硫化氢通过JAK2/STAT3通路抑制脂多糖诱导的小胶质细胞M1型极化

目的观察硫化氢(H_2S)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞极化的影响并探讨JAK2/STAT3信号通路是否介导其作用。方法将培养的N9小胶质细胞随机分为对照组、LPS组、硫氢化钠(NaHS)组、LPS+NaHS组、蛋白酪氨酸激酶(JAK2)/信号转导和转录激活因子(STAT3)抑制剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG-490)组、LPS+NaHS+AG-490组共6组,每组设3个复孔。采用MTT法检测各组细胞活力,采用ELISA法检测各组胶质细胞及培养上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-4 IL-10水平,采用Western-blot检测各组细胞精氨酸酶1(Arg1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果与对照组比较,LPS组细胞Arg1蛋白及IL-4和IL-10表达水平增加,而iNOS蛋白、IL-1β、IL-6、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达降低,p-JAK2/t-JAK和p-STAT3/t-STAT3比值降低(均P0.05)。与LPS组比较,LPS+NaHS组细胞Arg1蛋白及IL-4和IL-10表达水平增加,而iNOS蛋白、IL-1β、IL-6、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达降低,p-JAK2/t-JAK2和p-STAT3/t-STAT3比值降低(均P0.05)。JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG-490可减弱NaHS的作用。结论 H_2S可抑制LPS诱导的小胶质细胞M1型极化,其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路实现。     

特异性抑制JAK2/STAT3信号通路对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后COX-2和VEGF表达水平的影响

目的 探讨特异性抑制蛋白酪氨酸激酶2/信号转导与激活子3(JAK2/STAT3)信号通路对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉闭塞再灌注模型; 大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组; 给药组大鼠于再灌注前5 min腹腔注射JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490(1 mg/kg),其余2组给予等量生理盐水; 再灌注24 h后各组行神经功能缺损评分,用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死体积,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑组织中JAK2、STAT3、环氧合酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA相对表达水平,用蛋白印迹(Western blot)检测脑组织磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、COX-2和VEGF的蛋白相对表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、JAK2和STAT3的mRNA,p-JAK2和p-STAT3蛋白、COX-2的mRNA和蛋白相对表达水平均显著升高(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05); 与模型组比较,给药组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、JAK2和STAT3的mRNA、p-JAK2和p-STAT3蛋白、COX-2的mRNA和蛋白相对表达水平均显著降低(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05)。结论 特异性抑制JAK2/STAT3信号通路可能通过降低脑组织中COX-2表达和促进VEGF表达来保护大鼠急性脑缺血再灌注损伤。     

LRG1通过抑制p38/MAPK通路的活化缓解Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨LRG1在Aβ1-42诱导阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的作用和机制。方法 Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞体外建立AD细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测LRG1转录水平;免疫印迹(Western blot)实验检测LRG1、Bcl-2和Bax蛋白以及p38磷酸化水平;流式细胞术(Flow Cyto Metry)实验检测细胞凋亡率。结果 Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞显著降低了细胞活性,提高LRG1蛋白水平。沉默LRG1提高Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞活性下降,抑制细胞凋亡;沉默LRG1逆转了Aβ1-42诱导Bcl-2和Bax蛋白水平的变化;沉默LRG1抑制Aβ1-42诱导p38的磷酸化水平。另外,U-46619(p38特异性激活剂)逆转了LRG1沉默对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结论 LRG1沉默通过抑制p38/MAPK信号通路的激活缓解Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤。     

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血再灌注后JAK2/STAT3信号传导通路的影响

目的 研究JAK2/STAT3信号通路在脑缺血再灌注损伤后的表达情况,并观察Rho激酶抑制剂Y-27632对其调控作用.方法 建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学染色法检测P-JAK2、P-STAT3在梗死区的表达水平,Tunel法检测神经细胞凋亡数量,观察P-JAK2、p-STAT3表达水平与神经元凋亡的相关性.结果 脑缺血再灌注后P-JAK2以及P-STAT3表达均上调,给予P-JAK2抑制剂以及Y-27632后,P-JAK2、P-STAT3的表达均受到抑制,同时减少了神经元凋亡数量,与模型组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 脑缺血再灌注后JAK2/STAT3信号通路激活,Y-27632可能通过抑制该通路的激活起到减少神经元凋亡,减轻神经功能缺损等脑保护作用.     

右美托咪定通过MAPK/STAT3通路对 AD大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探索右美托咪定(Dex)通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/信号转导和转录激活子3(STAT3)通路对β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42致大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 随机分为假手术组、Aβ1-42组、Dex低剂量(Dex-L)组、Dex高剂量(Dex-H)组、Dex-H+Anisomycin组、Dex-H+colivelin组，给予不同给药处理后进行实验观察。结果 Aβ1-42组大鼠海马组织神经元结构疏松，胞体形态异常，Aβ沉积严重，逃避潜伏期、炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、细胞凋亡数目、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3、cleaved caspase-3表达较假手术组均显著增加，穿越原平台次数、Bcl-2表达显著下降(P<0.05);经不同剂量Dex干预后均可逆转上述指标(P<0.05);MAPK通路激活剂及STAT3激活剂可减轻Dex对AD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论 Dex可以通过减少炎性因子水平以及Aβ沉积，降低细胞损伤和凋亡，保护大鼠海马神经元，可能与抑制MAPK/STAT3通路有关。     

STIP1对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）表达对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，及其对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。方法 免疫印迹法检测体外培养的正常胶质细胞（SVG）和人胶质瘤细胞（U251、U87和U37）STIP1蛋白表达水平。NC-siRNA或STIP1-siRNA质粒转染U251细胞，CCK-8法检测U251细胞增殖；Transwell实验检测U251细胞侵袭能力；流式细胞术检测U251细胞凋亡率；免疫印迹法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。结果 与正常胶质细胞SVG比较，胶质瘤细胞U251、U87和U373的STIP1蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较，STIP1-siRNA组STIP1蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞侵袭力明显明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显增高（P<0.05），而且，p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 STIP1在胶质瘤细胞中呈高表达，抑制STIP1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭、促进凋亡，机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

抑制低密度脂蛋白受体相关蛋白2表达对Alzheimer's病细胞模型丝裂原活化蛋白激酶信号通路影响的机制研究

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)在β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的Alzheimer’s病(AD)细胞模型中的表达情况,及调控LRP2表达后对神经元存活影响及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响。方法采用20μmol Aβ1-42处理的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞作为AD细胞模型。采用Western blotting法检测LRP2蛋白表达情况。Scrambled siRNA和LRP2 siRNA(si LRP2)分别转染SH-SY5Y细胞48 h,随后予以Aβ1-42处理24 h,采用噻唑蓝比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting法检测ERK、p38及JNK的磷酸化水平。结果si LRP2+Aβ组细胞活力显著低于SC+Aβ组(P<0.05)。与处理前比较,Aβ1-42处理后LRP2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,siRNA-1组、siRNA-2组LRP2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05~0.01)。SC+Aβ组细胞凋亡率显著低于si LRP2+Aβ组(P<0.01)。SC+Aβ组及si LRP2+Aβ组(p-ERK1/2)/ERK与SC组及si LRP2组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。与SC+Aβ组相比,si LRP2+Aβ组(p-ERK1/2)/ERK亦无统计学差异(P>0.05)。SC+Aβ组及si LRP2+Aβ组p-p38/p38显著高于SC组及si LRP2组(均P<0.01)。与SC+Aβ组相比,si LRP2+Aβ组p-p38/p38无统计学差异(P>0.05)。SC+Aβ组及si LRP2+Aβ组p-JNK/JNK显著高于SC组及si LRP2组(均P<0.01)。与SC+Aβ组比较,si LRP2+Aβ组p-JNK/JNK显著增高(P<0.01)。未经JNK抑制剂处理的SC组、si LRP2组细胞的Cleaved Caspase-3相对表达与经JNK抑制剂处理的细胞差异无统计学意义(均P>0.05)。结论抑制LRP2后促进Aβ诱导的细胞凋亡,并且这种效应与ERK、p38磷酸化无明显相关,与JNK磷酸化相关,但JNK抑制剂不能逆转LRP2抑制导致的凋亡增加,提示JNK信号通路可能不直接发挥作用。     

冈田酸和β-淀粉样蛋白对大鼠CaMKⅡ与Tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨冈田酸和β-淀粉样蛋白对大鼠CaMKⅡ与Tau蛋白磷酸化的影响。方法用立体定向方法将β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)(1mg/ml、5μl/只)注入SD大鼠海马CA1区,1w后注射冈田酸(OA)0.4nmol/L、2μl/只,隔天注射共注射7次,以建立类AD动物模型。采用水迷宫、Western blotting和Real-time等方法对类AD模型进行行为学和分子生物学分析,检测类AD大鼠海马组织CaMKⅡ、磷酸化Tau蛋白的表达水平以及大鼠学习记忆力的变化。结果与对照组相比Aβ1-42海马注射组、OA注射组及共同注射Aβ1-42和OA组均能引起大鼠学习记忆力降低,CaMKⅡmRNA及蛋白表达增加(P0.01),Tau蛋白Ser404磷酸化增加(P0.05)。Aβ1-42与OA具有协同增加CaMKⅡmRNA及蛋白表达及Tau蛋白Ser404磷酸化的作用。结论 Aβ1-42和OA可降低大鼠学习记忆能力,增加CaMKⅡ表达和Tau蛋白Ser404磷酸化。     

缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注后海马CA_1区神经元凋亡及β淀粉样蛋白1-40表达的影响

目的探讨缺血后处理(ischemic postconditioning,IP)对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后大鼠海马CA1区神经元凋亡及β淀粉样蛋白1-40(β-Amyloid Prote in 1-40,Aβ1-40)表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为假手术(SH)组、I/R组、IP组。用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血60m in后进行不同时间点的缺血后处理,恢复再灌注24h后行神经行为学评分(NDS),检测神经元凋亡及Aβ1-40的表达。结果与I/R组比较,IP组显著改善NDS(P<0.01),显著减少海马CA1区神经元凋亡(P<0.01)及Aβ1-40表达水平(P<0.01)。Aβ1-40的表达与细胞凋亡呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论缺血后处理可通过抗细胞凋亡机制减轻脑缺血/再灌注损伤。缺血/再灌注后Aβ1-40表达上调,缺血后处理可减少缺血/再灌注后Aβ1-40表达。Aβ1-40可能参与缺血后处理抗细胞凋亡的脑保护机制。     

miR-139在Aβ25-35诱导Neuro-2a细胞损伤中的机制研究

目的研究miR-139在Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞损伤中的作用,探讨其在AD发生发展中的作用及分子机制。方法首先应用Aβ25-35体外构建Neuro-2a细胞损伤模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测不同浓度Aβ25-35对Neuro-2a细胞miR-139和FOXO1 mRNA及蛋白表达的影响。应用荧光素酶报告法测定miR-139的潜在作用靶点,并验证FOXO1作为miR-139直接作用靶点参与Aβ25-35的细胞毒性作用。最后利用细胞转染方法抑制miR-139功能,采用CCK-8法、caspase-3活性法、ELISA法检测miR-139静默后Aβ25-35对Neuro-2a细胞活力、凋亡、caspase-3活性、NF-κB活性及表达水平的影响。结果 Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞中miR-139表达上调(p 0. 05),FOXO1表达下调(P 0. 05)。FOXO1是miR-139的直接作用靶点,过表达或低表达miR-139能在蛋白及mRNA水平降低或升高FOXO1的表达(P 0. 05)。静默miR-139可降低Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞毒性、凋亡作用,miR-139对Aβ25-35诱导的Neuro-2a凋亡作用与NF-κB相关(P 0. 05)。结论 miR-139通过直接调控FOXO1、间接调控NF-κB表达,参与Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞毒性,抑制miR-139功能可能控制AD的发生发展。     

17-β雌二醇抑制过氧化氢诱导鼠脊髓星形胶质细胞凋亡

目的 探讨17-β雌二醇治疗脊髓损伤的可能机制,以期为临床急性脊髓损伤的治疗提供理论依据.方法 建立原代培养的星形胶质细胞凋亡模型,将培养的细胞按随机排序的方法分为5组:对照组、过氧化氢组、l7-β雌二醇+过氧化氢组、17-β雌二醇组、二甲基亚砜溶剂组.利用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞活性,蛋白免疫印迹检测第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2( Bcl-2)蛋白的表达.结果 与对照组(0.401±0.043)比较,过氧化氢处理后(0.172 ±0.018)吸光度(A)值明显降低(q’=-1.450,P =0.001),可反映细胞生存率、活力降低,而17-β雌二醇预处理后(0.312±0.023),A值增加(q’=7.025,P=0.0025),提示细胞生存率增加及细胞活力上升,各组间比较A值差异也存在统计学意义;PTEN蛋白表达降低、Bcl-2表达上调;caspase-3表达降低、p-Akt表达上调.结论 17-β雌二醇有可能通过下调PTEN蛋白,促进p-Akt、Bcl-2蛋白的表达,抑制过氧化氢诱导星形胶质细胞凋亡.因此,脊髓损伤时早期应用17-β雌二醇有助于减轻脊髓损伤的程度,促进脊髓神经功能的恢复.     

MALAT1对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤及PI3K/Akt通路的影响研究

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对β-淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并随机分为正常对照组(正常生长PC细胞)、模型组(Aβ1-42诱导PC细胞损伤)、sh-MALAT1组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1干扰序列)、sh-对照组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1对照序列)。采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组PC12细胞MALAT1表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测PC12细胞增殖,采用流式细胞仪及AnnexinV-FITC/PI法体外检测PC12细胞凋亡,采用免疫印迹(WB)检测PC12细胞PI3K/Akt通路相关p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白及其下游凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3/caspase3、B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组、sh-对照组组PC12细胞存活率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平低(均P0.05),MALAT1表达水平、PC12细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平高(均P0.05);与模型组、sh-对照组比较,sh-MALAT1组MALAT1表达水平、细胞存活率及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平高(均P0.05),Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平低(均P0.05)。结论下调MALAT1表达可能通过激活PI3K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达抑制Aβ1-42诱导的PC12损伤,发挥保护作用。     

脑出血大鼠颅内溶血磷脂酸受体1与血肿周围 水肿区细胞凋亡的相关性研究

目的 研究脑出血大鼠颅内溶血磷脂酸受体1(LPA-1)与血肿周围水肿区细胞凋亡的相关性。方法 选取134例Wistar大鼠,随机分为正常组和脑出血组,正常组60例,脑出血组74例,脑出血组大鼠采用立体定向脑内注入法构建脑出血模型; 采用RT-PCR检测LPA-1、Caspase-3表达水平,采用双盲法测定神经功能评分,采用Western blot检测Bax蛋白、Bcl-x蛋白表达水平,采用流式细胞术检测各种细胞水平及细胞凋亡水平,根据Pearson相关性分析法大鼠颅内溶血磷脂酸受体1(LPA-1)、Bax蛋白、Bcl-x蛋白及细胞凋亡的相关性。结果 脑出血组LPA-1、Caspase-3表达水平均明显高于正常组(P<0.05); 脑出血组神经功能评分明显高于正常组(P<0.05); 脑出血组Bax蛋白表达水平显著高于正常组,脑出血组Bcl-x蛋白表达水平明显低于正常组(P<0.05); 脑出血组LPA-1、Caspase-3、Bax蛋白表达水平及神经功能评分持续升高,Bcl-x蛋白表达持续降低,直到第3 d到达顶峰后缓慢恢复,到第7 d恢复到正常评分的80%左右。脑出血组中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、细胞凋亡率均明显高于正常组(P<0.05); 脑出血组性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、细胞凋亡率持续升高,直到第3 d到达顶峰后缓慢降低,到第7 d降低更加显著。LPA-1与Bax蛋白的表达水平呈正相关(r=0.33,P<0.05); LPA-1与Bcl-x蛋白的表达水平呈负相关(r=0.25,P<0.05); LPA-1表达水平与细胞凋亡率呈正相关(r=0.81,P<0.05); Bax蛋白与Bcl-x蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.22,P<0.05); Bax蛋白表达水平与细胞凋亡率呈正相关(r=0.71,P<0.05); Bcl-x蛋白表达水平与细胞凋亡率呈负相关(r=0.74,P<0.05)。结论 LPA-1与Caspase-3在大鼠脑出血中高表达,神经功能评分在大鼠脑出血中评分过高,Bax蛋白在大鼠脑出血中高表达,Bcl-x蛋白在大鼠脑出血中低表达,脑出血大鼠细胞凋亡率过高,LPA-1、Bax蛋白、Bcl-x蛋白及细胞凋亡在大鼠脑出血中关系密切,可能具有相关性。     

miR-433通过JAK2/STAT3信号通路调控氧化应激在大鼠术后认知障碍中的作用研究

目的 探讨miR-433对术后认知障碍(POCD)大鼠海马氧化应激和认知功能的影响及其作用机制。方法 将大鼠随机分为4组,Control组、POCD组、POCD+NC mimic组、POCD+miR-433 mimic组。构建大鼠POCD模型,实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)检测miR-433在POCD大鼠海马组织中的表达;Morris水迷宫试验评价大鼠认知功能;苏木精-伊红(HE)染色检测海马组织病理学变化;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氧化应激水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-433和JAK2的靶向关系;Western blotting检测海马组织中cleaved caspase-3、Bad、Bcl-2、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果 与Control组比较,POCD组大鼠海马组织中miRNA-433表达显著降低,逃避潜伏期延长,穿越目标平台次数减少,POCD组神经细胞紊乱,细胞数量明显减少,神经元细胞凋亡率显著升高,cleaved caspase-3和Bad蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达...     

β淀粉样蛋白诱导脑内神经元凋亡及褪黑素的保护作用

目的　探讨凋亡机制在 β 淀粉样蛋白 (Aβ)脑内致阿尔茨海默病 (AD)作用中的意义及褪黑素 (MT)对Aβ脑内神经毒性的干预效果。方法　将Aβ1 4 0 微量注射至大鼠右侧海马CA1区 ,7d后 ,用尼氏染色检测神经元丢失 ,HE染色、TUNEL染色及透射电镜检测细胞凋亡 ;用免疫组化SABC法检测Bax/Bcl 2的表达。结果　Aβ组右侧海马CA1区发现大量凋亡细胞 ,而假手术对照组和生理盐水对照组未发现细胞凋亡 ;Aβ组Bax表达增强 ,而Bcl 2表达在上述三组间无明显差异 ;MT组海马CA1区神经元计数为 47.4± 5 .9,明显多于Aβ组 (2 9.4± 4.5 ) ,但少于生理盐水对照组 (79.8± 7.6 )和假手术对照组 (83.1± 8.5 ) ,MT组细胞凋亡 (8.4± 3.7)少于Aβ组 (18.9± 6 .1)。 结论　Aβ能诱导脑内神经元凋亡 ,并可能与促进Bax的表达有关 ;MT能明显减轻Aβ的脑内神经毒性 ,补充MT可能有助于AD的防治     

阿尔茨海默病患者外周淋巴细胞对Aβ1-40刺激反应性研究☆

目的探讨阿尔茨海默病(AD)外周淋巴细胞免疫功能的变化.方法淀粉样蛋白肽(Aβ140)等刺激AD患者外周淋巴细胞,测定其增殖功能和凋亡细胞比例;异硫氰酸荧光素(FITC)标记单抗直接标记,流式细胞仪测定T细胞亚群.结果轻、中～重AD组淋巴细胞对Aβ1-40刺激的增殖能力都显著低于对照;白介素-2(IL-2)分泌、白介素-2受体(IL-2R,CD25)表达和T细胞亚群及细胞凋亡在各组间无差异.结论AD病人淋巴细胞对Aβ1-40刺激增殖反应低下,提示AD患者对Aβ1-40清除能力减弱可能与AD发病有关.     

大鼠脑出血后活化星形胶质细胞EGFR-JAK1/STAT3表达及Genistein的抑制作用

目的探讨EGFR-JAK1/STAT3信号通路在大鼠脑出血后星形胶质细胞活化中的作用。方法 SD大鼠60只,随机分为ICH组、DMSO组、GST组,每组20只,Ⅶ型胶原酶注入苍白球进行脑出血造模。GST组在造模后每天腹腔注射Genistein溶液(50 mg/kg),DMSO组腹腔注射相同剂量DMSO溶液,一次/d。取术后1 d、7 d、14 d、28 d共4个时间点进行神经功能评分,各时间点每组随机取5只大鼠处死取脑,免疫组化检测EGFR、GFAP在星形胶质细胞中的表达变化,Western blot检测每各组p-JAK1、p-STAT3蛋白水平的表达。结果神经功能评分:GST组优于ICH组与DMSO组、ICH组与DMSO组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫组化显示脑出血后EGFR、GFAP表达增高,给予GST干预后,GFAP、EGFR表达显著少于ICH组及DMSO组,差异有统计学意义(P<0.05);7 d时p-JAK1/p-STAT3蛋白表达显著上升,予GST干预后,p-JAK1/p-STAT3蛋白水平较ICH组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),DMSO组EGFR、GFAP及p-JAK1/p-STAT3蛋白表达水平,与ICH组比较,差异无统计学意义(P<0.05)。结论脑出血所致星形胶质细胞活化与EGFR表达上调有关,抑制EGFR表达,可使pJAK1/p-STAT3蛋白表达水平下调,提示EGFR-JAK1/STAT3信号通路可能与脑出血后星形胶质细胞活化相关。     

Aβ寡聚体损伤PC12细胞毒性研究

目的研究Aβ寡聚体对PC12细胞的毒性损伤作用及机制。方法不同比例的Aβ42/Aβ40 Aβ寡聚体作用于PC12细胞构建AD模型,分别应用CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测Aβ42蛋白含量,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase 3表达、自噬相关蛋白Beclin 1及PS1蛋白表达。结果 Aβ42/Aβ40不同比例寡聚体作用于PC12细胞:Aβ42比例越大,Aβ的表达及凋亡越明显,且具有剂量依赖性; PC12细胞活力一定浓度范围呈现增强,超过一定范围后其活力下降; Aβ42/Aβ40对细胞自噬的激活在一定的浓度范围内有效,当浓度过大时,细胞自噬减弱,引起细胞损伤;不同比例Aβ寡聚体损伤PC12细胞,PS1的表达水平无差异。结论 (1) Aβ损伤PC12细胞AD早期细胞模型构建成功;(2) Aβ寡聚体损伤PC12细胞Beclin1蛋白在一定的浓度范围内表达增加,自噬受激活,当Aβ42的浓度达到某一浓度时,Beclin1蛋白的表达减低,自噬被抑制;(3) Aβ寡聚体不改变细胞内PS1的表达水平,其可能通过改变PS1的结构和功能引起Aβ沉积。