慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前PBMC细胞因子的研究

目的 研究准备抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者的免疫特点.方法 将30例慢性丙型肝炎患者和10例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)体外培养72 h后,用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的浓度.结果 (1)慢性丙型肝炎患者PBMC培养上清中IFN-γ、IL-10和TNF-α的水平明显升高(P＜0.05),没有检测到IL-2、IL-4、IL-12的基础分泌.(2)不同病情患者间的细胞因子的分泌水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性丙型肝炎患者体内TH2型细胞因子的分泌占优势.提示通过调整TH1/TH2失衡可能达到抗病毒治疗目的.     

黄芪在树突状细胞水平对哮喘TH 1/TH 2平衡的调节作用

目的 探讨黄芪在树突状细胞(DC)水平对过敏性哮喘TH/TH2平衡的调节作用.方法 用rhGM-CSF和rhIL-4诱导培养外周血来源的DC并予鉴定,ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-12、IL-10以及与自身T细胞反应后,RT-PCR检测T-bet和GATA-3 mRNA含量,流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平.结果 哮喘患儿外周血DC分泌IL-10高于对照组(P＜0.05);黄芪干预后DC分泌IL-10降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05).哮喘患儿外周血DC分泌IL-12低于对照组(P＜0.05);黄芪干预后DC分泌IL-12增加,但与哮喘组比较差异无统计学意义.混合培养第7天哮喘组T细胞内IL-4水平显著高于正常对照组(P＜0.01);而IFN-γ水平则显著低于正常对照组(P＜0.05);哮喘组IL-4/IFN-γ比值高于正常对照组(P＜0.01).黄芪干预后T细胞内IL-4水平与哮喘组比较差异无统计学意义,而IFN-γ水平增加,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05),IL-4/IFN-γ比值降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.01).哮喘组T-bet mRNA的表达强度明显低于正常对照组(P＜0.01);而哮喘组GATA-3 mRNA的表达强度则明显高于正常对照组(P＜0.05);哮喘组GATA-3/T-bet比值高于正常对照组(P＜0.05).黄芪干预后T细胞GATA-3 mRNA的表达强度与哮喘组比较差异无统计学意义,而T-bet mRNA水平增加,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05),GATA-3/T-bet比值降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 哮喘患儿DC功能缺陷,产生IL-12减少、IL-10增加导致TH2优势分化,从而使TH1/TH2平衡向TH2倾斜,合成IFN-γ减少,进而造成气道慢性炎症、气道高反应性而致哮喘发作.黄芪对DC的调节主要通过降低IL-10的分泌水平,从而降低其抑制TH0细胞向TH 1分化的功能,即间接抑制了TH0细胞向TH2的分化.     

IL—12对慢性乙型肝炎患者TH2／TH2分化的影响

目的 观察IL-12对慢性乙肝患者TH1/TH2类细胞分化的影响。方法 分离50例慢性乙型肝炎患者PBMC,分别与植物血凝素（PHA,100ug/mL）、HBcAg(1ug/mL）、HBeAg(1ug/mL）单独或联合IL-12（10ng/mL）体外培养48h,ELISA法检测培养上清液 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平。20例健康人群做对照。结果 IL-12对健康人群PBMC产生TH1/TH2类细胞因子无显著影响,但对慢性乙型肝炎患者则显著增强PBMC产生IFN-γ,且慢性中度患者最为突出。IL-12与HBeAg联合诱导,不但显著增强慢性乙型肝炎患者PBMC产生IL-12和IFN-γ,还抑制IL-4和IL-10的产生。结论 IL-12可增强慢性乙型肝炎患者IFN-γ优势表达,可促进HBeAg诱导的TH2型优势表达向TH1型优势表达转换。     

八色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆CD4+T细胞的表型特征

目的:检测BCG刺激后,PPD+正常人外周血中细胞因子产生及其亚群.方法:分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMC),BCG刺激后检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子分泌,并用八色流式细胞术分析BCG特异性T细胞亚群.结果:BCG刺激PBMC后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析分泌细胞因子的细胞亚群,主要是CD4+CD45RO+ CD62L(-)CD27(-)和CD4+ CD45RO+ CD62L(-)CD27+分泌细胞因子.结论:BCG刺激PPD+正常人外周血PBMC后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且该细胞表现出CD4+CD45RO+ CD62L(-)效应型记忆细胞特征,可能在预防结核感染中发挥重要作用.     

活动性肺结核患者外周血单个核细胞表达TH1/TH2类细胞因子的特点

结核病患者免疫细胞产生TH1类细胞因子的能力低下，而TH2类细胞因子表达各家报道不一。CD4^ T和CD8^ T细胞是结核病免疫中主要的效应细胞，也是细胞因子的主要来源。我们采用流式细胞仪检测CD4^ T和CD8^ T分泌IFN-γ和IL-4的能力，从单细胞水平探讨结核菌感染患者TH1／TH2型免疫反应的特点。     

川崎病TH1/TH2功能状态的研究

川崎病(Kawasaki disease,KD)是一种急性弥漫性血管炎,婴幼儿发病多见,至今,该病病因及发病机理不明,从病人的流行病学特征推测可能与病原体感染或毒素超抗原引起免疫学异常有关.本研究通过对KD患儿急性期、恢复期PPD皮试的观察以及外周血血清IgE的变化、外周血CD4 T细胞CD30表达和外周血单个核细胞(PBMC)培养上清IL-4、IFN-γ水平的测定,了解KD急性期TH1/TH2功能平衡状态及免疫发病机理.     

体外阻断CD134对LN患者外周血单个核细胞TH1/TH2细胞因子表达的影响

目的 探讨CD134／CD134L共刺激分子对TH1，TH2细胞因子表达的影响及在狼疮性肾炎（LN）发病机制中的可能作用。方法活动期LN患者10例，分别采取外周静脉血，用密度梯度离心法制备新鲜PBMC，分成6组：（1）对照培养组；（2）单纯刺激组；（3）抗CD134组；（4）抗Ⅱ，4组；（5）rhCD134：Fc组；（6）地塞米松（Dex）组。另选取10例健康体检者作为健康对照组。采用ELISA法分别测定培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-10表达水平。结果（1）在抗CD3ε单抗／rIL-2刺激前，活动期LN患者PBMC培养液上清分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10水平都明显高于健康对照组；（2）在抗CD3ε单抗／rIL-2刺激下，活动期LN患者PBMC分泌的IFN-γ，4和IL-10又较刺激前明显增加；（3）抗IL-4单抗、抗CDl34单抗均可使经抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的LN患者PBMC分泌IL-4、IL-10水平显著下降，导致IFN-γ水平显著增高，免疫应答朝TH1方向偏离；（4）Dex能显著抑制抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的原代培养PBMC中IL-4、IFN-γ的分泌水平，但对IL-10的产生并没有明显的抑制或促进作用；（5）rhCD134：Fc能显著降低抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的原代培养PBMC中IFN-γ及IL-4、IL-10的分泌水平，对TH1和TH2细胞因子的产生都有显著抑制作用。结论糖皮质激素的抗炎机制具有多重性，对TH1、TH2细胞因子的作用并不均衡；抗CD134单抗对减轻LN患者PBMC的异常活化有一定作用；CD134-IgG融合蛋白与抗CD134单抗相比，抑制作用更明显，对急性期LN有更好的治疗作用。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

TH1/TH2细胞因子与习惯性流产的关系研究

目的通过测定习惯性流产患者（RSA）及正常妊娠妇女外周血血清TH1/TH2细胞因子的含量,探讨TH1/TH2细胞因子与习惯性流产发生的关系。方法采用酶联免疫吸附法检测30例RSA患者,72例正常妊娠妇女血清IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α及TNF-β水平并比较两组之间的差异。结果RSA患者IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α血清水平显著高于正常妊娠妇女（P〈0.05）,TNF-β血清水平显著低于正常妊娠妇女（P〈0.05）。结论血清IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平可能在习惯性流产发生中起重要作用。     

TH1类细胞因子对结核病患者产生单核细胞趋化蛋白1的调节作用

目的 探讨TH1类细胞因子干扰素γ(IFN—γ)、白细胞介素—2(IL-2)对结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌MCP—1的影响。方法 将12例结核患者和8例健康人PBMCs在LPS诱导前，用IL2、IFN-γ进行预刺激1h，采用ELCSA法检测各组培养上清液中MCP—1的水平。结果 与单纯用LPS组相比，加入IL-2、IFN-γ能明显上调结核患者及健康人PBMC的MCP—1分泌，且呈现浓度依赖性，两者联用具有协同效应。结论 TH1类细胞因子IL-2、IFN—γ通过上调MCP—1，使单核细胞、淋巴细胞向炎症部位趋化，参与组织炎症及肉芽肿形成，从而发挥保护性的免疫效应。     

Ⅱ型树突状细胞在慢性乙型肝炎患者中的功能检测及其临床意义

目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血中Ⅱ型树突状细胞(pDC2)的数量及其功能的变化与疾病的发生发展的关系.方法 采用流式细胞分析技术对27例慢性乙型肝炎患者和15例健康人外周血中pDC2数量的变化以及其产生α干扰素的能力进行了检测,同时与T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比值进行了比较分析.结果 肝炎患者外周血pDC2的百分数(0.096±0.086)较正常人(0.304±0.093)明显降低,两者差异有统计学意义(P＜0.001),特别是慢性肝炎患者pDC2产生IL-12及IFNα的能力明显低于正常人群(P＜0.001);而CD4+/CD8+的比值则明显高于正常人(P＜0.01).同时发现在HBV DNA(+)的患者中其pDC2的百分数和CD4+/CD8+的比值分别为0.087±0.054和1.95±0.562,均明显高于HBV DNA(-)患者(分别为0.043±0.031和1.44±0.476),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 与正常人相比,慢性乙型肝炎患者外周血中pDC2的数量和其产生细胞因子的能力降低,后者可能与慢性乙型肝炎患者病程的进展以及血清中HBV DNA阳性有关.     

乙型肝炎病毒感染者外周血T淋巴细胞亚群表达与其血清HBV-DNA水平的相关性分析

观察乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血T细胞亚群功能变化与其血清HBV-DNA水平,探讨病毒复制程度与细胞免疫功能的关系.应用流式细胞术直接荧光法检测142例HBV感染者和35名健康对照者外周血中T淋巴细胞亚群百分率,用荧光定量PCR法检测HBV感染者血清HBV-DNA.结果显示:与健康对照组比较,慢性乙型肝炎组CD4...     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞亚群相对数量特点的分析

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血树突状细胞亚群（DC1和DC2）相对数量特点。方法采集健康人和慢性乙型肝炎患者外周静脉抗凝全血,利用荧光抗体标记和流式细胞仪检测外周血树突状细胞亚群,DC1的特异性标记为Lineage^-HLA-DR^＋CD11c^＋,DC2的特异性标记为Lineage^-HLA-DR^＋CD123^＋;电化学发光检测血清乙型肝炎病毒标志。结果慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量高于健康人近两倍,但缺少统计学意义,DC1相对数量在两者间没有差别;血清HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量显著增高（P=0．002）,差异存在于与HBeAg阳性患者和健康人比较中（分别D1.2=129,P〈0．01;D2．3=108,P〈0．05）,而在上述3组中DC1相对数量无差异（P=0．183）。结论慢性乙型肝炎患者外周血DC2增加与HBeAg血清转换有关,提示DC2可能有抑制病毒的作用。     

乙肝病毒蛋白对慢性乙型肝炎患者PBMCs功能的影响

目的：乙肝病毒蛋白对不同感染状态慢性乙型肝炎患者的外周血单核细胞（PBMCs）功能的影响。方法：收集乙肝表面抗原（HBeAg）阳性丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常者40例（A组）， 乙肝e抗原（HBeAg）阳性ALT持续正常者20例（B组）， HBeAg及 乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）阴性ALT正常者20例（C组），另外选择15例各型肝炎病原学标志检测均为阴性的健康体检者为正常对照组，分离培养外周血单核细胞，加入植物血凝素（PHA）、HBeAg、HBcAg, 培养48 h后，1 500 r/min 离心10 min,收集上清液-20 ℃保存，统一检测IFN-γ、IL-10含量。采用流式细胞仪检测外周血CD8＋CD28＋T细胞亚群。结果：IFN-γ在HBeAg阳性ALT正常组，HBeAg阳性ALT异常组中的含量明显低于正常对照组和HBeAg及 HBV-DNA阴性ALT正常组；IL-10在HBeAg阳性ALT正常组，HBeAg阳性ALT异常组中的含量明显高于正常对照组和HBeAg及 HBV-DNA阴性ALT正常组。CD8＋CD28＋T细胞在HBeAg阳性ALT正常组中明显低于其它各组。结论：HBeAg阳性的患者，Th1型细胞免疫反应明显低下，Th2型细胞免疫反应明显增高，CTL的数量减少。     

小儿慢性乙型肝炎外周血T细胞亚群和临床病理关系的研究

目的　探讨小儿慢性乙型肝炎细胞免疫功能与临床、病理的关系 ,了解其间的相关性。方法　研究对象为确诊的 94例 12岁以内慢性乙型肝炎住院患儿。常规检测血T细胞亚群等、血丙氨酸转氨酶 (ALT)水平、病毒学指标 ,并进行腹部B超、肝脏病理学检查。结果　有活动性肝脏病理炎症者CD4 CD8 升高 (P <0 0 5 ) ;女性比男性CD4 降低差异有非常显著意义 (P <0 0 1)、CD8 升高差异有显著意义 (P <0 0 5 )、CD4 CD8 降低差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;T淋巴细胞的异常改变与HBVDNA、PTA以及脾脏大小关系不明显。而各项观察的临床、病理指标与CD3 T淋巴细胞、B淋巴细胞均无明显相关性。结论　小儿慢性乙型肝炎患者机体存在细胞免疫功能失衡 ,其相关性表现在肝脏炎症损伤严重程度与T淋巴细胞功能的损伤有明显的相关性 ,女性对HBV的T淋巴细胞反应比男性更有利于清除HBV ,其预后及对抗病毒和免疫调节治疗反应较好。     

Lack of evidence for the Th2 predominance in patients with chronic hepatitis C

A T helper (Th)1 to Th2 shift has been proposed to be a critical pathogenic determinant in chronic hepatitis C. Here, we evaluated mitogen-induced and hepatitis C virus (HCV) core antigen-induced cytokine production in 28 patients with biopsy-proven chronic hepatitis C. Flow cytometry demonstrated that after mitogenic stimulation the percentage of Th2 cells (IL-4 + or IL-13 +) and Th0 cells (IFN-gamma/IL-4 + or IL-2/IL-13 +) did not differ between patients and controls. In contrast, the percentage of Th1 cells (IFN-gamma + or IL-2 +) was significantly increased in CD4 +, CD8 +, 'naive'-CD45RA + and 'memory'-CD45RO + T-cell subsets from patients versus controls. Similar results were obtained by ELISA testing supernatants from mitogen-stimulated, unfractionated peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures. Interferon-alpha treatment was associated with a reduction in the mitogen-induced Th1 cytokine response in those patients who cleared their plasma HCV-RNA. Analysis of cytokine expression by CD4 + T cells after HCV core antigen stimulation in a subgroup of 13 chronic hepatitis C patients demonstrated no cytokine response in 74% of these patients and an IFN-gamma-restricted response in 26%. Finally, no Th2 shift was found in lipopolysaccharide-stimulated monocytes. These data indicate that a Th1 to Th2 shift does not occur in chronic hepatitis C.     

自身免疫性肝炎CD4+CD25+high调节性T细胞的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋high调节性T细胞（Tr）在自身免疫性肝炎（AIH）发病中的作用。方法用流式细胞仪技术比较分析AIH患者16例、慢性乙型肝炎（CHB）22例及键康正常人20例外周血中的CD4^＋CD25^＋high细胞，同时用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况。结果AIH组外周血中CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋百分比显著低于正常组（P〈0、05）和CHB组（P〈O．01），并且CHB组显著高于正常组（P〈0．05）；同时AIH组外周血中CD4^＋ T细胞也显著高于CHB组（P〈0．01））；肝组织Foxp3^＋细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区，AIH组肝组织Foxp3^＋表达显著低于CHB组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋high Tr细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一。     

巨细胞病毒感染患儿细胞免疫应答反应及临床意义

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染患儿细胞免疫应答反应及临床意义。方法:选择2015年6月至2019年5月在本院确诊的97例CMV感染患儿,根据其有无临床症状分为症状组和无症状组,选择同期健康体检婴儿48例为对照组。采用RT-PCR反应检测所有患儿尿液标本中CMV DNA载量;采用ELISA法检测所有纳入研究对象IL-6、IL-10、TNF-α水平,流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群;采用Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞亚群与IL-6、IL-10、TNF-α水平和CMV DNA载量之间的相关性。结果:与对照组相比,CMV感染患儿有症状组和无症状组外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+细胞水平均明显降低(P<0.05),血清IL-6、IL-10和TNF-α水平明显升高(P<0.05),有症状组外周血CD3+CD8+T细胞水平明显升高(P<0.05);与无症状组相比,CMV感染患儿有症状组患儿尿液中CMV DNA载量明显升高(P<0.05),外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+水平均明显降低(P<0.05),IL-6、IL-10和TNF-α、CD3+CD8+T水平均明显升高(P<0.05);Pearson相关性分析显示,CMV感染患儿外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+细胞水平均与CMV DNA载量、IL-6、IL-10和TNF-α水平呈显著的负相关(P<0.05),CD3+CD8+T细胞水平均与CMV DNA载量、IL-6、IL-10和TNF-α水平呈显著的正相关(P<0.05)。结论:CMV感染患儿的外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+水平明显下降,且其下降水平与CMV DNA病毒载量显著相关。     

Normal expression of p55 interleukin 2 receptor (CD25) by lymphocytes from former blood donors seropositive for human T lymphotropic virus.

Dysregulated expression of the p55 interleukin 2 receptor (CD25) is characteristic of adult T cell leukemia (ATL) associated with human T lymphotropic virus (HTLV) infection. In order to determine if similar changes characterize HTLV infection in the apparent absence of ATL, CD25 expression by peripheral blood lymphocytes from HTLV-seropositive former blood donors was measured using a sensitive dual-color cytofluorometric assay. When comparing the HTLV-seropositive group (N = 19) and a seronegative control group (N = 20), no significant differences were observed in either the proportions of the major lymphocyte subsets (CD3, CD4, CD8, CD19, CD16/56) coexpressing CD25 or the phenotypic distribution of CD25+ cells among these lymphocyte subsets. Similarly, the total percentages of CD3, CD4, CD8, and CD19 cell subsets were unchanged; however, the percentage of CD16/56+ cells was significantly decreased in the HTLV group and reflected a decrease in the percentage of CD16/56 cells lacking CD25. These findings indicate that HTLV infection without ATL is characterized by normal CD25 expression by lymphocytes and a decreased percentage of lymphocytes with a phenotype characteristic of natural killer cells.