单克隆抗体的免疫活性测定

本文参照Lindmo T法,测定Ⅰ标记抗低分化鼻咽癌单抗BAC5的免疫活性分数,获得满意结果。 材料和方法 一、材料: (一)抗低分化鼻咽癌单抗BAC5:复苏抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞株BAC5,培养至对数生长期,以3.5×10~5细胞/0.5ml注入6～8周龄BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天后取腹水。经硫酸铵粗提后,再用DEAE-Sepharose 6B层析纯化。所得BAC5纯度93％,属IgG2a亚类,亲和力常数(Ka)=8×10~9L·M~(-1),分子量149KD。 (二)无载体Na~(126)Ⅰ:由北京原子能研究院提供。用Iodogen法标记BAC5,标记率88.6％,标记BAC5放化纯度92.8％,比活度83MBq/mg,比浓度33.2MBq/ml。     

Iodogen法碘标记McAb技术探讨

我们用Iodogen法标记McAb,体会到要想获得满意的标记效果,应控制好投料、pH、掌握反应时间及贮存时间几个环节。 材料和方法 一、材料: (一)Iodogen:化学名称为1,3,4,6—四氯,3α6α-二苯甘脲,分子量430,美国piere化学公司产品。用二氯甲烷(Sigma公司)溶解,分别配成50μl含3μg,5μg,10μg,25μg,50μg及100μg的浓度,取50μl涂布于2ml玻璃小瓶底部,用氮气轻轻吹干,当即盖上胶盖、封口,-20℃冻存备用。 (二)McAb BAC5:取液氮中冻存的杂交瘤细胞BAC5,复苏后培养至对数生长期,注射3.5×10~5个细胞/0.5ml至6～8周龄的BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天后收集腹水。纯化腹水得纯度为93％的抗低分化鼻咽癌单抗BAC5,属IgG2a亚类,亲和力常数(Ka)值为8×10~9L·M~(-1),分子量149KD。 (二)无载体Na~(125)J,中国北京原子能中、研究院提。     

^125I标记McAb BAC5在荷瘤裸鼠移植瘤的分布研究

用放射性核素标记单克隆抗体(McAb)进行肿瘤的放射免疫显像,是诊断肿瘤的重要手段之一,也是近年来受人关注的动向之一。我们在进行抗低分化鼻咽癌单杭BAC5在荷瘤裸鼠体内分布研究中,发现标记McAb BAC5在肿瘤中央坏死部位与肿瘤周边未坏死部位的分布随时间而改变。时间愈长,坏死处浓集愈高,现将结果报告如下。 材料和方法 一、McAb BAC5:抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞     

~(125)Ⅰ标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125Ⅰ标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性。方法:①利用Iodogen法,Na125Ⅰ标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率。纸层析法测定放射化学纯度和稳定性。②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性。③观察小鼠体内的生物学分布情况。结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40~100μg、抗体20~50μg[Iodogen(m)∶抗体(m)=2∶1],加入Na125I15~30 MBq、室温反应10~15 min,标记率为(90.40±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2~26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%。②125Ⅰ-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性。③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数。结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125Ⅰ-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性。为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础。     

抗人结肠癌单克隆抗体CL_3全抗体与F(ab'''')_2片段在荷瘤裸鼠体内动态分布比较

为提高放射免疫显像(RAID)和放射免疫引导下外科手术(RIGS)的效果,用抗人结肠癌单克隆抗体(McAb)CL3,通过Pepsin消化法制备F(ab＇)_2,~(125)I标记,标记率73.1％,放化纯度99.5％,比活度4.7μCi/μg。结合分析法测定的免疫活性为56.8％,亲和常数为3.4×10~9L/mol。~(125)I-CL3全抗体标记率73％,放化纯度99.2％,比活度4.12μCi/μg,免疫活性     

125I标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125I标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性.方法:①利用Iodogen法,Na125I标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率.纸层析法测定放射化学纯度和稳定性.②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性.③观察小鼠体内的生物学分布情况.结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40～100μg、抗体20～50μg[Iodogen(m):抗体(m)=2:1],加入Na125I15～30 MBq、室温反应10～15 min,标记率为(90.40 4±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2～26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%.②125I-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性.③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数.结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125I-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性.为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础.     

PMA、抗CD3、PHA和A23187对Jurkat细胞表达Tac抗原和高亲和性IL-2受体的调变作用

本文运用~(125)Ⅰ标记的CD25单克隆抗体和IL-2进行竞争结合试验,发现抗CD3单克隆抗体、PHA和Ca~(++)载体A23187均明显抑制PMA诱导Jurkat细胞Tac抗原的表达。抑制率分别为50.0％、74.5％和87.8％。静止的Jurkat细胞不具有任何亲和性的IL-2结合受体,PMA(20ng/ml)刺激24h后,每个细胞表面表达509个高亲和性IL-2受体,KD值为381PM。     

第二抗体对~(131)I标记单抗放射免疫显像的改善作用

~(131)I标记抗体用于肿瘤放射免疫显像的主要问题是本底放射性,特别是血液中本底放射性较高。抗标记抗体的第二抗体可促进未与肿瘤结合的标记抗体加速从体内排出。 用Iodogen法标记抗结肠癌单抗2C_(10),标记抗体放化纯度96％,放射比4.47μCi/μg,     

单克隆抗体SC6的免疫放射分析法及其临床意义

本文应用亲和层析法分别纯化了单克隆抗体SC 6及其相应的SC 6抗原。采用氯胺一T和lodogen法以‘2’I标记单克隆抗体SC6,标记率分别为61.2％和91.5％;放化纯度97.5畅.采用双抗体夹心法操作,一抗和“’IMc人b最适工作浓度分别是 20 ＃g/ml     

高压液相纯化小鼠单克隆抗体及其在免疫学中应用

本文采用Deschamps方法加以修改,40％饱和硫酸铵沉淀小鼠腹水中免疫球蛋白,然后用TSK-DEAE 5PW高压液相离子交换层析柱,应用线性梯度洗脱条件,纯化TLiSAl IgG1单克隆抗体,回收率为50～60％、纯度>90％。纯化后的单克隆抗体在荧光细胞激活分类仪分析、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶染色、~(125)I标记单抗进行竞争结合试验、功能性实验以及制备Sephorose CL-4B亲和层析柱纯化相应抗原进行氨基酸列序分析中均显示良好的生物学活性。     

^125I标记单克隆抗体4E5的制备及其在小鼠体内的分布

目的：探讨放射性核素^125I标记单克隆抗体4E5的方法,观察标记物在正常小鼠体内的生物学分布。方法：采用Iodogen法进行单克隆抗体4E5的Ⅲ标记,标记产物用SephadexG-50分离纯化,三氯醋酸（TCA）法测定标记率和放化纯,并对标记物的稳定性进行分析。取45只昆明小鼠随机分成9组,每只小鼠从尾静脉注入剂量为148KBq／0．2ml的^125I-4E5,分别于注药后5min、15min、30rain及1h、2h、6h、24h、48h、72h各处死一组小鼠,取主要脏器称重并测量其放射性计数,计算各脏器每g组织百分注射剂量率（％ID／g）。结果：”I标记4E5的标记率为（79．24-2．6）％,放射化学纯度为（97．1±1．1）％,比活度为294．5MBq／mg;^125I－4E5加入到血清及PBS中放置1w后,放化纯度仍〉90％;体内分布显示^125I-4E5在小鼠体内主要分布于肝、脾、肾,在血液中清除较快。结论：Iodogen法^125I标记4E5的标记率和放化纯度高,方法简便,标记物的稳定性好;。I-4E5在小鼠体内主要通过肝和肾代谢,血液中清除较快。     

胃癌单克隆抗体GMGI:1D1-2在荷瘤裸鼠中的放射免疫显像

本文应用胃癌组织和胃癌细胞株接种Rowett裸大鼠及BALB/c裸小鼠,成功地建立了两种荷瘤裸鼠模型。采用氯铵T碘化法将~(125)I、~(131)I标记于抗人胃癌单克隆抗体GMG1:1D1-2。标记率为68％,IF和RIA法测定标记物显示仍保持明显的抗体活性。标记后的GMG1:1D1-2注入荷人胃癌裸     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验,以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明,用正交法所得的实验结果中,最佳配用情况下,包被用抗体和主要的酶标记抗体的作用下位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上,两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体夹心法的本底很低,可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性,滴度为1:16(对流电泳法)的患者血清稀释至2~(19)时仍可得到P/N比≥2.1的读数,目测判定结果时至少在2~(16)稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

BAC5-scFv的表达、复性及活性检测

目的探讨以包涵体形式表达的抗鼻咽癌单克隆抗体(mAb)BAC5的单链抗体(BAC5-scFv)的纯化、复性方法,并对其活性进行检测。方法扩增pET-22b-scFv质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,培养、破菌后,分离和变性包涵体,用Ni-NTA His Bind层析柱纯化变性的scFv。经稀释、透析及尿素梯度凝胶层析柱3种方法进行复性。用细胞免疫组化染色和蛋白印迹法(Western blot),鉴定复性后的BAC5-scFv的免疫活性。结果Ni-NTA His Bind亲和层析柱能有效纯化变性的scFv。以尿素梯度凝胶层析柱复性的蛋白回收率最高。免疫细胞化学染色法检测及Western blot分析证实,复性后的BAC5-scFv可与CNE2细胞上的抗原特异性结合。结论以包涵体形式表达的BAC5-scFv经变性、纯化及复性后,获得良好的免疫活性,为大量制备具有活性的BAC5-scFv,并用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗研究奠定了基础。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

~(131)I标记抗AFP抗体SPECT扫描对肝细胞癌定位及诊断

用核素标记抗AFP抗体对肝癌的放射免疫探测(Radioimmunodetection,RA-ID)研究受到人们的重视。本文对17例患者(其中12例肝癌、2例肝血管瘤、2例肝硬化及1例肝脓肿)进行了~(131)I标记抗AFP抗体的RAID研究。氯胺丁法~(131)I标记纯化的马抗人AFP多克隆抗体和鼠抗人AFP单克隆抗体。静脉注射标记抗体2.0～2.5mCi后     

碘标记肝癌单克隆抗体HAb18的探讨及免疫活性分数测定

抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb18用氯胺T法在3种不同条件下碘标记,同时用溴代琥珀酰亚胺标记。用Lindmo的双倒数作图法体外测定标记抗体~(125)I-HAb18与肝癌细胞QGY-7703结合的免疫活性分数。对不同的标记方法和标记条件下的标记参数进行比较。结果,氯胺T法在3种条件下的标记率和免疫活性分数相差不显著,免疫活性分数为0.32+0.029～0.45±0.041。而溴代琥珀酰亚胺法标记率为94.5％±3.2,免疫     

单克隆抗体与眼部恶性黑色素瘤

作者获得两种单克隆抗体,它们可与福尔马林固定,石蜡包埋的眼部恶性黑色素瘤组织相关抗原起反应,MAb8-IH和MAb8-2A,是用免疫BALB/c鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系Sp2/0、Ag·14融合而制成。这两种McAb都是IgM。用硫酸铵沉淀和Sephacryls-300层析柱将这些抗体由腹水中纯化。两种抗体均能被各种试剂包括过氧化物酶和~(125)Ⅰ标记。     

金黄色葡萄球菌蛋白A分离的黑色素瘤病人血浆免疫复合物中抗原和抗体的性质

本文建立了一种用同位素~(125)I标记免疫复合物(IC)的方法,来测定IC中抗原和抗体的性质。作者用含有金黄色葡葡菌的滤器,从黑色素瘤病人血浆中吸附IC,然后用Mgcl_2将IC等洗脱下来。分离的物质用PEG沉淀法进行纯化,再用~(125)I将IC进行标记。~(125)I标记了的抗原和抗体的复合物在pH2.6时解离,蔗糖密度梯度超速离心,将抗原和抗体分离。发现放射活性的70％存在于梯度的上1/3。分别将上1/3和2/3部分的两种物质中和。用同位素计数的方法可以证明其中上1/3部分可与自身的IgG重新结合;