丹参酮Ⅱ_A对乳腺癌细胞阿霉素化疗敏感性的影响及相关机制研究

目的探讨丹参酮IIA对乳腺癌细胞阿霉素化疗敏感性的影响及相关机制。方法分别用丹参酮IIA、阿霉素、阿霉素+丹参酮IIA干预人乳腺癌MCF-7和阿霉素耐药的MCF-7(MCF-7/dox)细胞,采用MTS法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验观察细胞迁移能力,Western blotting法检测腺瘤样结肠息肉易感蛋白(APC)、β-catenin、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达。结果丹参酮IIA能明显增强阿霉素对MCF-7和MCF-7/dox细胞的增殖抑制、迁移抑制和诱导凋亡作用;与阿霉素敏感的MCF-7细胞比较,MCF-7/dox细胞中APC蛋白表达水平显著降低(P0.05),β-catenin蛋白表达水平显著提高(P0.05);与单用阿霉素比较,阿霉素与丹参酮IIA联合使用能明显上调MCF-7及MCF-7/dox细胞内APC及E-cadherin表达水平(P0.05),下调β-catenin、MMP-2及MMP-9蛋白表达水平(P0.05)。结论 APC/β-catenin信号通路参与了乳腺癌细胞阿霉素耐药的发生;丹参酮IIA能够通过调控APC/β-catenin信号通路增强乳腺癌细胞对阿霉素化疗的敏感性。     

三黄煎剂降低ROS促进乳腺癌他莫昔芬耐药细胞凋亡的实验研究

目的探讨三黄煎剂对MCF-7他莫昔芬耐药(MCF-7/TAMR)细胞ROS水平和凋亡的影响。方法建立MCF-7/TAMR细胞系,采用CCK-8法检测他莫昔芬对乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/TAMR增殖的影响,并检测耐药指数;同时检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR增殖的影响。免疫荧光法评价MCF-7、MCF-7/TAMR及各给药组的ROS的水平;流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡情况;Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞凋亡相关蛋白表达对的影响。结果成功构建了MCF-7/TAMR细胞株,不仅在形态上发生了改变,而且对他莫昔芬的抵抗能力得到了增强,其RI指数为(3.61±0.35)(P0.05),三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞株有明显的抑制作用,IC50值为(4.28±0.06)mg/m L,能够降低耐药细胞株的ROS水平,同时能够下调MCF-7/TAMR细胞的Bcl-2活性,上调Ba X/Bak,促使MCF-7/TAMR细胞产生凋亡。结论三黄煎剂通过降低乳腺癌MCF-7TAMR细胞内的ROS水平,抑制乳腺癌MCF-7TAMR细胞增殖并促进乳腺癌MCF-7TAMR细胞凋亡。     

小叶莲中graphislactone A的分离制备及其抗肿瘤作用机制研究

目的确定小叶莲中graphislactone A的制备分离方法;探讨graphislactone A诱导人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR凋亡的作用机制。方法小叶莲药材采用醋酸乙酯超声提取,提取物经过硅胶柱色谱法富集目标成分,再用重结晶法纯化。采用MTT法检测graphislactone A对乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR的细胞毒活性。采用流式细胞术、RT-PCR技术和Western blotting法分别检测graphislactone A对乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR凋亡、凋亡相关基因及P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达的影响。结果建立了小叶莲中graphislactone A的制备分离方法。Graphislactone A对乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR具有细胞毒活性,IC50值分别为2.38、9.35μmol/L,且能够上调乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中p53、bax、caspase-3基因的表达,下调bcl-2基因和P-gp的蛋白表达。结论 Graphislactone A为首次从高等植物中发现的酚类化合物,该制备分离方法效率高、样品回收率高,得到的目标成分纯度高。与阳性药依托泊苷相比,Graphislactone A对乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR具有较强的细胞毒活性,且能够诱导其凋亡,其机制可能与p53的表达水平上调、激活caspase-3通路、调节bax和bcl-2的相对比例,下调P-gp的蛋白表达有关。     

复方中药紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制

目的探讨中药紫龙金(Zilongjin,ZLJ)对多药耐药肿瘤细胞的作用机制。方法采用MTT法检测ZLJ对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期以及罗丹明123的荧光强度变化;Western blot方法检测相关蛋白的表达变化。结果 ZLJ分别处理人乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX耐药细胞,以及人口腔上皮癌KB和KBV200耐药细胞。MTT法测定表明:ZLJ作用耐药和敏感细胞的IC50值相近,耐药细胞对ZLJ没有交叉耐药性;无论对敏感和耐药细胞,流式细胞术分析发现ZLJ阻断细胞于S期;ZLJ单独处理MCF-7/DOX和KBV200耐药细胞,可以微弱地降低其耐药性,分别与多柔比星(doxorubicin,DOX)和长春新碱(vincris-tine,VCR)合用,可以明显地增加DOX和VCR的活性;ZLJ处理耐药细胞MCF-7/DOX后,检测到细胞内耐药蛋白P-糖蛋白(P-glyco protein,P-gp)呈时间依赖性降低。Western blot检测表明,ZLJ的抑制作用是通过使凋亡标志蛋白PARP出现切割,启动凋亡通路实现的。结论中药ZLJ抑制耐药细胞增殖,没有交叉耐药性;其抑制作用与诱导细胞凋亡以及降低P-gp表达有关。     

七叶皂苷钠通过抑制AKT,ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

探讨七叶皂苷钠对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。运用MTT法检测七叶皂苷钠对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学变化;DAPI染色后在荧光显微镜下检测细胞核变化;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(PARP,cleaved caspase-8,pro-caspase-3)和细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)及其共同上游激酶SRC的磷酸化变化情况。结果显示,不同浓度七叶皂苷钠作用于乳腺癌MCF-7细胞后,以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞增殖;诱导细胞凋亡(典型的凋亡形态学变化、细胞核改变和细胞凋亡率显著增加);细胞凋亡相关蛋白PARP切割增加,cleaved caspase-8表达增加,pro-caspase-3表达减少进一步验证了七叶皂苷钠的凋亡诱导作用;七叶皂苷钠显著抑制细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)的磷酸化,其共同上游激酶SRC的活化亦显著下降。结果表明,七叶皂苷钠通过抑制SRC的活化,阻断信号向下游信号分子AKT,ERK的传递,抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,诱导细胞凋亡。     

苦参碱与粉防己碱逆转人MCF-7细胞耐药性的作用与机制

目的:探讨中药有效成分苦参碱与粉防己碱合用能否逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性.方法:使用人乳腺癌MCF-7和耐多柔比星的MCF-7/DOX细胞进行研究.采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞术检测罗丹明123荧光强度的变化;Western blot方法检测P-糖蛋白的表达变化.结果:苦参碱作用耐药和敏感细胞的IC50相近,耐药细胞对苦参碱没有明显的交叉耐药性;流式细胞术分析发现苦参碱单独处理MCF-7/DOX耐药细胞,可以微弱地降低其耐药性,并且与粉防己碱有协同作用;苦参碱与多柔比星合用,可以增加多柔比星对MCF-7/DOX耐药细胞的生长抑制作用,且与粉防己碱有协同作用;苦参碱和粉防己碱、多柔比星合用处理细胞,MCF-7/DOX耐药细胞株P-糖蛋白表达水平下降.结论:苦参碱与粉防己碱合用具有协同作用,能逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性,降低P-糖蛋白的表达.     

蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程及凋亡的影响

目的 研究蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测KB细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡率，RT-qPCR法检测细胞c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态，ELISA法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性，Western blot法检测细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素作用24、48、72 h后，KB细胞增殖抑制率均升高(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素组作用48 h后，G₀/G₁细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3、caspase-8、caspase-9活性均升高(P<0.05,P<0.01),细胞核染色质浓缩现象明显，而c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达和p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.0...     

三七总皂苷逆转乳腺癌细胞MCF-7/ADM多药耐药的实验研究

目的 从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂苷(PNS) 对人乳腺癌细胞MCF-7/S(敏感细胞) 及MCF-7/ADM(耐药细胞) 的影响.方法 以MTT 法测定PNS对MCF-7/S 及MCF-7/ADM的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX) 对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;以无细胞毒性的三七总皂苷注射液作为耐药逆转剂用MTT法体外药敏感实验观察其对多药耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用;用RT-PCR分别测敏感细胞和PNS作用后的耐药细胞表达的MDR1基因的阳性率;用WESTERN测定敏感细胞和PNS作用后的耐药细胞表达多药耐药蛋白P - gp (P - 170) 的阳性率.以上实验均用维拉帕米作为阳性对照.结果 ①PNS在300μg/ ml 浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量.②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度( IC50) 分别为0.62μg/ ml 和25.03 μg/ ml,耐药倍数为40.37倍.③PNS能够增强阿霉素(DOX) 对MCF-7/ADM的细胞毒作用, PNS 50,100,200μg/ ml分别作用于乳腺癌耐药细胞48 h后,耐药细胞株的IC50分别降至17.85,13.80,11.63 μg/ml.④PNS(50,100,200μg/ ml) 均可下调多药耐药基因mdr - 1 及其表达的糖蛋白P - gp 的量,且随PNS浓度的增加,下调作用更加明显.而未发现维拉帕米有类似作用.结论 ①高浓度的三七总皂苷具有一定的抗肿瘤作用;②三七总皂苷可下调MCF-7/ADM的MDR-1和P-gP;③PNS能够部分逆转耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药性;④三七总皂苷是一种有效安全的多药耐药逆转剂.     

大黄素下调ERCC1蛋白表达逆转乳腺癌化疗耐药的机制研究

目的:探讨中药大黄素下调ERCC1蛋白表达与其逆转乳腺癌MCF-7/Adr细胞株多药耐药的相互关系,阐明大黄素逆转细胞耐药与ERCC1的作用机制。方法:采用MTT比色法对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr及敏感细胞株MCF-7进行药敏试验,蛋白质印迹法检测细胞中ERCC1蛋白的表达。结果:MCF-7/Adr对阿霉素和顺铂的耐药倍数分别为21和11倍,在加入10g/mL大黄素后,耐药逆转倍数分别为2.86和1.79。MCF-7/Adr分别经10g/mL和20g/mL大黄素处理后第2、4、6、10天ERCC1蛋白的表达水平逐渐降低,大黄素20g/mL浓度下作用更明显。结论:大黄素可以通过下调ERCC1的表达水平而逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,并与大黄素的浓度和作用时间有一定的相关性。     

六神丸逆转人结肠癌耐阿霉素细胞株Lovo/Dox机制的初步研究

目的初步探讨六神丸逆转人结肠癌耐阿霉素细胞株Lovo/Dox的机制。方法设置对照组、阿霉素组(Dox)、六神丸组和阿霉素与六神丸联合用药组。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测六神丸对人结肠癌耐药细胞株(Lovo/Dox、HCT116/L-OHP、Caco2/Dox)的影响;蛋白质免疫印迹法(Western Blotting)检测耐药蛋白P-gp、BCRP以及相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Cytochrome C和抑癌蛋白p53在人结肠癌Lovo/Dox细胞中的表达;免疫荧光实验检测P-gp的荧光表达。结果六神丸作用于人结肠癌3种耐药细胞24 h后,CCK-8结果显示其可抑制3种人结肠癌细胞株的活性,其中抑制人结肠癌耐阿霉素细胞株Lovo/Dox的效果最明显。六神丸联合阿霉素可上调caspase-3、caspase-9、p53蛋白表达水平以及减弱P-gp蛋白及荧光表达。结论六神丸可逆转人结肠癌耐阿霉素细胞株Lovo/Dox的P-gp表达,可能是通过激活相关凋亡途径和抑癌蛋白而引起该细胞株凋亡。     

六神丸含药血清对MCF-7／ADR细胞P-gp表达的影响的实验研究

目的：探讨中药六神丸对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法：以流式细胞仪计数方法法检测糖蛋白P-gp的表达。结果：六神丸含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞的P-gp的表达；阿霉素与10％含药鼠血清合用对抑制人乳腺癌细胞MCF-7／ADR的P-gp蛋白表达的效果良好，与异博定＋阿霉素＋10％正常鼠血清组无明显差异。结论：六神丸具有逆转MCF-7／ADR多药耐药性的作用，可明显下调P-gp的表达。     

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleavedCaspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之...     

槲皮素诱导MCF-7细胞死亡机制中自噬与凋亡的相关性

 目的 研究槲皮素（quercetin,Que）在人乳腺癌细胞系（MCF-7）死亡中的作用,初步探讨自噬和凋亡机制在MCF-7死亡中的相关性。方法 采用噻唑蓝（MTT）法测定Que对MCF-7细胞的抑制作用; AO/EB染色、Hochest33258染色、单丹磺酰尸胺（MDC）、免疫荧光法观察给药后自噬和凋亡的发生;MTT法结合乳酸脱氢酶（LDH）漏出率和流式细胞仪研究自噬与凋亡机制在MCF-7死亡中的关系。结果 Que对MCF-7生长有显著抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性; Que可诱导MCF-7 细胞发生自噬和凋亡;在Que给药前用3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬或用氯喹碱化溶酶体,Que对MCF-7的细胞毒性作用增强;碱化溶酶体后,Que可使 MCF-7细胞的凋亡峰提前;溶酶体组织蛋白酶抑制剂E64d能降低Que对MCF-7细胞的生长抑制。结论 Que能明显抑制MCF-7细胞的生长,并诱导其发生自噬和凋亡,自噬在早期起保护作用,另一方面溶酶体组织蛋白酶可能参与了Que诱导的MCF-7细胞死亡;溶酶体可能是MCF-7细胞发生自噬和凋亡的枢纽。     

解毒祛瘀方对乳腺癌细胞MCF-7/ADM的耐药逆转作用

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药逆转的作用及机制。方法:以MCF-7/ADM细胞为研究对象,利用噻唑蓝(MTT)比色法检测解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM生长的影响;应用流式细胞术检测肿瘤细胞内罗丹明123(Rh-123)的含量;分别利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤细胞内多药耐药蛋白1(MDR1),乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)mRNA及蛋白表达变化。结果:与空白组比较,经1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方作用后,阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的逆转倍数(RF)分别提升1.7倍和3.0倍(P0.05);人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中Rh-123含量分别提高了1.8倍和2.5倍(P0.05),MDR1和BCRP蛋白和mRNA表达水平明显下降(P0.05),1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方MDR1 mRNA表达分别降低35.5%和56.0%(P0.05),BCRP mRNA表达分别降低41.6%和49.5%(P0.05)。结论:解毒祛瘀方可提高人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM对阿霉素的敏感性,逆转该细胞对阿霉素的耐药性,其机制可能与降低MDR1和BCRP蛋白和mRNA的表达,抑制细胞药物外排作用相关。     

靛玉红衍生物PHⅡ-7通过抑制c-fos表达抗乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖

目的:探讨靛玉红衍生物PHⅡ-7抗乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖作用的初步机制。方法:MTT法检测PHⅡ-7的体外杀伤活性;RT-PCR法、Western blot法检测基因、蛋白表达水平;构建干扰c-fos的短发夹RNA真核表达载体,转染MCF-7/ADR细胞,并建立稳定转染的细胞系;采用细胞计数法绘制生长曲线探讨c-fos表达下调对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:PHⅡ-7剂量依赖性地抑制乳腺癌敏感株MCF-7及耐药株MCF-7/ADR增殖;c-fos在耐药株MCF-7/ADR表达明显高于敏感株MCF-7;PHⅡ-7明显抑制c-fos的表达;shRNA显著抑制了c-fos蛋白表达,细胞增殖也被显著抑制。结论:靛玉红衍生物PHⅡ-7浓度依赖性地抑制乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖,其作用可能与抑制原癌基因c-fos有关。     

柴胡皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞株迁移、凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响

目的探讨柴胡皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞株内质网应激(ERS)所致的凋亡及Calnexin/Calreticulin循环的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组、低、中、高剂量组;检测各组细胞增殖、迁移及凋亡情况;Western blot检测各组细胞Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP的表达。结果与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移能力降低,细胞凋亡率增加,且细胞中Calnexin、Calreticulin、GRP78、CHOP蛋白表达增高。结论柴胡皂苷D可能通过影响MCF-7细胞Calnexin/Calreticulin循环,加重乳腺癌细胞ERS,引发细胞凋亡,从而降低细胞增殖率及迁移能力。     

土贝母皂苷甲对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的:探讨中药土贝母主要成分土贝母皂苷甲(TBMSⅠ)通过激活Egr1/p21信号通路对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法:体外培养MCF-7细胞，并把细胞分为空白组、TBMSⅠ高剂量组(20μg/ml)、TBMSⅠ中剂量组(15μg/ml)、TBMSⅠ低剂量组(10μg/ml),使用对应浓度的TBMSⅠ干预MCF-7细胞。干预24、48、72 h后，使用CCK-8法检测细胞增殖情况。干预MCF-7细胞48 h后，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡、细胞周期分布情况。采用Western blotting、qRT-PCR检测各组细胞Egr1、p21蛋白及mRNA表达。结果:干预24、48、72 h后，TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组的MCF-7细胞得到抑制，且抑制率呈时间与剂量依赖性。干预48 h后，TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组MCF-7细胞的凋亡率高于空白组，差异有统计学意义(均P<0.05)。TBMSⅠ高剂量组、TBMSⅠ中剂量组、TBMSⅠ低剂量组G₀/G₁期细胞占比低于空白组，G₂     

齐墩果酸衍生物SZC014同时诱导乳腺癌细胞的凋亡和自噬

目的:齐墩果酸(OA)具有多种药理学作用,如肝保护、抗炎、抗氧化及抗肿瘤等。然而,它的活性相对较弱并且生物利用度低,使其临床应用受到限制。在本研究中,我们合成一种新的OA衍生物—SZC014,并研究它们在乳腺癌细胞中的抗肿瘤作用及其作用机制。方法:应用MTT法测定空白对照组、不同浓度OA及SZC014处理后的乳腺癌细胞的存活率。应用PI染色流式细胞术测定SZC014对细胞周期的影响。通过倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察并拍摄SZC014处理后的细胞形态学和超微结构的变化。应用Western blot分别测定SZC014处理后凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白表达的变化情况。结果:MTT实验证明,SCZ014可抑制乳腺癌细胞的增殖,并且其生长抑制作用强于OA。PI染色流式细胞术证明SZC014诱MCF-7细胞周期停滞于G2/M期。倒置相差显微镜和透射电子显微镜证明SZC014处理的MCF-7细胞中凋亡和自噬同时被发现。Western blot结果提示SZC014可能通过线粒体途径诱导MCF-7细胞凋亡。此外,SZC014诱导Beclin 1与ATG 5的上调可能与MCF-7细胞自噬相关。结论:SZC014作为一种新的OA衍生物,表现出较OA更强的抗乳腺癌活性,且这种抗肿瘤作用可能与凋亡及自噬相关。     

半枝莲对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探索半枝莲对人结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、12.5、25、50、75μg/mL)的半枝莲氯仿极性部位提取物(ECSB)干预SW620细胞后,MTT法检测细胞活力,DAPI染色观察SW620细胞的凋亡,流式细胞术检测SW620细胞的周期,蛋白质印迹法(Western blot)检测SW620细胞中PCNA、Survivin的表达。结果ECSB显著抑制了SW620细胞的活力(P<0.01),并呈剂量性依赖;DAPI染色显示ECSB处理SW620细胞24 h后出现明显的细胞核固缩,核碎裂形成,提示ECSB促进SW620细胞的凋亡;流式细胞术检测结果显示在50μg/mL ECSB干预SW620细胞48 h后,S期明显增高,提示ECSB抑制SW620细胞的增殖;Western blot检测结果显示各浓度的ECSB均能显著抑制SW620细胞的PCNA表达,75μg/mL ECSB能显著抑制SW620细胞的Survivin表达。结论ECSB促进人结肠癌细胞株SW620的凋亡,抑制其增殖,其可能机制是通过下调PCNA、Survivin的表达。     

桔梗皂苷D联合伊马替尼对白血病耐药细胞K562/R的抑制增殖和作用机制研究

桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对多种恶性肿瘤有显著抑制作用,对白血病细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,但其是否有效提高耐药细胞对伊马替尼的敏感性及其发挥功能的分子机制仍未阐明。为了研究PD与伊马替尼(imatinib,IM)联合用药对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/R的作用及机制。细胞增殖实验检测桔梗皂苷D对伊马替尼增殖抑制功能的影响,采用CCK8测定PD和IM单药及联合用药对K562/R增殖的抑制作用;流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI双标记细胞凋亡率的变化,Western blot法检测cleaved caspase-3,cleaved caspase-9,PARP,cleaved PARP,Bcr/abl,p-AKT,p-mTOR蛋白表达。结果显示桔梗皂苷D联合伊马替尼对K562/R细胞的增殖抑制作用和细胞凋亡率比单独用药组效果明显。Western blot法检测结果显示与单药组比较,联合用药组可以明显上调cleaved caspase-3,cleaved caspase-9,cleaved PARP蛋白表达,同时下调PARP,Bcr/abl,p-AKT,p-mTOR蛋白的表达。结果表明桔梗皂苷D可以提高耐药细胞对伊马替尼的敏感性,联合用药在抑制细胞增殖、诱导凋亡、抑制Bcr/abl蛋白和激活PI3K/AKT/mTOR信号通路方面明显优于单独用药。