IL-12刺激肥大细胞分泌IL-4与ERK和AKT信号转导通路有关

目的 检测白细胞介素(IL)12对肥大细胞介质分泌的影响并探讨其可能的信号转导通路.方法 肥大细胞P815培养、激发后收集细胞和上清液,用ELISA法检测上清液中组胺、IL-4和IL-6的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测蛋白激酶B(AKT)、细胞外信号调节的蛋白激酶(ERK)、信号转导子和转录激活子(STAT)3和p38信号转导通路蛋白磷酸化情况.结果 IL-12以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4,但对肥大细胞IL-6的分泌和组胺释放无明显影响.PD98059,U0126和LY294002阻断IL-12引起的肥大细胞IL-4分泌,并抑制IL-12引起的ERK和AKT磷酸化.结论 IL-12刺激肥大细胞P815分泌IL-4很可能是通过激活AKT和ERK信号转导通路实现的.     

八肽胆囊收缩素通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白表达;用Western blot检测RAW264.7细胞p38 MAPK的磷酸化水平。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白的表达,分别于刺激后3 h及6 h达到高峰;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无影响;10-8、10-6 mol.L-1CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的p-p38MAPK水平,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平;④p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,与CCK-8共同作用后,抑制作用进一步加强。结论 CCK-8通过抑制p38 MAPK磷酸化而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

IL-1β对神经元样PC12细胞IL-1RⅠ蛋白表达的影响

目的:探讨IL-1β对神经元样PC12细胞IL-1RⅠ蛋白表达的影响。方法:将PC12细胞传代后以一定的密度种植于培养皿后,NGF诱导其分化成神经元样细胞后,随机分为空白对照组(A组)I、L-1β1ng/mL刺激组(B组)I、L-1β5ng/mL刺激组(C组)、IL-1β10ng/mL刺激组(D组)。24h后分别以MTT法测定各组细胞存活率,Western Blotting方法检测神经元样PC12细胞内IL-1RⅠ蛋白表达。结果:MTT法显示,与A组相比,不同剂量组的IL-1β均可导致神经元样PC12细胞存活率的下降(P<0.01);WesternBlotting方法显示,与A组相比,不同剂量组的IL-1β刺激均可引起神经元样PC12的IL-1RⅠ蛋白表达上调(P<0.05)。结论:IL-1β可引起神经元样PC12细胞的IL-1RⅠ蛋白高表达,这可能与其所致神经元样PC12细胞细胞存活率的下降相关。     

HIL-29通过激活MAPK信号途径上调Hela细胞TLR3表达

目的探讨人白细胞介素29(hIL-29)对Hela细胞TLR3受体表达的影响。方法重组的hIL-29加入Hela细胞中,以RT-PCR分析Toll样受体3(TLR3)、2′5′-寡聚腺苷酸合成酶(2′5-′OAS)、MXA蛋白的mRNA表达水平变化,western-blot分析TLR3受体蛋白质水平变化及信号蛋白MAPK(ERK1/2)激活变化。结果hIL-29显著上调TLR3受体的mRNA水平和蛋白质水平的表达,并且具有剂量依赖性。hIL-29刺激Hela细胞18 h后,2′5-′OAS、MXA蛋白的mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。western-blot分析hIL-29刺激Hela细胞5~30 min后,信号蛋白ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.01)。结论hIL-29可能通过激活ERK1/2上调(2′5-′OAS)、MXA和TLR3的表达。     

八肽胆囊收缩素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞AP-1活性及IL-6表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-6表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-6蛋白及mR-NA表达;用EMSA方法检测RAW264.7细胞AP-1 DNA结合活性。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-6蛋白及mRNA表达;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达无明显影响;10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的AP-1活性,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的AP-1活性。结论 CCK-8通过抑制AP-1 DNA结合活性而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

IL-23诱导人外周血单个核细胞对MUTZ-1细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的 白介素-23(IL-23)诱导人外周血单个核细胞对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖、凋亡及相关基因表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离获得正常人外周血单个核细胞(PBMNC),细胞分4组:阴性对照组(未加IL-23),3个浓度IL-23组(2、10、50 ng/ml),体外诱导72 h,并与MUTZ-1共培养.MTT实验检测MUTZ-1细胞增殖.流式细胞仪检测MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化.Real time-PCR和Western-blot检测MUTZ-1细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、survivin mRNA和蛋白表达.结果 2、10、50 ng/ml IL-23诱导的PBMNC与MUTZ-1细胞共培养后,MUTZ-1细胞增殖速度、S期细胞比例明显降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例明显增加,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2、survivin mRNA和蛋白表达明显下调,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-23诱导PBMNC能够明显抑制MUTZ-1细胞增殖,促进MUTZ-1细胞凋亡,其机制与上调Bax、caspase-3表达、下调Bcl-2、survivin表达有关.     

IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养,探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用.方法 取对数生长期细胞,分为3组:A组(KM3细胞组),B组(RAW264.7细胞组),C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组).分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后,检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例.RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量.ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量.结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后,与对照组相比,M2 型巨噬细胞比例显著增加(P<0.05);予以ACTA处理后M2型巨噬细胞表达明显下降(P<0.05);而予以rIL-6处理后M2型巨噬细胞表达明显上调(P<0.05).与B组(RAW264.7细胞组)相比,C组(RAW264.7细胞+KM3细胞)M2型巨噬细胞相关细胞因子CCL22,IL-10的mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而M1型巨噬细胞相关因子IL-12,TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.05).与A组、B组相比,C组细胞上清液中IL-6含量在24 h、48 h、72 h时间点均明显上调(P<0.05).通过浓度梯度改变RAW264.7细胞或KM3细胞的数量,发现RAW264.7细胞数量的改变显著影响了IL-6的表达水平.结论 将RAW264.7细胞和KM3细胞共培养后,后者能诱导RAW264.7细胞向肿瘤相关M2型巨噬细胞转化, IL-6在上述转化过程中发挥重要作用.     

ERK1/2通路参与大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞ETB受体上调表达

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在血管平滑肌细胞内皮素-1 B型受体(ET_B)上调中的作用。方法用大鼠肠系膜上动脉离体培养模型，以敏感的离体小血管张力描记技术记录血管张力变化，实时PCR定量ET_B受体mRNA，PhosphoELISA法测定细胞内磷酸化的ERK1/2蛋白水平。结果大鼠肠系膜上动脉培养3 h，细胞内ERK1/2蛋白磷酸化水平明显增高，培养24 h ET_B受体mRNA表达水平显著上调，选择性ET_B受体激动剂蛇毒类似物(sarafotoxin 6c，S6c)引起的收缩增强；与特异性ERK1/2通路阻滞剂SB386023共同孵育24 h，S6c引起的最大收缩E_max明显下降，ET_B受体mRNA水平也显著降低。结论ERK1/2信号转导通路参与大鼠肠系膜上动脉离体平滑肌细胞ET_B受体上调过程。     

鹅去氧胆酸抗脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应作用及机制

目的研究鹅去氧胆酸(CDCA)抗脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的作用及其机制。方法 BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加LPS 200 mg·L~(-1)继续培养22 h,采用Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量;Western印迹法检测细胞内环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平;RT-PCR法检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL~(-1)β和G蛋白偶联受体5(TGR5)mRNA表达水平。BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加入LPS 200 mg·L~(-1)继续培养1 h,Western印迹法检测NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)磷酸化水平;细胞免疫荧光法观察NF-κB入核情况。结果与正常对照组相比,模型组培养基中NO含量显著增加(P<0.01);COX-2和iNOS蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01);TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达显著上调(P<0.01);TGR5 mRNA表达显著下调(P<0.01);并且NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核增多。与模型组相比,CDCA显著减少培养基中NO含量(P<0.01),降低COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);显著下调TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达(P<0.01);显著上调TGR5 mRNA表达(P<0.01)。与模型组相比,CDCA显著降低NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并观察到NF-κB核转位减少现象。结论 CDCA可显著抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应,其作用机制可能与激活TGR5、抑制Akt/NF-κB信号通路相关。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、迁移作用及机制

目的 探究黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）增殖、迁移及Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法 将hPDLSCs分为对照组、LPS组、黄芩苷不同浓度（0.1、1、10 mg/L）组,采用ELISA法和CCK-8法测定细胞炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]含量和细胞活力,以筛选最适黄芩苷浓度并进行后续通路验证实验。随后将细胞分为对照组、LPS组、最适黄芩苷浓度组、抑制剂组（10μg/mL LPS+1 mg/L黄芩苷+3μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490）,干预24 h后检测hPDLSCs增殖率、凋亡率、迁移率、侵袭细胞数、细胞周期素D1(Cyclin D1)、胱天蛋白酶3(caspase-3)mRNA和蛋白表达及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 根据细胞炎症因子含量和细胞活力结果选择1 mg/L为黄芩苷最适浓度。与对照组比较,LPS组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低,细胞...     

人白介素-15基因系列启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建

目的克隆人白介素-15(IL-15)基因系列启动子,构建IL-15基因启动子荧光素酶报告基因载体。方法通过PCR方法从HaCaT细胞基因组DNA中获得IL-15基因编码序列5′上游七段逐步缺失的IL-15启动子序列;双酶切后,分别重组到含萤火虫荧光素酶的报告基因pGL3-Basic载体上,构建IL-15基因系列启动子报告基因载体;用脂质体转染法将含最长启动子序列的报告基因载体转染至HaCaT细胞,并设置空白对照组和LPS组分别处理;24 h后采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性。结果经PCR方法扩增出七段逐步缺失的IL-15基因启动子片段,PCR及双酶切鉴定各重组体构建正确;瞬时转染HaCaT细胞后经报告基因检测得知所克隆最长序列具有启动子活性。结论成功构建了IL-15系列启动子报告基因载体,并在HaCaT细胞中初步活性分析得知所克隆IL-15基因调控系列内包含启动子核心区域,为进一步研究IL-15表达调控机制奠定了实验基础。     

肾综合征出血热患者T淋巴细胞亚群及IL-6和IL-10的变化

目的研究肾综合征出血热(HFRS)患者外周血T细胞亚群及血浆IL-6、IL-10水平的变化,并研究其相关性,以探讨其在HFRS发病机制中的作用。方法应用流式细胞仪检测41例HFRS患者外周血及10例正常人外周血的T淋巴细胞CD3及亚群CD4、CD8细胞的数量及CD4/CD8比值;同时应用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-6、IL-10水平。结果HFRS患者病程中存在CD3、CD4、CD8细胞数量的不同程度升高,CD3、CD8细胞于发热期明显升高(P<0.05或P<0.01),均于低血压期达峰值(P<0.01);CD4细胞升高幅度较小,于少尿期达峰值(P<0.01);CD4/CD8比值下降或倒置,于低血压期比值降至最低(P<0.01);血清IL-6、IL-10水平在病程中均明显升高(P<0.01),于少尿期达峰值。在HFRS不同病型中,随临床病型的加重,CD3、CD8细胞明显升高,在危重型升高达峰值(P<0.01),而CD4细胞升高幅度相对较小,在重型升高达峰值(P<0.01);CD4/CD8比值明显降低;血清IL-6、IL-10水平明显升高;CD4/CD8比值的下降与血清IL-6、IL-10水平的升高相一致,呈明显的负相关(P<0.01),相关系数分别为r=-0.9278和r=-0.8787。结论细胞免疫功能紊乱与细胞因子分泌失常介导的体液免疫功能亢进在HFRS发病机制中起重要作用。     

慢性肾炎治疗前后血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-18和T淋巴细胞亚群检测意义

目的探讨慢性肾炎患者治疗前后血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-18和T淋巴细胞亚群的变化。方法分别应用放免法、ELISA法和单克隆抗体法对30例慢性肾炎患者治疗前后进行了血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-18和T淋巴细胞亚群水平的检测,并与35名正常健康人作比较。结果慢性肾炎患者在治疗前血清IL-2和CD4/CD8比值明显低于正常人组（P〈0.05）,而IL-6、IL-10和IL-18水平高于正常人组（P〈0.01）;经半年治疗后血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-18和CD4/CD8与治疗前组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论检测慢性肾炎患者血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-18和T淋巴细胞亚群水平对判断病情及其预后均具有一定的临床实用价值。     

Lipopolysaccharide-induced down-regulation of organic anion transporting polypeptide 4 (Oatp4; Slc21a10) is independent of tumor necrosis factor-alpha, Interleukin-1beta, interleukin-6, or inducible nitric oxide synthase.

Organic anion transporting polypeptide 4 (Oatp4; Slc21a10) is expressed almost exclusively in liver, where it mediates uptake of a variety of compounds, including bile acids, as well as other endo- and xenobiotics, across hepatic sinusoidal membranes in a Na+-independent manner. Lipopolysaccharide (LPS) has been shown to decrease Oatp4 mRNA levels in a dose- and time-dependent manner in Toll-like receptor 4 (TLR4)-normal (C3H/OuJ) mice, but not in TLR4-mutant (C3H/HeJ) mice. Moreover, after LPS administration, serum concentrations of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), interleukin-1beta (IL-1beta), and interleukin-6 (IL-6) are markedly lower in TLR4-mutant mice than in TLR4-normal mice. Thus, TLR4 is considered an upstream mediator of LPS-induced decrease in mouse Oatp4 mRNA. LPS is thought to alter liver gene expression through LPS-induced cytokines or nitric oxide (NO). TNF receptor p55 (TNFRp55) and type I IL-1 receptor (IL-1RI) mediate the biological functions of TNF-alpha and IL-1beta, respectively. Therefore, to determine whether endogenous cytokines or NO are mediators of LPS-induced down-regulation of Oatp4, Oatp4 mRNA levels were determined in mice deficient in the TNFRp55, IL-1RI, IL-6, or inducible nitric oxide synthase (iNOS) after LPS administration. Mice homozygous for a targeted deletion of genes for TNFRp55, IL-1RI, IL-6, or iNOS exhibited similar decreases in Oatp4 mRNA levels as wild-type mice after LPS administration. Moreover, in mouse hepatoma cells, treatment with TNF-alpha, IL-1beta, or IL-6 individually or in combination did not suppress activity of mouse Oatp4 promoter (-4.8 kb to +30). Therefore, LPS-induced down-regulation of Oatp4 appears to be independent of TNF-alpha, IL-1beta, IL-6, or iNOS.     

IL-6、IL-10对骨髓基质细胞白血病抑制因子(LIF)的调节

目的 研究白细胞介素—6(IL-6)、白细胞介素—10(IL-10)对管髓基质细胞白血病抑制因子(LIF)表达的调节。方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-6和IL-10作用下的LIF的表达水平，用逆转录—聚合酶使反应(PT—PCR)测定IL-6和IL-10作用下的LIF转逆子水平。结果 在IL-6作用下LIF水平明显降低(P＜0．05)；而IL-10对LIF水平没有明显影响。结论 IL-6能下调骨髓基质细胞LIF的表达，而IL-10对骨髓基质细胞LIF的表达无明显调控作用。     

不同浓度HAES在正常人体外对IL-10和IL-12的影响

目的 探讨不同浓度的羟乙基淀粉类血浆代用品(贺斯6%HAES200/0.5)对正常人体免疫系统白介素-10(IL-10)和白介素-12(IL-12)的影响,以检验其是否抑制正常人体的免疫系统.方法 正常志愿者30名,严格无菌条件下抽取静脉血各20 ml,并以肝素抗凝,在超净台内分离出单个核细胞,计数后将细胞平均分成5组...     

动态监测重症肺炎患者血液和支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-10的含量及其意义

目的动态监测重症肺炎患者血液和支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-10的浓度变化，探讨其临床意义。方法收住本院ICU的重症肺炎患者，人选患者在病程的第1天，CPIS评分〉6分为CPIS高分组，CPIS评分≤6分为CPIS低分组。在病程的第1、4、7天抽取外周静脉血做细胞因子测定以及支气管肺泡灌洗液检查。结果无论在血液中还是在BALF中，CPIS高分组的IL-6、IL-8水平比CPIS低分组明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01），CPIS高分组IL．10水平比CPIS低分组组稍高，但尚未达显著差异；血液和BALF中IL石、IL-8水平与CPIS评分呈正相关（P〈0．05），血液和BALF中IL-10水平与CPIS评分无明显相关性。结论重症肺炎患者血液和支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8的水平可以反映肺感染程度，IL-8、IL-10的水平及变化趋势可以反映患者预后情况。     

银屑病诱发药物对HaCaT角质形成细胞的影响

为了探讨锂盐、普萘洛尔和氯喹是否通过影响银屑病的细胞因子网络从而诱发或加重银屑病，以不同浓度的碳酸锂、盐酸普萘洛尔或二磷酸氯喹处理HaCaT角质形成细胞后加以TNF-α刺激，应用人类细胞因子抗体分析膜技术测定细胞培养液中多种细胞因子和生长因子的分泌情况；采用实时定量PCR法检测IL-8和IL-6 mRNA的表达。人类细胞因子抗体分析膜技术结果显示，碳酸锂明显促进IL-6和TNF-α的产生；盐酸普萘洛尔明显促进IL-6等多种细胞因子和生长因子的产生；二磷酸氯喹也明显促进IL-6的产生。实时定量PCR结果表明，TNF-α能刺激HaCaT角质形成细胞呈剂量依赖性增加IL-8和IL-6 mRNA的表达(P<0.01)；并对IL-8的调节作用更强(P<0.01)；1×10^-6 mol·L^-1盐酸普萘洛尔能显著上调IL-6 mRNA的表达(P<0.05)。碳酸锂、盐酸普萘洛和二磷酸氯喹对HaCaT角质形成细胞表达以及产生某些细胞因子和生长因子具有调节功能。