RNAi沉默Furin基因对人宫颈癌HeLa细胞增殖和转移的影响

目的研究Furin基因沉默对宫颈癌HeLa细胞株生长转移的影响。方法脂质体法将质粒Furin siRNA转染人宫颈癌HeLa细胞。MTT法检测细胞的增殖情况,Boyden细胞迁移和侵袭实验观察HeLa细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测Furin及产物MT1-MMP蛋白量的变化,ELISA法检测细胞上清中MMP2的浓度。结果细胞增殖实验中Furin siRNA处理后48h的HeLa细胞与空质粒转染组相比体外生长抑制38.6%,差异有统计学意义(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验中,Furin siRNA处理后,HeLa细胞穿过滤膜和基质胶的细胞数量均明显少于空质粒转染(P<0.05);它可显著降低MT1-MMP蛋白表达及MMP2的分泌。结论 Furin siRNA可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长及肿瘤细胞转移,机制可能与降低Furin产物MT1-MMP的表达及MMP2合成有关。     

人MT1-MMP真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达及意义

目的：克隆人膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）基因,构建真核表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）从人正常肝组织中扩增MT1-MMP全长cDNA,将之与pMD18-T载体连接,测序后将该片段亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中。将构建好的pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经酶切鉴定后,采用脂质体法转染入HepG2细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株。应用RT-PCR检测转染前后该细胞株MT1-MMP mRNA表达水平。结果：①RT-PCR获得长度约为704 bp的目的片段,与预期片段相符;②将pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,得到约5 400 bp和704 bp两个片段,测序结果证实所插入目的片段与GenBank中MT1-MMP cDNA序列匹配;③重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平（1.66±0.43）明显高于空质粒组（1.21±0.25）和对照组（1.19±0.18)(P<0.01）。结论：成功构建pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体,并在人肝癌细胞株HepG2中稳定表达。     

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。     

HBx基因缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的影响

目的 前期的研究成功构建了稳定表达HBx基因及其缺失突变体( HBx-d382)的L02细胞,分别命名为L02/HBx和L02/HBx-d382,并证实其可导致肝细胞恶性转化.该研究进一步探讨HBx-d382对L02细胞G1期细胞周期调控相关基因cyclinD1,cyclinG1和E2F1表达的影响.方法 实验分为L02/pcDNA3.0(稳定转染pcDNA3.0)、L02/HBx和L02/HBx-d382(分别稳定转染质粒pcDNA3.0/HBx和pcDNA3.0/HBx-d382)3组.通过实时定量PCR以及wester-blot检测转染HBx基因及其缺失突变体HBx-d382后L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的改变.结果 实时定量PCR以及wester-blot结果表明稳定表达HBx基因或HBx-d382的L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达上调,表达HBx-d382的L02细胞上调最为明显.结论 HBx-d382可能通过上调cyclinD1、cyclinG1和E2F1从而影响细胞G1期调控,进一步导致肝细胞恶性转化.     

膜型基质金属蛋白酶-1增强乳腺癌细胞系MCF-7的恶性表型

目的：探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)蛋白酶-1表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生物学行为的影响及MT1-MMP催化亚单位在其中的作用。方法：应用脂质体转染法将携带MT1-MMP及其突变体基因MT1-MMP-E240A的pcDNA3.1载体分别稳定导入MCF-7细胞，通过超微结构观察及体外生长、迁移实验检测MCF-7细胞生物学行为的变化。结果：转染后的细胞经RT-PCR证实MT1-MMP mRNA的表达与对照组比较明显增强；免疫荧光细胞化学染色显示MT1-MMP蛋白呈强阳性表达，阳性颗粒分布于肿瘤细胞的胞浆和胞膜。透射电子显微镜观察显示pcDNA3.1组和MCF-7组细胞未见异常，而MT1-MMP组与MT1-MMP-E240A组细胞与对照组相比出现较多处于分裂期的细胞和瘤巨细胞，部分细胞胞浆内出现糖原池和髓样小体样溶酶体。细胞增殖周期、细胞生长曲线测定结果显示，MT1-MMP组与MT1-MMP-E240A组处于G₂M期的细胞比率明显高于对照组（P＜0.01），提示转染组细胞的增殖能力增强。转染组细胞在Matrigel和FN上的迁移能力较对照组明显增强（P＜0.05）。结论：MT1-MMP能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移，在一定程度上增加其恶性表型；MT1-MMP催化亚单位在其中不发挥主要作用。     

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞MT1-MMP基因表达的实验研究

目的 探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)shRNA真核表达载体(pGenesil-1-MT1-MMP)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)MT1-MMP基因mRNA表达及蛋白表达的影响.方法 构建质粒表达载体pGenesil-1-MT1-MMP和pGenesil-1-HK;实验分为3组:空白对照组,阴性对照组(加入pGenesil-1-HK),RNA干扰(RNAi)组(加入pGenesil-1-MT1-MMP).用脂质体瞬时转染VSMC,48 h后通过荧光显微镜观察转染效果,流式细胞仪检测转染效率.于转染后72 h采用RT-PCR方法检测MT1-MMP mRNA表达水平,用Western blot方法检测MT1-MMP蛋白质表达水平.结果 瞬时转染VSMC 48 h后通过流式细胞仪检测转染效率高达85.5%,转染pGenesil-1-MT1-MMP质粒72 h后,RNAi组MT1-MMP mRNA及蛋白质水平明显下调(P<0.05).结论 靶向MT1-MMP的短发夹RNA质粒能够高效地转染入VSMC,并能有效下调MT1-MMP基因mRNA和蛋白的表达.     

EphA2对结肠癌细胞株HCT116中VEGF和MMP9蛋白表达的影响

目的:探讨EphA2对结肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9, MMP9)蛋白表达的影响.方法:用Western 印迹验证选择高表达EphA2蛋白的结肠癌细胞株HCT116;脂质体转染法将EphA2反义寡核苷酸瞬时转染入HCT116细胞,Western 印迹检测反义寡核苷酸转染效率后, ELISA检测转染前后细胞上清液中VEGF蛋白的表达;明胶酶谱分析法检测转染前后细胞上清液中明胶酶的分泌.结果:EphA2 反义寡核苷酸成功抑制了EphA2总蛋白的表达, 降低了VEGF蛋白和MMP9蛋白的表达.结论:EphA2 反义寡核苷酸通过降低结肠癌细胞株HCT116中VEGF,MMP9蛋白的表达来抑制结肠癌细胞株HCT116的侵袭和转移.     

VEGF165基因转染的内皮祖细胞移植对大鼠肾脏缺血再灌注后的保护作用

评估VEGF165基因转染的内源性内皮祖细胞(EPCs)移植治疗肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的作用,进一步完善EPCs对肾脏IRI产生保护作用的旁分泌机制。利用重组腺病毒载体Ad-VEGF165感染EPCs,并进行转染效率鉴定。并进一步移植治疗大鼠肾脏IRI,术后24h和72h分别评估血清肌酐及尿素氮水平;组织病理学检查评估各组大鼠术后肾损伤程度;Western blot检测大鼠肾脏IRI中血管内皮生长因子 (VEGF)、血管生成素-1 (Ang-1)及血管生成素-2 (Ang-2) 表达情况。结果发现利用重组腺病毒载体Ad-VEGF165转染的EPCs移植治疗后,大鼠肾脏功能明显改善,术后72h检测大鼠患肾,其内VEGF、Ang-1以及Ang-2表达水平均明显提升。因此,VEGF165基因转染的EPCs移植治疗可以有效的治疗大鼠肾脏IRI,其作用机制可能与EPCs归巢后旁分泌过量VEGF并进一步促进Ang-1、Ang-2等血管新生因子表达,从而促使肾脏血管新生有关。     

胃癌患者的血清LAG-3、DKK-1含量测定及其与临床病理特征的相关性

目的:研究胃癌患者血清中LAG-3、DKK-1含量及癌细胞增殖、侵袭、血管新生等临床病理特征的相关性。方法:选择在我院诊断为早期胃癌的48例患者作为研究的胃癌组,同期在我院体检的50例健康志愿者作为研究的对照组,采集血清并测定LAG-3、DKK-1及血管新生分子的含量,采集胃癌组织、癌旁组织并测定增殖、侵袭相关分子的表达量。结果:胃癌组血清中LAG-1、DKK-1、Ang-1、Ang-2、VEGF、bFGF的含量显著高于对照组,胃癌组织中EPHA2、LOXL2、PCNA、Akt、CyclinD1、MYH-9、CXCR7、KDM1A、CatB的mRNA表达量均显著高于癌旁组织;胃癌患者血清中Ang-1、Ang-2、VEGF、bFGF的含量及胃癌组织中EPHA2、LOXL2、PCNA、Akt、CyclinD1、MYH-9、CXCR7、KDM1A、CatB的mRNA表达量均与血清LAG-3、DKK-1含量呈正相关关系。结论:血清LAG-3、DKK-1含量对早期胃癌具有诊断价值并且能够评估胃癌组织中癌细胞增殖、侵袭及血管新生的临床病理特征。     

血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9与胃癌的侵袭和转移

胃癌的侵袭和转移依赖于肿瘤间质中的血管生成和细胞外基质的降解。血管内皮生长因子(VEGF)是目前所知的作用最强的促血管生成因子之一,它可以直接或间接地参与血管生成的每个环节。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是一种与胃癌侵袭和转移密切相关的蛋白酶,它通过降解细胞外基质引起胃癌的侵袭和转移。现以VEGF、MMP-9的主要生物学效应、与肿瘤侵袭转移(尤其是胃癌)的关系及可能机制进行综述。     

象牙塔里的人们依旧如故

我有一个叫Betty的病人，她今年75岁。从我认识她以来，她就一直患有严重的类风湿关节炎，到现在已经快30年。尽管做了髋关节和膝关节的置换，她还是痛得很厉害。而最近丈夫的去世使她的病情更糟了。现在，她又面临一个新的问题：过去对她最有效的止痛剂即将从市场上消失。     

血管内皮细胞生长因子及其受体与白血病

血管新生在白血病发生、发展过程中起着重要的作用,血清血管内皮生长因子(VEGF)水平能够在一定程度上解释白血病血管新生现象,VEGF是作用最强、特异性最高的血管新生调节因子,白血病细胞不仅分泌VEGF还不同程度的表达VEGF受体,VEGF在刺激白血病细胞增殖、迁移中发挥重要作用。动态检测血清VEGF水平可在一定程度上了解白血病的状态和体内白血病细胞的总负荷量,对白血病的疗效及预后判断有一定的指导意义。文章综述VEGF及其受体与白血病的关系。     

心房颤动：心率与心律同等重要

两项新的研究显示，在心房颤动的药物治疗方面控制心率不仅与控制心律的疗效及操作相当，而且更加经济、安全。因而我们可以推测由于药物控制心率副作用较少，可能会降低心房颤动患者的住院率。     

脑瘫患儿和正常儿童一样快乐

欧洲的一项横断面调查报告称，脑瘫儿童和正常儿童的生活质量相近。500名年龄在8到12岁之间的脑瘫儿童通过一种最近起用的Kidscreen评分系统给自己生活的10个方面打分。他们的答案与一般的健康儿童不相上下，并且在某项领域—对学校环境方面，脑瘫患儿似乎比健康儿童更快乐。     

美国或许需要更多医生

1997年,美国某些重要卫生组织预言,美国将面临医生过剩的问题。为此,他们提出了一些政策,限制医生数量的增长。然而,这种预测并未变为现实。在11年后的今天,美国或许要面临医生短缺的局面。这究竟是怎么回事呢？     

The ivory towers are as resilient as ever

I have a patient called Betty. Betty is 75 and is weighed down by more than her share of troubles. She has had severe rheumatoid arthritis for as long as I have known her - which is approaching 30 years. Her pains, which are still severe despite hip and knee replacements, have been augmented by the recent death of her husband. Now she faces a further hurdle： the painkiller that is most effective for her is about to be withdrawn.