太空环境诱变黑色素瘤细胞的实验研究

目的观察太空环境对B16细胞生物学特性的影响，寻找免疫原性增强的细胞株。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞搭载于第20颗返回式卫星，返地后单克隆化，选择1株形态变异的单克隆细胞株（1^#），MTT法检测细胞增殖情况，接种C57BL／6J小鼠，分别观察细胞致瘤性、荷瘤小鼠免疫器官、生存期及瘤体病理变化。结果1^#太空诱变细胞株，形态呈现树突状，增殖速率与对照细胞比较差异无统计学意义（P〉0．05），接种C57BL／6J小鼠，肿瘤潜伏期延长（P〈0．01），瘤体重量减小（P〈0.01），胸腺系数增大（P〈0．01），且荷瘤小鼠生存期延长（P〈0，01），而脾系数与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05），病理学结果显示：1^#细胞组瘤体内血管不及对照组丰富，坏死区较少，瘤体内浸润淋巴细胞较对照组有不同程度的增多，瘤旁组织内有较多淋巴细胞。结论空间诱变1^#细胞株可能趋向分化，体内实验结果提示：1^#诱变细胞株抗原性可能被增强，激发了小鼠的免疫应答，该结果为进一步筛选免疫原性增强的细胞株，确定抗原的强化特征提供了实验基础。     

太空环境对黑色素瘤B16细胞成瘤性的影响

目的观察空间诱变小鼠黑色素瘤B16细胞株的成瘤性，寻找免疫原性发生变异的细胞株。方法将B16细胞株应用细胞低温长期生存系统，搭载于我国第20颗返回式卫星，返地后进行单克隆化，从得到的110株单克隆太空诱变B16细胞株中随机选取4株，常规培养后和对照细胞株同时分别接种C57BL／6J小鼠，腹腔接种组观察生存期，皮下接种组14d后取血、处死，记录瘤重，脾脏重，胸腺重，并进行血清细胞因子检测和瘤体的病理学检测。结果初步确定了适合太空诱变肿瘤细胞株体内筛选实验的方法和筛选指标，并筛选出了1株出瘤时间延迟、瘤重缩小，生存期延长，荷瘤小鼠血清IL-2浓度升高，免疫原性可能发生变异的B16细胞株。结论空间环境可使体外培养肿瘤细胞产生变异，能否通过太空诱变的方法增强肿瘤细胞株的免疫原性需进一步实验验证。     

太空环境对生物工程细胞CHO(dhfr-)的影响

目的 探讨空间环境对细胞的影响. 方法 利用基因工程细胞的航天搭载装置将细胞进行无源搭载,将生物工程CHO（dhfr-）细胞搭载于第18颗返回式卫星.随机选取3株诱变细胞株,MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,同时观察诱变细胞染色体变化,检测细胞周期调控相关基因p21Cip1/Waf1表达情况. 结果 太空诱变CHO（dhfr-）细胞增殖速度出现快慢不一的变化;细胞周期分布改变,G1期细胞显著增多（P〈0.05）,S期细胞明显减少（P〈0.05）;细胞染色体异常核型增加;p21^Cip1/Waf1基因表达上调,mdm2基因没有明显变化. 结论 太空环境可导致细胞产生多种变异,为改造、筛选优化哺乳动物宿主细胞表达系统提供了新手段.     

中药膏剂呼吸道给药对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的 研究中药膏剂通过呼吸道给药对S180荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及对其免疫功能的影响.方法 将S180细胞接种至昆明小鼠腹腔,待形成腹水后,取腹水接种至昆明小鼠左前肢皮下,建立皮下移植瘤模型,待瘤体体积达0.06cm3时开始用药.实验分为3组,每组6只.对照组不给予任何干预措施,正常饲养.中药组经呼吸道给药治疗,每日通过呼吸道吸入药物气体6h,1次/d,持续给药21d.阿霉素(ADM)组经腹腔注射ADM 1mg/kg,每周1次,共3次.每日观察昆明小鼠的进食、活动状况等一般体征,隔日测量小鼠体重.停药2d后,经小鼠内眦静脉取血,采用流式细胞术检测CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞比例.剥离小鼠皮下瘤结节称重,部分瘤组织进行病理学观察,部分制备成单细胞悬液,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,中药组小鼠静脉血中CD3+、CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值明显增高(P＜0.05).与对照组比较,中药组和ADM组小鼠皮下移植瘤重量明显降低(P＜0.01),而中药组与ADM组皮下移植瘤的重量差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,中药组细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).镜下病理学观察可见对照组移植瘤组织坏死局限,细胞丰富,排列紧密,中药组瘤组织内坏死广泛分布,无明显区域性,纤维组织增生,瘤细胞散在排列,瘤组织周围淋巴细胞浸润较多.ADM组瘤组织内亦可见较多坏死组织.结论 中药膏剂经呼吸道吸入给药可在一定程度上抑制小鼠S180皮下移植瘤的生长.     

凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其机制探讨

目的探讨凝血酶在体内促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其作用机制。方法细胞黏附试验和细胞迁移试验观察凝血酶对Glc-82细胞黏附特性和转移特性的影响,裸鼠移植瘤实验观察凝血酶对Glc-82移植瘤荷瘤小鼠体质量、瘤质量、肺结节及生存期的影响,Western印迹法观察凝血酶对移植瘤组织细胞外信号调节激酶（ERK）、黏着斑激酶（FAK）和抑癌蛋白PTEN（10号染色体上检出的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白）的影响。结果凝血酶在体外显著促进Glc-82细胞的黏附和迁移;在体内,凝血酶可降低荷瘤小鼠的体质量、增加瘤质量占体质量比、部分凝血酶组小鼠肺转移增多、荷瘤小鼠的生存时间缩短;Western印迹结果显示,凝血酶可促进肿瘤组织ERK的激活,促进FAK的表达,并且抑制抑癌基因PTEN的表达。结论凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的恶性进展,可能与促进肿瘤细胞的黏附和迁移特性,促进肿瘤组织ERK、FAK的激活及表达有关,并可能通过抑制抑癌蛋白PTEN的表达而发挥作用。     

不同光照剂量的光动力疗法对小鼠肝癌移植瘤增殖及局部免疫细胞的影响

目的探讨不同光照剂量的光动力疗法（PDT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤作用及局部免疫效应。方法 69只ICR小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、光照低剂量PDT组（能量密度135 J/cm2）和光照高剂量PDT组（能量密度215～225 J/cm2）。治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率。观察HE染色的瘤组织病理学改变,免疫组化法检测肿瘤组织的CD8＋细胞毒性T淋巴细胞（CD8＋CTLs）。结果 （1）光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组抑瘤率分别为73.9%、96.3%;光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低剂量PDT组（P〈0.01）。（2）PDT后2、24和72 h肿瘤组织先后出现肿瘤细胞空泡样变性、广泛核固缩及凝固性坏死;肿瘤中微血管淤血扩张、出血和管壁破坏,上述病理改变光照高剂量PDT组更为显著。（3）治疗后72 h光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量均明显高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）;而光照低剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量又显著高于光照高剂量PDT组（P〈0.05）。结论光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低能剂量PDT组;PDT可引起细胞毒性T淋巴细胞在肿瘤局部浸润增加,光照低剂量PDT组对肿瘤局部CD8＋CTLs的免疫增强效应优于光照高剂量PDT组。     

分割照射对肝癌移植瘤小鼠脾脏免疫细胞的影响

目的探讨肝癌皮下移植瘤小鼠的分割照射对远端脾脏组织的影响。方法构建荷瘤C57BL/6 J小鼠模型,取对数期生长的小鼠肝癌细胞Hepa 1-6接种于小鼠右侧皮下(1×10^7/只),荷瘤小鼠按随机数表法分为荷瘤对照组和照射组,每组20只。另设10只健康小鼠作为健康对照组。照射组皮下肿瘤给予8 Gy×3次X射线局部照射,剂量率为0.883 Gy/min。照射后第7、14天检测小鼠肿瘤脏器指数、脾脏脏器指数、脾脏病理学改变,以及脾脏T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群、NK细胞的变化。结果与荷瘤对照组相比,照后7、14 d,照射组小鼠肿瘤脏器指数显著降低(t=4.649、26.34,P<0.05),脾脏中NK细胞显著升高(t=3.952、3.633,P<0.05),CD3+、CD4+、CD3+CD4+淋巴细胞以及CD4+/CD8+比值在照后7 d显著降低(t=3.193、3.656、3.219、2.641,P<0.05),CD3+淋巴细胞在照后14 d显著降低(t=3.031,P<0.05),其余指标脾脏脏器指数、B淋巴细胞、CD3+CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞变化不显著。结论肿瘤局部照射可引起远隔器官内淋巴细胞比例失衡,导致机体免疫力下降,为放疗免疫损伤提供了新的诠释。     

光动力疗法对荷瘤小鼠血清中TNF-α含量影响的实验研究

目的探讨光动力疗法（PDT）抑瘤效应的免疫机制,以及PDT联合肿瘤局部注射卡介苗（BCG）的治疗效果。方法建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型72只,随机分为对照组、PDT组、BCG组和联合组,每组18只。观测各组移植瘤体积的变化。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）,测定各组PDT治疗后2、24 h和7 d荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α的变化。结果 1.各治疗组治疗后7 d的移植瘤体积较对照组均明显缩小（P〈0.01）。治疗后7 d联合组的肿瘤体积较PDT组明显缩小（P〈0.05）。2.ELISA结果显示,治疗后2、24 h和7 dPDT组和联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量均明显高于对照组和BCG组（P〈0.01）,联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量明显高于PDT组（P〈0.05）。结论 PDT可增强荷瘤小鼠全身的免疫力,肝癌移植瘤体积明显缩小。PDT联合局部注射BCG的疗效优于单用PDT和单用BCG。     

131I-Herceptin在昆明小鼠及荷人卵巢癌裸鼠模型中的生物分布和显像

目的 研究131 I标记抗人表皮生长因子受体-2蛋白（HER-2/neu）单克隆抗体Herceptin在正常昆明小鼠和荷人卵巢癌裸鼠体内的生物分布及荷人卵巢癌裸鼠的放射免疫显像特点.方法 （1）Iodogen法131I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯、稳定性及免疫活性.（2）流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测人卵巢癌SKOV-3、HO-8910细胞株及瘤组织HER-2/neu表达情况.（3）计算131I-Herceptin经昆明小鼠尾静脉注射后5,15,30 min和1,2,4,12,24,48,72 h及荷瘤裸鼠尾静脉注射后4,12,24和48h的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）和肿瘤/非肿瘤组织放射性（T/NT）比值.（4）行131I-Herceptin荷卵巢癌裸鼠模型显像,观察注射后1,2,4,8,12,24,48,72,96和120h显像情况并确定最佳显像时间.结果 （1）131I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯为98.4%,24 h后仍大于80%,标记物免疫活性较好.（2）SKOV-3细胞株HER-2/neu高表达,表达率92.67% 而HO-8910细胞株表达很低,表达率仅9.59%.（3）131I-Herceptin在昆明小鼠体内主要经肝、脾及肾代谢,血液快相半排期为0.27 h,慢相半排期为51.96h.在荷人SKOV-3移植瘤部位,24 h时放射性摄取值达到18.08%ID/g,显著高于其他脏器组织 T/NT比值随时间延长逐渐增高,72 h时肿瘤/脑放射性比值高达27.27.（4）SKOV-3荷瘤裸鼠在尾静脉注射131I-Herceptin后2 h即可见移植瘤放射性浓聚,48 h后与周围组织对比更为明显,至120 h时仍见移植瘤部位放射性明显浓聚,与对侧感兴趣区比值高达11.44.而HO-8910荷瘤裸鼠各时间点移植瘤几乎未见放射性浓聚.结论 131I-Herceptin对荷人SKOV-3移植瘤具有良好的靶向作用,有望用于高表达HER-2/neu的人卵巢癌患者放射免疫显像及其复发转移灶的靶向治疗.     

慢病毒介导的HER2-siRNA对人卵巢癌移植瘤的抑制及其显像监测

目的 研究慢病毒介导的干扰RNA沉默人表皮生长因子受体2(HER2)对卵巢癌SKOV-3细胞移植瘤生长的影响,并探讨放射免疫显像在RNA干扰肿瘤生物治疗中的应用价值.方法 利用HER2-短发夹状(sh) RNA慢病毒表达载体和随机序列慢病毒载体感染SKOV-3细胞株,建立稳定表达HER2-小干扰(si) RNA的SKOV-3细胞株及阴性对照(NC)细胞株.分别将细胞株接种于裸鼠,建立荷人卵巢癌裸鼠模型实验(KD1)组和NC组,并以未感染的SKOV-3细胞株裸鼠模型作为空白对照(CON)组,检测各组裸鼠(每组5只)的成瘤率、成瘤时间、瘤体大小、HER2蛋白表达.通过131Ⅰ-曲妥珠单克隆抗体(Herceptin)进行荷瘤小鼠放射免疫显像,观察肿瘤显影情况,比较各实验组T/B比值.采用SPSS 17.0对实验结果进行单因素方差分析和最小显著差异t检验.结果 裸鼠成瘤率为100％(15/15).CON组、NC组和KD1组的平均成瘤时间分别为(4.583±0.520)、(4.567±0.284)和(6.023±0.316) d(F=13.946,P＜0.01),KD1组移植瘤较另2组平均成瘤时间延长(t=4.557、4.608,均P＜0.01).至种植后28 d各组间移植瘤体积差异有统计学意义(F=26.343,P＜0.01);CON组、NC组和KD1组离体瘤质量分别为(0.614±0.135)、(0.558±0.190)和(0.120±0.489) g(F=225.026,P＜0.01);KD1组平均瘤体积(t=7.125、4.759)、瘤体质量(t=19.158、16.977)较另2组明显减小(均P＜0.01).免疫组织化学结果显示KD1组HER2蛋白表达明显减少(弱阳性).核素显像示各组荷瘤小鼠移植瘤均有不同程度显影,KD1组1、4、8、12、24、48、72和96 h T/B比值(0.208 ～4.427)均低于NC组(0.576～5.508)和CON组(0.640～5.695;F=9.197～ 39.375,均P＜0.05).结论 慢病毒介导的HER2-siRNA可以显著抑制人卵巢癌移植瘤的生长;131Ⅰ-Herceptin放射免疫显像能在一定程度上反映HER2蛋白的表达情况,有望用于针对HER2靶点的RNA干扰肿瘤生物治疗的疗效评估.     

辐射诱导pEgr-p16表达增强及其体外抑制B16黑色素瘤作用

目的研究pEgr-p16重组质粒在转染的黑色素瘤B16细胞中的辐射诱导表达特性,验证其联合放射治疗体外抑制B16细胞增殖的作用。方法将脂质体包裹的pEgr-p16重组质粒,转染B16细胞株;采用定量PCR方法检测不同剂量X射线诱导后p16的表达和同一剂量X射线诱导下p16的表达时程,流式细胞数术检测细胞凋亡率的变化;MTT法检测pEgr-p16基因协同放射治疗后B16细胞的存活情况。结果pEgr-p16重组质粒转染B16细胞,不同剂量X射线均可诱导p16表达增强,为假照组的3.78-6.67倍（P〈0.01）;2GyX射线照射后,p16表达随时间延长而逐渐增强,在照射后72h达到最高值。p16基因联合放射可诱导B16细胞凋亡,凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组（P〈0.05-0.01）;转染pEgr-p16质粒的细胞经2GyX射线照射,8d后细胞数明显低于同时间其他实验组（P〈0.05-0.001）。结论pEgr-p16基因-放射联合治疗有明显的抑制黑色素瘤B16细胞生长的作用,其作用优于单纯给予射线或基因转染。     

空间环境对黑色素瘤细胞基因表达谱的影响

目的探讨空间环境对黑色素瘤B16细胞基因表达谱的影响。方法利用“细胞在常温条件下长期存活装置”将B16细胞进行无源搭载。返地后常规培养，以常规培养的野生型B16细胞及地面装置组作为对照，甲基噻唑基四唑法测定细胞生长曲线，基因芯片分析细胞18240个基因的差异表达。结果搭载细胞返地培养后，与对照组细胞相比，生长速率差异没有显著性意义。与常规培养的对照相比，地面装置组细胞及空间组细胞分别有61及156个基因发生明显改变；其中35个基因为地面装置组及空间组细胞二者共同与常规对照组细胞差异表达，30个基因为空间培养细胞与地面装置组细胞之间差异表达；差异表达的基因涉及Wnt及Ca^2＋等信号传导途径。结论空间环境作用后，B16肿瘤细胞基因表达改变，一些信号传导途径及能量代谢表现为对空间环境较为敏感。     

8-Br-cAMP对THP1细胞中ABCA1及单核细胞趋化因子的影响

 目的 以THP1细胞株为靶点,研究8-Br-cAMP对ABCA1、MCP-1基因mRNA和蛋白质表达及IL-1β蛋白质的影响,阐明ABCA1基因在AS及泡沫细胞形成中新的可能机制.方法 复苏培养THP1细胞株,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染THP1细胞,给予上述8-Br-cAMP的刺激,同样的方法观察上述指标的改变.结果 予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24 h ABCA1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP刺激下,THP1细胞中ABCA1可增加炎症因子表达,参与AS的发生.     

光动力疗法对输入的NK细胞在荷Heps肝癌鼠瘤内分布的影响

目的探讨NK细胞输入后在荷Heps肝癌小鼠体内的分布规律,光动力疗法（PDT）对输入的NK细胞在肿瘤组织内分布的影响。方法 96只KM小鼠建立Heps肝癌移植瘤模型后随机分为对照组、细胞组（NK组）和光免疫组（PIT组）,每组32只。对照组小鼠尾静脉输入生理盐水,NK组小鼠尾静脉输入4,＇6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记的NK细胞,PIT组小鼠PDT处理后即刻输入DAPI标记的NK细胞。治疗后1、2、4、6和8 d摘取小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织,在荧光显微镜下观察NK细胞在上述脏器的动态分布情况;治疗后2 d观察瘤组织的病理学变化;治疗后1、2、4、6和8 d摘除小鼠眼球取血以流式细胞仪检测外周血NK细胞百分率;治疗后6 d LDH释放法检测小鼠脾细胞杀伤活性。结果 （1）各治疗组,输入后1、2、4、6和8 d,NK细胞在小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织中均有分布,其中以肿瘤组织内最多;NK细胞在瘤内浸润密度：以输入后2 d最高,而各时间点PIT组又显著高于NK组（P〈0.05）;（2）外周血中NK细胞含量：在治疗后1、2、4和6 d,PIT组较对照组明显增高（P〈0.01）;治疗后1、2和4 d,NK组较PIT组和对照组增高（与PIT组相比,P〈0.05;与对照组相比,P〈0.01）;（3）效靶比为10∶1、20∶1和50∶1时,NK组和PIT组脾细胞杀伤活性均显著高于对照组,其中PIT组又显著高于NK组（P〈0.01）。结论 NK细胞输入荷瘤小鼠体内后能选择性聚集于肿瘤组织内;PDT可增加输入的NK细胞在瘤内的浸润密度,增强小鼠脾细胞对Heps肝癌的杀伤活性。     

抑制FOXD1基因表达增强结直肠癌细胞HCT116的放射敏感性

目的 研究抑制FOXD1基因的表达对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot检测人结直肠癌组织和细胞中FOXD1 mRNA和蛋白的表达。对结直肠癌HCT116细胞行梯度剂量（0、2、4、6 Gy）X射线照射,qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中FOXD1的表达。将siRNA阴性对照和FOXD1 siRNA转染至结直肠癌细胞中,分别记为si-NC组和si-FOXD1组,经4 Gy的X射线照射处理后记为si-NC+4 Gy组和si-FOXD1+4 Gy组,Western blot检测各组细胞中FOXD1的表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞的增殖活性,克隆形成实验检测各组细胞存活率,采用TECT DNA-PK试剂盒检测各组细胞中DNA-PK活性,将转染的结直肠癌细胞接种于BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,进行射线照射后,检测各组肿瘤的体积和质量变化。结果 与癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中FOXD1 mRNA和蛋白的表达均显著增加（t=5.579、4.816,P<0.05）,与结肠黏膜上皮细胞NCM460相比,结直肠癌细胞株中FOXD1 mRNA（t=5.85~17.62,P<0.05）和蛋白（t=9.04~11.42,P<0.05）表达均显著升高。结直肠癌细胞HCT116中FOXD1的表达量随着放射剂量增加而升高,呈现剂量依赖性,差异有统计学意义（t=9.13~44.15,P<0.05）。转染si-FOXD1能够有效地抑制结直肠癌细胞中FOXD1的表达（t=10.51,P<0.05）,FOXD1敲低后能够抑制结直肠癌细胞的增殖活性（t=10.41,P<0.05）,提高结直肠癌细胞的放射敏感性,放射增敏比为1.797,降低放射诱导的DNA-PK的活性（t=6.20,P<0.05）。抑制FOXD1的表达经射线照射后,裸鼠种植瘤体积和重量明显减小（t=11.29、3.69,P<0.05）。结论 抑制FOXD1基因的表达能够提高结直肠癌细胞的放射敏感性,抑制结直肠癌裸鼠移植瘤的生长,可为改善放射治疗对结直肠癌患者的治疗效果提供潜在的靶向基因。     

Melanoma growth and tumorigenicity in models of microgravity

INTRODUCTION: Spaceflight involves numerous biological stressors that could affect long-term cancer incidence and tumor behavior. Ground-based models of microgravity can be used to investigate in vitro and in vivo tumor growth as a preparation for later work in space. The incidence of tumor growth and carcinogenesis in microgravity is as yet unknown. Hence, we investigated the effects of modeled microgravity on tumor growth and tumorigenicity using ground-based in vitro and in vivo models. METHODS: Murine B16-F10 melanoma cells were cultured in a tissue culture flask (FL) and in a rotating-wall vessel bioreactor (BIO) designed by NASA to simulate some aspects of microgravity. We then measured cell growth, melanin production, and apoptosis. After 48 h of cultures in FL and BIO, cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice, syngeneic hosts for B16-F10 tumor cells. Tumor sizes were then measured every other day. RESULTS: BIO cultures had 50% decreases in growth when compared with FL cultures while demonstrating an inversely proportional increase in doubling time. Melanin production (a marker of differentiation) increased at 24 and 48 h in BIO. Flow cytometry analysis demonstrated that there was an increase in the percentage of apoptotic cells in the BIO when compared with that in the FL. When BIO-cultured melanoma cells were inoculated subcutaneously in mice, there was a significant increase in tumorigenicity as compared with FL-cultured cells. CONCLUSION: Our results indicate that simulated microgravity may have altered the tumor cell characteristics and enhanced the invasive property. It is possible that the microgravity analogue culture environment may have selected highly tumorigenic cells for survival despite the decreased overall growth in the microgravity analogue.     

lncRNA GAS5通过下调miR-223的表达提高结肠癌细胞的放射敏感性

目的 探究生长特异抑制物5（lncRNA growth arrest-specific 5,lncRNA GAS5）通过靶向调控miR-223的表达对结肠癌细胞的放射敏感性的影响。方法 采用荧光定量PCR（qPCR）检测多种结肠癌细胞系中lncRNA GAS5的表达量,选择表达量较低的作为后续研究对象;细胞克隆实验检测过表达lncRNA GAS5对结肠癌SW480细胞放射敏感性的影响;通过生物信息学数据库starBase以及双荧光素酶报告基因实验预测以及验证lncRNA GAS5的靶基因miR-223;qPCR检测miR-223在多种结肠癌细胞系中的表达量,以及过表达lncRNA GAS5对SW480细胞中miR-223表达量的影响。结果 与人正常结肠上皮细胞（NCM460）相比,lncRNA GAS5在结肠癌SW480、LOVO、HT-29、SW620细胞系中的表达量显著降低（t=15.25、8.69、14.42、11.62,P<0.05）,其中在SW480细胞中的表达量最低;过表达lncRNA GAS5或者下调miR-223显著降低细胞的存活分数（8 Gy时lncRNA GAS5：t=13.51,P<0.05;anti-miR-223：t=14.93,P<0.05）,促进凋亡（lncRNA GAS5：t=8.30,P<0.05;anti-miR-223：t=7.32,P<0.05）,增加结肠癌细胞放射敏感性;生物信息学分析显示,lncRNA GAS5 3''端序列中包含与miR-223的结合位点,过表达/下调lncRNA GAS5后,miR-223的表达量下降/上升。结论 lncRNA GAS5通过靶向调控miR-223的表达促进结肠癌细胞凋亡、抑制其存活,从而提高结肠癌细胞的放射敏感性。