鞣花酸抗肝癌作用的相关分子

目的 探索五倍子提取物鞣花酸抗肝癌生物学活性的相关分子.方法 鞣花酸体外孵育肝癌HepG-2细胞,采用细胞形态学、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和Hoechst33258染色分析细胞的增殖与凋亡;Westera-blotting分析基因表达.结果 鞣花酸剂量依赖性抑制HepG-2细胞增殖,诱导其凋亡;鞣花酸抑制肿瘤相关基因CtBP、Stathmin和COX-2的表达,随鞣花酸浓度升高,抑制作用增强.结论 鞣花酸通过抑制CtBP、Stathmin和COX-2的表达发挥抗肝癌的生物学作用.     

莽吉柿提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的研究莽吉柿提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法使用不同浓度0.75、1.25、2.5、5μg/mL的莽吉柿提取物处理体外培养Hela细胞,CCK-8检测试剂盒检测其对宫颈癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活性氧(ROS)表达水平;Western Blot检测磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(BAX)表达水平。结果莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),IC50为1.63μg/mL。流式细胞术检测发现,莽吉柿提取物处理组(2.5μg/mL和5μg/mL)的Hela细胞的凋亡率显著高于对照组[(4.19±0.24)%、(14.03±0.21)%比(3.30±0.10)%,P均0.05]。莽吉柿提取物处理组的ROS含量显著高于对照组,为对照组的3.05倍,P0.05。荧光显微镜结果显示莽吉柿提取物处理组的ROS荧光强度显著升高。Western Blot检测发现,莽吉柿提取物处理组(2.5μg/mL和5μg/mL)宫颈癌Hela细胞p-ERK1/2蛋白表达量显著低于对照组,分别为对照组的54%和25%;Bcl-2蛋白表达量显著低于对照组,分别为对照组的76%和67%;BAX蛋白表达量显著高于对照组,分别为对照组的1.11倍和1.45倍(P均0.05)。结论莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的影响可能是通过诱导细胞氧化损伤,调控肿瘤细胞MAPK/ERK1/2信号通路和凋亡相关蛋白,进而诱导细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖。     

Bcl-2抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖和凋亡的影响

目的研究B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖和凋亡的影响。方法采用细胞计数试剂盒8检测不同浓度下Bcl-2抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖的影响; Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测不同浓度ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F凋亡的影响;应用免疫印迹法检测抑制剂ABT-263对Bcl-2、Bcl-xL、髓细胞白血病1(Mcl-1)及佛波醇-12-肉豆蔻酸-13-乙酸酯诱导的蛋白质1(又称Noxa)等蛋白表达水平的影响。结果 Bcl-2抑制剂ABT-263处理细胞后,0. 125、0. 25、0. 5、1、2、4、8μmol/L组吸光值低于0μmol/L组(0. 696±0. 020,0. 527±0. 015,0. 465±0. 022,0. 323±0. 010,0. 133±0. 004,0. 057±0. 002,0. 028±0. 002比0. 856±0. 017)(P <0. 05)。在0. 5μmol/L浓度下诱导约6%鼻咽癌细胞的凋亡,其诱导凋亡的机制可能主要是通过正调控促凋亡蛋白Noxa完成的,在1μmol/L ABT-263的作用下能够引起鼻咽癌细胞中Noxa近7倍左右的升高。结论 ABT-263可以通过上调促凋亡蛋白Noxa促进鼻咽癌细胞的凋亡,具有应用于鼻咽癌治疗的潜力。     

莽吉柿提取物通过调控MAPK/ERK信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡的作用研究

目的: 研究莽吉柿(Garcinia mangostanaSL.)提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:使用0μg/ml、0.75μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml的莽吉柿提取物体外培养Hela细胞,CCK-8法检测其对宫颈癌细胞增殖的影响;使用不同浓度莽吉柿提取物体外培养Hela细胞,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活性氧(Cell reactive oxygen, ROS)表达水平;不同浓度莽吉柿提取物体体外培养Hela细胞,Western Blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、p-ERK的表达。 结果: 莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05),IC50为1.63μg/ml。流式细胞术检测发现, 0、2.5μg/ml、5μg/ml的莽吉柿提取物处理后Hela细胞的凋亡率分别为(3.30 ± 0.10)%,(4.19 ± 0.24)%,(14.03±0.21)%,具有显著性差异(p＜0.05)。流式细胞术检测发现0、5μg/ml的莽吉柿提取物处理后,细胞活性氧(ROS)水平显著提高(P<0.05),mean值分别为(129796 ± 1336)和(481665 ± 9804)。荧光显微镜结果显示其ROS荧光水平显著提高。Western Blot检测发现宫颈癌Hela细胞中Bcl-2蛋白显著降低、BAX蛋白显著升高、p-ERK蛋白显著降低(P均<0.05)。结论: 莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的影响可能是通过诱导细胞氧化损伤,调控肿瘤细胞MAPK/ERK信号通路,调控凋亡相关蛋白,进而诱导细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖。     

NS398通过环氧化酶-2依赖途径诱导肾癌细胞786-O凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响及其机制。方法同浓度NS398作用体外培养786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,RT-PCR法检测COX-2 mRNA表达;免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法和免疫细胞化学检测显示NS398作用后能降低COX-2 mRNA和蛋白表达。ELISA检测显示NS398作用后PGE2释放水平呈下调趋势;流式细胞仪检测表明,30、180μmol/L NS398处理组凋亡率分别为(14.3±1.4)%、(31.5±2.1)%,与对照组凋亡率(2.1±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞的凋亡作用。方法:PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株48h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态;PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株24h后,采用流式细胞仪分析细胞早期凋亡。结果:25,50和75μmol/L PGG孵育5-8F细胞48h后,贴壁活细胞减少,漂浮死亡细胞增多。PGG孵育24h后,细胞早期凋亡率分别为(4.00±0.56)%、(6.97±0.25)%和(10.23±0.71)%,与对照组(1.53±0.15)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PGG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的生物学作用。     

新合成的紫草萘醌类衍生物TEISHNZ的细胞毒作用和诱导人鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨一种新的人工半合成紫草萘醌类衍生物(2,3,11-三乙巯基-6-异己萘茜,简称TE ISHNZ)。在体外对8种人癌细胞的细胞毒作用及诱导人鼻咽癌细胞(CNE2)细胞凋亡的作用。方法应用噻唑蓝(M TT)比色法检测TE ISHNZ对8种人癌细胞的增殖抑制作用,以半数抑制浓度(IC50)为指标进行评价。应用流式细胞术(FCM)检测TE ISHNZ诱导CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果TE ISHNZ在0.78~25μg/mL质量浓度下,对8种人癌细胞均有明显的增殖抑制作用;对CNE2细胞、人肺腺癌细胞(GLC-82)、人肝癌细胞(B e l-7402)、人白血病细胞(K 562)、人宫颈癌细胞(H eL a)、人胃腺癌细胞(M GC-803)、人乳腺癌细胞(M DA 453)和人口腔癌细胞(KB)的IC50分别为3.96、2.48、5.13、1.92、4.54、5.88、1.35和3.44μg/mL,IC50值均在6μg/mL以下。FCM检测结果显示,以TE ISHNZ(1.56、3.12和6.25μg/mL)处理CNE2细胞48 h后,在FCM的DNA直方图上可见亚二倍体(亚G1峰);细胞凋亡率依次为3.9%、10.8%和28.1%,而对照组的细胞凋亡率为2.2%;TE ISHNZ对CNE2细胞的诱导凋亡作用呈浓度依赖性;细胞周期分析显示CNE2细胞被阻滞于G2/M期。用6.25μg/mL TE ISHNZ处理CNE2细胞12、24、36和48 h后亦可见细胞凋亡,细胞凋亡率分别为4.5%、27.2%、48.2%和24.9%,而对照组的凋亡率为1.0%。CNE2细胞被TE ISHNZ处理的前36 h,其凋亡率随着作用时间的延长而增加,被阻于S和G2/M期;作用48 h时,被阻于G2/M期。结论TE ISHNZ对多种人癌细胞有明显的细胞毒作用,且能诱导CNE2细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期和(或)G2/M期。     

HPLC法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量

目的 建立石榴皮提取物中鞣花酸含量的HPLC测定方法.方法 色谱条件:色谱柱为Agilent TC-C18(2)(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙酸乙酯∶磷酸(0.01 mol/L)∶磷酸二氢钾(0.01 mol/L)∶甲醇(0.05∶20∶20∶60);流速1 mL/min;检测波长为254 nm;柱温25 ℃.结果鞣花酸在5.36～171.40 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.82%,RSD为1.41% (n=9).结论 HPLC法简便,准确,重复性好,可用于石榴皮提取物中鞣花酸的含量测定.     

黑升麻提取物对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究黑升麻提取物对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响。方法将肝癌HepG2细胞依据随机数字法分为黑升麻药物0、10、20、30、40、50μg/mL组,采用细胞计数试剂盒8检测实验组不同浓度(10、20、30、40、50μg/mL)黑升麻处理后HepG2细胞的增殖抑制率。流式细胞仪、Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染检测对照组(黑升麻药物浓度0μg/mL)及不同浓度(10、20、32μg/mL)黑升麻处理后实验组的HepG2凋亡细胞比率; Western blot检测凋亡相关胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达。结果 0、10、20、30、40、50μg/mL组抑制率分别为0%、(12. 51±9. 31)%、(27. 85±1. 51)%、(53. 20±5. 55)%、(67. 42±3. 54)%、(81. 43±0. 73)%,各组比较差异有统计学意义(P <0. 05),随着各组给药浓度的增加抑制率逐渐升高(P <0. 05)。黑升麻IC50为32. 010μg/mL。与0μg/mL组比较,10、20、32μg/mL组凋亡逐渐增加(P <0. 05),Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-8蛋白表达上调(P <0. 05)。结论黑升麻提取物可有效抑制肝癌HepG2细胞系增殖,促进细胞凋亡,该作用至少部分依赖于外源性死亡受体途径。     

HPLC法测定新疆不同产地石榴皮中鞣花酸含量

目的建立测定新疆不同产地石榴皮中鞣花酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法检测石榴皮中鞣花酸的含量:ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇∶乙酸乙酯∶磷酸二氢钾/磷酸(0.05mol/L)(32∶2∶66)为流动相;流速为0.8mL/min,检测波长254nm,柱温30℃。结果石榴皮中鞣花酸的线性范围为1.018 8～1 273.44μg/mL(r=0.999 9),平均回收率(n=9)为101.0%,RSD为1.15%。经测定喀什市酸石榴皮中鞣花酸含量最高。结论 HPLC法简便、准确、重复性好,可用于石榴皮中鞣花酸含量的测定,为药材基原选择与石榴皮的质量控制提供了一定的依据。