龙胆泻肝汤抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠Th1、Th2细胞分化的影响

目的　探讨龙胆泻肝汤（LXD）对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法　将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD干预组大鼠造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃。干预后12 d分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测Rbpj基因的表达,ELISA检测Rbpj、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）蛋白的表达,流式细胞仪检测各组织中Th1、Th2细胞的表达水平,分析Th1/Th2细胞比例的变化。结果　干预后12 d,Q-PCR检测发现,与正常对照组大鼠相比, Rbpj mRNA在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中均呈显著上调表达(均为P<0.001);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj mRNA相对表达水平均显著降低(均为P<0.01)。ELISA检测结果发现,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj和IFN-γ蛋白表达水平均明显高于正常对照组,IL-4蛋白表达水平均明显低于正常对照组（均为P＜0.05);相比于EAU模型组,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中Rbpj IFN-γ蛋白表达水平均显著降低,IL-4蛋白表达水平均显著升高（均为P＜0.05)。流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Th1细胞水平均明显升高,Th2细胞水平均明显降低,Th1/Th2细胞比例失衡（均为P＜0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中Th1细胞水平均明显下降,Th2细胞水平均明显升高,两者细胞比例逐渐恢复均衡（均为P<0.01)。结论　LXD可通过下调EAU大鼠Notch信号通路转录因子Rbpj的表达水平抑制Notch信号通路的活化,显著促进EAU大鼠中Th1/Th2细胞比例恢复平衡并改善免疫微环境,从而达到治疗葡萄膜炎的目的。     

龙胆泻肝汤对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的干预作用

目的　探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis,EAU）大鼠Notch信号通路相关基因表达的影响。方法　Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和龙胆泻肝汤干预组,后两组诱导EAU模型,龙胆泻肝汤干预组造模后用龙胆泻肝汤灌胃。免疫后12 d分别分离三组大鼠的脾脏和淋巴结收集CD4⁺T细胞,流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的表达水平;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测Notch1、Notch2、Notch3、Notch4基因的表达情况;ELISA检测Notch信号通路相关蛋白的表达水平。结果　流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞水平明显升高,Treg细胞水平降低;与EAU模型组相比,龙胆泻肝汤干预组大鼠的Th17细胞水平明显下降,Treg细胞水平升高,两者比例逐渐恢复均衡;qRT-PCR检测发现龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4基因的表达在免疫后12 d高于正常对照组（均为P<0.01）,但显著低于EAU模型组（均为P<0.01）,Notch3基因在大鼠脾脏和淋巴结未检测到表达;ELISA检测结果发现,龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4蛋白表达水平在免疫后12 d虽然高于正常对照组（均为P<0.01）,但显著低于EAU模型组大鼠（均为P<0.01）。结论　龙胆泻肝汤可有效缓解EAU大鼠中Th17/Treg比例失衡状态,其作用机制可能涉及到Notch信号通路调节的nave CD4⁺T细胞向Th17 和Treg细胞的分化。     

rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用

目的　探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis,EAU）中的表达变化。方法　应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6~8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果　双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组（1.00）,免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0.41±0.12、0.37±0.09和0.25±0.07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义（均为P<0.05）。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组（均为P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论　rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。     

miR-223-3p靶向调控Rbpj转录因子对葡萄膜炎大鼠Th1和Th17细胞分化的影响

目的：探讨miR-223-3p对Notch信号通路转录因子Rbpj表达的调控作用以及对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th17细胞分化水平的影响。

方法：用双荧光素酶表达报告系统探讨miR-223-3p对Rbpj基因表达的调控作用。将24只雌性Lewis大鼠随机分为EAU模型组、正常对照组(NC组)和空白对照组(BC组),每组8只。EAU模型组注射含光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)、结核菌素和完全弗氏佐剂的乳糜液以诱导葡萄膜炎,BC组注射等体积的不含IRBP多肽的乳糜液,NC组注射等体积的无菌生理盐水。免疫后12d,无菌分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测miR-223-3p和Rbpj基因的表达水平; 酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白的表达水平; 流式细胞仪检测三组大鼠不同组织中Th1和Th17细胞的表达水平。

结果：双荧光素酶检测结果证实Rbpj是miR-223-3p调控的靶基因。免疫后12d,相比于NC组,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p相对表达水平分别为0.33±0.29、0.11±0.12、0.18±0.11,均呈下调表达(均P<0.05); Rbpj mRNA水平均呈上调表达,分别为3.00±0.06、1.52±0.12、3.01±0.34(均P<0.05); BC组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p和Rbpj mRNA水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。ELISA检测结果发现,免疫后12d的EAU模型组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平均明显高于NC组(均P<0.05),BC组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12d,EAU模型组各组织的Th1和Th17细胞比例均显著高于NC组(均P<0.05)。BC组与NC组各组织Th1和Th17细胞比例无明显变化(均P>0.05)。

结论：miR-223-3p可负调控Notch信号通路转录因子Rbpj的表达。EAU大鼠中miR-223-3p的下调表达可升高Rbpj基因和蛋白的表达水平,促进Th1和Th17细胞的分化以及提高相关分子IFN-γ和IL-17的表达水平,进而影响葡萄膜炎的发生发展。     

龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用

目的　探讨龙胆泻肝汤（Longdan Xiegan decoction,LXD）对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法　将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导并建立EAU模型,LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理12 d,EAU组大鼠给予相同体积的PBS缓冲液灌胃处理12 d。实时荧光定量PCR(Q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中iNOS和Arg1 mRNA及蛋白的表达;此外,采用流式细胞仪检测以上各组织中M1型、M2型巨噬细胞极化水平,分析LXD对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。结果　免疫后12 d,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠各组织中iNOS mRNA和蛋白表达均升高,而Arg1 mRNA和蛋白表达均降低（均为P<0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中iNOS表达均降低,而Arg1表达均升高（均为P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低（均为P<0.05）,呈现不均衡表达;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平下降,而M2型巨噬细胞极化水平升高,两者比例逐渐恢复均衡。结论　在EAU大鼠中,M1/M2巨噬细胞极化比例紊乱,LXD可明显降低M1型巨噬细胞极化水平以及相关因子iNOS表达,提高M2型巨噬细胞极化水平以及相关因子Arg1表达,从而发挥对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。     

龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠补体C4、MBL2表达的影响

目的　探讨龙胆泻肝汤（Longdan Xiegan decoction,LXD）对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠的治疗作用及对血清中C4、MBL2蛋白表达水平的影响。方法　54只Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU组和LXD组,其中EAU组、LXD组大鼠制备EAU模型,LXD组造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU组给予等量生理盐水灌胃。免疫后12 d使用激光扫描检眼镜（scanning laser ophthalmoscope,SLO）观察三组大鼠眼底炎症,并取三组大鼠同侧眼球进行病理切片,观察视网膜组织病理学变化;分离三组大鼠的脾脏和淋巴结,收集T淋巴细胞,流式细胞仪检测CD4⁺/CD8⁺细胞比例的变化;酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中C4、MBL2蛋白的表达水平。结果　SLO检查结果显示,与正常对照组相比,EAU组大鼠屈光间质不清,无法观察眼底视网膜及血管情况;LXD组大鼠眼底血管迂曲扩张,屈光间质混浊,视盘边界模糊不清,但较EAU组大鼠症状轻。组织病理学检查结果显示,与正常对照组相比,EAU组大鼠眼组织结构紊乱,视网膜全层破坏,视网膜内可见大量炎性细胞浸润;LXD组大鼠视网膜仅表现为轻、中度炎性细胞浸润。流式细胞仪检测结果发现,EAU组大鼠脾脏、淋巴结中CD4⁺/CD8⁺比值均高于正常对照组;LXD组大鼠的CD4⁺ T细胞表达水平下降,CD8⁺ T细胞表达水平升高,两者比例趋于平衡。ELISA检测结果发现,与正常对照组相比,EAU组大鼠免疫后12 d、16 d、20 d血清C4蛋白水平均显著升高,与EAU组相比,LXD组免疫后12 d、16 d、20 d血清C4蛋白水平均明显降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;同时,EAU组各时间点血清MBL2蛋白水平明显降低,而LXD组较EAU组各时间点血清MBL2蛋白水平均显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　LXD可有效缓解EAU大鼠眼内炎症,改善脾脏、淋巴结中CD4⁺/CD8⁺细胞比例失衡,同时降低血清中补体C4蛋白表达水平,上调MBL2蛋白表达水平,促进补体系统恢复平衡,加快葡萄膜炎的炎症消退,从而达到治疗EAU的作用。     

c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠模型Th17细胞比例及细胞因子表达的影响

目的　探讨c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）小鼠模型光感受器间维生素A类结合蛋白1-20（IRBP_1-20）特异性辅助性T细胞17（Th17）细胞比例及细胞因子表达的影响。方法　取健康C57BL/6J小鼠（8~10周龄）6只,采用随机数字表法将小鼠分为正常对照组、EAU组,每组3只。EAU组小鼠腹腔内注射350 ng百日咳毒素,单后足和脊柱两侧皮下注射含150 μg IRBP_1-20、0.8 mg结核分枝杆菌H37RA和弗氏不完全佐剂的乳化剂以诱导EAU模型;正常对照组小鼠不给予特殊干预。免疫后13 d,行间接检眼镜检查并通过小动物视网膜成像系统可视化检测小鼠眼底炎性病灶,HE染色观察视网膜组织病理学改变,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测T细胞和眼球组织中c-Myc mRNA的表达。将EAU模型小鼠T细胞分为对照组和10058-F4组,10058-F4组T细胞加入50 μmol·L^-1 10058-F4,对照组T细胞不给予药物干预。培养6 h后,洗去药物,将两组T细胞与IRBP_1-20（10 mg·L^-1）及骨髓来源树突细胞共培养,同时加入20 μg·L^-1 白细胞介素（IL）-23（Th17细胞诱导条件）。采用qRT-PCR检测c-Myc、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）、IL-17A、IL-17F和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF） mRNA相对表达量,ELISA检测共培养细胞上清液中IL-17含量,流式细胞仪检测共培养细胞中Th17细胞比例。结果　本研究EAU组小鼠模型建立成功。qRT-PCR检测结果显示,EAU组小鼠T细胞、眼球组织中c-Myc mRNA相对表达量分别为1.85±0.37、2.31±0.47,较正常对照组（1.01±0.02、0.99±0.05）均明显升高,差异均有统计学意义（P=0.017、0.008）;10058-F4组T细胞c-Myc mRNA相对表达量为0.57±0.03,明显低于对照组（1.04±0.02）,差异有统计学意义（P<0.001）。ELISA检测结果显示,10058-F4组共培养细胞上清液中IL-17含量明显低于对照组,差异有统计学意义（P=0.025）。流式细胞仪检测结果显示,10058-F4组共培养细胞中Th17细胞比例为（17.97±0.91）%,明显低于对照组［（22.50±0.90）%］,差异有统计学意义（P=0.004）。qRT-PCR检测结果显示,10058-F4组T细胞RORγt、IL-17A、IL-17F、GM-CSF mRNA相对表达量分别为0.52±0.11、0.51±0.06、0.58±0.15、0.75±0.03,明显低于对照组（1.01±0.01、1.00±0.01、1.02±0.02、1.01±0.02）,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　c-Myc抑制剂10058-F4可显著降低T细胞中c-Myc表达水平,抑制Th17细胞特异性转录因子RORγt表达及效应细胞因子IL-17A、IL-17F、GM-CSF的产生,负向调控IRBP_1-20特异性Th17细胞免疫反应。     

大鼠自身免疫性葡萄膜视网膜炎辅助T细胞的类细胞因子水平表达

目的观察实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（experimental autoimmune uveoretinitis，EAU）大鼠血清以及脾细胞培养上清液中辅助T细胞1／辅助T细胞2（helper T cell 1／helper T cell2，Th1／Th2）类细胞因子水平。方法用Fmoc法合成光感受器间维生素A类结合蛋白R16多肽片段，联合免疫佐剂诱导EAU动物模型。在EAU高峰期取大鼠血清，分离脾细胞，培养后取上清液，应用酶联免疫吸附法检测血清以及脾细胞培养上清液中Th1类细胞因子（interferon-γ，IFN-γ、interleukin-2，IL-2）和Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）水平。结果EAU组大鼠血清中IFN-1和IL-2的浓度分别为（33．8±5．2）μg／L，（52．5±7．9）μg/L，显著高于空白对照组[（6．2±1．4）μg/L，（3．7±0．8）μg/L和弗氏完全佐剂对照组[（complete Freund＇s adjuvant，CFA）；（9．2±1．9）μg/L，（5．1±1．1）μg/L]（P〈0．05）；而IL-4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义。EAU组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2的浓度分别为（1105．3±197．5）μg/L，（45．0±16．2）μg/L，显著高于空白对照组（5．24±1．7）μg/L，（4．1±1．3）μg/L和CFA组（25．14±5．9）μg/L，（5．1±1．9）μg/L（P〈0．01），IL4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义；CFA组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-1的浓度明显高于空白对照组（P〈0.05），IL-2、IL-4、IL-10的浓度与空白对照组相比差异无统计学意义。结论在EAU高峰期，Th1类细胞因子水平显著升高，提示EAU是Th1细胞诱导的疾病（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：280-282）     

miR-30b-5p 抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的　探讨miR-30b-5p对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Notch信号通路活化的调控机制及治疗作用。方法　通过Target Scan（http://www.targetscan.org/）对Notch1和Dll4基因与 miR-30b 的关系进行生物信息学预测。将雌性Lewis大鼠随机分为对照组、EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p空载体（miR-30b-5p-N）组。EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠首先诱导EAU模型,miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠分别采用携带miR-30b-5p和miR-30b-5p-N的慢病毒于EAU大鼠脾脏进行注射干预处理,EAU组大鼠于同一部位注射相同体积的生理盐水。处理后12 d,实时荧光定量PCR检测4组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA的表达;免疫组织化学检测4组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达,分析miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的调控作用。结果　生物信息学预测分析结果表明,Notch 信号通路上 Notch1和Dll4基因均为 miR-30b 调控的靶基因。免疫后12 d,相比于对照组,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA水平均升高（均为P<0.05）;经miR-30b-5p干预治疗后,miR-30b-5p组脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA表达均显著降低（均为P<0.05）。免疫组织化学检测结果显示,免疫后12 d,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 蛋白表达均上调（均为P<0.05）;miR-30b-5p干预治疗后,脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白表达均显著下调（均为P<0.05）。结论　miR-30b-5p可明显下调EAU大鼠各组织中Notch1和Dll4等Notch信号通路相关分子的表达进而抑制Notch信号通路活化,从而达到治疗葡萄膜炎的作用。     

白芍总苷对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠肝脏中自然杀伤T细胞表达的影响

目的探讨白芍总苷（TGP）对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠肝脏中自然杀伤T（NKT）细胞基因表达的影响。方法实验研究。45只Lewis大鼠采用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和TGP干预组,每组15只。EAU模型组和TGP干预组注射含光感受器间维生素A结合蛋白（IRBP1177-1191）的乳糜液以诱导出葡萄膜炎,正常对照组注射等体积的不含IRBP多肽的乳糜液。于免疫后每天对TGP干预组大鼠进行TGP灌胃给药,其余2组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,并每天采用裂隙灯显微镜观察各组大鼠眼前节炎症反应,记录发病程度,并进行炎症评分。免疫后第12天分别提取3组大鼠的眼球制成病理切片,观察炎症反应。收集3组大鼠肝脏CD4⁺T细胞,流式细胞仪检测NKT细胞的表达水平,观察变化趋势;采用RT-PCR和ELISA分别检测白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）mRNA和蛋白表达情况。采用单因素方差分析进行数据处理。结果免疫后第12天,TGP干预组炎症评分和病理分级明显低于EAU模型组,但是高于正常对照组;与正常对照组相比,EAU模型组和TGP干预组NKT表达水平明显较高,且TGP干预组高于EAU模型组（P<0.05）;TGP干预组大鼠肝脏中IFN-γ的mRNA表达显著低于EAU模型组（P<0.001）;TGP干预组大鼠肝脏中IL-4mRNA低于正常对照组（P<0.001）,但明显高于EAU模型组（P<0.001）;TGP干预组大鼠肝脏IFN-γ蛋白浓度高于正常对照组（P<0.001）,低于EAU模型组（P=0.01）;TGP干预组大鼠肝脏中IL-4蛋白表达高于EAU模型组（P<0.001）。结论TGP可通过调节EAU大鼠IL-4、IFN-γ基因的表达水平,增加EAU大鼠中NKT细胞的表达数量,达到治疗葡萄膜炎的目的。     

短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎发展的作用

目的 探索短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发展的促进作用.方法 选取健康SPF级6～8周龄小鼠38只,随机分为模型对照组(EAU组)和高糖模型组(GLU组),每组19只小鼠.GLU组小鼠从造模前14 d开始给予200 g·L-1葡萄糖溶液饮水直至处死,EAU组小鼠给予正常饮水,同时保证EAU...     

Blockade of interleukin-6 signaling suppresses not only th17 but also interphotoreceptor retinoid binding protein-specific Th1 by promoting regulatory T cells in experimental autoimmune uveoretinitis

PURPOSE. Both Th17 and Th1 cells contribute to experimental autoimmune uveoretinitis (EAU). Interleukin-6 (IL-6) blockade inhibits Th17 differentiation in EAU and potently suppresses ocular inflammation, although its effect on Th1 cells is unknown. To clarify the mechanism of IL-6 blockade, the authors investigated T helper cells with particular focus on Th1 and regulatory T cells (Treg) in EAU of IL-6 gene knockout (KO) mice. METHODS. EAU was induced in wild-type (WT) mice and in mice lacking IL-6 (IL-6KO), IL-17 (IL-17KO), and IFN-γ (GKO) on a C57BL/6 background. Clinical scores of EAU, cytokine levels in supernatants from ocular tissue homogenates, and T helper cell differentiation in lymph nodes in each mouse were examined. To study the roles of Treg cells, EAU was induced in IL-6KO mice treated with anti-CD25 monoclonal antibody (mAb) to deplete Treg cells in vivo. RESULTS. Inflammation was comparable between WT, IL-17KO, and GKO mice but was absent in IL-6KO mice. Th17 and interphotoreceptor retinoid binding protein (IRBP)-specific Th1 cells were increased in GKO and IL-17KO mice, respectively, whereas both populations were reduced in IL-6KO mice. Th1-dominant EAU in IL-17KO mice was suppressed by anti-IL-6R mAb treatment. Treg cell depletion in vivo induced EAU in IL-6KO mice. CONCLUSIONS. After the induction of EAU, IL-6 deficiency resulted in the inhibition of the IRBP-specific Th1 response and enhanced the generation of IRBP-specific Treg cells. Furthermore, Treg was needed to inhibit Th1 responses and ocular inflammation in IL-6KO mice. Protective effects of IL-6 signaling blockade in EAU involve not only Th17 cell inhibition but also IRBP-specific Treg cell promotion.     

实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中T-bet的表达及意义

目的 研究实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）中T-bet的表达及意义 方法 Lewis大鼠28只，用视网膜S抗原与Freund完全佐剂免疫24只大鼠以诱导EAU模型，另外4只作为正常对照。免疫组大鼠分别于免疫后7、12、15、21 d被处死，取所有大鼠的眼球和脾脏，固定后制作眼组织平片和眼球及脾脏的石蜡连续切片。使用单克隆抗T-bet 和CD4的抗体，通过免疫组织化学细菌蛋白过氧化物酶法在上述组织平片及切片上进行免疫组织化学单染和双染色，在光学显微镜下观察并计数阳性细胞，数据经SPSS 11.0统计学软件分析。 结果 正常眼和脾组织中均见少量T-bet阳性细胞；免疫后7 d，虹膜、视网膜及脾脏中T-bet的表达增加，免疫后15 d达高峰，免疫后21 d表达降低，但仍高于正常组。免疫组织化学双染色显示，T-bet阳性细胞中多数为CD4+。 结论 T-bet在EAU的发病中起着重要作用，其作用可能是通过激活辅助性T淋巴细胞1而实现的。（中华眼底病杂志，2004，20：172-174）     

雷帕霉素对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

背景雷帕霉素不仅具有抗菌作用,而且是一种良好的免疫抑制剂,可用于多种自身免疫性疾病的治疗．对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的治疗作用是目前研究的热点之一。目的研究雷帕霉素对EAU的治疗作用,并观察雷帕霉素对EAU各免疫细胞群炎性因子表达的影响。方法25只Lewis大鼠采用随机数字表法分为EAU组（20只）和正常对照组（5只）。光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）R16肽段与完全氟氏佐剂充分乳化后于Lewis大鼠后足皮下注射以建立EAU模型,EAU模型鼠再按分层随机的原则分为模型对照组和雷帕霉素组,每组10只大鼠。雷帕霉素组造模后即应用O．2mg／（kg·d）雷帕霉素（0．4m1）腹腔内连续注射7d,模型对照组及正常对照组大鼠采用等体积的生理盐水进行腹腔内注射。造模后第4天开始每日裂隙灯下观察大鼠EAU的症状,造模后第14天制备大鼠视网膜切片,以苏木精-伊红染色法进行组织病理学观察,参照Caspi的标准对EAU症状及组织病理学分级进行评分。应用免疫组织化学染色法检测各组大鼠视网膜中炎性因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-17（IL-17）的表达情况。结果造模后6d模型对照组大鼠EAU炎症评分逐渐升高,12d达到高峰,然后逐渐下降。雷帕霉素组大鼠EAU炎症评分变化呈现相同的趋势,但各时间点EAU炎症评分均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。视网膜组织病理学研究表明,模型对照组大鼠视网膜结构紊乱,大量炎性细胞浸润,组织病理学评分为3．30±0．48,而雷帕霉素组视网膜结构接近正常,组织学评分为0．90±0．45,差异有统计学意义（t=16．541,P〈0．01）。雷帕霉素组IFN-γ、IL-17在大鼠视网膜中的表达量（A值）分别为21．16±4．23和49．86±6．59,明显低于模型对照组的62．14±7．32和124．85±6．33,差异均有统计学意义（q=33．334、q=56．923,P〈0．01）。结论雷帕霉素通过抑制EAU视网膜中IFN-γ、IL-17等炎性因子的表达而对EAU发挥治疗作用,其机制可能是通过抑制Th1、Th17细胞群来实现的。