蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究

目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分———蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础。方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分。结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000。经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25 000~50 000之间。结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究

以野生环毛蚓(Pheretima)为材料，经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE—纤维素离子交换柱层析等纯化步骤，得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶(EFE)，具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用，但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制，说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na^ 、K^ 、Mg^2 对此酶有一定的抑制作用，Hg^2 对EFE有强烈抑制作用，而Ca^2 可提高此酶活力。     

快速蛋白液相色谱法纯化威廉环毛蚓纤溶酶及其活性研究

摸索威廉环毛蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶(earthw fibrinolytic enzyme，EFE)体内外的抗栓溶栓活性。通过提取，分步盐析，再经AKTAbasic蛋白快速液相色谱进一步纯化，得一组有纤溶活性的同工酶，其中一种比活较大达2000IU／mg。药理试验表明该酶有明显的抗拴溶栓活性。     

糖链对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响

应用以大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)为配基的亲和色谱从赤子爱胜蚓中分离了蚯蚓纤溶酶,亲和介质Sepharose-4B对蚯蚓纤溶酶的吸附量为0.04 ms/g,以糖苷酶A去除固定在SBTI上的蚯蚓纤溶酶的糖链.辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(ConA-HRP)亲和印迹和Schiffs染色结果表明.蚯蚓纤溶酶的糖链已基本去除,去除糖链后蚯蚓纤溶酶的活性降低约30%.     

蚯蚓纤溶酶新组分的分离纯化及部分性质

采用以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和色谱分离蚯蚓纤溶酶，以DEAE-纤维素-52离子交换柱色谱和制备电泳纯化各单组分。结果表明新组分8、9、10都是能水解纤维蛋白的糖蛋白。组分8是一种纤溶酶原激活剂，有2个亚基，Mr为25．5k和17．8k；组分9仅一条肽链，Mr为33．6k；组分10含有Mr为18．7k和10．9k的2个亚基。组分9、10均兼有纤溶酶原激活活性和直接纤溶活性。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U·mg^-1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。     

一种体内溶栓活性优于总蚯蚓纤溶酶的组分

目的筛选高效低毒的蚯蚓纤溶酶单一组分。方法通过亲和色谱从赤子爱胜蚓获得含多组分的总蚯蚓纤溶酶(EFE)，经离子交换分离得到3个主要溶栓组分EfP-0-2，EfP-I-1和EfP-I-2，与EFE比较体内外溶栓效果和毒副作用。结果与其他组分比较，EfP-I-1的体外溶栓作用较强；当静脉注射4.5 mg·kg^-1时，各组分对纤维蛋白原的影响均不明显，只有EfP-I-1能显著溶解动静脉旁路血栓；当静脉注射达6 mg·kg^-1时，只有该组分对延长出血时间的影响不明显；急性毒性实验表明，该组分的LD₅₀是EFE的2.17倍。结论EfP-I-1有较高的体内外溶栓活性和较低的毒副作用。由于该组分在总EFE中所占比例较高，并易于分离纯化，故适于作为单一组分的溶栓药物进行开发。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U.mg？1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。     

一种具有纤溶活性的蛋白酶的分离纯化及性质

目的分离纯化BacillussubtilisJin2 1发酵产生的具有纤溶活性的蛋白酶 ,并对其性质进行研究。方法通过硫酸铵分级盐析 ,SerineSepharose 2B和SephacrylS— 2 0 0色谱柱进行分离纯化 ,用SDS PAGE测定纯度 ,SDS PAGE和凝胶层析测定相对分子质量 ,纤维蛋白平板法测定酶活力。结果分离得到了电泳纯的酶 ,该酶的相对分子质量为 2 8kD ,等电点约为 8 6 ,最适 pH为 7 5 ,最适温度为 4 0℃ ,在 4 0℃以下较稳定 ,超过 5 0℃时酶活力开始下降 ;金属离子Mn2 + 对酶有明显的激活作用 ,而Zn2 + 对酶有抑制作用 ,二异丙基磷酰氟 (DFP)和苯甲基磺酰氟 (PMSF)完全抑制酶活性。结论该酶是一种丝氨酸蛋白酶 ,与纳豆激酶相似 ,有望开发成为一种新型口服溶栓药物     

延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的从延胡索(Rhizoma corydalis)中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分,并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶,表观相对分子质量分别为33 000和59 000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶,ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性,在4~50℃活性稳定,50~75℃酶活有所下降;最适pH值为8.0,在pH 3.0左右,仍能保留大部分酶活;能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定,有希望研发成为一种溶栓新药。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：     

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6～ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。     

蚓激酶的分离纯化和对大鼠脑血栓模型的药效观察

以威廉环毛蚓为原料，用循环工艺纯化。纯品蚓激酶经股静脉注射实验性局灶脑梗塞大鼠，并与尿激酶比较，观察其对脑梗塞模型大鼠的药效。从脑片染色结果及给药后不同时间点大鼠血液中纤溶酶原激活剂和其抑制剂的含量变化显示用该工艺纯化的蚓激酶有较好的溶栓作用。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

目的研究1种高效分离纯化绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)的方法。方法采用硫酸抽提,硫酸铵分级沉淀,缓冲液溶解沉淀,用相对分子质量(Mr)为30 000的超滤膜去除大分子蛋白质,Mr为5 000的超滤膜除盐及小分子蛋白质,亲和色谱纯化,得MBTI,高效液相色谱法(HPLC)和SDS-PAGE电泳法分别测定其纯度和Mr,以酪蛋白为底物测其活性。结果纯化的MBTI经HPLC和SDS-PAGE鉴定为2条蛋白质带,其Mr分别为12 000和8 000,其活性约为大豆蛋白酶抑制剂的3倍。结论超滤法与亲和色谱结合能快速高效地分离纯化MBTI。