氟对原代培养的大鼠成骨细胞分化相关指标的影响

目的研究氟对原代培养的大鼠成骨细胞的细胞活性及对成骨细胞分化相关指标的影响。方法取出生24 h内的大鼠胎鼠的颅盖骨,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶交替消化的方法获得原代成骨细胞。分别加入终浓度为0(对照组)、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L氟化钠进行染毒72 h,采用MTT法检测细胞活性;染氟72 h后,采用Real-time RT-PCR法检测成骨细胞分化标志物COL1A1、ALP和ON mRNA的表达情况;染氟5 d后,采用染色法检测成骨细胞ALP蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10-6~10-4 mol/L染氟组成骨细胞存活率及10-7~10-5 mol/L染氟组成骨细胞ALP蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着NaF染毒浓度的升高,成骨细胞存活率和ALP蛋白的表达水平均呈先升高后下降的趋势。与对照组相比,各浓度NaF染毒组成骨细胞ALP、ON mRNA的表达水平及10-7、10-6 mol/L NaF染毒组成骨细胞COL1A1 mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论本实验条件下,较低剂量的氟可促进大鼠成骨细胞的分化。     

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。     

HDAC1在燃煤污染型氟暴露人群及染氟人原代成骨细胞中的转录及表达

目的本研究以燃煤污染型氟人群和原代人成骨细胞为研究对象,检测氟暴露对组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)m RNA转录及蛋白的表达的影响,从人群和细胞两个体系探讨HDAC1基因在地方性氟中毒发生发展中的作用。方法选择贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区295例氟暴露人群及非氟暴露区85例村民作为调查对象,在知情同意的原则下,采集调查对象的尿液及外周血。依据尿氟(UF)含量将调查对象分为正常尿氟组(UF1.96 mg/g Cr,140例)、低氟组(1.96 mg/g Cr≤UF3.92 mg/g Cr,93例)、中氟组(3.92 mg/g Cr≤UF7.84 mg/g Cr,82例)和高氟组(UF≥7.84 mg/g Cr,65例)。同时以0、125、250、500、1 000μmol/L氟化钠处理人原代成骨细胞72 h。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测氟暴露人群外周血及染氟人原代成骨细胞HDAC1 m RNA水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(Western-blot)分别检测外周血、成骨细胞HDAC1蛋白表达。结果调查对象外周血HDAC1 m RNA转录水平各组间比较差异有统计学意义(F=16.502,P0.05),低、中、高尿氟组HDAC1 m RNA水平均低于正常尿氟组(P0.05);外周血HDAC1蛋白表达,各组间比较差异有统计学意义(F=4.885,P0.05),低、中、高尿氟组HDAC1蛋白含量均高于正常尿氟组(P0.05)。氟化钠处理人成骨细胞72 h后,HDAC1 m RNA水平,组间比较差异有统计学意义(F=226.81,P0.05),随着染氟浓度的升高,HDAC1 m RNA转录水平逐渐升高(P0.05);HDAC1蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=20.60,P0.05);随着染氟浓度的升高,HDAC1蛋白表达水平逐渐升高(P0.05)。结论 HDAC1参与氟中毒的发生发展过程,其蛋白表达增强可能是氟骨症发生的早期分子事件。     

亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞BER相关基因H4K20me1修饰水平及其mRNA转录水平影响

目的了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO_2)对人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)碱基切除修复(BER)基因聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1(PARP1)、N-甲基化嘌呤-DNA-糖基化酶(MPG)、X射线修复交叉互补基因-1(XRCC1)启动子区和编码区组蛋白H4第20位赖氨酸一甲基化(H4K20me1)修饰水平及其mRNA转录水平的影响。方法以0.00、2.50、5.00、10.00μmol/L的NaAsO_2处理HaCaT细胞24h。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MPG、PARP1、XRCC1基因mRNA表达水平;定量染色质免疫沉淀技术(CHIP-qPCR)检测MPG、PARP1、XRCC1基因启动子区(CHIP1、CHIP2区域)和编码区(CHIP3、CHIP4区域)H4K20mel修饰水平。结果 (1)MPG、PARP1、XRCC1基因mRNA表达水平检测结果:2.5μmol/L染砷组MPG、PARP1、XRCC1基因mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),5.00、10.00μmol/L组mRNA表达水平随染毒剂量的增加而降低,与对照组比较,各差异有统计学意义(P0.05)。(2)MPG、PARP1、XRCC1基因启动子区和编码区组蛋白H4K20mel修饰水平检测结果:基因启动子区,不同染砷组HaCaT细胞MPG基因启动子CHIP1、CHIP2区和PARP1基因启动子CHIP2区未观察到H4K20me1的富集规律,与对照组相比各差异无统计学意义(P0.05),5.00、10.00μmol/L染毒组HaCaT细胞XRCC1基因启动子CHIP1、CHIP2区和10.00μmol/L染毒组PARP1基因启动子CHIP1区H4K20me1的富集与对照组相比明显减少,各差异有统计学意义(P0.05);基因编码区,5.00、10.00μmol/L染毒组HaCaT细胞MPG.、PARP1、XRCC1基因编码CHIP3、CHIP4区H4K20mel的富集与对照组相比明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NaAsO_2可通过抑制HaCaT细胞PARP1、XRCC1基因启动子区和MPG、PARP1、XRCC1基因编码区H4K20mel的表达水平,使MPG、PARP1、XRCC1基因mRNA转录水平下降。     

5-氮-2'脱氧胞苷逆转人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因的表达

目的:观察甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne RIZ1基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨人卵巢癌细胞系OVCAR3和AnglneRIZ1基因失活的机制及5-Aza-CdR对RIZ1基因表达的调控。方法:用5-Aza-CdR(浓度为5μmol/L)处理体外培养的人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne后,采用MSP法检测用药前后细胞中RIZl基因的甲基化状态,RT-PCR及Western-blot法检测用药前后细胞中RIZ1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:在人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中,RIZ1基因启动子区呈异常甲基化状态,RIZ1基因mRNA及蛋白表达缺失,经过5-Aza-CdR处理后,RIZ1基因启动子区呈非甲基化状态,其mRNA及蛋白重表达。结论:5-Aza-CdR可改变人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因甲基化状态,从而调控癌细胞中RIZ1基因的表达。     

鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化与其mRNA和蛋白质表达情况之间的关系。方法:培养鼻咽癌细胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞株(NP69),采用MS-PCR和Q-RT-PCR及Western Blot方法检测各细胞株中Syk基因的甲基化和Syk mRNA及Syk蛋白表达。结果:MS-PCR法检出CNE-1和CNE-2细胞Syk启动子甲基化率分别为36%±3.6%和62%±4.5%,而NP69未检测到甲基化;Q-RT-PCR法检出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为42%±3.5%和28%±2%;WesternBlot法检出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为36%±4.5%和16%±2.5%。均有统计学意义(P<0.01)。结论:在分化程度较低的鼻咽癌细胞中,Syk基因启动子甲基化程度较高,则Syk基因mRNA与蛋白的表达较低。Syk基因mRNA和蛋白的表达与Syk基因启动子甲基化程度呈负相关。     

二(口恶)英对胰岛素样生长因子Ⅱ表达的调控

目的 探讨二(口恶)英(TCDD)对成骨细胞胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor II,IGF-II)基闪表达的影响.方法 应用1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L的TCDD作用于原代培养的大鼠颅盖骨成骨细胞,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹杂交分析成骨细胞中IGF-II mRNA及蛋白质的表达.结果 TCDD增加了成骨细胞中IGF-II的基因表达,1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L TCDD组IGF-II mRNA表达水平分别为10.85±0.18、11.82±0.16、11.92±0.18,与对照组(5.06±0.02)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);1×10-7 mol/L剂量的TCDD使IGF-II的mRNA和蛋白质的表达分别上调130%和280%.结论 TCDD在基因转录和翻译水平上正性调控成骨细胞内IGF-II基因的表达.     

硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达的影响

目的研究一定浓度的硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞株,加氟组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠;加氟加硒组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠,同时加入100 nmol/L的亚硒酸钠;对照组细胞在无血清培养液中培养;连续培养24 h,检测培养液中的iNOS、eNOS的活力;采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)测定iNOS mRNA和eNOS mRNA的表达。结果与对照组比较,400、1 000、2 000μmol/L加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达增强(P<0.01);而400、1 000、2 000μmol/L加氟组eNOS的活力和1 000、2 000μmol/L加氟组eNOSmRNA的表达降低(P<0.05,P<0.01);与相应剂量的加氟组(400、1 000μmol/L)比较,加硒加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达降低(P<0.05),而eNOS的活力和eNOS mRNA的表达升高(P<0.05);而加硒加氟组(氟剂量:2 000μmol/L、硒剂量:100 nmol/L)的iNOS与eNOS的表达与相应剂量的加氟组(2 000μmol/L)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达产生影响,但是对高剂量氟组作用不强。     

氟对人成骨样细胞株凋亡的影响

目的研究氟化钠(NaF)对人成骨样细胞株凋亡的影响及其机制。方法四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖能力,萤光染剂(Hoechst 33342)染色,DNA梯形(DNA Ladder)琼脂糖电泳,流式细胞仪分析检测细胞凋亡,RT-PCR半定量分析抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax mRNA表达,显色法检测凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果NaF(4,6,8×10-3mol/L)可以剂量依赖性地抑制细胞增殖(P<0.01),Hoechst33342染色、琼脂糖电泳和流式细胞仪均可检测到氟对成骨细胞凋亡的诱导作用。RT-PCR结果显示:NaF可以剂量依赖性地抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01),提高Bax mRNA表达(P<0.01),并显著增强Caspase-3的活性(P<0.01)。结论NaF可以显著的抑制人成骨样细胞株增殖和诱导其凋亡,并可能是通过抑制Bcl-2表达,促进Bax表达和提高Caspase-3活性来诱导人成骨样细胞株凋亡。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

Choice of measures of vaccination and estimates of risk of pediatric pertussis

BackgroundVaccination uptake at the individual level can be assessed in a variety of ways, including traditional measures of being up-to-date (UTD), measures of UTD that consider dose timing, like age-appropriate vaccination, and risk reduction from individual doses. This analysis compared methods of operationalizing vaccination uptake and corresponding risk of pertussis infection.MethodsCity-wide case-control study of children in Philadelphia aged 3 months through 6 years, between 2001 and 2013. Multiple logistic regression was used to isolate the independent effects of each measure of vaccination uptake and the corresponding relative odds of pertussis.ResultsBeing UTD on vaccinations was associated with a 52% reduction in risk of pertussis (OR 0.48, 95% CI: 0.34, 0.69). Evaluation of delayed receipt of vaccine versus on-time UTD yielded similar results. There was a decrease in risk of pertussis for each additional dose received with the greatest reduction in pertussis infection observed from the first (OR 0.48, 95% CI: 0.28, 0.83) and second dose (OR 0.17, 95% CI: 0.08, 0.34). Additional doses conferred minimal additional protection in this age group.ConclusionExamining vaccination status by individual doses may offer improved predictive capacity for identifying children at risk for pertussis infection compared to the traditional UTD measure.     

两种不同肌瘤剔除术治疗子宫肌瘤的临床疗效比较

目的:比较腹腔镜子宫肌瘤剔除术与腹式子宫肌瘤剔除术的临床疗效。方法:回顾分析63例腹腔镜子宫肌瘤剔除术与61例腹式子宫肌瘤剔除术的临床资料,比较2种手术方式的手术时间、术中出血量、肛门排气时间、使用抗生素时间、术后感染率、体温恢复正常时间、住院时间等情况。结果:两组患者接受子宫肌瘤剔除术顺利完成,腹腔镜组手术时间长于开腹组(P0.05),腹腔镜组术中出血量及剔除肌瘤个数均少于开腹组(P0.05),术后腹腔镜组体温恢复正常时间、肛门排气时间、抗生素使用及住院时间均短于开腹组,两组患者最多随访6个月,腹腔镜组平均康复时间较开腹组短(P0.05),两组随访B超均未发现明显肌瘤结节。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术损伤小,恢复快,住院时间短,是值得推广的微创手术。     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。     

性发育异常发病机制的研究进展

正常的性腺分化可分为3个过程：原始性腺形成、性别决定和卵巢/睾丸发育。在任一环节中,基因表达或调控发生异常均有可能导致性发育异常疾病的发生。性发育异常是指染色体、性腺和解剖性别不典型。随着分子生物学技术的发展,不断地发现新的基因或信号通路参与性腺分化和发育,如SRY、SF1、WT1、Sox9等基因与睾丸发育密切相关,Wnt/Rspo1/B连环蛋白通路、Dax1、Foxl2等基因在卵巢分化中发挥着重要作用,一些非编码RNA和转化生长因子也有重要的调节功能,且睾丸和卵巢发育均为主动过程,即使在出生后因某些基因的改变两者间也可出现横向分化。这些为揭示性分化异常的发病机制提供了可能。     

尘肺病患者145例死因调查

目的分析汉中市尘肺病的发生、发展和死亡原因，以提高尘肺病患者的生存质量。方法对145例尘肺病患者的死因进行回顾性分析，计算其平均发病年龄、死亡年龄及患尘肺病后的存活年限。结果矽肺的平均发病年龄和死亡年龄均早于煤工尘肺和石棉肺，尘肺病的主要死因为患肺部疾患，患尘肺病后的平均存活年限为12a。结论加强职业健康体检工作，对尘肺病人做到早发现早治疗和预防并发症的发生。     

One-year stability of the Measure of Processes of Care

BACKGROUND: The Measure of Processes of Care (MPOC) is a 56-item self-administered measure designed to examine what parents of a child with a chronic health problem think of the services they and their child receive, and to measure the extent to which these services are family-centred. Reliability and validity of the MPOC were established in prior studies. The aim of the present study was to assess the 1-year stability of the MPOC to justify its use as an evaluative tool. METHODS: Nine paediatric rehabilitation centres in the Netherlands participated in this short longitudinal survey study. Subjects were 205 parents (response rate 74.8%) of children aged 1-18 years who received care in one of the participating paediatric rehabilitation centres. All subjects filled out two MPOCs with a 1-year interval. RESULTS: All correlations between the scale scores of the MPOC at the first and second administration were relatively high and significant (range: 0.443-0.609, all P < 0.001), demonstrating high inter-individual stability. However, all mean scale scores, except for Providing General Information, significantly reduced after 1 year. CONCLUSIONS: The MPOC has a moderate 1-year stability. However, because of its tendency to score lower when repeated after 1 year, its use as an evaluative follow-up instrument to assess the effectiveness of a programme intervention is restricted.     

儿童皮质发育畸形的MRI诊断

目的探讨儿童皮质发育畸形(MCD)的MRI表现特点,为MCD的早期诊断提供依据。 方法选择2010年1月至2012年12月在四川省医学科学院·四川省人民医院放射科经MRI检查确诊为MCD的44例患儿为研究对象。回顾性分析及总结其MRI影像学特征。本研究遵循的程序符合四川省医学科学院·四川省人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象及其监护人知情同意,并与监护人签署临床研究知情同意书。 结果本组44例经MRI确诊为MCD患儿中,巨脑回-无脑回为17例,多小脑回为14例,灰质异位为9例,脑裂畸形为4例。MCD的MRI特点中,巨脑回表现为脑回增宽、皮质增厚及白质变薄;无脑回表现为正常脑沟、脑回消失,皮质增厚及白质变薄;多小脑回表现为脑回增多、细小;灰质异位表现为皮质下及侧脑室周围深部白质区结节状、团块状或带状病灶,信号与灰质信号相同;脑裂畸形表现为从侧脑室到脑表面贯穿大脑半球的裂隙,表面覆盖灰质。 结论MRI是诊断儿童MCD的可靠影像学方法。     

244株真菌鉴定结果分析

目的 了解某院2000～2001年各类真菌的检出率。方法 用酵母样真菌同化试验编码鉴定板TH-15进行编码鉴定。结果 真菌分离率为8．85％；244株真菌分为10种，其中以白色念珠菌和热带念珠菌较高，分别占真菌总数的75．41％和11．47％；检出真菌的主要标本是痰和阴道分泌物。结论 及时进行真菌培养，有利于合理使用抗菌药物和控制真菌感染。