肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：观察肾炎康复片对转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组（100 mg·L^-1）、中剂量组（200 mg·L^-1）、高剂量组（500 mg·L^-1）。分别利用甲基噻唑基四唑法（metyl thiazolyl tetronzolium,MTT）观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果：TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高（P〈0.05）;TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组（P〈0.05）。结论：肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质（ECM）的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

阿魏酸哌嗪对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达及细胞外基质合成的影响

目的 探讨阿魏酸哌嗪(PF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质成分表达的影响及其意义.方法 将体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为正常对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1加50、100、200 ng/mL PF干预组.分别利用免疫细胞化学法检测各组细胞CTGF蛋白表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞CTGF mRNA表达量,双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 CTGF蛋白及mRNA、细胞上清Col Ⅰ、FN表达量在TGF-β1组较正常组明显升高(P<0.05),阿魏酸哌嗪组上述指标均低于TGF-β1组(P<0.05).结论 阿魏酸哌嗪能抑制TGF-β1诱导下肾小球细胞外基质(ECM)的合成.其机制可能与下调系膜细胞上CTGF的表达量及功能活性有关.     

螺旋藻对阿霉素肾硬化大鼠肾脏的保护作用

目的研究螺旋藻对阿霉素肾硬化大鼠肾脏的保护作用及相关机制。方法将32只SD大鼠随机分为4组：假手术组（S组）,阿霉素肾硬化对照组（M组）,螺旋藻组（SP组）,贝那普利治疗组（B组）。8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白定量、血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及肾脏病理改变,免疫组化观察肾脏组织纤连蛋白（FN）、IV型胶原（Col IV）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。RT-PCR测定肾皮质TGF-β1mRNA的表达。结果螺旋藻能减少尿蛋白、降低BUN和Scr,减轻基质增生和肾小球硬化,且能减少FN、Col IV、TGF-β1的表达。下调肾皮质TGF-β1mRNA的表达。结论螺旋藻能减轻阿霉素肾硬化大鼠肾脏损害,对肾脏有保护作用。     

银杏内酯B对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及细胞外基质分泌的影响

目的观察银杏内酯B对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MC)转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)分泌增加的抑制作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组、银杏内酯B高、中、低剂量组,分别于6、12、24h后ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1、FN、LN、ColⅣ蛋白含量,荧光半定量RT-PCR法检测TGF-β1基因表达的变化。结果正常培养的大鼠肾小球系膜细胞可分泌一定量的FN、LN、ColⅣ及TGF-β1,LPS刺激后各成分分泌量均明显增加,银杏内酯B高、中、低剂量组在各个时间点相对于LPS刺激组各观察指标均受不同程度的抑制,并且银杏内酯B可抑制LPS刺激后TGF-β1mRNA的增高表达,而且这种抑制作用呈现剂量依赖效应。结论银杏内酯B能够抑制LPS刺激引起的系膜细胞分泌细胞外基质的增加,这种抑制作用可能通过TGF-β1调节。     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响

目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.     

NF-κB介导大鼠肾小球系膜细胞Visfatin对促纤维化因子和细胞外基质表达的影响

目的观察大鼠肾小球系膜细胞中内脏脂肪素(Visfatin)对促纤维化因子和细胞外基质(ECM)表达的影响并探讨核因子-κB(NF-κB)在此过程中的作用。方法分别构建Visfatin表达质粒及Visfatin RNAi质粒,将细胞分为八组:A组:正常糖对照组;B组:正常糖+NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组;C组:过表达Visfatin组;D组:过表达Visfatin+PDTC组;E组:空白表达载体组;F组:空白表达载体+PDTC组;G组:Visfatin RNAi组;H组:空白沉默载体组。比较过表达或沉默Visfatin前后促纤维因子及细胞外基质基因及蛋白表达的变化。用Realtime-PCR方法检测转录生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂(PAI-1)、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原(Col I)、IV胶原(Col IV)等基因表达的变化,用Western Blot检测Visfatin、CTGF、FN等蛋白的表达,用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性;以及通过观察PDTC处理对照组、过表达Visfatin组、空白表达载体组前后上述指标的变化。结果大鼠肾系膜细胞过表达Visfatin后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量显著升高(P0.05)。下调Visfatin表达后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量均显著降低(P0.05)。PDTC处理的各组,NF-κB活性、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV表达量与对应的未经PDTC处理组相比显著降低(P0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,Visfatin可通过NF-κB通路诱导促纤维化因子和细胞外基质的表达。     

β榄香烯对肾小球系膜细胞纤维化的抑制作用

目的 观察β榄香烯对转化生长因子(TGF-β)刺激后的肾小球系膜细胞(HMC)表达结缔组织生长因子(CTGF)及纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 先用有效浓度10 ng/mL的转化生长因子(TGF-β)刺激肾小球系膜细胞(HMC)24 h,然后再用不同浓度,分别为80μg/mL、120μg/mL、160μg/mL的榄香烯干预被刺激的肾小球系膜细胞( HMC )24h.实验分高中低不同浓度组、诱导组及空白对照组.用Western蛋白印迹法测定FN蛋白表达和CTGF的蛋白表达.用RT-PCR法检测FN和CTGF的mRNA水平的变化.结果 经TGF-β刺激24 h后的肾小球系膜细胞(HMC),诱导组较空白组比较,FN蛋白和CTGF蛋白的表达能明显(P＜0.05),高浓度β榄香烯组和中浓度β榄香烯组较诱导组比较,HMC上的FN蛋白和CTGF蛋白的表达和mRNA水平明显降低(P＜0.05),并呈浓度依赖方式降低MHC上表达的FN和CTGF的表达.结论 β榄香烯可以通过减少诱导纤维化后的肾小球系膜细胞中CTGF和FN的表达,发挥抑制肾间质纤维化的作用,β榄香烯可以抑制肾间质纤维化,在延缓肾功能衰竭过程中起着重要作用.     

促红细胞生成素对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ/Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响研究

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组：对照组,AngⅡ组（0.1、1.0、10.0 μmol/L）,EPO组（1、10、100 U/L）,AngⅡ+EPO组（EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ 1.0 μmol/L）。各组处理0、24、48 h时,CCK-8法检测系膜细胞增殖情况,免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平,ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白水平。结果 单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖,AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组,且48 h时高于24 h时,24 h时高于0 h时,差异均有统计学意义（P＜0.05）;单独给予AngⅡ或EPO均可促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,除EPO 1 U/L亚组Col Ⅰ蛋白表达水平与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）外,AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 1 U/L亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 10 U/L亚组和AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 100 U/L亚组在24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,但与对照组及同浓度单纯EPO亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO组各亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Ang Ⅱ能刺激系膜细胞增殖,促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,EPO亦有一定程度类似作用,但两者同时存在时,EPO可拮抗AngⅡ诱导的系膜细胞增殖及ColⅠ、Col Ⅳ和FN的合成及分泌,提示EPO除可纠正肾性贫血外,可能对AngⅡ诱导的肾小球硬化具有抑制作用而保护肾功能。     

转化生长因子β1在糖尿病大鼠肾脏表达中的研究

目的探讨链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的表达情况。方法实验采用成年雄性Sprague-Dawle大鼠20只,随机分为两组各10只,糖尿病组尾静脉注射STZ制成糖尿病模型,对照组尾静脉注射枸橼酸钠缓冲液。两组大鼠4周后处死,取肾脏组织行苏木精伊红染色法观察糖尿病肾脏组织的形态变化,同时行免疫组织化学SABC半定量检测TGF-β1蛋白的表达水平。结果糖尿病组肾脏组织光镜下出现肾小球的毛细血管球肥大,肾小囊腔呈裂隙状,基底膜轻度增厚,系膜增生,肾小管上皮细胞显示空泡和颗粒变性。TGF-β1蛋白在糖尿病大鼠肾脏上皮细胞和肾小球系膜细胞表达显著增高（P〈0.01）。结论实验动物的高血糖状态会损害肾脏组织,高血糖可能通过活化大鼠肾脏组织内TGF-β1,从而促进肾间质结缔组织增生和纤维化,从而导致肾小球硬化而引起糖尿病肾病。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖培养的系膜细胞糖原合成酶激酶-3β和细胞外基质合成的影响

目的观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及细胞外基质成分（ECM）的影响及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的干预效果。方法以大鼠GMCs为实验对象,培养48h后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）测定GMCs增殖情况,Western blot法测定GSK-3β蛋白表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测高糖条件下细胞培养液中细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果高糖明显诱导GMCs增殖并抑制GSK-3β磷酸化,EGCG和GSK-3β特异性的抑制剂TDZD-8均能抑制高糖诱导的细胞增生,并增加GSK-3β磷酸化水平。高糖环境下系膜细胞分泌的FN、ColⅣ及LN明显增加（P〈0.05）,EGCG能抑制上述作用。结论EGCG通过GSK-3β信号通路抑制高糖诱导的GMCs增殖,并能抑制GMCs细胞外基质的合成,从而延缓糖尿病肾小球肥大和肾小球硬化。     

阿魏酸钠对TGF—β1诱导下肾脏成纤维细胞α-SMA、CTGF表达及细胞外基质合成的影响

目的观察阿魏酸钠（SF）对转化生长因子β1（TGF-β1）作用下肾成纤维细胞（NRK-49F）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）表达、细胞外基质（ECM）合成的影响,探讨其抗肾间质纤维化的效果及可能机制。方法体外培养NRK-49F细胞,利用MTT观察阿魏酸钠对TGF-β1诱导细胞活力的影响;实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（Real TimeRT—PCR）检测细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法观察细胞α-SMA、CTGF蛋白表达的情况;ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的表达。结果TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力、上调细胞α-SMA、CTGF在mRNA和蛋白水平的表达、增加ColI及FN的合成;阿魏酸钠能够减轻TGF-β1,的上述效应。结论阿魏酸钠可以在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾脏纤维化。     

尾加压素Ⅱ和转化生长因子β1在糖尿病大鼠肾脏的表达及其意义

目的：观察尾加压素Ⅱ（UⅡ）和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球的动态表达规律及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组及糖尿病2、4、8和12周组。糖尿病大鼠模型用单次腹腔注射链脲菌素（55 mg•kg^-1）诱发。生化法测定血糖、血和尿肌酐、尿白蛋白和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）含量。免疫组织化学法检测肾脏UⅡ、TGF-β1、纤连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）的表达。结果：糖尿病各组大鼠的生化指标均明显高于对照组（P<0.05）。糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球可见UⅡ和TGF-β1阳性染色颗粒,对照组未见该阳性染色颗粒。与糖尿病2周时比较,糖尿病4、8和12周组UⅡ和TGF-β1表达（阳性染色肾小管数和细胞数）随着病程进展进行性增加(P<0.05),肾小管上皮细胞UⅡ的表达水平与尿NAG含量呈正相关（r=0.895,P<0.01）。糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞UⅡ与TGF-β1的表达水平呈正相关（r=0.769,P<0.01）。糖尿病8和12周组大鼠肾脏FN和ColⅣ表达明显高于对照组（P<0.05）。结论：糖尿病大鼠肾小管上皮细胞和肾小球UⅡ及TGF-β1蛋白表达均明显增加,提示其在糖尿病肾病的肾小管损害及细胞外基质积聚中可能起一定作用。     

褐藻多糖硫酸酯对阿霉素肾硬化大鼠肾脏保护作用的研究

目的:探讨褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan,FPS)对阿霉素肾硬化大鼠肾脏的保护作用。方法:将32只SD大鼠分成4组:假手术组(SHAM组),阿霉素肾硬化模型组(M组),褐藻多糖硫酸酯治疗组(FPS组),洛汀新治疗组(B组)。8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白定量、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)及肾脏病理改变,免疫组化观察肾脏组织纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。RT-PCR测定肾皮质转化生长因子β1(TGF-β1)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)mRNA。结果:FPS能减少尿蛋白、降低BUN和Cr,减轻基质增生和肾小球硬化,且能减少TGF-β1、FN、ColⅣ表达,下调肾皮质TGF-β1P、AI-1 mRNA表达。结论:FPS能减轻阿霉素肾硬化大鼠肾脏损害,对肾脏有保护作用。     

苯那普利对抗Thy1.1大鼠系膜基质积聚的影响

目的 观察血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利对系膜增殖性肾炎（MsPGN）大鼠系膜基质的影响。方法 用抗胸腺细胞血清（ATS）诱导SD大鼠产生MsPGN后，用苯那普利治疗24d，处死大鼠并用ELISA方法测定大鼠肾小球系膜中胶原Ⅳ（ColⅣ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）、层粘连蛋白（LN）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果 治疗组大鼠系膜中ColⅣ、ColⅢ、LN、FN的含量明显低于对照组大鼠系膜中各相应成分的含量，各对应成分之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 苯那普利对MsPGN大鼠系膜基质的积聚有明显的抑制作用。     

生地对高糖致人肾小球系膜细胞增殖、氧化应激及细胞外基质的影响

目的 观察生地含药血清对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HRMC)的作用。方法 制备生地含药血清,通过LC-MS检测技术,鉴别入血成分;MTT法检测HRMC增值抑制率;试剂盒检测细胞上清中SOD、MDA的含量变化;ELISA法检测HRMC中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ);流式法检测细胞周期分布;免疫荧光检测HRMC中TGF-β1的表达。结果 生地含药血清中含有水苏糖、梓醇,含药血清中效应成分可抑制高糖诱导的HRMC增殖,减少细胞外基质（ECM）的增生,下调TGF-β1的mRNA表达。结论 生地可能通过调节TGF-β1的表达来抑制ECM的分泌从而改善糖尿病肾病的发生发展。      

白血病抑制因子通过乙酰化STAT3抑制肾间质纤维化的研究

目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)对肾间质纤维化的作用及其机制。方法 TGF-β和(或)LIF和(或)TSA刺激肾脏成纤维细胞(NRK-49F);TGF-β和(或)LIF刺激Stat3基因敲除细胞(MEF-Stat3-KO);用KM小鼠建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)模型,腹腔内注射LIF后收集肾脏;用Western Blot方法检测纤维化相关性蛋白(Col3和FN1)和乙酰化Stat3的表达,用RT-PCR方法检测Col3和FN1的mRNA表达,用免疫组化方法检测肾脏组织的Col3、FN1和LIFR、Stat3的沉积。结果 在NRK-49F细胞中,LIF降低TGF-β诱导的Col3和FN1的表达;在Stat3-KO细胞中,LIF对Col3和FN1的表达无作用。UUO肾脏中,LIFR和Stat3的表达较假手术组明显减少,LIF注射后Col3和FN1的沉积减少。LIF刺激NRK-49F细胞15min后,乙酰化Stat3明显增多;TSA刺激细胞后,Col3和FN1的表达降低更加明显。结论 LIF抑制体内外肾间质纤维化,依赖于Stat3,其机制可能包括乙酰化修饰。     

肾康丸对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠TGF-β1／Smad信号通路影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病（diabetes mellitus，DM）模型，模型成功后随机分为3组：模型对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组，治疗8周后，取大鼠肾脏，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白（fibronetin，FN）和TGF-β1mRNA基因表达情况；采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织Smad2、Smad3蛋白表达的情况。结果在治疗的8周里，模型组大鼠血糖均维持在16．7mmol／L以上；出现多饮、多食、多尿、消瘦的DM症状；8周后，DN模型组大鼠与正常大鼠比较，肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达显著上调（P〈0．01），Smad2、Smad3蛋白表达明显增加。肾康丸和开搏通都可以抑制DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达，差异具有统计学意义（P〈0．01），都可以减少Smad2、Smad3蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1／Smad信号转导通路的激活，减少细胞外基质合成和分泌，从而延缓DN进程。     

芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响

  目的  研究芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响。  方法  MTT法检测各浓度芒果苷元对HK-2细胞活力的影响；用TGF-β1诱导HK-2细胞成EMT模型，并给以芒果苷元干预，在TGF-β1诱导24 h时显微镜下拍照记录细胞形态变化，划痕实验法检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测纤连蛋白（fibronectin，FN）和Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）蛋白表达水平。  结果  （1）芒果苷元（10-9～10-5 mol/L）浓度下HK-2细胞活力均无明显变化（P > 0.05）；（2）与正常组相比，模型组细胞形态变长变梭，迁移和侵袭能力显著增强（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调（P < 0.05，0.01）；与模型组相比，芒果苷元组细胞能维持原来的鹅卵石形，迁移和侵袭能力显著下降（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）。  结论  芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移和侵袭，阻止细胞形态的改变，下调细胞外基质成分FN和ColⅠ的蛋白表达，从而抑制EMT的发展。     

活性氧簇调控的信号通路与糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是以细胞外基质(ECM)在肾脏的过度聚积,导致肾小球系膜增生和肾小管间质纤维化为特征.临床研究证明高血糖是糖尿病血管并发症包括DN始发和进展的主要决定因子.在肾小球系膜细胞,高糖可诱导ROS的产生和上调 TGF-β1及ECM的表达.外源性H2O2 或由葡萄糖氧化酶持续产生的H2O2 也可上调TGF-β1和纤维结合素(FN)在系膜细胞的表达、以及FN在小管上皮细胞的表达.抗氧化剂可有效抑制高糖和H2O2 诱导的TGF-β1和 FN的上调.研究结果表明,在高糖诱导的肾脏损害中,ROS起着非常重要的作用.然而,ROS 调控信号通路导致糖尿病肾脏终末期细胞反应的机理还未完全清楚.本文将从细胞、分子和基因水平阐述高糖诱导ROS 的产生,ROS诱导信号转导级联的激活以及转录因子、基因和蛋白质在系膜细胞和小管上皮细胞的过度表达而导致ECM在肾脏聚积的机制;同时也将阐述在糖尿病肾脏,AGE、TGF-β1和Ang ΙΙ诱导ROS 产生,增强高糖激活信号通路的机理.     

LOX-1介导ox-LDL诱导大鼠系膜细胞表达TGF-β1及分泌细胞外基质

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠肾小球系膜细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及分泌细胞外基质(ECM)的影响,并观察LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(PIA)对ox-LDL上述作用的影响.方法:体外培养肾小球系膜细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1 mRNA的表达;RT-PCR观察空白组、ox-LDL组(50 μg/ml)和PIA组(50 μg/ml ox-LDL 250 μg/ml PIA)肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA的表达,ELISA法检测上述3组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的含量.结果:RT-PCR结果表明,25、50、100 μg/ml ox-LDL组LOX-1 mRNA表达明显高于0 μg/ml组(P＜0.05),其中50 μg/ml组表达最高;50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA表达明显高于空白组和PIA组(P＜0.01).ELISA结果表明50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1 、FN、Col Ⅳ的含量明显高于空白组和PIA组(P＜0.05).结论:ox-LDL体外可促进大鼠肾小球系膜细胞表达LOX-1、TGF-β1及分泌细胞外基质,PIA可抑制ox-LDL的上述作用,提示LOX-1可能介导了ox-LDL对肾小球系膜细胞的损伤,参与了肾小球硬化的发生和发展.