活血补肾中药对培养成骨细胞VEGF活性的影响

目的：研究活血补肾中药丹仙康骨胶囊对体外培养成骨细胞VEGF活性的影响，进一步探讨丹仙康骨胶囊抗骨坏死的作用机制。方法：应用RT-PCR及流式细胞仪检测观察不同剂量丹仙康骨胶囊对成骨细胞VEGF mRNA的表达与VEGF的生成的影响。结果：丹仙康骨胶囊可以促进成骨细胞VEGF mRNA的表达与VEGF的生成，并呈剂量依赖性。结论：丹仙康骨胶囊促进成骨细胞VEGF mRNA的表达与VEGF的生成可能是其抗骨坏死的作用机制之一。     

应用血管内皮生长因子基因治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：通过建立犬股骨头缺血坏死模型，探讨应用脱蛋白骨复合转染血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因骨髓基质细胞植入治疗股骨头缺血坏死的可行性。方法：实验选取36只成年犬，随机分为3组，每组12只。A组为脱蛋白异体骨复合转染VEGF基因的自体骨髓基质细胞；B组为脱蛋白异体骨复合未转染基因的自体骨髓基质细胞；C组单纯植入脱蛋白骨材料。采用液氮冷冻法制作狗股骨头缺血坏死模型，将细胞骨材料复合物植入缺血坏死股骨头内。应用微循环灌注方法了解股骨头内的血运情况，组织形态学观察坏死股骨头的修复情况，免疫组化方法检测VEGF的表达，骨密度仪测定股骨头的骨密度。结果：A组4周后股骨头内有VEGF表达，12周后股骨头内有大量的树枝状血管生成，大量新骨形成，骨密度增高；B、C组均无VEGF基因表达，B组有部分新骨及血管生成，C组仅见少量类骨质形成，血管再生不明显。结论：利用脱蛋白骨复合转染VEGF基因的骨髓基质细胞可促进新骨形成与血管再生，有利于促进坏死骨的修复。     

血管内皮生长因子基因转染促进股骨头坏死修复

目的　探索治疗股骨头及其它骨缺血性坏死新方法。方法　将血管内皮生长因子真核表达质粒pCD hVEGF1652 0 0 μg与胶原混合植入坏死的兔股骨头内 ,术后 2、4周用免疫组化SABC方法检测血管内皮生长因子 (VEGF)表达情况 ,组织形态学分析术后 2、4周修复区血管生成情况及术后 6、8周股骨头新骨形成情况。结果　术后 2周免疫组化证实基因转染组股骨头内有VEGF表达 ,组织形态学检测发现术后 2、4周转染基因的股骨头内血管生长快于对照组 ,术后 4、8周转染基因股骨头新骨形成多于对照组 ,差异均有显著性(P <0 0 1)。结论　利用VEGF基因转染刺激坏死骨组织内血管再生 ,可促进坏死骨修复 ,为临床治疗骨缺血性坏死提供了新的研究方向     

丹仙康骨胶囊对培养成骨细胞影响的观察

目的：为了解补肾活血中药丹仙康骨胶囊对体外培养成骨细胞的作用。方法：应用透射电镜、MTT、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及骨钙素(BGP)含量放免测定法，观察丹仙康骨胶囊对成骨细胞超微结构、增殖与分化作用的影响。结果：丹仙康骨胶囊刺激(20mg／ml)的成骨细胞，ALP活性提高及骨钙素含量增多；透射电镜观察其细胞线粒体致密、游离核糖体增多、内质网丰富扩大增粗呈中等电子密度，而糖原溶解与脂肪空泡均较少。结论：丹仙康骨胶囊具有促进成骨细胞的代谢、增殖和分化的作用。     

激素性股骨头坏死病程中股骨头局部VEGF mRNA表达的变化及意义

目的：探讨激素性股骨头坏死病程中股骨头局部血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA）表达的变化及意义，方法：新西兰大白兔36只，随机均分成正常对照组和模型组，每组18只。模型组用内毒素加激素注射造成股骨头坏死。两组动物分别于造模后6、10、14周各处后6只行股骨头组织学检查和VEGFmRNA原位杂交观察。结果：光镜观察示模型组股骨头骨小梁变细、空骨陷窝增加，成骨细胞数量减少，这些表现随着时间的推移逐渐加重，软骨下血窦计数减少，各时段均低于正常组，差异有显著性意义（P＜0．05或P＜0．01）。原位杂交显示，模型组兔的股骨头6周时血管周围有VEGFmRNA阳性表达，10例时血管、成骨细胞的表达逐渐减少，14周时稍有所增加，结论：股骨头坏死后血管修复能力下降，血管内皮细胞的功能受到破坏影响，增加股骨头局部VEGF可能有助于股骨头坏死的修复。     

bFGF基因转染促进股骨头坏死修复的实验研究

目的 :为临床治疗股骨头及其它骨缺血性坏死探索新方法。方法 :将碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)真核表达质粒pCD rbFGF与胶原混合植入坏死的兔股骨头内 ,术后RT PCR及免疫组化方法检测bFGF表达情况 ,组织切片及组织形态学分析股骨头内血管生长及新骨形成情况。结果 :术后 2周RT PCR及免疫组化证实转染bFGF基因的股骨头内有bFGF表达。术后 2周股骨头内血管生长与对照组相比 ,术后 8周股骨头内新骨形成与对照组相比 ,差异均有非常显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :利用bFGF基因转染可刺激股骨头坏死内血管再生和新骨形成 ,为临床治疗骨缺血性坏死提供了新的研究方向     

体外冲击波治疗兔缺血性股骨头坏死过程中血管内皮生长因子的表达

目的 观察体外冲击波对兔股骨头缺血坏死模型中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 30只新西兰大白兔用甲基强的松龙和脂多糖诱导成股骨头缺血坏死模型,右侧为实验侧接受冲击波治疗,左侧为对照侧,治疗后1、2、4、8、12周取材行苏木素-伊红(HE)染色,VEGF免疫组织化学法检测蛋白表达分布,Western blot法定量蛋白.结果 实验侧软骨下骨组织VEGF的表达较对照组明显增加,在4周时达到高峰,并持续至8周,软骨下骨新生血管和成骨明显.结论 体外冲击波治疗能够促进缺血坏死股骨头中新生血管和软骨下骨的形成,VEGF的表达上调可能是其治疗机制.     

血管内皮细胞生长因子促进激素性股骨头坏死修复

[目的]探讨应用血管内皮细胞生长因子治疗激素性股骨头坏死的方法。[方法]新西兰兔30只，22只兔耳缘静脉注射马血清，臀肌注射醋酸泼尼松龙，制造激素性股骨头坏死动物模型。动物随机分为3组：A组：VEGF治疗组，B组：对照组，C组：正常对照组。治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体至股骨头。于治疗后5周，采用影像学方法观察股骨头结构变化，病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化。[结果]VEGF治疗组，X线及CT检查显示：模型股骨头结构变清晰，骨质破坏明显修复；HE染色结果：VEGF治疗组可见软骨细胞修复性增生，骨髓腔造血组织出现增生，栓塞的血管旁边出现新生的血管。[结论]VEGF治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复。     

论五联同步整合疗法治疗股骨头坏死的科学性

引起股骨头坏死的原因很多，如股骨颈骨折直接破坏骨的血供，导致股骨头缺血坏死，称为创伤性股骨头坏死。对没有创伤的股骨头坏死，如饮酒、服用激素及其他疾病而导致的股骨头坏死，人们存在着不同的看法，提出了很多理论，如血栓栓塞理论、骨内压增高理论、小动脉阻塞、静脉回流受阻、脉管炎破坏血管壁、脂肪代谢紊乱、骨髓内出血、血管内凝血等。但各种潜在病因均可通过一个共同的途径，即激活血管内凝血，导致骨内血管栓塞，引发骨缺血坏死。还有学者认为：股骨头坏死是由于应力集中导致股骨头内的超微结构发生变化，进而挤压血管而导致骨坏死。不论何种理论，一致认同股骨头坏死与股骨头的血供（即缺血）有着密切的关系，所谓缺血导致坏死，坏死反过来又导致缺血进一步加重，从而使股骨头的坏死面积逐步加大，最后出现塌陷、致残。股骨头发生坏死的同时，也伴随自行修复的产生，Tones发现再生血管的穿透能力仅为10～15mm，由于股骨头坏死修复过程中，坏死骨周围应力集中又致股骨头内骨折.     

人肝细胞生长因子基因转染成骨细胞移植治疗早期股骨头缺血性坏死的实验研究

目的 探讨人肝细胞生长因子(hHGF)基因转染成骨细胞移植促进股骨头的早期血管新生,增强坏死股骨头的局部骨修复能力.方法 36只新西兰兔随机分成对照组、移植转染hGHF基因组和未转染成骨细胞组.体外分离、培养胎兔颅骨中的成骨细胞,利用脂质体介导hHGF基因体外转染成骨细胞,同时建立兔激素性股骨头缺血坏死模型,然后将细胞通过髓芯减压后移植于坏死的股骨头内,组织形态学分析血管发生和骨修复情况.结果 胎兔颅骨中分离培养的成骨细胞表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶,hHGF基因转染成骨细胞体外及体内检测均有hHGF蛋白的表达.转染hHGF基因的成骨细胞组和成骨细胞组移植坏死的股骨头内的新生骨小梁与单纯髓芯减压组比较有差异性,同时基因转染组的新生血管数较对照组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hHGF基因转染可促进缺血股骨头的血管新生,并增加骨形成.显著促进坏死骨修复.     

The effects of glucocorticoids on angiogenesis in vitro]

Glucocorticoids administration presumably affects the vascular system and causes avascular necrosis of the femoral head. However, the mechanism by which this occurs is still unknown. In order to clarify the action of glucocorticoids on the vascular system, we investigated the effects of dexamethasone on an angiogenesis model in vitro. The angiogenesis model was obtained by co-culturing vessel fragments and myofibroblastic cells from rat epididymal fat pads. In this model, myofibroblastic cells induce capillary formation by producing an endothelial cell growth factor and collagen. Dexamethasone at physiological doses inhibited significantly capillary growth by suppressing the collagen synthesis by myofibroblastic cells. However, dexamethasone had no effect on endothelial cells. These results indicate that glucocorticoids are related to the pathogenesis of avascular necrosis of the femoral head by inhibiting the repair of the vascular system in vivo.     

股骨头缺血性坏死骨质含量与VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达的相关性研究

目的坏死骨的血管再生及骨修复能力与VEGF、bFGF与BMP-2多种生长因子关系密切,通过观察股骨颈骨折、创伤性及非创伤性股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的股骨头局部上述因子的表达变化,并与其组织病理学的骨质含量指标进行相关性分析,为进一步探讨ANFH的发病机制及临床针对不同病因进行个性化治疗提供实验依据。方法取59例人工全髋关节置换术患者自愿捐赠的股骨头标本进行观察。创伤性ANFH 22例(A组),Ficat分期:Ⅲ期13例,Ⅳ期9例。非创伤性ANFH 19例(B组),Ficat分期:Ⅲ期11例,Ⅳ期8例;其中激素性10例,酒精性7例,原因不明2例。新鲜股骨颈骨折18例(C组)。3组患者性别、年龄等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。采用双能X线骨密度仪测量股骨头负重区骨密度;大体观察组织病理学改变,HE染色光镜及扫描电镜下观察其病理变化,计算空骨陷窝百分比及骨小梁面积百分比,并采用原位杂交技术分别对其VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达进行检测。结果 A、B组骨密度均低于C组,B组低于A组,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B组股骨头形态不规则,光镜下见坏死区骨小梁稀疏、不完整,有大量空骨陷窝;健存区A组有较多纤维组织增生,B组髓腔内脂肪细胞增生、肥大。扫描电镜示A、B组大多骨细胞脂肪变性、坏死,骨基质内见脂肪细胞增生。C组均呈正常股骨头结构。A、B组空骨陷窝百分比均高于C组,骨小梁面积百分比均低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B组间仅空骨陷窝百分比差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组VEGF、BMP-2、bFGF mRNA阳性染色面积百分比及吸光度(A)值均明显低于C组(P<0.05);A组BMP-2、bFGF mRNA两指标均较B组高(P<0.05),但VEGF mRNA A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。上述各因子表达强度与骨密度、骨小梁面积百分比成正相关,而与空骨陷窝百分比成负相关。结论创伤性ANFH的股骨头修复能力强于非创伤性ANFH,创伤性与非创伤性ANFH股骨头局部VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表达均降低。     

Upregulation of VEGF in Subchondral Bone of Necrotic Femoral Heads in Rabbits with Use of Extracorporeal Shock Waves

Extracorporeal shock wave treatment appears to be effective in patients with avascular necrosis of the femoral head. However, the pathway of biological events whereby this is accomplished has not been fully elucidated. The purpose of this study was to investigate the effect of extracorporeal shock waves on vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in necrotic femoral heads of rabbits. VEGF expression was assessed by immunohistochemistry, quantitative real-time PCR, and Western blot analysis. The degree of angiogenesis was also assessed, as determined by the microvessel density (MVD), the assessment of which was based on CD31-expressing vessels. Bilateral avascular necrosis of femoral heads was induced with methylprednisolone and lipopolysaccharide in 30 New Zealand rabbits. The left limb (the study side) received shock wave therapy to the femoral head. The right limb (the control side) received no shock wave therapy. Biopsies of the femoral heads were performed at 1, 2, 4, 8, and 12 weeks. Western blot analysis and real-time PCR showed that shock wave therapy significantly increased VEGF protein and mRNA expression, respectively, in the subchondral bone of the treated necrotic femoral heads. Compared with the contralateral control without shock wave treatment, the VEGF mRNA expression levels increased to a peak at 2 weeks after the shock wave treatment and remained high for 8 weeks, then declined at 12 weeks, whereas the VEGF protein expression levels increased to a peak at 4 weeks after the shock wave treatment and remained high for 12 weeks. The immunostaining of VEGF was weak in the control group, and the immunoreactivity level in the shock-wave-treated group increased at 4 weeks and persisted for 12 weeks. The most intensive VEGF immunoreactivity was observed in the proliferative zone above the necrotic zone. At 4, 8, and 12 weeks after the shock wave treatment, MVD in subchondral bone from treated femoral heads was significantly higher than that in subchondral bone from untreated femoral heads. These data clearly show that extracorporeal shock waves can significantly upregulate the expression of VEGF. The upregulation of VEGF may play a role in inducing the ingrowth of neovascularization and in improving the blood supply to the femoral head.     

活血化瘀中药联合血管内皮生长因子基因转移促进股骨头坏死处新生血管形成的实验研究

目的:观察活血化瘀中药联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对促进股骨头缺血坏死处新生血管形成情况。方法:日本大耳兔40只,随机分为对照组、模型组、中药组、基因组和综合组。治疗8周后采用免疫组织化学方法观察股骨头滑膜VEGF阳性细胞率及数字减影血管造影股骨头血管数目改变情况。结果:模型组VEGF阳性细胞表达率减低,与对照组、基因组、综合组比较,差异有显著性意义(P<0.01),与中药组比较,有统计学差异(P<0.05),综合组VEGF阳性细胞表达率较高,与中药组及基因组比较,有统计学差异(P<0.05)。血管数目:在A区,各组与模型组比较,均无统计学差异;在B区,各组较模型组血管数目均有增加,对照组、基因组、综合组与模型组比较,有统计学差异(P<0.05)。综合组与基因组比较有统计学差异(P<0.05),中药组虽然血管数目较模型组多,但是无统计学意义。结论:活血化瘀中药及VEGF基因转移均可促进股骨头缺血坏死处局部新生血管形成和侧支循环的建立,尤以活血化瘀中药联合基因疗法效果为好,为临床应用活血化瘀中药联合基因疗法治疗股骨头缺血性坏死提供实验依据。     

染料木黄酮通过促进VEGF 表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制

目的观察染料木黄酮(Genistein Gen)通过促进VEGF表达改善去势大鼠骨质疏松的作用机制。方法建立绝经大鼠模型,6月龄雌性大鼠40只,随机分为对照组,假手术组、去势组、Gen干预6周组、Gen干预12周组。光镜下观察各组股骨头结构,分析大鼠股骨头空缺骨陷窝数的变化。ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF),观察VEGFmRNA原位杂交表达强度并分析。结果与对照组相比,去势组骨密度值下降,Tb.Th明显下降(P0.05)。干预10周组骨密度值明显升高,Tb.Th明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。糖尿病大鼠股骨头随病程发展骨小梁变稀薄。Gen对去卵巢大鼠血清中VEGF的表达无影响。VEGF mRNA在骨髓腔血管内皮细胞表达上升(P0.05)。结论 Gen可促进血管内皮细胞增殖,促进血管形成,改善去势大鼠骨质疏松抗骨质疏松倾向。