粉防己碱对培养乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

 目的：观察粉防己碱（Tet)对培养大鼠心肌细胞内游离钙（[Ca2+]i)的影响。方法：运用Ca2+指示剂Fura-2作 为细胞内钙离子的荧光探针，利用AR-CM-MIC阳离子測定系统，检測培养乳鼠心肌细胞内游离钙的浓度 [Ca2+]i。结果：在细胞外液钙浓度为1.8mmol/L时，心肌细胞静息[Ca2+]i为80.3士6.9mmol/L。在细胞外液钙浓度为1.8-5.4mmol/L时，粉防己碱（Tet)对细胞静息[Ca2+]i无明显影响。Tet1-100Mmol/L剂量依賴的抑 制高钾和H202引起的[Ca2+]i的升高，Tetl0μmol/L能对抗去甲肾上腺素引起的[Ca2+]i,升高。对搏动细胞，Tet 能抑制细胞外高钙引起的收缩期[Ca2+]i瞬间的变化，减慢搏动頻率。结论:Tet对高K+、去甲肾上腺素、H202及高 钙引起的[Ca2+]i,增高的抑制作用可能是其抗心肌缺血机理之一。     

白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法:异丙肾上腺素10μmol/L诱导心肌细胞肥大,实验分为:正常组、异丙肾上腺素组、白藜芦醇25μmol/L组、白藜芦醇50μmol/L组、N-[2-[N-(4-氯肉桂)-N-甲基氨基]苯基]-N-(2-羟乙基)-4-甲氧苯磺酰胺磷酸酯盐(KN93)0.2μmol/L组。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;鬼笔环肽染色测细胞大小;RT-PCR测细胞内ANP mRNA表达;Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化,电泳法测定钙调蛋白激酶(Ca MKⅡ)蛋白表达。结果:异丙肾上腺素使心肌细胞蛋白含量增加,细胞体积增大,ANP mRNA表达增加,[Ca2+]i瞬变增加,Ca MKⅡ蛋白表达增高。与异丙肾上腺素组相比,白藜芦醇50μmol/L和KN93 0.2μmol/L组蛋白含量降低,细胞体积减少,ANP mRNA表达降低,[Ca2+]i瞬变降低,Ca MKⅡ蛋白表达降低。结论:白藜芦醇可通过降低胞内[Ca2+]i瞬变和Ca MKⅡ表达抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大。     

人参皂苷Rg1对高糖诱导心肌肥大的保护作用

目的:探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导心肌细胞肥大的保护作用。方法:利用体外培养模型,以25 mmol/L葡萄糖诱导心肌细胞肥大,观察不同剂量人参皂苷Rg1(15、30、60 mol/L)对高糖诱导的心肌肥大的抑制作用。倒置荧光显微镜下观察细胞形态大小及肌丝改变,用考马斯亮蓝法测心肌细胞蛋白含量;用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;MTT法测细胞存活率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化。结果:与正常对照组相比,高糖组使心肌细胞总蛋白质含量增加,细胞体积增大,细胞存活率降低,胞内[Ca2+]i瞬间变化的峰值增大。与模型组相比,人参皂苷Rg1(30、60mol/L)可有效改善高糖诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞存活率增高,同时抑制高糖诱导的细胞内[Ca2+]i瞬间变化的峰值,且其对胞内Ca2+的抑制作用与L-型钙通道抑制剂维拉帕米相似。结论:人参皂苷Rg1对高糖诱导的心肌细胞肥大有一定的保护作用,其作用可能与抑制细胞内Ca2+有关。     

蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞游离钙离子的影响

目的 探讨蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子的影响及其作用机制.方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用钙敏荧光探针Fura-2/ AM负载染色后,采用阳离子测定系统,检测给药前后心肌细胞游离钙离子浓度[Ca2+]i及心肌细胞钙瞬变.结果 (1)静息状态下,心肌细胞[Ca2+]i为(83.3±11.7) nmol/L(x±s,n=6),终质量浓度分别为0.2、1、5μg/mL蜂胶黄酮对静息[Ca2+]i无影响.(2) KC1、Iso能明显升高[Ca2+]i(P ＜0.01),预孵蜂胶黄酮能抑制KCl及Iso引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01);(3)蜂胶黄酮能降低心肌细胞钙瞬变峰值,抑制钙瞬变频率,对KCl、异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙瞬变变化具有抑制作用.结论 蜂胶黄酮可抑制心肌细胞内钙超载,其作用机制可能与影响钙通道及细胞内钙释放有关.     

复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞凋亡的信号转导机制研究

目的 探讨复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的信号转导机制.方法 采用牛LEC进行原代和传代培养,用H2O2诱导LEC凋亡,同时加入终浓度为1/1000的复方水蛭滴眼液共同孵育.荧光分光光度法及放射免疫法检测LEC内游离钙([Ca2+]i)、cAMP和cGMP浓度变化.结果 H2O2可明显升高LEC内[Ca2+]l和cAMP的水平,显著降低cGMP水平;加入复方水蛭滴眼液后,细胞内[Ca2+]i和cAMP浓度较H2O2组显著降低,而cGMP水平显著升高.结论 复方水蛭滴眼液抑制H2O2诱导的LEC凋亡的机制可能是通过降低LEC内[Ca2+],和cAMP的水平,阻断或抑制Ca2+-钙凋蛋白依赖性蛋白激酶途径、Ca2+-蛋白激酶C途径以及cAMP-蛋白激酶A(PKA)信号转导途径抑制LEC凋亡;同时通过升高LEC内cGMP浓度、激活cGMP-蛋白激酶C(PKC)信号转导途径抑制LEC凋亡.所以,复方水蛭滴眼液是通过多条途径抑制H2O2诱导的LEC凋亡.     

17β-雌二醇对巨噬细胞内Ca~(2+)的影响

目的观察17β-雌二醇(E2)对巨噬细胞胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及可能的作用途径。方法小鼠腹腔巨噬细胞用F lou-3/AM负载,用激光共聚焦显微镜检测,[Ca2+]i以细胞内荧光强度表示。结果 100 nmol/L的17β-雌二醇能使小鼠腹腔巨噬细胞的[Ca2+]i明显提高(提高率39.8%)。巨噬细胞在无钙的条件下,加入E2后[Ca2+]i升高10.6%,在补充入Ca2+后,[Ca2+]i更有明显升高。用维拉帕米、肝素和普鲁卡因预先处理后,E2诱导的[Ca2+]i升高分别被抑制了52.8%,16.6%和36.7%。结论 E2诱导的腹腔巨噬细胞胞浆游离钙的升高是外钙内流和内钙释放共同作用的结果,并且这种作用与L-型钙通道、IP3受体和ryanod ine受体关系密切。     

复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨复方当归注射液对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外原代培养心肌细胞分为正常组、模型组及复方当归注射液干预组(高、中、低剂量),每组8个样本;采用过氧化氢(H2O2)制备心肌细胞凋亡模型;运用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率与细胞内钙离子浓度([Ca2+]i);测定细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:模型组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著高于正常组(P<0.01),SOD活性则显著降低(P<0.01);复方当归注射液干预组的细胞凋亡率、[Ca2+]i及LDH、MDA水平显著低于模型组(P<0.01),SOD活性则显著提高(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:复方当归注射液对H2O2所致心肌细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能与其有效清除氧自由基及抑制细胞内钙超载相关。     

钙调蛋白磷酸酶通路在白藜芦醇抑制异丙肾上腺素诱导心肌肥大作用机制研究

目的:探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用,及其钙调蛋白磷酸酶(Ca N)通路的作用。方法:利用体外培养模型,以10μmol/L ISO诱导心肌细胞肥大,观察白藜芦醇的作用,并用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;鬼笔环肽染色测细胞骨架;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化,用电泳法测定Ca N的表达。:结果与正常组相比,ISO使心肌细胞蛋白含量增加43.5%,细胞体积增大73.4%,[Ca2+]i瞬变增加,Ca N表达增高。与ISO组相比,白藜芦醇(25,50μmol/L)组蛋白含量降低25.8%和26.9%,细胞体积减少15.0%和27.8%,[Ca2+]i瞬变降低,Ca N蛋白表达降低。结论:白藜芦醇可通过降低胞内[Ca2+]i瞬变和Ca N表达抑制ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大。     

双龙丸对过氧化氢所致内皮细胞胞浆钙离子浓度变化的调节作用

本文建立了应用荧光指示剂Fura-2/AM测定培养的牛主动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)的方法,分别测定在正常状态下、单独加入过氧化氢(H2O2)时及同时加入H2O2和双龙丸药物血清(阳性与阴性对照组分别为心痛定及生理盐水的药物血清)时培养的牛主动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度([Ca2+]i),探讨H2O2作用下[Ca2+]i的变化及双龙丸对这一变化的调节作用。结果:测得正常对照组内皮细胞的[Ca2+]i为96.58±14.20nmol/L,加入H2O2(0.05mmol/L)可使其[Ca2+]i增加到294.41±42.73nmol/L;双龙丸能部分拮抗H2O2升高[Ca2+]i,其高剂量组作用强于低剂量组,但均不及心痛定。实验结果证实了双龙丸能调节Ca2+代谢,具有一定的钙拮抗作用。     

五味子乙素对晶状体上皮细胞内Ca2+cAMP cGMP的影响

目的研究旨在探讨五味子乙素对氧化损伤的晶状体上皮细胞内Ca2+、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制.方法采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞(LEC)原代和传代培养,以含有过氧化氢(H2O2)的培养液孵育LEC复制氧化损伤模型,并加入五味子乙素单体共同孵育.分别采用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色测定法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性变化,采用荧光分光光度计测定不同时间细胞内钙离子浓度[Ca2+]i以及放射免疫分析法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量变化.结果①H2O2组可引起LEC吸光度值(A)明显下降(P＜0.01),五味子乙素能明显增强氧化损伤的LEC活性,并呈剂量-效应关系和时间-效应关系.②氧化损伤的LEC[Ca2+]i升高(P＜0.01);五味子乙素可以降低由H2O2引起的细胞[Ca2+]i的升高,并呈时间-效应关系.③H2O2组cAMP浓度升高;cGMP浓度下降(P＜0.01);五味子乙素使cAMP水平下调,cGMP水平上升(P＜0.01),并呈时间-效应关系.结论五味子乙素可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP信号系统、cGMP信号系统及其相互作用来调节生物学效应.     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 + 40mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L^-1和 30 μmol·L^-1对BayK8644和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P>0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用。     

附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的:研究附子含药血清对大鼠心肌细胞L型钙通道的影响,探讨附子抗缓慢型心律失常的作用机制。方法:附子水煎后水浴浓缩成1∶1,给予大鼠灌胃,每次15.6 g·kg-1,7 d后制备含药血清;细胞密度20个/m L,药物血清体积分数为10%。作用时间:从加药物血清20 min后开始记录,到1 h逐渐结束,各组样本数均为8;采用急性酶解法获得大鼠的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录L型钙通道电流,观察附子含药血清对单个心室肌细胞L型钙通道电流(Ica-t)幅度及动力学特性的影响。结果:10%空白血清组和10%附子含药血清组给药后的平均峰电流密度和平均激活率分别为:(-3.59±1.06)p A/p F(单位细胞膜面积的电流大小),12.87%(n=8,P0.05)和(-4.01±0.88)p A/p F,51.17%(n=8,P0.01);附子含药血清激活曲线用药前和用药后的V1/2和K(稳态半数激活电压和斜率因子)分别为(-12.66±0.44)m V和(5.70±0.35),(-14.71±0.88)m V和(5.68±0.72),(P0.05,n=8);附子含药血清失活曲线用药前和用药后的V1/2和K分别为(-28.10±0.20)m V和(6.31±0.18),(-37.55±0.11)m V和(5.94±0.09),(P0.05,n=8);附子含药血清恢复曲线用药前和用药后的τ为(171.01±11.13)ms和(160.15±4.97)ms(n=8),差异无统计学意义;附子含药血清可增加L型钙通道电流密度、激活曲线左移,失活曲线右移,对恢复曲线没有影响。结论:附子含药血清能增加心室肌细胞钙通道电流。     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 4 0mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L- 1和 30 μmol·L- 1对BayK86 4 4和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P >0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用     

三七总皂苷对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制.方法:应用激光共聚焦显微荧光技术探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度[(FI-FI0)/FI0 (%);FI0:对照;FI:给药]表示.结果:(1)PNS ( 40、80、120 mg/L )可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加.(2)预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可取消PNS (80 mg/L) 在模拟缺血液中的作用.(3)PNS (80 mg/L)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加.结论:PNS可通过抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网内钙释放从而降低[Ca2+]i.     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的：观察参附注射液对大鼠心室肌细胞L型钙通道的作用。方法：采用急性酶解法获得单个心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录钙电流。结果：参附注射液浓度依赖性阻断L型钙通道电流,其IC50为原液2.5%稀释。参附注射液（0.3%,3%）能够上移I-U曲线,但不改变峰电位和反转电位;3%参附注射液对L型钙通道激活曲线失活曲线无明显影响,但可使通道电流从失活中恢复的时间明显延长,时间常数由给药前的82ms增至给药后的139ms。结论：参附注射液对心肌细胞L型钙通道电流有抑制作用。     

滇黄芩总黄酮对豚鼠心肌细胞电压依赖性钠通道电流的影响

目的:研究滇黄芩总黄酮(totla flavonoid)对豚鼠心肌组织电压门控性钠通道的影响。方法:成年豚鼠,肝素抗凝后,腹腔麻醉,断头处死,迅速取其心脏,进行Langendorff灌流,先用无钙台式液灌流10 min,再以Ⅰ型胶原酶溶液灌流心脏,待心脏基本变软后剪取心室部分,制备单个心室肌细胞。分离出的豚鼠心肌单细胞,用全细胞电压钳技术记录电压依赖性钠电流进行研究。结果:滇黄芩总黄酮能可逆性抑制钠电流,其半数抑制浓度(IC50)为106 mg.L-1(95%的可信限是92～112 mg.L-1)。滇黄芩总黄酮并不影响钠通道激活开放的刺激电位阈值、最大激活电位值和反转电位值,但能使可激活开放的钠通道明显减少,钠离子电流明显衰减,可引出的钠电流在-40 mV处较正常组减少45.6%。细胞外给予滇黄芩总黄酮不影响钠通道激活曲线:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的半激活电压(V1/2)分别为(-50.4±1.7)mV和(-50.1±3.1)mV(n=6差异无统计学意义)。细胞外给予滇黄芩总黄酮可影响钠通道失活曲线,106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮对电压依赖性稳态失活钠电流会引起一个大约12 mV的负向漂移,延缓失活钠通道的恢复:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的V1/2分别为(-69.4±1.6)mV和(-79.3±3.2)mV(n=7,P<0.05),两者间的差异有显著性意义,斜率分别为(-8.2±0.9)mV和(7.1±0.7)mV。细胞外给予滇黄芩总黄酮也可影响失活钠通道的恢复,使钠通道的复活时间常数显著延长:对照组和106mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的时间常数分别为(15.6±6.3),(29.8±14.8)ms(n=6,P<0.05),差异有显著性意义。结论:滇黄芩总黄酮可阻滞豚鼠心肌细胞钠通道,是稳定的豚鼠心肌组织钠通道阻断剂。     

炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流及其动力学特征的影响

目的：研究炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流（ICa-L）及其动力学特征的影响。方法：选取24只大鼠随机分为空白对照组和炙甘草汤低剂量组（1.125 g/mL）、中剂量组（2.25 g/mL）、高剂量组（4.5 g/mL）,每组6只。3组药物组大鼠分别按各自浓度给予相同体积的炙甘草汤药液灌胃,对照组大鼠予以等体积生理盐水灌胃。给药1周后利用酶解法对4组大鼠心房肌细胞进行急性分离,用全细胞膜片钳技术记录4组心房肌细胞ICa-L并比较I-V曲线,选取中剂量组与对照组的心房肌细胞比较ICa-L通道的动力学特征。结果：与对照组比较,炙甘草汤低、中、高剂量组的大鼠心房肌细胞ICa-L均发生不同程度的抑制效果,I-V曲线均上移。观察比较中剂量药物组与对照组的ICa-L通道动力学特征,发现2组细胞的激活曲线和半数激活电压,差异无统计学意义（P>0.05）,但中剂量药物组细胞的稳态失活曲线发生向右偏移,半数失活电压V1/2升高（P<0.05）,失活后恢复曲线向下偏移,时间常数（τ）延长（P<0.01）。结论：炙甘草汤能够抑制大鼠心房肌细胞L型钙电流,减慢心房细胞钙通道失活速度,延长失活后恢复的时间,从而起到减慢心率的作用,这可能是炙甘草汤临床上治疗房性心律失常的作用机制。     

Effects of Total Flavones from Acanthopanax senticosus on L‐type Calcium Channels,Calcium Transient and Contractility in Rat Ventricular Myocytes

Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim.) Harms (AS), a traditional herbal medicine, has been widely used to treat ischemic heart disease. However, the underlying cellular mechanisms of its benefits to cardiac function remain unclear. The present study examined the effects of total flavones from AS (TFAS) on L‐type Ca²⁺ channel currents (I_Ca‐L) using the whole cell patch‐clamp technique and on intracellular calcium ([Ca²⁺]_i) handling and cell contractility in rat ventricular myocytes with the aid of a video‐based edge‐detection system. Exposure to TFAS resulted in a concentration‐ and voltage‐dependent blockade of I_Ca‐L, with the half‐maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of 283.12 µg/mL and the maximal inhibitory effect of 36.49 ± 1.95%. Moreover, TFAS not only increased the maximum current in the current–voltage relationship but also shifted the activation and inactivation curves of I_Ca‐L toward the hyperpolarizing direction. Meanwhile, TFAS significantly reduced amplitudes of myocyte shortening and [Ca²⁺]_i with an increase in the time to 10% of the peak (Tp) and a decrease in the time to 10% of the baseline (Tr). Thus, the cardioprotective effects of TFAS may be attributed mainly to the attenuation of [Ca²⁺]_i through the direct inhibition of I_Ca‐L in rat ventricular myocytes and consequent negative effect on myocardial contractility. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.