组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACI）对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响。方法 体外培养神经胶质瘤细胞株U251,用脂质体转染MKK7-siRNA1、MKK7-siRNA2和对照siRNA,48 h后Western blot检测MKK7表达及JNK/c-Jun活性,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况;用0.5 μM组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（trichostatin A, TSA）处理细胞8 h,DMSO作对照,Western blot检测MKK7、p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun表达或磷酸化水平;用TSA分别处理细胞8、12、24 h,检测各时间点细胞增殖率;用其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括伏立诺他（suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA）,丙戊酸（valproic acid, VPA）,M344处理细胞检测MKK7表达及细胞增殖。结果 同对照组相比,沉默MKK7表达抑制了JNK/c-Jun活性和细胞增殖（P=0.008）;TSA处理细胞8 h显著抑制MKK7表达及JNK/c-Jun活性,SAHA、M344、VPA均显著抑制MKK7表达。TSA处理细胞8 h没有抑制细胞增殖,处理12 h显著抑制增殖（P=0.006）, 24 h抑制效应更明显（P=0.002）; SAHA（P=0.001）, M344（P=0.008）或VPA（P=0.002）处理细胞12 h均抑制了细胞增殖。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过抑制MKK7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖。     

高分级胶质瘤的放化综合治疗

胶质瘤是起源于神经胶质细胞的肿瘤，主要包括星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤和混合性胶质细胞肿瘤。星形细胞瘤是胶质瘤中最常见的类型，其中的间变性星形细胞瘤又称恶性星形细胞瘤，属WHOⅢ级。临床常将恶性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤统称为恶性胶质瘤，而将Ⅲ级胶质瘤（如间变性星形细胞瘤，间变性少突胶质细胞瘤）、胶质母细胞瘤、胶质肉瘤等统称为高分级胶质瘤。     

CD133、CD68和PD-L1在不同病理级别脑胶质瘤组织中的表达及相关性

目的 探讨人脑胶质瘤组织中胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSCs）标志物CD133、肿瘤相关巨噬细胞（tumor- associated macrophages,TAMs）标志物CD68和负性共刺激分子PD-L1在不同病理级别人脑胶质瘤组织中的表达及其相关性。方法 采用免疫荧光双染法检测不同病理级别脑胶质瘤组织中CD68和PD-L1蛋白的共表达情况;采用实时荧光定量PCR（quantitative real- time fluorescent PCR,qRT-PCR）技术检测30例低级别脑胶质瘤（Ⅰ级和Ⅱ级）组织和30例高级别脑胶质瘤（Ⅲ级和Ⅳ级）组织中CD133、CD68和PD-L1 mRNA的表达,并分析其与临床病理级别之间的相关性。结果 脑胶质瘤组织中PD-L1和CD68共表达在肿瘤相关巨噬细胞上,即大部分PD-L1阳性细胞为肿瘤相关巨噬细胞,高级别组CD68和PD-L1蛋白的共表达明显高于低级别组。在脑胶质瘤组织中,CD133、CD68和PD-L1 mRNA的表达水平均与病理分级呈正相关（r=0.647,P<0.001;r=0.499,P<0.001;r=0.445,P=0.001）;三者在高级别脑胶质瘤组织中的表达均高于低级别脑胶质瘤组织（P＜0.05）; 脑胶质瘤组织中CD133与CD68 mRNA的表达呈正相关（r=0.525,P<0.001）,低级别组和高级别组中两者表达亦呈正相关（r=0.518,P=0.005;r=0.500,P=0.007）;脑胶质瘤组织中CD133与PD-L1 mRNA表达呈正相关（r=0.431,P<0.001）,低级别组和高级别组两者表达亦呈正相关（r=0.398,P=0.036;r=0.417,P=0.027）。结论 脑胶质瘤组织中PD-L1主要由肿瘤微环境中的TAMs表达;CD133、CD68和PD-L1表达与脑胶质瘤的恶性程度密切相关。     

少突胶质细胞瘤中染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性

目的 研究少突胶质细胞瘤染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性。方法 选取少突胶质细胞瘤35例、间变型少突胶质细胞瘤32例标本作为实验组,星形细胞瘤20例及瘤旁正常脑组织标本20例作为对照组,荧光原位杂交方法检测染色体1p/19q联合缺失情况,巢式甲基化特异性PCR技术检测MGMT基因启动子甲基化情况。结果 少突胶质细胞瘤和间变型少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失率分别为85.71%、75.00%,均显著高于星形细胞瘤及正常脑组织（P<0.05）;少突胶质细胞瘤、间变型少突胶质细胞瘤、星形细胞瘤的MGMT基因启动子甲基化率均显著高于正常脑组织（P<0.05）,但三者组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化呈正相关性,并且均与患者3年生存率相关（P<0.05）。结论 少突胶质细胞瘤中1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化状态密切相关,联合检测有助于提高临床病理诊断的精确性,更好地评估预后。     

抑癌基因TCF21启动子甲基化在肾癌诊断及预后中的意义

目的 探讨TCF21启动子甲基化在肾癌诊断与预后中的意义。方法 使用焦磷酸测序仪对样本的TCF21基因启动子甲基化水平进行定量检测,并进行统计学分析。结果 肾癌组织及尿液中TCF21基因甲基化水平明显升高（P=0.000,P=0.000）。肾癌组织TCF21基因甲基化水平与年龄（P=0.003）、吸烟史（P=0.018）、Fuhrman分级（P=0.046）及临床分期（P=0.048）有关, TCF 2 1 甲基化水平与年龄（ r=0 . 4 0 3 、P=0 . 0 0 2 ） 、吸烟史（r=0.321、P=0.017）和Fuhrman分级（r=0271、P=0.045）呈正相关。肾癌尿液中TCF21甲基化水平与肿瘤大小（P=0.000）、Fuhrman分级（P=0.013）及临床分期（P=0.020）有关,TCF21甲基化水平与肿瘤大小（r=0.662、P=0.000）、Fuhrman分级（r=0.662、P=0.010）和临床分期（r=0.662、P=0.017）呈正相关。TCF21高甲基化组（>35.42%）与TCF21低甲基化组（≤35.42%）患者术后生存率和总生存率差异有统计学意义（P=0.000,P=0.000）。肾癌组织中TCF21甲基化水平诊断肾癌的ROC曲线下面积高于尿液样本,差异具有统计学意义（P=0.004）。结论 TCF21与肾细胞癌的发生、发展及预后有关。联合检测肾细胞癌组织标本和尿液标本可作为诊断肾癌及判断预后等生物学行为的重要指标。     

内向整流性钾通道4.1在人星形细胞瘤中的表达变化研究

目的：研究内向整流性钾通道4.1（kir4.1）在人星形细胞瘤和正常脑组织的表达差异,探讨星形细胞瘤增殖、生长的分子机制。方法：选取50例星形细胞瘤患者的肿瘤组织,其中胶质母细胞瘤21例,间变性星形细胞瘤15例,星形胶质细胞瘤14例。以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照。利用免疫组化与蛋白印迹（Western-blot）方法检测肿瘤组织与对照组织的kir4.1表达。结果：不同星形细胞瘤组织与对照组相比较,kir4.1表达增强（P〈0.05）;其中,恶性程度较高的胶质母细胞瘤相对于恶性程度较低的星形胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤,kir4.1表达更为强烈（P〈0.05）。结论：kir4.1表达的变化与肿瘤的恶性程度有关。kir4.1在人星形细胞瘤组织表达增强。     

多形性胶质母细胞瘤放疗临床靶区范围及治疗的讨论

间变性星形细胞瘤为WHO Ⅲ级，多形性胶质母细胞瘤为WHO Ⅳ级，美国NCCN2007指引中建议，对于高级别胶质瘤应最大范围切除肿瘤，术后病理为间变性星形细胞瘤者，应予放疗±同期化疗±辅助化疗；而若证实为多形性胶质母细胞瘤者，则应予放疗＋同期化疗＋辅助化疗。关于高级别脑胶质瘤靶区的勾画尚无定论。我们收治一例右侧额叶混合性胶质瘤（部分为间变性星形细胞瘤，部分为多形性胶质母细胞瘤），于外院行肿瘤全切术，术后经多学科讨论后认为应予放疗加替莫唑胺同期化疗及辅助化疗。本文就此病例的放疗靶区勾画及治疗进行讨论。     

恶性胶质瘤的治疗现状及进展

恶性胶质瘤(malignant gliomas,MG)包括胶质母细胞瘤(glioblastomas,GBM)、间变性星形细胞瘤(anaplastic astrocytomas,AA)、间变性少支星形细胞瘤(anaplastic oligoastrocytomas,AOA)及间变性少支胶质细胞瘤(anaplastic oligodendrogliomas,AO),其中GBM的年发病率为3.19/100000人。     

CD15及CD133在高、低级别胶质瘤中的表达及意义

目的探讨CD15在胶质瘤的表达及分布特征,与目前公认的脑肿瘤干细胞标志物CD133作对照,并探讨两者相关性。方法采用免疫组织化学法检测80例胶质瘤组织（高级别39例,低级别41例）CD15和CD133的表达。用Image-Pro Plus 6.0图像分析处理软件计算CD15和CD133阳性细胞积分光密度值（IOD）。结果CD15与CD133在高、低级别的胶质瘤均有表达。CD15及CD133阳性细胞数以及壁龛随胶质瘤病理级别增高而增多。在高、低级别胶质瘤中CD15⁺细胞与CD133⁺细胞IOD值差异均有统计学意义（z=－3.432,P=0.001;z=－4.192,P=0.000）;CD15⁺细胞与CD133⁺细胞IOD值呈显著正相关（r=0.535,P=0.000）;CD133还表达于含有肥胖细胞成分的胶质瘤肥胖细胞中,并可见CD133+血管。结论CD15及CD133阳性细胞数以及壁龛随胶质瘤病理级别增高而增多。CD15及CD133表达成正相关关系。含有肥胖细胞成分的胶质瘤中大量肥胖细胞CD133阳性,与其不良临床预后相符。关键词：     

BMP2 mRNA在脑胶质瘤中的表达及与生存期的关系

目的:分析骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）mRNA在脑胶质瘤中的表达及与生存期的关系。方法:收集中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库(www.CGGA.org.cn)中542例不同类型脑胶质瘤患者临床、病理、分子病理、总生存时间,比较BMP2 mRNA在不同类型脑胶质瘤患者中的表达,及与生存期关系。结果:脑胶质瘤患者BMP2 mRNA表达与性别无关（t=1.011,P=0.313);年轻患者较年老患者表达更高(t=4.324,P=0.000);少突胶质细胞瘤患者表达高于星形胶质细胞瘤患者,高于胶质母细胞瘤患者(F=123.569,P=0.000);WHO II、WHO III级患者表达高于WHO IV级患者(F=60.410,P=0.000)。IDH突变型患者表达高于IDH野生型患者(t=22.309,P=0.000)。1p/19q缺失患者表达高于1p/19q无缺失患者(t=14.933,P=0.000)。较低级别胶质瘤患者及胶质瘤母细胞瘤患者中IDH突变型患者BMP2 mRNA表达均高于IDH野生型患者(F=161.604,P=0.000)。脑胶质瘤BMP2 mRNA高表达者生存期长于低表达者(χ2=78.334,P=0.000)。结论:脑胶质瘤恶性程度越低,BMP2 mRNA表达越高。BMP2 mRNA高表达者生存期更长。     

乳腺癌中组蛋白去甲基化酶JMJD3与上皮间质转化相关蛋白表达的相关性及临床意义CSCD

目的探讨乳腺癌组织中组蛋白去甲基化酶JMJD3与上皮细胞-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的表达及其相关性。方法收集120例乳腺癌及对应癌旁组织标本,采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织中JMJD3、E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的表达,并分析上述蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系及相关性。结果乳腺癌组织中JMJD3和E-cadherin阳性率(56.67%和65.00%)显著低于癌旁组织(73.33%和83.33%)(均P<0.05),Vimentin和N-cadherin阳性率(54.17%和58.33%)显著高于癌旁组织(23.33%和20.83%)(均P<0.05)。JMJD3、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin的表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期和淋巴结转移均相关(均P<0.05),JMJD3与肿瘤直径相关(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌中JMJD3与E-cadherin表达呈正相关(r=0.204,P=0.025),与Vimentin和N-cadherin表达均呈负相关(r=-0.467,r=-0.500,均P=0.000)。结论乳腺癌中JMJD3可能通过调节乳腺癌细胞上皮-间质转化途径调控乳腺癌侵袭转移。     

GSTP-1基因遗传变异对术后接受替莫唑胺联合放疗的脑胶质瘤患者预后的影响

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P-1（GSTP-1）基因遗传变异对术后接受替莫唑胺联合放疗的脑胶质瘤患者预后的影响。方法 收集患者外周血进行GSTP-1基因多态性位点基因分型。收集部分患者接受化疗前的新鲜外周血单核细胞提取RNA进行GSTP-1 mRNA表达实验。对多态性位点和其他变量进行相关性分析。结果 Ile105Val位点在研究人群中的分布频率为：G/G型68.00%（119例），G/A型29.14%（51例），A/A型2.86%（5例），最小等位基因频率为0.17，该位点基因型分布频率符合Hardy-Weinberg平衡（P=0.868）。G/A+A/A型和G/G基因型患者的中位无进展生存期（PFS）分别为4.4和6.9月，差异有统计学意义（P=0.005）。G/A+A/A型和G/G基因型患者的中位总生存期（OS）分别为11.0和15.3月，差异有统计学意义（P<0.001）。G/A+A/A基因型对OS具有独立的影响意义（OR=1.68, P=0.011）。G/A+A/A基因型患者的GSTP-1 mRNA表达较G/G型高（P<0.001）。结论 GSTP-1基因Ile105Val位点可能通过影响GSTP-1基因mRNA表达进而影响接受替莫唑胺联合放疗的胶质瘤患者预后。     

乏氧条件下HIF-1α通过上调PD-L1促进鼻咽癌恶性发展的机制

目的 探讨乏氧条件下HIF-1α通过上调PD-L1促进鼻咽癌恶性发展的机制。方法 选取人类鼻咽癌细胞系CNE2细胞进行实验。设置常氧组（20%O2）、乏氧组（1%O₂）、HIF-1α-siRNA+乏氧组和NCsiRNA+乏氧组。MTT实验检测各组细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞凋亡;RT-PCR检测各组细胞中HIF-1α、STAT3和PD-L1 mRNA表达的变化;Western blot检测不同处理条件下各组细胞HIF-1α、STAT3和PD-L1蛋白表达的变化及STAT3磷酸化情况。结果 MTT实验显示,乏氧组和转染细胞增殖率显著高于常氧组（P=0.000）,HIF-1α-siRNA+乏氧组的细胞增殖率明显低于常氧组、乏氧组和NC-siRNA+乏氧组（P=0.000）。流式分析显示,HIF-1α-siRNA+乏氧组的细胞凋亡率显著高于其他三组（P=0.001）。RT-PCR检测显示,HIF-1α-siRNA+乏氧组的HIF-1α、PD-L1和STAT3 mRNA水平显著低于乏氧组和NC-siRNA+乏氧组。蛋白印迹结果显示,HIF-1α、PD-L1和STAT3蛋白表达趋势与mRNA分子水平趋势一致。HIF-1α-siRNA+乏氧组pSTAT3蛋白水平也显著低于乏氧组和NC-siRNA+乏氧组（P=0.001）。结论 乏氧微环境下HIF-1α有可能通过STAT3上调PD-L1表达,进而促进癌细胞免疫逃逸,导致鼻咽癌恶性发展。     

横纹肌肉瘤组织中JMJD2B和HIF-1α的表达及其对预后的意义

目的 探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B和HIF-1α在横纹肌肉瘤（RMS）组织中的表达及意义。方法 选取78例RMS患者通过随访获取生存时间,采用免疫组织化学染色法检测JMJD2B和HIF-1α在RMS组织中的表达情况并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 78例样本中,JMJD2B和HIF-1α表达阳性例数分别为46例（59.0%）和44例（56.4%）。JMJD2B和HIF-1α的表达成正相关（P<0.001, r=0.518）且与肿瘤的危险度、治疗、转移、分期有关（均P<0.05)。生存分析显示危险度的级别、新辅助化疗的有无、HIF-1α和JMJD2B表达的高低与患者预后相关（均P<0.05）。进一步采用多因素Cox回归显示JMJD2B（HR=3.161, P=0.039）和危险度（HR=2.925, P=0.001）可作为RMS患者独立的预后因素。结论 JMJD2B和HIF-1α的表达与横纹肌肉瘤的总体生存密切相关,JMJD2B是横纹肌肉瘤患者的独立预后指标。