miR-30b-5p 抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的　探讨miR-30b-5p对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Notch信号通路活化的调控机制及治疗作用。方法　通过Target Scan（http://www.targetscan.org/）对Notch1和Dll4基因与 miR-30b 的关系进行生物信息学预测。将雌性Lewis大鼠随机分为对照组、EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p空载体（miR-30b-5p-N）组。EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠首先诱导EAU模型,miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠分别采用携带miR-30b-5p和miR-30b-5p-N的慢病毒于EAU大鼠脾脏进行注射干预处理,EAU组大鼠于同一部位注射相同体积的生理盐水。处理后12 d,实时荧光定量PCR检测4组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA的表达;免疫组织化学检测4组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达,分析miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的调控作用。结果　生物信息学预测分析结果表明,Notch 信号通路上 Notch1和Dll4基因均为 miR-30b 调控的靶基因。免疫后12 d,相比于对照组,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA水平均升高（均为P<0.05）;经miR-30b-5p干预治疗后,miR-30b-5p组脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 mRNA表达均显著降低（均为P<0.05）。免疫组织化学检测结果显示,免疫后12 d,EAU组、miR-30b-5p组和miR-30b-5p-N组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4 蛋白表达均上调（均为P<0.05）;miR-30b-5p干预治疗后,脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白表达均显著下调（均为P<0.05）。结论　miR-30b-5p可明显下调EAU大鼠各组织中Notch1和Dll4等Notch信号通路相关分子的表达进而抑制Notch信号通路活化,从而达到治疗葡萄膜炎的作用。     

rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用

目的　探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis,EAU）中的表达变化。方法　双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-D眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR（Q-PCR）检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果　双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达（均为P<0.01）;Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠（均为P<0.05）。结论　rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。     

rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

目的 探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用.方法 构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3'UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将mo-miR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测mo-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况.结果 双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P＜0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P＜0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3'UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展.本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础.     

龙胆泻肝汤对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的干预作用

目的　探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis,EAU）大鼠Notch信号通路相关基因表达的影响。方法　Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和龙胆泻肝汤干预组,后两组诱导EAU模型,龙胆泻肝汤干预组造模后用龙胆泻肝汤灌胃。免疫后12 d分别分离三组大鼠的脾脏和淋巴结收集CD4⁺T细胞,流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的表达水平;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测Notch1、Notch2、Notch3、Notch4基因的表达情况;ELISA检测Notch信号通路相关蛋白的表达水平。结果　流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞水平明显升高,Treg细胞水平降低;与EAU模型组相比,龙胆泻肝汤干预组大鼠的Th17细胞水平明显下降,Treg细胞水平升高,两者比例逐渐恢复均衡;qRT-PCR检测发现龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4基因的表达在免疫后12 d高于正常对照组（均为P<0.01）,但显著低于EAU模型组（均为P<0.01）,Notch3基因在大鼠脾脏和淋巴结未检测到表达;ELISA检测结果发现,龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4蛋白表达水平在免疫后12 d虽然高于正常对照组（均为P<0.01）,但显著低于EAU模型组大鼠（均为P<0.01）。结论　龙胆泻肝汤可有效缓解EAU大鼠中Th17/Treg比例失衡状态,其作用机制可能涉及到Notch信号通路调节的nave CD4⁺T细胞向Th17 和Treg细胞的分化。     

龙胆泻肝汤抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠Th1、Th2细胞分化的影响

目的　探讨龙胆泻肝汤（LXD）对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法　将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD干预组大鼠造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃。干预后12 d分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测Rbpj基因的表达,ELISA检测Rbpj、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）蛋白的表达,流式细胞仪检测各组织中Th1、Th2细胞的表达水平,分析Th1/Th2细胞比例的变化。结果　干预后12 d,Q-PCR检测发现,与正常对照组大鼠相比, Rbpj mRNA在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中均呈显著上调表达(均为P<0.001);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj mRNA相对表达水平均显著降低(均为P<0.01)。ELISA检测结果发现,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj和IFN-γ蛋白表达水平均明显高于正常对照组,IL-4蛋白表达水平均明显低于正常对照组（均为P＜0.05);相比于EAU模型组,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中Rbpj IFN-γ蛋白表达水平均显著降低,IL-4蛋白表达水平均显著升高（均为P＜0.05)。流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Th1细胞水平均明显升高,Th2细胞水平均明显降低,Th1/Th2细胞比例失衡（均为P＜0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中Th1细胞水平均明显下降,Th2细胞水平均明显升高,两者细胞比例逐渐恢复均衡（均为P<0.01)。结论　LXD可通过下调EAU大鼠Notch信号通路转录因子Rbpj的表达水平抑制Notch信号通路的活化,显著促进EAU大鼠中Th1/Th2细胞比例恢复平衡并改善免疫微环境,从而达到治疗葡萄膜炎的目的。     

龙胆泻肝汤抑制葡萄膜炎大鼠Notch信号通路活化的作用

目的　探讨龙胆泻肝汤（Longdan Xiegan Decoction，LXD）对实验性自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis，EAU）大鼠Notch信号通路活化的抑制作用及其对辅助性T细胞17（T helper 17，Th17）和调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）表达水平的影响。方法　随机将雌性Lewis大鼠分为正常对照（NC）组、EAU模型组、LXD干预组。EAU模型组和LXD干预组大鼠诱导EAU，免疫后LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理，EAU模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃。免疫后12 d观察大鼠眼部炎症表现，取三组大鼠眼球进行病理切片，观察病理学变化；实时荧光定量PCR（quantitative polymerase chain reaction，QT-PCR）和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中Notch1、DLL4、白细胞介素10（interleukin 10,IL-10）和IL-17 mRNA及蛋白的表达；流式细胞仪检测三组大鼠各组织中Th17、Treg细胞的表达。结果　病理检查结果表明，LXD对EAU大鼠眼部组织结构有明显的保护作用。QT-PCR和ELISA检测结果发现，与NC组相比，LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1、DLL4、IL-10、IL-17 mRNA和蛋白表达水平均升高，但除IL-10外，其他明显低于EAU模型组（均为P<0.05）；流式细胞仪检测结果发现，EAU模型组大鼠的各组织中Th17/Treg比例均高于NC组，经LXD干预后，Th17细胞表达水平下降，Treg表达水平升高，两者比例趋向平衡。结论　LXD可有效降低EAU大鼠脾脏、淋巴结、眼组织中Notch1、DLL4、IL-10和IL-17 mRNA和蛋白的表达水平，改善Th17/Treg细胞比例的平衡，从而有效减轻EAU大鼠的眼部炎症，保护眼部组织结构，调节全身及眼部的免疫状态。     

miR-223-3p靶向调控Rbpj转录因子对葡萄膜炎大鼠Th1和Th17细胞分化的影响

目的：探讨miR-223-3p对Notch信号通路转录因子Rbpj表达的调控作用以及对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠Th1、Th17细胞分化水平的影响。

方法：用双荧光素酶表达报告系统探讨miR-223-3p对Rbpj基因表达的调控作用。将24只雌性Lewis大鼠随机分为EAU模型组、正常对照组(NC组)和空白对照组(BC组),每组8只。EAU模型组注射含光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)、结核菌素和完全弗氏佐剂的乳糜液以诱导葡萄膜炎,BC组注射等体积的不含IRBP多肽的乳糜液,NC组注射等体积的无菌生理盐水。免疫后12d,无菌分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测miR-223-3p和Rbpj基因的表达水平; 酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白的表达水平; 流式细胞仪检测三组大鼠不同组织中Th1和Th17细胞的表达水平。

结果：双荧光素酶检测结果证实Rbpj是miR-223-3p调控的靶基因。免疫后12d,相比于NC组,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p相对表达水平分别为0.33±0.29、0.11±0.12、0.18±0.11,均呈下调表达(均P<0.05); Rbpj mRNA水平均呈上调表达,分别为3.00±0.06、1.52±0.12、3.01±0.34(均P<0.05); BC组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中miR-223-3p和Rbpj mRNA水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。ELISA检测结果发现,免疫后12d的EAU模型组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平均明显高于NC组(均P<0.05),BC组大鼠各组织中Rbpj、IFN-γ、IL-17蛋白表达水平与NC组相比均无差异(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12d,EAU模型组各组织的Th1和Th17细胞比例均显著高于NC组(均P<0.05)。BC组与NC组各组织Th1和Th17细胞比例无明显变化(均P>0.05)。

结论：miR-223-3p可负调控Notch信号通路转录因子Rbpj的表达。EAU大鼠中miR-223-3p的下调表达可升高Rbpj基因和蛋白的表达水平,促进Th1和Th17细胞的分化以及提高相关分子IFN-γ和IL-17的表达水平,进而影响葡萄膜炎的发生发展。     

miR-223-3p调控NLRP3炎症小体对自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响

目的 探讨miR-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。方法 首先构建双荧光素酶报告质粒载体,并验证miR-223-3p对NLRP3基因表达的调控作用。然后将48只健康Lewis雌性大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAU组和miR-223-3p慢病毒组,每组16只。EAU组和miR-223-3p慢病毒组大鼠首先用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)乳糜液诱导EAU模型,同时miR-223-3p慢病毒组每只大鼠双眼玻璃体内注射8μL携带miR-223-3p的慢病毒,造模12 d后麻醉处死大鼠,分离各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织。实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p、NLRP3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)的基因表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)以及NLRP3的蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组大鼠眼...     

龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用

目的　探讨龙胆泻肝汤（Longdan Xiegan decoction,LXD）对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法　将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导并建立EAU模型,LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理12 d,EAU组大鼠给予相同体积的PBS缓冲液灌胃处理12 d。实时荧光定量PCR(Q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中iNOS和Arg1 mRNA及蛋白的表达;此外,采用流式细胞仪检测以上各组织中M1型、M2型巨噬细胞极化水平,分析LXD对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。结果　免疫后12 d,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠各组织中iNOS mRNA和蛋白表达均升高,而Arg1 mRNA和蛋白表达均降低（均为P<0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中iNOS表达均降低,而Arg1表达均升高（均为P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低（均为P<0.05）,呈现不均衡表达;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平下降,而M2型巨噬细胞极化水平升高,两者比例逐渐恢复均衡。结论　在EAU大鼠中,M1/M2巨噬细胞极化比例紊乱,LXD可明显降低M1型巨噬细胞极化水平以及相关因子iNOS表达,提高M2型巨噬细胞极化水平以及相关因子Arg1表达,从而发挥对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。     

CD4＋CD25＋T细胞在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中的作用

背景实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）已被证明是一种由T淋巴细胞介导的器官特异性自限性疾病。研究表明 CD4＋CD25＋T细胞可能参与了EAu的调控,但其作用机制尚有待研究。目的探讨EAU中 CD4＋CD25＋T细胞的表达变化。方法按照Caspi的方法提纯牛视网膜S抗原,与弗氏完全佐剂混合后,于24只Lewis大鼠右后足底部注射0．1ml制作EAU模型,4只未处理大鼠作为正常对照组。免疫后每日州裂隙灯显微镜观察大鼠眼部变化。造模后7、12、15、21d处死动物,取大鼠视网膜、引流淋巴结、脾脏,对大鼠眼组织切片进行苏木精一伊红染色前进行病理评分。对各时间点收集的大鼠视网膜、引流淋巴结、脾脏分别制备单细胞悬液,流式细胞仪检测各时间点3种组织中 CD4＋CD25＋T细胞的表达情7兄。结果造模7d后大鼠睫状充血,虹膜血管扩张;15d后炎症达高峰,前房大量炎性渗出;21d后炎症消退。眼部病理评分结果与临床所见一致,造模15d组病理评分与其他各组比较差异均有统计学意义（P=0．000）。正常对照组大鼠脾脏和淋巴结中有2．0％CD4＋T细胞表达CD25,造模组 CD4＋CD25＋T细胞表达增加,亓在EAU高峰期达最高,EAU消退期轻微下降,与正常对照组比较差异有统计学意义（P=0．000）。结论 CD4＋CD25＋T细胞在EAU动物模型炎症组织中表达的动态变化与炎症反应有关,提示 CD4＋CD25＋T细胞参与EAU的发生发展和消退过程。     

Notch1和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1在糖尿病小鼠视网膜中的表达

背景 多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）在糖尿病视网膜病变（DR）发生过程中具有重要作用,而Notch1是生物体重要的信号转导通路,可能参与对视网膜新生血管性疾病的拮抗过程,Notch1是否参与了DR的发生还未得到证实. 目的 探讨Notch1、Dll4、PARP-1、Akt、核因子-κB（NF-κB）及caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织及高糖视网膜血管内皮细胞（RVECs）中的表达. 方法 建立糖尿病小鼠模型,应用免疫组织化学法和Western blot法检测Notch1、Dll4、PARP-1、Akt、NF-κB及caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织及RVECs的表达.结果 Notch1、Dll4、p-Akt在糖尿病小鼠视网膜组织中的表达量比正常对照组明显降低,而PARP-1、caspase-3在糖尿病小鼠视网膜组织中的表达量比正常对照组明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,但NF-κB的表达量无明显变化,差异无统计学意义（t=0.748,P=0.530）.RVECs中Notch1、p-Akt的表达量随葡萄糖浓度的增高而增加,而剪切型PARP-1、caspase-3的表达量则随葡萄糖浓度的增高而降低,在葡萄糖浓度为30 mmol/L时上述变化最显著,与正常对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而NF-κB的表达量无明显变化. 结论 在糖尿病小鼠视网膜中,剪切型PARP和caspase-3蛋白的表达上调,但Notch1、p-Akt蛋白的表达量下调.剪切型PARP和caspase-3表达量随葡萄糖浓度的增高而增加,Notch1、p-Akt则相反.     

调节性T细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用

目的探讨CD4^＋调节性T细胞（Treg）在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）病程进展中的作用。方法通过IRBP161-180和完全弗氏佐剂皮下免疫,在B10RⅢ小鼠诱导产生EAU,对眼内炎症行临床检查并对其严重程度予以评分。通过免疫磁珠分选EAU恢复期小鼠脾脏CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋CD25^-T细胞。通过流式细胞术分析脾脏CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的比例。通过体内过继转移评价Treg的抑制效应。结果小鼠诱导EAU后产生眼内炎症反应。将EAU恢复期小鼠脾细胞、脾CD4＋T细胞或脾CD4^＋CD25^＋T细胞过继转移入正常小鼠继而皮下免疫诱导EAU,眼底检查显示受者小鼠眼内炎症程度明显降低。相反,正常小鼠脾细胞、EAU恢复期脾CD8^＋T细胞或CD4^＋CD25^-T细胞过继转移无此效应。流式细胞分析显示随着EAU的发展,脾内CD4^＋CD25^＋T细胞比例和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞比例逐步升高,并在恢复期维持较高水平。结论 CD4^＋Treg随着EAU的病程进展数量增多,它们可能参与EAU的自发缓解。