银染色法检测短串联重复序列

短串联重复序列（ＳＴＲ）又称微卫星ＤＮＡ，它是由２～７个碱基对作为核心单位串联重复形成的一类ＤＮＡ序列。ＳＴＲ出现的数目和频率的变化构成了ＳＴＲ遗传多态性。ＬＤＬ受体基因第１８外显子３′末端非翻译区上一段短串联重复序列（ｄＴＡ）ｎ在人类存在多态性［１］。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），结合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）建立了检测相差２ｂｐＤＮＡ碱基对的银染方法。一、材料和方法１－材料：ＰＣＲ缓冲液，Ｔａｑ酶，ｄＮＴＰ，引物，ＰＣＲ仪，电泳仪，垂直电泳槽及电泳板。银染试剂为国产分析纯，试剂均用去离…     

应用PCR扩增GRG受体基因第二外显子的实验条件研究

为了研究ＰＣＲ扩增的最适条件，以ＧＲＧ受体第二外显子基因为对象，观察了影响ＰＣＲ反应的因素。研究结果表明：最佳变性温度为９２℃与９４℃；最适的退火温度为５８℃；最适的引物浓度为０．６￣０．８μｍｏｌ；以１．０Ｕ酶量结果最满意；最适ｄＮＴＰ浓度为１００￣１５０μｍｏｌ／Ｌ；最适的镁离子浓度为２．０ｍｍｏｌ／Ｌ；最佳循环次数为３５个循环；该文可为希望引入ＰＣＲ作为诊断实验的实验室提供有用的信息。     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的蛋白C及FⅤLeiden突变的初步调查

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤＬｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏感比值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率有显著差异（Ｐ＜０．０５）。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检查了１４１例排除ＤＶＴ的个体和３５例ＤＶＴ患者的Ｌｅｉｄｅｎ突变情况，发现所有样本的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ均显示了同样的代表野生型基因型的电泳条带，未发现Ｌｅｉｄｅｎ型突变。ＡＰＣＲ试验阳性的２例ＤＶＴ患者之多聚酶链反应（ＰＣＲ）产物测序结果进一步证实了实验中ＰＣＲ反应和ＭｎｌＩ酶切反应的特异性。结果说明ＡＰＣＲ现象可能是中国人群ＤＶＴ发病的一个危险因素；但我们与西方调查者实验结果的差别，说明在不同种族中，ＤＶＴ的致病机制可能不同     

多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的白蛋C及FV Leiden突变的初…

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤ Ｌｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏经值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率     

静脉及心脑血栓性疾病抗活化的蛋白C的研究

为探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）及其基因型在中国人血栓性疾病的发病情况，用活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）以加和不加活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）的比值（ＡＰＣ－ＳＲ）检测ＡＰＣＲ；用多聚酶链反应扩增因子Ⅴ第１０外显子（包含５０６位密码子）的２２０ｂｐ片段，再用限制性内切酶ＭｎｌⅠ消化检测其基因型。共检测了４６例静脉血栓和下肢动脉血栓，５８例心、脑梗塞，７４例冠心病及４０名正常人的ＡＰＣＲ及其基因型。结果表明血栓性疾病患者与正常人的ＡＰＣＲ无明显差异，亦没有发现与ＡＰＣＲ相关的基因型，提示ＡＰＣＲ很可能不是中国人血栓性疾病常见相关病因     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

PCR结果判定中若干现象的解释及对策

ＰＣＲ结果判定中若干现象的解释及对策荣玲玲赫翠珍赵敬勇殷红（首都医科大学实验中心分子生物学室，北京１０００５４）ＰＣＲ有敏感而特异的特点，已被越来越多地应用于各种病原体所致疾病的诊断。但ＰＣＲ受到许多因素的影响，电泳会出现各种各样的现象，如何解释并正...     

彩色多普勒超声对巩膜扣带术后球后血流动力学的研究

为研究巩膜扣带术后后睫状动脉（ＰＣＡ）、视网膜中央动脉（ＣＲＡ）球后血流动力学的改变，不同术式对眼部血流动力学的影响及ＰＣＡ、ＣＲＡ球后血流动力学改变的相关因素分析，对５０例孔源性视网膜脱离患者术前、术后不同时期行彩色超声多普勒检测。结果：巩膜扣带术后ＰＣＡ、ＣＲＡ的收缩期最大血流速度（Ｖｍａｘ）、舒张期末最小血流速度（Ｖｍｉｎ）较对照组下降，而阻力指数（ＲＩ）较对照组增加，经配对ｔ检验有显著性差异（Ｐ值＜０．０５）。环扎＋外加压可明显影响ＰＣＡ、ＣＲＡ的血流量，而单纯外加压术则无明显影响。ＰＣＡ、ＣＲＡ的Ｖｍａｘ改变与环扎带缩短率呈负相关。认为巩膜环扎术可导致眼血流量下降。     

干血纸片直接进行DNA扩增

本实验探讨了干血纸片直接用于ＰＣＲ扩增方法的建立及其反应条件的优化，使其在临床及实验研究中具有更广泛的应用前景。１材料与方法１．１材料１．１．１干血纸片的制备取耳垂血、手指血或直接抽取的静脉血滴于国产新华滤纸上，室温下自然晾干后，－２０℃可保存一月以上。１．１．２主要试剂ＴａｑＤＮＡ聚合酶购自加拿大Ｂｉｏｓｔａｒ公司，ｄＮＴＰ购自Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司，ＤＮＡ分子质量标准ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）ＨａｅⅢ购自华美生物工程公司。１． １． ３ ＰＣＲ引物根据文献［１］，设计人胰岛素受体基因第 １７外显子引…     

半巢式PCR检测淋巴细胞白血病微小残留病

半巢式ＰＣＲ检测淋巴细胞白血病微小残留病徐兵，周淑芸，孙竞免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排可作为Ｂ－淋巴细胞白血病的克隆标志，一次ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ重排敏感性可达１０￣（－４）～１０￣（－５）水平，我们采用更灵敏的半巢式多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测了...     

RID和PCR诊断结核病的比较研究

ＲＩＤ和ＰＣＲ诊断结核病的比较研究邓松华，沈际佳，张林杰（安徽医科大学，合肥２３００００）单向免疫扩散法（ＲＩＤ）检测活动性结核标志物诊断结核病取得了比较满意的结果［１，２］。为验证ＲＩＤ的敏感性与特异性，我们将ＲＩＤ法与多聚酶链反应技术（ＰＣＲ）用...     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

定量PCR技术

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是模拟ＤＮＡ体内复制过程,在体外将ＤＮＡ片段加人工扩增的技术,有许多因素都可以影响ＰＣＲ的扩增效率,导致常规ＰＣＲ的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量ＰＣＲ技术,从克服各种因素对ＰＣＲ扩增的干扰,从而提高ＰＣＲ的特异性及准确性,本文对定量ＰＣＲ技术进行了简要的综述。     

套式聚合酶链反应单管法检测单纯疱疹病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法、套式ＰＣＲ双管法及套式ＰＣＲ单管法分别检测１３０份散发性脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的ＤＮＡ，阳性率依次为１８．５％（２４／１３０）、２９．２％（３８／１３０）、２９．２％（３８／１３０）；６０份非中枢神经系统感染者ＣＳＦ标本的检测阳性率分别为０、３．３％（２／６０）、０。结果显示：套式ＰＣＲ虽然提高了检测的敏感性，但假阳性也大大增加。改良的套式ＰＣＲ单管法则大大减少了污染机会，使操作更方便、省时，适于临床推广应用。     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

目的建立特异、灵敏的聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌（ＨＰ）的方法。方法用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养、单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交（ＰＣＲ－Ｓｂ）检测经胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部炎症、十二指肠溃疡的胃活检组织、唾液和粪便标本中的ＨＰ。结果检测胃活检标本７９份，ＰＣＲ－Ｓｂ阳性率为９９％，单纯ＰＣＲ及细菌培养的阳性率分别为９５％和６５％，ＰＣＲ－Ｓｂ的灵敏度达到１ｆｇ。唾液标本的检测阳性率为３５％，粪便标本的检测结果均为阴性。结论测序证实了ＰＣＲ扩增的正确性。ＰＣＲ结合长臂光敏生物素探针杂交是特异、灵敏、简便和对人体无害的检测ＨＰ的方法。     

套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体

目的建立一种敏感、特异、快速诊断女性生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的方法。方法应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术和直接荧光（ＤＦＡ）法检测女性生殖道沙眼衣原体。对两者结果不符的标本用细胞培养法验证。结果３００份受检标本，ＤＦＡ法阳性７１份，阴性２２９份，ＮＰＣＲ法阳性９０份，阴性２１０份；其中ＮＰＣＲ和ＤＦＡ均为阳性者６８份，另有２２份ＮＰＣＲ阳性，而ＤＦＡ为阴性，再经细胞培养证实系阳性。但另有３份ＤＦＡ阳性，ＮＰＣＲ却为阴性，再经细胞培养证实亦属阳性。综合ＮＰＣＲ与ＤＦＡ并对照细胞培养，结果显示ＮＰＣＲ的敏感性为９６７％（９０／９３），特异性为１００％（２０７／２０７），ＤＦＡ的敏感性为７６３％（７１／９３），特异性为１００％（２０７／２０７）。结论ＮＰＣＲ技术与ＤＦＡ法检测ＣＴ感染，均具有高度特异性、操作简便等优势；ＮＰＣＲ的敏感性优于ＤＦＡ法；ＤＦＡ法具有费用低、重复好的特点。两法结合起来检测ＣＴ，将获得理想的检测效果。     

血栓栓塞症患者抗活化的蛋白C的研究

目的 探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）现象在中国人血栓栓塞症发病中的作用。方法 用ＡＰＴＴ法检测ＡＰＣＲ敏感比率（ＡＰＣＲ－ＳＲ）来研究４０例深静脉血栓症（ＤＶＴ）患者、５２例脑血栓形成患者和１００例正常人的ＡＰＣＲ发生率;用多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）来检测ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变;用免疫火箭电泳测血浆总蛋白Ｓ和游离蛋白Ｓ。结果 正常人的正常化ＡＰＣＲ－ＳＲ（ｎ－ＡＰＣＲ     

定量PCR技术的研究进展

定量ＰＣＲ技术的研究进展陈建魁综述牟兆钦审校（军事医学科学院附属医院，北京１０００３９）关键词定量ＰＣＲ核酸检测技术聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立以来，定性技术不断改进和完善，可以达到检测单个靶序列的水平。但实际工作中常需要定量检测标本中核酸，而不是...     

聚合酶链反应在轮状病毒感染诊断和研究中的应用

聚合酶链反应在轮状病毒感染诊断和研究中的应用于化泓（南昌大学食品科学与工程系，南昌３３００４７）本文主要介绍聚合酶链反应（ＰＣＲ）的特点及其在轮状病毒（ＨＲＶ）感染诊断和研究中的应用情况。１ＰＣＲ的特点１．１敏感性高据Ｇｅｎｔｓｃｈ［１］报道，ＰＣＲ...