋△Ｓｐ．式中△Ｓｅ和△Ｓｐ分别为Ｓｅ和Ｓｐ的增减量。     

慢性肾功能衰竭患者血小板胞浆游离钙浓度及血栓素B_2含量的观察

用Ｆｕｒａ－２荧光测定法和ＲＩＡ，对２４例慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）维持血透患者（男１６例，女８例，年龄２６～７１岁，平均５０．９岁）血小板的胞浆游离钙浓度和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）含量进行了测定。ＣＲＦ组透析前、后血小板胞浆游离钙浓度均高于正常对照组（Ｐ均＜０．００１），透析后低于透析前（Ｐ＜０．００２）；透前、后血小板ＴＸＢ２均低于正常（Ｐ分别小于０．００１和０．０５），透析后高于透析前（Ｐ＜０．００１）。血小板胞浆钙浓度变化与ＴＸＢ２生成不相关。Ｐ＜０．００１：与透析前比，ΔＰ＜０．０５，ΔΔＰ＜０．００２在相关分析上，Ｐｔ［Ｃａ２＋］ｉ与血小板ＴＸＢ２在正常对照组不相关（ｒ＝－０．２７，ｐ＜０．１），透析前、后也均不相关（ｒ＝０．３４和－０．２２，ｐ分别＜０．２和０．５）。讨论Ｃａ２＋是重要的细胞内信使，多种形式的细胞损伤或细胞处于病理生理状态下，常伴有胞浆钙水平的增高。血小板胞浆Ｃａ２＋在刺激信号的转导中发挥重要的作用，促使血小板的变形、聚集、释放，调节血小板的花生四烯酸代谢［３］。有关研究已证实，血小板［Ｃａ２＋］ｉ的变化能诱发内源性花生四烯酸代谢物的释放，参与ＴＸＡ２生成的调节；而ＴＸＡ２对［Ｃａ     

一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

p53、EGFR和Ki-67抗原在子宫恶性中胚叶混合瘤中的表达

目的：研究子宫恶性中胚叶混合瘤ｐ５３、ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７抗原的表达及与肿瘤临床分期、组织学分级和预后的关系。方法：用免疫组化Ｓ－Ｐ法对２１例子宫恶性中胚叶混合瘤的存档资料作染色观察。结果：ｐ５３、ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７抗原的阳性表达率分别为６１．９％、６１．９％和７１．４％。临床分期Ⅱ～Ⅳ期肿瘤（１０／１２）的ｐ５３阳性表达率明显高于Ⅰ期肿瘤（３／９）（Ｐ＜０．０５）、肿瘤癌性成分Ⅱ级的ｐ５３阳性表达高于Ⅰ期（Ｐ＜０．０５）。６例在１年内死亡的病例，其中５例ｐ５３阳性染色，而５例生存２年以上的肿瘤ｐ５３免疫染色全部阴性，两组比较（Ｐ＜０．０５）。肉瘤成分Ⅲ级的ＥＧＦＲ阳性率高于Ⅱ级（Ｐ＜０．０５），除此而外，ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７的表达和肿瘤分期、预后均无相关性。结论：肿瘤的ｐ５３表达具有预后意义     

乙型肝炎病毒preS1 多肽在大肠杆菌中的表达与纯化研究

目的　获得大量完整的重组乙肝病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ）ｐｒｅ Ｓ１ 多肽纯品,以利于ｐｒｅ Ｓ１ 功能与免疫学性质的研究。方法　比较不同表达载体及不同的培养、诱导和纯化条件,最大限度地使表达产物免受大肠杆菌蛋白酶的降解。结果　分析不同长度ｐｒｅ Ｓ１ 基因在两种不同载体,两种表型宿主菌中表达产物的状况,可看出在ｐｒｅ Ｓ１ 第５６ 和６４ 位氨基酸之间存在两个 Ｅ．ｃｏｌｉ 蛋白酶切割点。用ｐ Ｑｅ９载体和 Ｍ１５（ｐ Ｒ Ｅ Ｐ４） 宿主菌, Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导１２ 小时以 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 琼脂糖柱在变性条件下纯化,能获得１０ ｍｇ／ Ｌ 以上具有良好免疫学活性的电泳纯ｐｒｅ Ｓ１ 蛋白。结论　缩短诱导时间、用一步法在变性条件下纯化表达产物可获得无明显降解的ｐｒｅ Ｓ１ 完整蛋白。     

中国蒙古族群体和北方汉族群体C1R遗传多态性研究

为了解中国人群Ｃ１Ｒ的遗传多态性，并评估和展望其在法医学和群体遗传学中的应用价值，运用作者建立的测定Ｃ１Ｒ表型的等电聚焦免疫印迹技术，调查了中国蒙古族群体和北方汉族群体补体Ｃ１ｒ亚单位（Ｃ１Ｒ）的遗传多态性，这两个群体中Ｃ１Ｒ等位基因的频率分布为：蒙古族：Ｃ１Ｒ＊１＝０．５３１７、Ｃ１Ｒ＊２＝０．２８１７、Ｃ１Ｒ＊５＝０．１７２５、Ｃ１Ｒ＊Ｖ＝０．０１４１；北方汉族：Ｃ１Ｒ＊１＝０．５３８１、Ｃ１Ｒ＊２＝０．２６１９、Ｃ１Ｒ＊５＝０．１７１４、Ｃ１Ｒ＊６＝０．００４８、Ｃ１Ｒ＊７＝０．００４８、Ｃ１Ｒ＊Ｖ＝０．０１９０。与其他群体Ｃ１Ｒ的资料相比，中国这两个群体Ｃ１Ｒ的基因频率分布与白种人、黑人有很大差异，提示Ｃ１Ｒ是群体遗传学研究较理想的遗传标记之一。     

免疫组化和PCR—SSCP检测p53基因异常的一致性探讨

目的：探讨免疫组化检测ｐ５３蛋白表达和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因突变的一致性。方法：单克隆抗体ＤＯ－７检测８５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的ｐ５３蛋白表达，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测其中３１例腺癌的ｐ５３基因突变。结果：８５例ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达阳性率为６８％（５８／８５），３１例腺癌中ｐ５３蛋白表达阳性率为６１％（１９／３１），１４例（４６％）出现ｐ５３基因５～８外显子突变，ｐ５３蛋白免疫组化和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因突变无显著相关（χ２＝０．１，Ｐ＝０．７６），其一致率为５２％。结论：ｐ５３蛋白表达并不能很好地反映ｐ５３基因突变。     

p53和nm23联合表达对食管鳞癌淋巴结转移的影响

目的：探讨ｐ５３ 和ｎｍ２３ 表达作为食管鳞癌转移标志物的实用价值。方法：采用免疫组化方法检测８５ 例原发性食管鳞癌中ｐ５３ 和ｎｍ２３ 蛋白表达。结果：６３－５３ ％ （５４／８５） 肿瘤呈ｐ５３ 阳性表达,ｐ５３ 阳性表达与肿瘤淋巴结转移和ＴＮＭ 分期有关（Ｐ值均为０－００１）。４０ ％（３４／８５） 肿瘤为ｎｍ２３ 低表达。ｎｍ２３ 低表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、ＴＮＭ 分期有关（ Ｐ值分别为０－０３２、０－００１、０－００１） 。单因素分析显示：ｐ５３ 和ｎｍ２３ 表达为影响淋巴结转移的主要因素（ ＯＲ值分别为６－９８４ 和０－０８７,Ｐ＜０－００１）。多因素分析显示：ｎｍ２３ 表达是影响淋巴结转移的一个独立因素（珘ｂ＝ － ０－８４８１ , ＯＲ＝ ０－１８１, Ｐ＝ ０－０００１） 。ｐ５３阳性肿瘤具有高度淋巴结转移的倾向（珘ｂ＝ ０－３１５０, ＯＲ＝２－２８４,Ｐ＝ ０－０５６５）,其它临床病理学参数与淋巴结转移之间未见明显关系（Ｐ＞ ０－０５） 。ｐ５３ 和ｎｍ２３ 异常表达之间呈负相关（ｒｓ＝ － ０－３８４９ ,Ｐ＝ ０－０００３）,在促进肿瘤的进展和转移过程中起联合作用。结论：ｐ５３ 和ｎｍ２３ 联合表达对判断食管鳞癌患者     

脑型和味型代谢性谷氨酸受体的不同功能

目的　利用脑型及味型mGluR4在体内外的表达 ,检测两种受体结构功能上的差异 ,从而证实它们在信号转导功能上的不同。　方法　将克隆得到的脑型及味型mGluR4分别通过脂质体介导转染CHO细胞。在L MSG和L AP4的作用下 ,检测两种受体的功能。利用WesternBlot及原位杂交技术 ,分别检测它们在体内外的表达。　结果　转染脑型及味型mGluR4的CHO细胞 ,表达两种不同分子量的免疫活性蛋白 ,其中脑型分子量约为 12 0kD而味型约为 6 8kD。在L MSG和L AP4作用下 ,味型mGluR4对刺激物反应的浓度远高于脑型mGluR4。对大鼠脑组织及舌味蕾的原位杂交证明 ,mGluR4在小脑颗粒细胞有很高的表达 ,而在味蕾细胞表达率较低 ,阳性细胞仅占味蕾细胞的 5 %。　结论　味组织中的mGluR4与脑组织中mGluR4在结构和功能上有明显不同。味型mGluR4特异性表达于味蕾细胞 ,在高于脑内的浓度下 ,结合细胞外的谷氨酸 ,通过降低cAMP的浓度引发味觉信号转导。是谷氨酸味觉的特异性受体     

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素及其受体cDNA的克隆和序列测定

目的 研究促甲状腺激素释放激素（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＴＲＨ）及其受体（ＴＲＨ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＲＨ－Ｒ）在大鼠丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。方法 以大鼠丸组织总ＲＮＡ为模板,依据大鼠下丘脑中的前ＴＲＨ和垂体中的ＴＲＨ－Ｒ ｃＤＮＡ设计引物,进行反转录聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉ     

N-甲基-D-天冬氨酸型受体亚单位-1在大鼠第三脑室室管膜细胞上的表达

目的　研究 N-甲基 - D-天冬氨酸型受体亚单位 - 1(NMDAR1)在大鼠第三脑室室管膜细胞上的表达。　方法　免疫组织化学技术。　结果　 (1) NMDAR1在第三脑室室管膜细胞中的表达呈强阳性 ;(2 ) NMDAR1阳性室管膜细胞的形态与分布 ,在雌、雄大鼠间不存在明显的性别差异。　结论　为脑脊液中的谷氨酸可通过 NM-DA受体介导调节室管膜细胞提供了形态学证据。     

当归多糖对人粒单系造血祖细胞增殖分化的调控机理研究

目的：研究当归多糖（APS）对人粒单系血细胞发生的影响及其调控的机理。方法：采用造血祖细胞体外培养,造血生长因子生物活性检测,核酸分子原位杂交和免疫细胞化学等实验血液学技术,研究ASP对人粒单系造血祖细胞（CFU－GM）增殖分化的影响。结果：APS在体外能显著刺激CFU－GM的增殖;经APS诱导制备的人胸腺细胞,腺细胞、骨髓基质细胞条件培养液能明显促进CFU－GM增殖,经APS体外刺激后骨髓基质细胞、脾细胞和胸腺细胞的GM－CSF蛋白和mRNA表达水平显著提高。结论：APS可能通过直接或间接途径促进淋巴细胞和造血微环境中的基质细胞合成和分泌GM－CSF或GM－CSF样物质,进而促进粒单系血细胞的发生。     

中国人2型糖尿病的基因分型和定位

目的　对中国人２ 型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２ 号染色体及Ｘ染色体上的３５８ 对荧光标记的微卫星引物,进行多重ＰＣＲ,ＰＣＲ扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离,然后进行电泳图谱及信息收集。应用ＧｅｎｅｓｃａｎＴＭ ３．０ 软件和Ｇｅｎｏ－ｔｙｐｅＴＭ ２．１ 软件进行基因分型和基因定位。　结果　在３５ 个家系中共有１９３ 个微卫星标志能准确进行基因分型。共得４１ ４９５ 个基因型。经过多点连锁分析和患病同胞对分析,初步确定在１,１０,１２,１８,２０号染色体上存在ＮＩＤＤＭ 相关基因位点。　结论　用全基因组扫描技术可以对中国人２ 型糖尿病相关基因位点进行基因分型和基因定位。     

用BrdU标记技术观察大鼠脊髓上胸段灰质细胞的分化发育

目的 观察脊髓灰质细胞的分化发育,寻找脊髓移植时胎鼠脊髓取材的最佳时间。方法 用５－溴－２脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）标记ＤＮＡ,ＡＢＣ免疫细胞化学方法观察大鼠上胸段脊髓灰质细胞的增殖分化情况。结果 孕鼠于Ｅ１０ｄｅ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎刀脊髓上胸段ＢｒｄＵ免疫反应神经元主要集中在脊髓后角,脊髓侧角的ＢｒｄＵ免疫反应神经元较少,前角仅有少量的ＢｒｄＵ免疫反应神经元;孕鼠于Ｅ１１ｄ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎鼠脊髓     

中药神经再生素作用于背根神经节细胞过程中基因的表达变化

目的 探讨中药神经再生素(NRF)作用的分子生物学机制。方法 采用半定量PCR方法，观察和比较NRF组、NGF组和空白对照组中生长相关蛋白43(GAP-43)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)、翻译延伸因子2A3-2(EF-Ts，RRAJ5161)和锌指样蛋白DDP2(F196315)基因水平的表达变化。结果 在NRF作用于离体培养的DRG细胞过程中，GAP-43、NF-L、2A3-2和DDP2基因表达在不同时间呈不同程度的上调。结论 NRF促神经生长的作用与NGF相似，可作用于蛋白翻译水平，促进神经细胞的生长；作用于细胞骨架蛋白水平，维持神经细胞的形态和神经细胞正常生理活动；作用于神经细胞特异的蛋白水平，具有维持细胞生存及促进神经细胞突起生长的作用；还可以作用于反式因子调控水平，影响相关基因的表达，促进神经元存活和神经突起延伸。     

慢性丙型肝炎肝组织HCV特异性CTL活性对干扰素应答效果的影响

目的 了解肝组织丙型肝炎病毒（HCV）特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性对慢性丙型肝炎患者干扰素治疗效果的影响。方法 用标准铬释放法对45例拟接受α干扰素治疗的慢性丙型肝炎（慢丙肝）患者肝组织CD8^ HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（HCV－CTL）活性进行检测，观察CTL活性与干扰素疗效的关系。结果 45例慢丙肝中20例（44．4％）肝组织HCV－CTL活性阳性。在完成干扰素治疗的42例中，19例HCV－CTL活性阳性。经过6个月的干扰素治疗，42例中共18例（42．9％）获得治疗终点完全应答15例（78．9％）为ETR，而23例HCV－CTL活性阴性患者仅3例（13．05）为ETR（P＜0．01）；10例持续应答者均为HCV－CTL活性阳性患者。结论 机体细胞免疫，尤其是CD8^ HCV-CTL介导的细胞免疫在决定慢性丙型肝炎干扰素治疗的效果中起重要作用。     

Tenascin-C分子中FN6-8片段蛋白对培养的脊髓缺气损伤神经元的影响

目的 研究ＦＮＫ６－８片段能否促进损伤神经元的突起生长。方法 从包含有ＴＮ－Ｃ分子中ＦＮ６－８ＤＮＡ序列的质粒中表达度纯化ＧＳＴ－ＦＮ６－８融合蛋白，以０．０５ｍｇ／Ｌ的浓度加入培养的胚胎小鼠脊髓神经元的培养液中，对照组加入等量ＧＳＴ，然后液体石蜡封闭液面造成神经元缺气损伤，３d后做ＭＴＴ实验，测神经元活性并图像分析神 元突起的长度。结果 ＦＮ６－８组的神经元活性和神经元突起长度明显高于对照组。结论     

人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用

目的 为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法 构建人PrPN端缺失原核表达质粒,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白;Western blot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力;提取Creutzfeldt-Jakob病（CJD）病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织,Westen blot检测多肽抗体与致病性PrP－res蛋白的反应能力。结果 所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP－res蛋白。结论 多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性,可以应用于临床CJD病人的检测。