福氏志贺菌gtrI基因突变导致的血清型回复转换

目的 研究携带O抗修饰基因gtrI的福氏志贺菌Y血清型菌株特征。方法 采用血清型多重聚合酶链反应(PCR)分型方法检测携带gtrI基因但I型抗原表位阴性的福氏志贺菌Y血清型菌株,并对其gtrI基因簇进行序列分析,对其基因组进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果 5株福氏志贺菌基因组携带gtrI基因簇,但是I型抗血清凝集阴性,表现为Y血清型特征;测序发现这5株菌株中的gtrI基因均发生了功能失活性突变;PFGE分析显示这5株菌株与福氏志贺菌血清型1a菌株具有相同或相近的PFGE带谱。结论 携带O抗修饰基因gtrI的福氏志贺菌Y血清型菌株来源于血清型1a。     

2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析

目的 了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌感染状况。 方法 采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本,进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型、药敏试验和PCR毒力基因检测。 结果 2007-2011年共检验标本1360份,检出志贺菌36株,检出率为2.65%,其中福氏2a志贺菌4株,占11.11%;福氏2b志贺菌3株,占8.33%;福氏1d志贺菌11株,占30.56%;福氏Xv志贺菌12株,占33.33%;宋内志贺菌6株,占16.67%;检出的志贺菌对多种抗生素耐药。 结论 2007-2011年引起余姚市细菌性痢疾主要病原菌是福氏志贺菌,其次为宋内志贺菌;福氏志贺菌有多种血清型,其中Xv血清型分离率最高;药敏试验以氨基糖苷类、喹诺酮类及部分头孢类抗生素敏感性较好;毒力基因呈现多样性。     

福氏志贺氏菌QRDR基因gyrA,parC及毒力基因ipaH的多重PCR检测

目的:建立快速检测福氏志贺菌致病性、耐药性的多重PCR方法。方法:根据福氏志贺菌耐药性基因gyrA,parC及毒力致病性基因ipaH,分别设计了3对引物,其PCR扩增产物分别为648,248和423bp,并进行单基因PCR和单管多重PCR扩增特异性和Tm值的优化。结果:该方法可同时检测福氏志贺菌gyrA,parC及ipaH三种标志性靶基因,其最优退火温度为57.5℃。结论:本方法操作简单,检测周期短,能够实现对福氏志贺菌样本的喹诺酮耐药决定区基因、毒力基因的并行快速检测。     

福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺修饰特异抗血清的制备

目的 制备针对福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺（PEtN）修饰的抗血清。方法 用血清型Yv菌株036_Yv（O-抗原PEtN修饰）免疫兔子制备抗血清,用036_Yv 的宿主菌036（O-抗原无PEtN修饰）吸附后,制备针对O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,并用135株福氏志贺菌检测血清的特异性。结果 制备的血清能够特异地与O-抗原存在PEtN修饰的福氏志贺菌发生凝集,效价为1:32;除了O-抗原携带PEtN修饰的福氏志贺菌血清型Xv,Yv和4av外,制备的血清不能与其他血清型发生交叉凝集,具有很好的特异性。结论 成功制备了针对福氏志贺菌O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,可应用于痢疾检测和监测。     

大理地区志贺菌的血清型分布及多重PCR检测技术的应用

目的 探讨大理地区志贺菌的血清型分布以及多重PCR技术在志贺菌检测中的应用.方法 用常规分离培养、生化鉴定和血清学分型法对腹泻患者粪标本进行检测,分离到的标本再用多重PCR法对志贺菌的毒力基因shetA、shetB、ial和ipaH进行扩增检测.结果 通过常规培养和生化反应鉴定,得到68株志贺菌.血清学鉴定显示福氏志贺菌41株,宋内志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株.通过多重PCR扩增后68株志贺菌均在423 bp(ipaH)处出现了条带,检出率为100%,其余在147 bp(shetB)、309 bp(shetA)处以及320 bp(ial)处均出现了至少一个条带,与常规鉴定法的符合率达100%.5份直接用阳性粪便标本提取DNA为模板进行多重PCR扩增后,也得到了同样的结果.结论 大理地区细菌性痢疾患者感染以福氏志贺菌为主,多重PCR技术可用于志贺菌的快速检测和流行病学调查.     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应（PCR）结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehxA基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20:H30、O2:H32和O2:H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx2 3种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26:H11的腹泻患者分离株。结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。     

105株志贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析

目的　调查志贺菌在上海地区流行的主要血清型和耐药性。方法　收集临床分离的志贺菌 1 0 5株进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验。结果　 1 0 5株志贺菌中 5 1株为宋氏志贺菌 ,占 4 8.6 % ;5 4株为福氏志贺菌 ,占 5 1 .4 % (包括 5株福氏变异株 ,占总数的 4 .7% )。宋氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为氟喹诺酮类 1 0 0 %、头孢噻肟 94 .1 %。而福氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为头孢噻肟 98.1 %、氟喹诺酮类70 %。结论　上海地区志贺菌感染以福氏志贺菌和宋氏志贺菌为主 ,福氏志贺菌中以福氏 2型为主 ,占 6 6 .7% ,其次为福氏 1型 ,占 2 0 .4 %。福氏志贺菌对各种抗生素耐药性有增高趋势 ,必须引起临床重视     

儿童福氏志贺菌TEM型β内酰胺酶耐药基因及其耐药性检测

目的了解儿童福氏志贺菌是否存在TEM基因及其发生率以及对耐药性的影响.方法对2004年6-11月从本院细菌性腹泻患儿粪便培养标本分离到的福氏志贺氏菌共51株,进行β内酰胺酶TEM全长基因PCR检测;用K-B法测定志贺菌对7种抗菌药物的敏感度.结果51株福氏志贺菌中17株检出TEM基因,阳性率33.3%;志贺菌对氨苄西林的耐药率高,其中TEM基因阳性志贺菌的耐药率为88.2%、TEM基因阴性志贺菌的耐药率为82.4%;对氨苄西林-舒巴坦也有一定的耐药,TEM基因阳性志贺菌、TEM基因阴性志贺菌的耐药率分别为41.2%、20.6%.结论从福氏志贺菌检出TEM型β内酰胺酶耐药基因,携带率为33.3%.     

中国福氏志贺菌前噬菌体分布与基因组进化研究

目的 前噬菌体是细菌基因组中重要可移动原件,在细菌毒力和宿主适应性方面发挥着重要作用。由噬菌体介导的福氏志贺菌血清型转化频繁发生,给志贺菌的监测、诊断和预防工作带来不便。为了探究我国福氏志贺菌基因组进化与其前噬菌体相关的血清型别转换之间的关系,利用生物信息学方法将前噬菌体在福氏志贺菌基因组中的分布与进化进行关联分析。方法 在中国17省（市、自治区）选取的294株福氏志贺菌具有丰富的血清型多态性。通过比较不同血清型福氏志贺菌基因组中原噬菌体及血清型转换噬菌体的覆盖度,统计分析其分布规律。结果 部分菌株可携带多种前噬菌体,同一种前噬菌体也可分布在不同血清型菌株中;部分菌株虽携带血清型转换噬菌体却并未发生血清型转换事件。不同血清型转换噬菌体在福氏志贺菌进化树中成簇出现,表明该部分菌株出现了血清型集中转换现象。结论 本研究有助于揭示前噬菌体的遗传多样性及与福氏志贺菌进化和血清型变异之间的关系,对预防和控制志贺菌的感染具有重要意义。     

儿童细菌性痢疾志贺菌属的血清型分布及耐药性分析

目的调查引起儿童细菌性痢疾的志贺菌属的血清型分布及其耐药性,指导临床合理用药。方法对2000年6月～2003年10月门诊及住院患儿大便培养分离所得359株志贺菌进行血清学分型和抗生素敏感试验。结果儿童细菌性痢疾福氏志贺菌感染占71.0%,宋氏志贺菌感染占29.0%;总耐药率为27.0%,其中福氏为31.4%,宋氏为16.2%。志贺菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、诺氟沙星、复方新诺明耐药严重。结论福氏志贺菌是儿童痢疾主要的血清型,临床治疗宜根据药敏结果用药。     

江苏省福氏4c志贺菌病原特性及毒力基因检测

目的　了解江苏省福氏4c志贺菌生化特征、对抗生素耐药性及毒力基因携带情况。方法　采用国际金标准细菌鉴定（API）试剂条进行生化鉴定，用玻片凝集法进行血清分型，细菌药物敏感试验纸片扩散（K-B）法检测对抗生素的耐药性，聚合酶链反应（PCR）扩增ipaH、set1、sen和 ial 4种毒力基因。 结果　福氏4c志贺菌发酵葡萄糖、甘露醇，41.0%菌株发酵阿拉伯糖。对阿莫西林/棒酸和萘啶酸耐药率高达100.0%，氨苄西林、四环素和复方新诺明耐药率为89.7%；79.5%菌株耐受一半以上抗生素。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100.0%、100.0%、92.3%和92.3%，92.3%（36/39）菌株携带全部4种毒力基因。结论　福氏4c志贺菌多重耐药情况较为严重，敏感药物有庆大霉素、头孢类药物和诺氟沙星。菌株毒力基因携带率高，具有较强的致病性。     

Utilization of a real-time PCR approach for Haemophilus influenzae serotype determination as an alternative to the slide agglutination test

Our laboratory has developed a simple two-step multiplex real-time PCR for use on isolates of Haemophilus influenzae for molecular serotype identification and the detection of capsular gene targets. The assay consists of a 2-plex real-time PCR targeting the capsule transport gene (bexA), and serotype b specific gene (bcsB), and a 5-plex real-time PCR detecting serotypes a, c, d, e, and f targeting Region II serotype-specific genes. Both real-time PCR assays are highly sensitive (<8 CFU) for all serotypes and 100% specific when tested by a panel of more than 40 bacterial organisms. A retrospective study of 214 isolates received between 1998 and 2011 were tested and compared against the traditional slide agglutination test (SAT) resulting in 100% concordance. We demonstrate that this two-step real-time PCR approach is more sensitive than previously published PCR assays and provides a simple alternative to the SAT. Reliable, rapid and sensitive H. influenzae serotyping is critical for identifying new emerging strains for epidemiological surveillance.     

2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析

目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据。 方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型。 结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0%),福氏志贺菌21株(28.0%),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群;75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1%~95.2%之间;三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0%;毒力基因ipaH、sen、set1、ial阳性率分别为100%、46.7%、24.0%、48.0%;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7%),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1%)和Ⅳ型(25.9%);宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S10三个带型为主,占宋内志贺菌的 53.7%;相似度>95%,可能来自于同一克隆系;福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布。 结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势;多重耐药现象严重;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型;PFGE型别呈现多元化流行特点。     

Serotyping of Pseudomonas aeruginosa isolated from clinical specimens.

Serotyping of 168 clinical isolates by the slide agglutination test using TIBS (Toshiba Institute of Biological Science) serotyping sera, which were prepared from Homma's serotype strains at the request of Pseudomonas aeruginosa Serotype Committee in Japan, was performed and the results were compared with serotyping using IMSUT (Institute of Medical Science, University of Tokyo) serotyping sera by the tube agglutination test. When heat-killed antigen from clinical isolates were used, both sets of serotyping sera showed similar results and the slide agglutination test using TIBS serotyping sera could be substituted for the tube agglutination test using IMSUT sera. It was also discovered that serotyping by the slide agglutination test with TIBS serotyping sera could be carried out using live bacteria. However, in serotyping with live bacteria, there is some difficulty in observing the agglutination time. To solve this problem, we propose that positive agglutination should be determined within 60 sec. The authors also performed serotyping of the clinical isolates using Difco serotyping sera prepared by the Difco Company based on Liu's serotyping system, and the results were compared with those obtained with serotyping sera prepared with Homma's serotype strains. The results indicated that in serotyping of clinical isolates using Difco serotyping sera more cross reaction occurred than in serotyping with sera obtained from Homma's serotype strains.     

河南省细菌性痢疾病原学特征研究

目的探讨河南省2008年志贺菌的病原学特征,了解掌握其血清型别、耐药谱及携带毒力基因情况,为临床用药及流行病学研究提供合理依据。方法从形态特征、生化反应、血清分型、药物敏感试验及毒力基因检测等方面分别对河南省各细菌性腹泻监测点分离到的272株志贺菌株进行了系统鉴定和病原学研究。结果 272株志贺菌包括福氏志贺菌250株(91.91%)、宋内志贺菌22株(8.09%);选择其中100株志贺菌进行了针对14种抗生素的药物敏感试验(AST),对氨苄西林、萘啶酸、四环素、氯霉素耐药率分别为99.1%、99.1%、100%、85.7%;对头孢噻吩/头孢噻肟、环丙沙星、复方新诺明及妥布霉素的耐药率为20%~70%之间(KF/CTX 21.6%/20.6%、C IP40.2%、SXT 66.7%、TOB 15.7%);选取120株志贺菌进行毒力基因set2、ipaH、ial、set1B的检测,82.50%的志贺菌含有这4种毒力基因。结论河南省2008年分离的志贺菌包括福氏和宋内2种血清型,以福氏志贺菌为主;菌株普遍携带有4种毒力因子,绝大多数菌株对3种以上抗生素不敏感,表明临床分离志贺菌的耐药问题日益严重,给腹泻疾病的治疗带来较大影响。     

中国福氏志贺菌优势序列型ST91获得SRL和Tn7多重耐药岛分析

目的分析中国福氏志贺菌优势序列型ST91(sequence type 91)中志贺菌耐药岛(Shigella resistance locus,SRL)和Tn7耐药岛的分布及变化情况。方法对包括14种血清型(1a[7株],1b[1株],1d[1株],2a[5株],2b[1株],3a[3株],3b[1株],4a[1株],4av[1株],4b[1株],X[9株],Xv[25株],Y[2株]和Yv[1株])和7种ST型(ST91[50株],ST109[1株],ST18[3株],ST142[1株],ST143[1株],ST103[2株],ST16[1株])的59株中国福氏志贺菌基因组中SRL、Tn7耐药岛的编码基因及核酸序列进行分析,并与参考菌株2002017和YSH600的SRL和Tn7岛进行比较。结果所有50株中国分离的福氏志贺菌ST91菌株,1株ST109和1株ST142菌株均携带SRL和Tn7岛。1株ST18菌株仅携带2个耐药岛的3个耐药基因。其他ST型菌株均未发现耐药岛。与参考菌株2002017相比,9株ST91菌株的SRL耐药岛发生了插入或缺失。其中,7株ST91菌株缺失了编码四环素耐药性的tet基因;1株ST91菌株缺失了编码β-内酰胺酶的oxa-1和编码氯霉素乙酰转移酶的cat基因;1株ST91的SRL岛上插入了1个编码广谱β-内酰胺酶的blaTEM-1基因。所有50株ST91、1株ST109和1株ST142菌株携带的Tn7岛的核酸序列和编码基因与参考菌株相比未发现差异。结论福氏志贺菌ST91型中国分离菌株均携带SRL和Tn7耐药岛。在SRL岛上发生了基因的插入和缺失。处于进化早期的ST18菌株,在获得耐药岛的过程中可能发挥了重要作用。     

沙门菌玻片凝集血清分型与多重荧光PCR血清分型检测试剂盒方法比较

目的探讨在肠道多病原监测中,沙门菌多重荧光PCR血清分型检测试剂盒的适用性,扩展沙门菌的分子分型和鉴定方法,提高分型效率,以更快更好地应对由沙门菌引起的腹泻事件。方法利用沙门菌多重荧光PCR血清分型检测试剂盒和传统玻片凝集血清分型方法,对2013 — 2018年北京市丰台区肠道多病原监测中分离获得的95株沙门菌进行分型分析,比较2种结果的符合程度。结果采用传统玻片凝集法,95株沙门菌被分为21种血清型。 采用多重荧光PCR血清分型检测试剂盒,85株沙门菌被分为17种型别,10株菌无法分型,包含Salmonella Goldcoast、S. London、S. Senftenberg、S. Thompson、S. Panama、S. Othmarsche 6种血清型。 在试剂盒成功分型的85株菌中,83株菌的分型结果与玻片凝集法一致,符合率为97.65%。结论在沙门菌分型中,玻片凝集法应用良好,多重荧光PCR血清分型检测试剂盒与前者分型结果一致性高,检测效率显著提升,对不常见血清型的鉴定有待扩充,2种方法联合使用可全面提高实验室对沙门菌的分型检测效率和准确率。