Toll样受体3对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌的影响

目的：通过 Toll 样受体3（TLR3）激动剂 Poly（I ∶ C）（PIC）刺激小鼠胰岛β细胞,观察 TLR3对细胞增殖,炎性因子表达及胰岛素分泌的影响。方法用小鼠胰岛β细胞株 NIT-1为研究对象,首先测定胰岛素释放以鉴定胰岛β细胞生物活性,再分别用不同浓度 PIC（0．1、1、10μg/mL）刺激 NIT-1细胞,CCK-8法检测细胞增殖;酶联免疫法（ELISA）检测炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达;葡萄糖刺激下的胰岛素释放试验（GSIS）测定 NIT-1细胞分泌胰岛素功能。结果 NIT-1细胞株呈贴壁、成簇及多边形生长;胰岛β细胞生物活性较好。与对照组相比,用不同浓度 PIC（0．1、1、10μg/mL）刺激时,NIT-1细胞增殖明显受到抑制,且呈剂量依耐性（P＜0．05）。 PIC 刺激组炎性因子（IL-1β,IL-6及 TNF-α）表达明显高于对照组（P＜0．05）。 PIC 刺激可明显抑制高糖介导下的 NIT-1细胞分泌胰岛素（P＜0．05）。结论 PIC 激活胰岛β细胞 TLR3,通过释放 IL-1β、IL-6及 TNF-α,抑制胰岛β细胞生长及胰岛素分泌。     

降糖中药1号对胰岛细胞分泌功能影响的体外实验

背景在前期研究基础上对降糖中药1号进行了其对离体胰岛细胞促胰岛素分泌的作用试验.目的探讨降糖中药1号的作用机制,为临床实验提供科学依据.设计取新生猪胰岛细胞进行传代培养,观察降糖1号对体外培养的胰岛细胞分泌胰岛素的影响.单位山东省立医院病理科及山东大学山东省立医院神经内科.材料实验于2004-02在山东省医学科学院中药药理研究室完成,选用美国长白杜络克种的新生猪.方法获得新生猪胰岛细胞,随机分为5组,每组3瓶,培养液组加入等量的培养液,优降糖组加入4 nmol/L的优降糖,降糖1号0.2 mL,0.15 mL,0.1 mL组分别加入降糖1号滤液0.2 mL,0.15 mL,0.1 mL,各组均放入培养箱中培养孵育3 h后取上清液,用放射免疫法测定胰岛素含量.主要观察指标各组胰岛细胞活性成分的比较.结果在基础培养液中的各组胰岛素水平差异不显著.但降糖1号0.2 mL,0.15 mL和0.1 mL组胰岛素释放量均比基础培养液胰岛素含量增加[(784.72±81.25),(462.25±14.91);(711.73±91.46),(467.62±15.56);(679.40±78.84),(475.82±13.33)mU/L],与加入中药剂量的倍比关系不明显.优降糖组刺激胰岛素分泌显著增加[(857.96±77.08),(470.58±15.43)mU/L].结论降糖中药1号能够刺激胰岛细胞,使胰岛素分泌量显著增加,从而有良好的降糖作用.     

转基因小鼠胰岛β细胞株胰岛素样生长因子1受体和胰岛素受体表达与小檗碱的干预效应

目的:观察小檗碱对转基因小鼠胰岛β细胞株胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响。方法:实验于2005-09/2006-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所完成。①实验材料:培养NIT-1细胞,在低糖(5.5mmol/L)和高糖(11.1mmol/L)环境下,分别加入0,1,3,10,30μmol/L的小檗碱和1μmol/L的格列苯脲,0μmol/L小檗碱组为空白对照组。②实验评估:培养24h后,采用四甲基偶氮唑盐法检测小檗碱NIT-1细胞增殖抑制作用;逆转录-聚合酶链反应测定NIT-1细胞胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体mRNA表达。结果:①四甲基偶氮唑盐法检测发现,不同浓度小檗碱(1～30μmol/L)与NIT-1细胞作用24h后,小檗碱组吸光度值比空白对照组低,随着小檗碱浓度的增加,吸光度值逐渐从0.356±0.061降低至0.162±0.014,而且在各组之间有显著性差异。②在低糖及高糖环境下,与空白对照组相比,小檗碱能促进NIT-1细胞胰岛素受体mRNA的表达(低糖环境:0.27±0.04,0.49±0.02;高糖环境:0.22±0.04,0.42±0.03;P<0.01),但仍低于格列苯脲组(低糖环境:0.75±0.22;高糖环境:0.78±0.01;P<0.01);而且随着小檗碱浓度的升高,NIT-1细胞胰岛素受体mRNA表达的增加更为明显,分别从0.49±0.02增高至0.68±0.44及从0.42±0.03增高至0.71±0.01。与空白对照组相比,小檗碱组胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无明显改变。结论:小檗碱促进胰岛素分泌,其作用机制可能与促进胰岛β细胞胰岛素受体mRNA表达有关。     

胰高血糖素样肽-1生理学作用及其在2型糖尿病中应用

胰高血糖素样肽-1是由肠道L细胞分泌的肠促胰岛素,与其受体结合后,促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌、胰岛β细胞增殖和分化并抑制其凋亡、延迟胃排空,但不引起体质量增加和低血糖,从而保护了胰岛β细胞功能.在疾病早期应用此类药物,受损的β细胞功能和β细胞数量有逆转的可能.胰高血糖素样肽-1类似物及二肽基肽酶Ⅳ抑制剂给2型糖尿病的治疗带来了新希望.     

壳寡糖及其衍生物对体外培养成骨细胞增殖的作用特点

背景:甲壳素、壳聚糖降解后得到的壳寡糖和单糖分子质量小、水溶性良好,具有大分子糖所不具备的更独特的生理生化活性.目的:观察壳寡糖及其衍生物N-乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖、羧甲基壳寡糖对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1的作用特点.设计、时间及地点:对比观察实验,于2004-02/2005-07在中国海洋大学海洋生命学院生化实验室完成.材料:小鼠颅骨成骨细胞株MC3T3-E1由北京协和医院细胞中心提供:N-乙酰氨基葡萄糖、壳寡糖、氨基葡萄糖、羧甲基壳寡糖为中国海洋大学海洋生命学院生化实验室自制.方法:分别将N-乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖、壳寡糖、羧甲基壳寡糖以10,100,500,1 000,2 000mg/L加入DMEM培养基中.将用4种糖培养的成骨细胞按试剂盒方法提取mRNA,进行mRNA差异显示分析.主要观察指标:MTT法测定成骨细胞的增殖情况.倒置显微镜下观察成骨细胞的生长情况.分析4种糖的mRNA差异.结果:N-乙酰氨基葡萄糖在5个质量浓度梯度均能促进成骨细胞增殖,1 000mg/L时效果最为明显;壳寡糖在各质量浓度下都表现出较明显的促进细胞增殖作用,500mg/L为最适质量浓度;氨基葡萄糖表现出双向调节作用,在10,100mg/L时有促进作用,>500mg/L则表现出抑制作用;羧甲基壳寡糖在各质量浓度下均表现出一定的促进成骨细胞生长作用,但促进效果较N-乙酰氨基葡萄糖和壳寡糖弱.光镜观察结果与MTT测定法结果一致.mRNA差异显示4种糖无明显激活新基因的产生.结论:壳寡糖及其衍生物对体外培养的成骨细胞均有不同程度的促进增殖作用,其中N-乙酰氨基葡萄糖和壳寡糖的效果优于氨基葡萄糖和羧甲基壳寡糖,作用中成骨细胞无新基因产生.     

胰岛β细胞功能评估方法及临床应用

胰岛β细胞功能是指胰岛素脉冲样分泌以及对各种刺激物引起的胰岛素释放或分泌反应以及分泌其他多肽的能力.检测胰岛β细胞功能有很多方法,包括胰岛素脉冲样分泌模式的检测和胰岛β细胞分泌刺激试验(葡萄糖刺激试验和非葡萄糖刺激试验).葡萄糖刺激试验主要有高葡萄糖钳夹技术、静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)结合数学模型分析技术以及临床常用的口服葡萄糖耐量试验(OGTT)等;非糖刺激试验主要有精氨酸试验及胰升糖素试验.另外,还可通过分析胰岛β细胞分泌的其他肽类来判断其功能,如C肽、胰岛素原(PI)、胰淀素等[1].在糖尿病的不同阶段胰岛β细胞功能有其不同特点,选择不同的测定方法对于评估不同阶段糖尿病胰岛β细胞功能有着重要意义.……     

干细胞移植定向分化为胰岛β细胞治疗糖尿病

糖尿病是由于胰岛β细胞破坏或胰岛素抵抗所致的胰岛素绝对或相对缺乏.干细胞具备的增殖能力和分化潜能使其成为胰岛素分泌细胞的潜在米源,还可以解决免疫排斥的难题.胰腺干细胞、胚胎干细胞、骨髓干细胞、脐血干细胞等可定向诱导分化为胰岛β细胞,或使用药物增加胰岛β细胞再生进而发挥治疗糖尿病作用.干细胞治疗糖尿病研究已取得了一定进展,部分实验已纠正糖尿病动物的高血糖状态.但尚需深入研究胰岛的发育和分化机制,这样才能从中获得信息用于诱导胚胎干细胞向β细胞分化,程序性、针对性应用诱导因子以取得更高的分化率,获得更成熟的胰岛素分泌细胞.     

壳寡糖对体外培养软骨细胞增殖的影响及对IL-1β诱导凋亡的保护作用

目的 体外实验研究不同浓度壳寡糖对软骨细胞增殖及IL-Iβ诱导细胞凋亡的保护作用.方法 从8周龄SD大鼠乳鼠膝关节分离、培养原代软骨细胞,鉴定后选用第2代软骨细胞进行实验.分别加入不同浓度壳寡糖培养48 h,通过CCK-8细胞计数法检测软骨细胞的增殖情况;采用IL-1β诱导软骨细胞凋亡,同时加入不同浓度的壳寡糖处理,倒置相差显微镜下观察软骨细胞形态及核分裂象的变化,通过流式细胞仪检测细胞早期凋亡比例,并通过Hoechst33258荧光染色检测软骨细胞凋亡细胞核的形态学变化.结果 CCK-8检测结果表明壳寡糖作用软骨细胞不同浓度、不同时间的软骨细胞增殖率比较均无显著性差异（P＞0.05）;流式细胞检测结果表明壳寡糖不仅扭转了细胞活力和增殖活性的下降,而且改善了IL-1β诱导的软骨细胞核染色质的损害,同时对软骨细胞凋亡率也有不同程度的降低.结论 一定浓度的壳寡糖对软骨细胞增殖无明显影响;壳寡糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,且呈剂量依赖性.     

应用细胞工程和转基因技术治疗糖尿病:"胰岛代理细胞"的构建研究

背景由于胰岛细胞分离技术难度较大,目前糖尿病细胞移植治疗尚缺乏理想的细胞来源.目的构建具有生理性胰岛素分泌能力胰岛代理细胞系,为糖尿病基因治疗提供有效手段.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预本研究在第三军医大学附属新桥医院中心实验室进行.以携葡萄糖激酶(glucokinase,GK)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,MPIN)的逆转录病毒共同感染人肝癌细胞系HepG2细胞,G418筛选,放免法、Western-blotting及RT-PCR鉴定;挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌反应的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.主要观察指标不同葡萄糖浓度条件下,联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞培养上清中的胰岛素浓度.结果G418筛选3周获阳性细胞克隆,放免法、Western-blotting挑选出两个目的基因表达均较强的HepG2细胞1株,命名为细胞克隆"β";RT-PGR证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录;在细胞"β"中获得葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75～2.00mmol/L时出现胰岛素分泌高峰;而在单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞中,各种葡萄糖浓度引起的胰岛素分泌差异无显著性意义(P＞0.05).结论成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.     

辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用

目的：探讨辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用及其作用途径。方法：分别用不同浓度辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin作用于NIT-1胰岛β细胞,48 h后观察二者是否有促进胰岛β细胞增殖的作用,并随后用阻断剂NF449分别与辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin共同作用于NIT-1胰岛β细胞,验证二者促进增殖作用途径是否为Gαs途径。结果：MTT法结果提示10^-9～10^-7mol/L ghrelin和10^-10～10^-7mol/L非酰化ghrelin均能促进胰岛β细胞增殖,并且二者都是通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。结论：辛酰化ghrelin和非酰化ghrelin都通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。     

Tiotidine and cimetidine--kinetics and dynamics

Tiotidine and cimetidine kinetics and dynamics were compared to assess mechanisms of the longer duration of effect of tiotidine in man. Both drugs has similar lag times for absorption. Tiotidine with a meal was more slowly absorbed than when fasting and was also more slowly absorbed than cimetidine with a meal. The elimination rates for both drugs did not differ; they were both approximately 2 to 3 hr. Oral doses of cimetidine achieved areas under the plasma concentration curve approximately three times that of tiotidine but these concentrations were only 1/10 as potent. The cimetidine concentration inducing 50% inhibition of food-stimulated gastric acid secretion was 0.41 +/- 0.04 whereas it was 0.04 +/- 0.003 microgram/ml for tiotidine. The effect of tiotidine lasted longer than that of cimetidine because the doses recommended for use in man resulted in higher concentrations in plasma relative to effective concentration than clinical doses of cimetidine.     

Developments and trends in traditional medicine and complementary and alternative medicine

With the rapid development of society, medical science and technology, although quality of life is enhanced and life expectancy is prolonged, aging, environmental changes and health problems are unavoidable. More and more people, therefore, are concerned about their health and place high demands on medical care. As modern medicine cannot meet all such demands, other medical care systems emerge. Trends in the seeking of medical care show that people are inclined towards natural approaches, so attention is being paid once again to traditional medicine, as well as complementary and alternative medicine. Under the patient-oriented concept, medical personnel have to recognize means of health care while thinking of the individualized and socioeconomic impacts. The purpose of this paper therefore is to provide medical personnel with information on the developments and trends in, knowledge and research with regard to traditional medicine as well as complementary and alternative medicine.