人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞衰老

 摘要:目的 探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导白血病K562细胞衰老及其机制。方法 MTT比色法筛选细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,并以此浓度和作用时间进行细胞衰老的相关机理研究。流式细胞术检测细胞增殖周期; SA-β-Gal染色检测阳性细胞;Colony-Assay检测集落形成能力;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测蛋白表达;透射电镜观察细胞超微形态。结果Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使K562细胞阻滞于G2/M期;并显著提高SA-β-Gal染色阳性细胞百分率（P＜0.05）;降低细胞形成集落的能力;衰老相关蛋白P53、P21、P16、RB表达上调（P＜0.05）;端粒长度缩短（P＜0.05）;胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大,异染色质凝集等衰老形态学变化。结论 Rg1可能经由P53-P21-Rb、P16-Rb信号通路诱导K562细胞衰老。     

骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老。分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs。CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高。与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFUMix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。结论本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关。     

氯化锂激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠造血干/祖细胞衰老及其机制

目的探讨氯化锂(Li Cl)激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老及其机制。方法免疫磁珠法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。纯化后细胞分为:正常对照组,常规培养;Li Cl组,正常对照组基础上,加入Li Cl(终浓度10mmol/L);D-半乳糖致衰组,正常对照组基础上,加入D-半乳糖(终浓度166mmol/L),各组培养48h。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养检测Sca-1+HSC/HPC多向分化潜能,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测Sca-1+HSC/HPC增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老,免疫细胞化学染色和Western blotting检测细胞内β-catenin、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、P53、P21蛋白表达,ELISA检测细胞胞质内8羟基脱氧鸟苷(8-OH-d G)含量。结果与正常对照组相比,Li Cl组与D-半乳糖致衰组Sca-1+HSC/HPC增殖能力下降,形成CFU-Mix数量下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,β-catenin、P53、P21蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达下调,细胞内8-OH-d G水平升高。结论 Li Cl可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,使细胞DNA氧化损伤,上调P53/P21途径,这可能是导致小鼠造血干/祖细胞衰老的机制之一。     

不同浓度雌二醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞衰老模型的影响

目的探究不同浓度的17β-雌二醇(17β-Estradiol,17β-E_2)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老模型的影响。方法构建HUVECs衰老模型后将细胞分为空白组,衰老组,17β-E_2阴性对照组,低浓度、生理浓度及高浓度17β-E_2组,CCK-8检测细胞活力;Western blot检测细胞衰老程度相关蛋白p-Rb、Rb、细胞自噬水平相关蛋白P6_2、LC3B以及衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色。结果与空白组相比,衰老组p-Rb/Rb比值增加,细胞活力下降,SA-β-Gal染色阳性细胞数目多,与衰老组比较,高浓度和生理浓度17β-E_2组p-Rb/Rb比值降低,SA-β-Gal染色阳性细胞数减少,P6_2表达量减少,LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达升高,细胞活力增加。结论 17β-E_2能通过上调自噬减轻H_2O_2诱导的HUVECs衰老,且与其浓度有关。     

叔丁基对苯二酚激活骨髓间充质干细胞蛋白酶体活性延缓复制性衰老

目的:探讨叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,t BHQ)在延缓骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)复制性衰老进程中的作用,以期为细胞移植治疗提供数量充足的种子细胞。方法:30μmol/L t BHQ持续作用于体外传代晚期BMSCs 4周,化学发光法测量蛋白酶体活性;CCK-8法检测细胞活力;Brd U掺入实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布;衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色检测衰老细胞百分比;Western blot检测衰老相关蛋白P53表达变化。结果:30μmol/L t BHQ持续作用于传代晚期BMSCs 4周后,蛋白酶体活性较DMSO溶剂对照组上调(21.96±1.98)%(P0.05)。CCK-8法显示随t BHQ浓度增加,细胞活力逐渐升高,至40μmol/L达到平台期,且至120μmol/L未见明显细胞毒性。Brd U掺入实验显示t BHQ组阳性细胞率与DMSO溶剂对照组比较,细胞增殖能力显著提高(P0.05);t BHQ组细胞增殖指数也显著高于DMSO组(P0.05)。t BHQ组SA-β-Gal阳性率较DMSO溶剂对照组显著降低(P0.01),且衰老相关蛋白P53表达量也较对照组下降(P0.05)。结论:t BHQ能够通过提高蛋白酶体活性延缓因蛋白酶体功能障碍引起的BMSCs复制性衰老进程。     

衰老大鼠模型骨髓基质细胞的生物学特点

目的探讨衰老大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)的生物学特点,为阐释机体衰老对造血诱导微环境的影响提供实验依据。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常组和衰老模型组。衰老模型组:大鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg,qd×42;正常对照组:大鼠皮下注射等时与等量生理盐水。衰老动物复制完成后第2天,分离骨髓单个核细胞(BMNCs)进行髓系造血祖细胞混合集落生成单位(CFU-Mix)培养。采用全骨髓贴壁法培养和传代BMSCs,取第3代细胞进行检测,CCK-8法测定BMSCs增殖能力;流式细胞术分析细胞周期;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;ELISA检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-6、干细胞生长因子(SCF)含量;DCFH-DA荧光染色流式检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测衰老相关蛋白P16、P21、P53表达。结果与对照组相比衰老模型组大鼠CFU-Mix集落形成数量明显降低;BMSCs增殖能力显著下降;处于G0/G1期的BMSCs比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G1期;SA-β-Gal染色阳性的BMSCs百分率显著上升;BMSCs培养上清液中IL-6、SCF含量明显下降;BMSC内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降;衰老相关蛋白P16、P21、P53表达明显上调。结论衰老大鼠骨髓基质细胞表现衰老相关生物学改变,其机制可能与氧化损伤激活衰老信号通路有关。     

衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化

目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-半乳糖作用48 h。CCK-8法测定BMSCs增殖;流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;Western blot检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养,集落计数检测髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量;DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,D-半乳糖诱导BMSCs衰老,细胞阻滞于G0/G1期(P0.01),增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性率升高(P0.01);衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降(P0.01);BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P0.01)。结论衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖、分化能力,其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤,分泌活性因子改变有关。     

雷帕霉素对过氧化氢诱导血管内皮细胞衰老的干预研究

目的:探讨雷帕霉素(Rapa)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响及其可能的机制。方法:把HUVECs分为空白组、衰老组(H_2O_2诱导)、Rapa+H_2O_2组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+H_2O_2组。噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;透射电子显微镜观察细胞超微结构改变;Western blot检测Rb、磷酸化Rb(p-Rb)、p21、LC-3II和beclin-1的表达变化。结果:与空白组相比,衰老组细胞活力下降,SA-β-Gal染色阳性率增高,细胞结构紊乱,并伴有衰老蛋白表达显著增加(P0.01);与衰老组相比,Rapa+H_2O_2组细胞活力增强,细胞衰老染色减少,p-Rb和p21表达显著减少(P0.05),电镜下细胞结构趋于正常,并可见自噬小体,beclin-1和LC3-II表达显著增多(P0.01);与衰老组相比,给予自噬抑制剂3-MA的细胞则表现为细胞活力进一步下降,SA-β-Gal染色阳性率进一步增高,p-Rb和p21表达增多,细胞结构破坏明显,beclin-1和LC3-II几乎不表达(P0.05)。结论:Rapa可延缓H_2O_2诱导的血管内皮细胞衰老,这种抗衰老作用可能与促进自噬有关。     

Rb1延缓人脐静脉内皮细胞早熟性衰老与caveolin-1表达的关系

目的:血管内皮细胞衰老是动脉粥样硬化发生的病理生理机制之一。本研究旨在探讨人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)早熟性衰老与窖蛋白1(caveolin-1)表达的关系,为延缓HUVECs衰老提供新的靶点。方法:建立60μmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导的HUVECs早熟性衰老模型,根据细胞形态学的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和细胞周期评估内皮细胞衰老,采用Western blot和激光共聚焦显微成像的方法检测caveolin-1的变化,观察人参皂苷Rb1对HUVECs衰老的作用及其相关的分子机制。结果:60μmol/L H_2O_2可成功地诱导内皮细胞衰老,早熟性衰老的HUVECs体积变大,SA-β-Gal活性明显增加,细胞发生G_1期阻滞,细胞增殖受抑制,caveolin-1表达增多。与H_2O_2处理组相比,人参皂苷Rb1预处理延缓HUVECs早熟性衰老,SA-β-Gal染色阳性细胞百分比降低,G_0/G_1期细胞比例下降,caveolin-1表达减少。结论:人参皂苷Rb1可通过抑制caveolin-1的表达延缓H_2O_2诱导的HUVECs早熟性衰老。     

D-半乳糖诱导大鼠骨髓基质细胞衰老及其机制

目的构建大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外和体内衰老模型,观察BMSCs衰老生物学特性。方法体外对照组:常规培养大鼠骨髓BMSCs,取第三代(P3)细胞继续培养48 h;体外衰老组:在对照组基础上加入D-半乳糖(D-Gal,终浓度30 g/L),作用48 h;体内衰老组:大鼠皮下注射D-Gal(120 mg/kg·d),qd×42 d;体内对照组:注射等时等量0.9%氯化钠溶液,模型完成第2天,分离培养BMSCs,取P3细胞进行实验。检测:CCK-8测定细胞增殖;流式细胞术分析周期和凋亡率;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察BMSCs衰老百分率;DCFH-DA荧光流式细胞术检测活性氧簇(ROS)水平,酶学法检测过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测P16、P21、P53、CDK2和cyclin D表达。结果 D-Gal体外与体内致衰老组BMSCs增殖能力下降;细胞G0/G1期比例增高、S期比例降低(P0.05);SA-β-Gal染色阳性百分率上升(P0.05);胞内ROS、MDA上升,SOD下降(P0.05);P16、P21、P53表达上调,CDK2、cyclin D下调(P0.05)。结论 D-Gal在体内与体外均能构建BMSCs衰老模型,其机制与D-Gal诱导BMSCs氧化损伤和激活衰老信号途径相关。     

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用 

目的 观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道（mito-KATP）开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（MMECs）fractalkine(FKN)表达中的作用。方法 培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组( EM>n /EM>=6)：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组（H/R组）、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（DZ组）、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（LY294002+DZ组）。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入 100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平, Western blotting检测Akt蛋白水平。结果 与N 组比较,H/R组细胞增殖率显著降低（EM>P /EM><0.01）、凋亡率显著升高（EM>P/EM> <0.01）, FKN mRNA和FKN蛋白表达显著增加（P <0.01）、Akt mRNA和Akt蛋白升高（ EM>P/EM> <0.05）。与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高（EM>P/EM> <0.01）、凋亡率显著降     

三种含硒化合物对K562细胞的抑制作用

目的 研究比较3种新的含硒化合物在体内、外的抗癌作用和作用机制. 方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和移植瘤生长抑制实验及形态学观察、流式细胞术以及激光扫描共焦显微镜,检测分析含硒化合物对K562细胞的抑制作用. 结果 3种含硒化合物能明显抑制K562细胞增殖(P<0.05)和S180、H22移植瘤(n=10)的生长(P<0.01);使K562细胞出现体积缩小,细胞膜完整,染色质高度凝集,边集,核浓染、碎裂,伴有出泡现象和凋亡小体出现等典型的凋亡特征;对K562细胞的周期分布有明显影响,且在大剂量时出现了明显的亚二倍体峰;能够明显增加K562细胞内Ca2+、Mg2+和细胞内活性氧(ROS)的荧光强度(P<0.01),但pH值和线粒体膜电位显著降低(P<0.01). 结论 3种含硒化合物均有体内、体外抗肿瘤作用,其作用机制可能与Ca2+、Mg2+、(活性氧ROS)、pH值和线粒体膜电位(MMP)诱导的细胞凋亡有关.     

人参皂甙Rg3在体外对白血病K562细胞增殖和诱导分化的影响**

背景：文献报道人参皂甙Rg3具有抗肿瘤作用,但对白血病作用研究很少。 目的：观察人参皂甙Rg3对白血病K562细胞的作用,并探讨其相关机制。 方法：以白血病K562细胞为靶细胞,实验分为对照组和人参皂甙Rg3组,人参皂甙Rg3组分别添加10,20,40,80,       100 mg/L Rg3。 结果与结论：MTT检测结果显示,不同浓度人参皂甙Rg3组K562细胞生长抑制率均显著高于对照组(P < 0.05~0.01)。NBT结果显示,人参皂甙Rg3组培养1,2,3 d K562细胞还原率均高于对照组(P < 0.01);人参皂甙Rg3组部分K562细胞体积变小,核仁消失,同时阳性细胞增多,细胞向成熟分化;流式细胞仪检测显示人参皂甙Rg3组培养2 d细胞周期G2期增高了3.84倍。提示人参皂甙Rg3在体外可抑制K562细胞增殖活性,其机制可能与人参皂甙Rg3将K562细胞周期阻滞在G2期,使细胞不能进行正常的有丝分裂,从而抑制细胞增殖有关。      

切割穹隆海马伞海马提取液促进放射状胶质细胞增殖和向神经元分化

Objective To investigate the proliferation and differentiation effect of hippocampal niche on the radial glia cells EM>in vitro/EM> . Methods Successfully prepared normal hippocampal extracts and transected extracts after hippocampal fimbria-fornix transection. On the proliferation and differentiation stages, the normal and transected extracts were used to investigate their effects on the radial glia cells respectively. Results On the proliferation stage, the proportion of BrdU-positive cells in the transected group was obviously higher than that of the normal group and control group（EM>P/EM>0.05）; on the differentiation stage, the number of Tuj1-positive cells in the transected group was much more than that of the normal and control group（EM>P/EM>0.05）. Conclusion The fimbria-fornix transected hippocampal extracts can promote the proliferation and neurons differentiation of neonatal rats radial glia cells EM>in vitro/EM>. These data indicate     

盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠左心室壁心肌细胞和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白变化

目的 探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响.方法 成年大鼠42只按4mg/(kg·d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组.利用电子/光学显微镜观察不同阶段左心室肌组织结构,免疫组织化学和Western blotting方法检测左心室肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达,并利用HAPIS-2000显微图像分析系统和SPSS10.0统计学软件对表达强度和面积百分比进行统计学处理.结果 光镜下观察ISO诱导心内膜下出现心肌细胞缺血坏死区.缺血坏死区有Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白高表达,缺血坏死区所占面积百分比有减小趋势,组间比较l周与4周之间差异无统计学意义(P＞0.05),4周与8周间差异具有统计学意义(P＜0.05);表达强度组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).非缺血坏死区心肌细胞早期表现为大量聚集糖原颗粒,后期以线粒体增多,肌原纤维松散为主要特征;免疫组织化学检测间质I型胶原蛋白所占面积百分比无变化,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);表达强度实验组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与对照组相比,表达量减小,差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学检测间质Ⅲ型胶原蛋白所占面积百分比呈增多趋势,组间比较,1周与4周间差异具有统计学意义(P＜0.05);表达强度稳定,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Western blotting结果显示,实验组间Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白均呈现从增多到减少的趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 ISO长期诱导致心内膜下心肌细胞缺血坏死,且缺血坏死区面积总体趋势变小;缺血坏死区发生纤维化改变,与心壁僵硬度增大相关.非缺血坏死区心肌细胞肥大与能量代谢相关,间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白不参与心室壁僵硬度和顺应性变化.     

磁性吉西他滨隐形纳米脂质体的制备及其体外抑瘤实验

目的 研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体(MGSL)的最佳条件并考察其理化性质以及在体外的抑瘤效应. 方法 通过逆相蒸发法制备MGSL,采用扫描电镜和原子力显微镜对其形态进行观察;利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布;通过高效液相色谱法(HPLC)检测药物的载药量和包封率;使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定.观察MGSL诱导的乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中的细胞形态学改变,MTT法获得MGSL作用乳腺癌细胞生长抑制率.流式细胞术分析MGSL引起的细胞凋亡率和细胞周期分布. 结果 MGSL为圆形或椭圆形,大小均匀一致,其平均粒径为206.6纳米,粒度分布窄,大小均匀.MGSL载药量为(10.4±0.7)%,包封率为(81.7±5.1)%.在体外,MTT实验结果与MGSL及游离的吉西他滨相对照,MGSL对人乳腺癌细胞有明显的杀伤作用,而且该作用随浓度升高有上升趋势;作用2h时在相同的浓度下较裸药组的抑瘤作用低(P<0.05),但作用48h后两组的抑制率无差别(P<0.05);另外MGSL比磁性吉西他滨纳米脂质体(MGL)的抑制率略低,但无统计学差异(P>0.05);乳腺癌细胞周期分布结果显示,MGSL是主要作用于S期的细胞周期药物;另外流式细胞术也证实了MGSL还有促乳腺癌细胞凋亡的作用,其诱导凋亡率达到51.62%. 结论 本法制备的MGSL符合作为纳米磁靶向给药系统的条件,其在体外显示了较好的抑瘤效应,可望成为一种有效的抗肿瘤物质.     

Resveratrol induces apoptosis of leukemia cell line K562 by modulation of sphingosine kinase-1 pathway

To explore the effects of resveratrol in a human myelogenous leukemia cell line K562 and its potential molecular mechanisms. The anti-proliferation effect of resveratrol-induced apoptosis on K562 cells were detected using MTT assay. Western blotting was performed for detecting changes of SphK1 expression in total cell protein and membrane/cytosol protein in K562 cells respectively after exposure to resveratrol. A biochemical assay was used to measure the activity of SphK after treatment of resveratrol, and then S1P and ceramide levels were examined using ELISA kits. Hochest 33258 staining and flow cytometry were applied to detect the apoptosis condition of K562 cells treated with resveratrol. Resveratrol inhibited the proliferation and induced apoptosis in K562 cells in a dose and time-dependent manner. Western blotting revealed that resveratrol did not affect total SphK1 expression level in K562 cells, but significantly changed the translocation of SphK1, the membrane SphK1 was decreased while cytosol SphK1 level was elevated. The activity of SphK1 in resveratrol treated groups was decreased compared to control group with a significant decrease of S1P and increase of ceramide level. Furthermore, Hoechst 33258 staining and Annexin V-FITC analysis confirmed the notable apoptotic effect of resveratrol in its anti-leukemia process. Resveratrol-induced proliferation inhibition of K562 cells might be mediated through its modulation activity of SphK1 pathway by regulating S1P and ceramide levels, which then affected the proliferation and apoptosis process of leukemia cells. SphK1/S1P pathway represents a target of resveratrol in human leukemia.     

siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 猴白血病病毒癌基因同系物A(RALA)基因表达对人慢性粒细胞性白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法: 利用Lipofectamine^TM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RALA siRNA对K562细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测RALA siRNA对K562细胞存活率的影响;real-time PCR检测RALA mRNA表达水平;Western blotting检测RALA蛋白表达水平;annexin V/PI双染流式 细胞仪检测RALA siRNA对K562细胞凋亡的影响;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果: RALA siRNA可明显抑制K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达(P<0.05);与阴性对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示转染RALA siRNA的K562细胞凋亡较阴性对照组显著增加(P<0.05);Hoechst 33258染色见转染RALA siRNA的K562细胞出现典型的凋亡形态学变化。结论: 癌基因RALA在白血病发生发展过程中发挥重要作用。siRNA下调RALA mRNA和蛋白的表达,可抑制人白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示RALA可能是白血病治疗的新靶点。     

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的 探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体(IP3R)是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式. 方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇(IP3)刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白(α-actin)、β主要组织相容性复合体(β-MHC)及即早基因(c-fos、c-myc)蛋白表达及肝素的干预作用. 结果 给予IP3(10-7mmol/L)刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达(P＜0.05),且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用(P＜0.05). 结论 激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一.