成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的机制研究

背景成骨细胞的同种异体移植,因其独特的优点,被认为是解决衰老骨重建修复较为理想的方法.目的研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制.设计配对设计的实验研究.地点和对象本实验完成于中山大学动物试验中心及中山大学医学院病理教研室.SD清洁级大鼠,雌性,15～18月龄,体质量400～450 g,96只;雄性,3～7 d龄,SD清洁级乳鼠,20只,均由中山大学动物试验中心提供.干预建立SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型,分为两组,每组48只.实验组将SD雄性乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD雌性鼠骨质疏松性骨折部位.对照组注入无血清培养液.手术后3,7,10,14,21,28,56,84 d处死,用X射线、原位杂交、免疫组化及图像分析检测骨折愈合不同时相的标本.主要观察指标①用X射线及病理切片观察试验组与对照组骨折愈合情况.②在骨折不同阶段,地高辛标记鼠Y染色体探针的阳性表达特点,以雄性Y染色体为标志,追踪移植细胞的远期存活及转归.③VEGF,TGF-β1及VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达.结果实验组骨质疏松性骨折愈合的速度及程度均高于对照组;实验组成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存,生长繁殖,促进骨质疏松性骨折愈合,并于移植84 d后仍存活.实验组VEGF,VEGFmRNA在7 d左右可见有阳性表达的细胞,14 d有分泌高峰,其中以软骨细胞中阳性最强,21 d分泌量开始下降,56 d后基本消失.TGF-β1,TGF-β1mRNA在3 d左右可见阳性细胞,7～10 d有分泌高峰,其中以成纤维细胞、软骨细胞中阳性最强,14 d分泌量开始下降,56 d后完全消失.而对照组未见明显分泌高峰.结论同种异体成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位,参与骨折修复的各个环节,可至少存活84d.TGF-β1,VEGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义.     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中相关因子的动态表达

目的：探讨在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中，生长因子TGF－β1，VEGF，bFGF动态表达的生物学意义，研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制。方法：将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD鼠骨质疏松性骨折部位，用原位杂交及免疫组化检验骨折愈合不同时相的标本：bFGF，VEGF，TGF－β1及bFGFmRNA，VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达。结果：实验组：成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存，生长繁殖，bFGF、bFGFmRNA及VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞，14d有分泌高峰，TGF－β1，TGF－β1mRNA在3d左右可见阳性细胞，7－10d有分泌高峰，而对照组未见明显分泌高峰。结论：成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位TGF-β1，VEGF，bFGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义。     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中相关因子的动态表达

目的:探讨在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中,生长因子TGF-β1,VEGF,bFGF动态表达的生物学意义,研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制。方法将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD鼠骨质疏松性骨折部位,用原位杂交及免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本:bFGFVEGF,TGF-β1及bFGFmRNA,VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达。结果:实验组:成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存,生长繁殖,bFGF、bFGFmRNA及VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞,14d有分泌高峰,TGF-β1,TGF-β1mRNA在3d左右可见阳性细胞,7～10d有分泌高峰,而对照组未见明显分泌高峰。结论:成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位TGF-β1,VEGF,bFGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义。     

幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合中不同类型一氧化氮合酶的动态表达

目的：追踪观察移植细胞在骨折愈合不同时间点的神经型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶动态表达的生物学意义。方法：实验于1999-01／2004-02在中山大学动物试验中心、中山大学病理教研室完成、中山大学肿瘤防治中心完成。选择SD清洁级大鼠96只，按配对原则分为实验组48只，对照组48只；SD清洁级乳鼠20只进行成骨细胞原代培养。建立SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型，实验组将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD雌性大鼠骨质疏松性骨折部位，对照组注入等量无血清培养液。手术后3，7，10，14，21，28，56，84d处死，每组每个时间点6只。用免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶和神经元型一氧化氮合酶的动态表达情况。结果：96只大鼠均进入结果分析。实验组：诱导型一氧化氮合酶在3d左右可见较多阳性表达的细胞，7d有表达高峰。内皮型一氧化氮合酶在3d左右可见少量阳性细胞，14d有表达高峰：神经元型一氧化氮合酶在10d左右可见少量阳性细胞，14-21d表达稍有增高，整个实验过程中神经元型一氧化氮合酶表达较弱，表达高峰不明显。而对照组诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶均有较弱表达，表达峰低平，而神经元型一氧化氮合酶表达很弱，未见明显表达高峰。结论：诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合的表达具有时效性，且表达的定位细胞不同，表达的量有差别，提示骨折部位一氧化氮合酶的释放可能对促进骨质疏松性骨折愈合有意义。神经元型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合过程中的作用不明显。     

幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合中不同类型一氧化氮合酶的动态表达

目的:追踪观察移植细胞在骨折愈合不同时间点的神经型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶动态表达的生物学意义。方法:实验于1999-01/2004-02在中山大学动物试验中心、中山大学病理教研室完成、中山大学肿瘤防治中心完成。选择SD清洁级大鼠96只,按配对原则分为实验组48只,对照组48只;SD清洁级乳鼠20只进行成骨细胞原代培养。建立SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型,实验组将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD雌性大鼠骨质疏松性骨折部位,对照组注入等量无血清培养液。手术后3,7,10,14,21,28,56,84d处死,每组每个时间点6只。用免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶和神经元型一氧化氮合酶的动态表达情况。结果:96只大鼠均进入结果分析。实验组:诱导型一氧化氮合酶在3d左右可见较多阳性表达的细胞,7d有表达高峰。内皮型一氧化氮合酶在3d左右可见少量阳性细胞,14d有表达高峰。神经元型一氧化氮合酶在10d左右可见少量阳性细胞,14～21d表达稍有增高,整个实验过程中神经元型一氧化氮合酶表达较弱,表达高峰不明显。而对照组诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶均有较弱表达,表达峰低平,而神经元型一氧化氮合酶表达很弱,未见明显表达高峰。结论:诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合的表达具有时效性,且表达的定位细胞不同,表达的量有差别,提示骨折部位一氧化氮合酶的释放可能对促进骨质疏松性骨折愈合有意义。神经元型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合过程中的作用不明显。     

中药骨康含药血清对骨质疏松性骨折愈合过程中血小板衍生生长因子表达的影响

背景：成骨细胞的同种异体移植，促进骨折愈合的研究正引起重视。中药在促进骨折愈合方面已有确切疗效。将二者结合起来所发挥的综合优势还需要进一步证实。目的：探讨中药骨康含药血清培养成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验，F2006-07／2007-02在广州中医药大学附属骨伤科医院实验室和广州中医药大学第一附属医院骨科实验室完成。材料：1d龄SD乳鼠用于分离原代成骨细胞：4月龄SD雌性大鼠36只用于制备含药血清；4月龄SD雌性大鼠63只用于实验造模和标本取材，中药骨康为水煎剂，由补骨脂、淫羊藿、熟地等组成，含生药量1．43kg／L。方法：将SD大鼠63只．随机分成3组，成骨细胞＋骨康血清组、成骨细胞＋罗盖全血清组、成骨细胞＋蒸馏水血清组，每组21只，建立骨质疏松性骨折动物模型，用相应含药血清培养的成骨细胞移植到骨折端部位。于模型建立后第7，14，28天，3组动物麻醉下各处死7只动物，截取股骨，主要观察指标：采用免疫组织化学法动态拎测血小扳衍生生长因子A和血小板衍生生长因子αR的表达。结果：骨折后7d，血肿、骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞和新形成的软骨细胞血小板衍生生长因子表达阳性：骨折后14d，骨折断端附近的骨外膜下编织骨表面成骨细胞血小板衍生生长因子强阳性表达，肥大的软骨细胞也呈阳性表达：骨折后28d，外骨痂中编织骨基质与表面细胞血小板衍生生长因子表达阳性，已成熟的骨小梁表面成骨细胞表达较弱，软骨细胞血小板衍生生长因子表达阳性。成骨细胞＋骨康血清组及成骨细胞＋罗盖全血清组的血小板衍生生长因子表达均较成骨细胞＋蒸馏水血清组明显。结论：运用骨康含药血清培养的成骨细胞进行移植，能增强骨痂中血小扳衍生生长因子A和血小板衍生生长因子αR的表达，促进实验性骨质疏松性骨折的愈合     

转移生长因子-β1、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白-2在大鼠骨质疏松骨折愈合骨痂中的表达

目的 观察去卵巢大鼠骨折愈合早期骨痂组织学变化以及转移生长因子β1(transforming growth factor beta，TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic proteins-2，BMP-2)的表达与分布，探讨骨质疏松对大鼠骨折早期修复的影响与TGF—β1、bFGF、BMP-2对其起的作用。方法 雌性SD大鼠去除双侧卵巢3个月后造成股骨干骨折，并与伤后不同阶段处死，分别进行组织学以及TGF-β1、bFGF、BMP-2免疫组化染色方法观察。结果 (1)骨折后4—6周，去卵巢组形成的骨痂中含有的软骨痂比例高于假手术组。(2)骨折后2周，去卵巢组与对照组中各因子的表达均达到高峰，4—6周时回落到极低水平。(3)骨折后2周，去卵巢组中表随达TGF-β1的成骨细胞数目少于对照组。结论 (1)骨质疏松大鼠骨折早期愈合形成的骨痂质量较差。(2)BMP-2、bFGF、TGF-β1在骨折愈合过程中存在的为期4周的“释放恒定时期”导致了骨质疏松骨折愈合的进一步延缓。(3)TGF-β1在成骨细胞中的表达减少是骨质疏松和骨折愈合质量下降的可能因素之一。     

牛骨形态发生蛋白对骨质疏松性椎体骨折愈合过程中局部血管内皮生长因子表达的作用

目的:观察骨质疏松性椎体骨折愈合过程中,局部血管内皮生长因子动态表达,探讨牛骨形态发生蛋白促进SD大鼠骨质疏松性椎体骨折愈合的作用机制。方法:实验于2005-07/2006-07在解放军兰州军区总医院骨研所完成。①牛骨形态发生蛋白的制备:青海小牦牛大腿骨,-4℃条件下,粉碎,按Urist改良方法提取。②选择雌性SPF级8个月龄SD大鼠96只,去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。随机分为2组:实验组和对照组,每组48只。③术后3个月行L5椎体开窗建立人工骨折模型,实验组置牛骨形态发生蛋白10mg 纤维蛋白复合体;对照组注入等量无血清培养液。④于手术后3,7,10,14,21,28,56,84d每组麻醉状态处死6只,用苏木精-伊红染色、免疫组织化学及定量聚合酶链反应检测骨折愈合不同时间的标本血管内皮生长因子及血管内皮生长因子mRNA的动态表达,阳性信号为胞浆内棕色颗粒。结果:96只SD大鼠全部进入结果分析。①骨折愈合不同时间组织学观察:实验组术后7d纤维骨痂形成,21d新生骨组织与旧骨组织出现融合,56～84d软骨性骨痂已逐渐被骨性骨痂取代,骨折部位髓腔再通,出现成熟板层骨,骨折基本愈合。对照组术后7d未见典型纤维性骨痂;21d新生骨组织大都游离与孤立存在,术后28d骨小梁仅有少部分连结成网状,56～84d部分骨缺损存在,不见成熟板层骨,大部分髓腔不通,骨折愈合延迟。②骨折不同时间血管内皮生长因子免疫组织化学结果:实验组血管内皮生长因子在7d左右可见有阳性表达的细胞,14d有分泌高峰,对应循环数(CT值)最小,两组比值最大。而对照组未见明显分泌高峰。③实时荧光定量聚合酶链反应检测结果:对照组在造模后1,2,4,6,8周时,椎体内的血管内皮生长因子mRNA的表达量明显低于实验组(P<0.01)。结论:牛骨形态发生蛋白可促进大鼠骨质疏松性椎体骨折部位血管内皮生长因子的动态表达,可在受体骨折部位局部促进骨折生长。     

淫羊藿对家兔骨折愈合过程中VEGF及TGF-β1表达的影响

目的 探讨淫羊藿对家兔骨折愈合的作用及机制。方法 手术制作成年雄性家兔双前肢桡骨中段骨折动物模型40例。术后分为两组，实验组（20例）除每日给予淫羊藿煎液口服外，其他饲养条件完全与对照组（20例）相同。分别于术后14、24、34、42天处死动物，取骨折标本作连续硬组织切片（厚5μm），作常规甲苯胺蓝染色及Masson三色染色。并作TGF-β1及VEGF免疫组化染色。结果 实验组较对照组在软骨细胞及破骨细胞形成，软骨内成骨和膜内成骨、骨痂形成及改建以及髓腔再通等方面均明显更早；TGF-β1及VEGF免疫组化染色在骨折后14天及24天实验组明显深于对照组；骨折后34天及42天，TGF—β1及VEGF免疫组化显色两组无明显差异。结论 淫羊藿通过促进家兔骨折局部VEGF及TGF-β1的表达。而促进血管的再生、间充质细胞的募集与分化、成骨细胞及软骨细胞的增殖和分化，促进破骨细胞的形成，从而促进了骨痂的形成与改建、髓腔的再通，最终促进骨折愈合。     

骨细胞CD44和纤连蛋白在骨质疏松性骨折中表达的意义

目的探讨骨细胞CD44和纤连蛋白的表达在骨质疏松性骨折中所发挥的作用。方法选取28只SD大鼠建立骨质疏松性骨折模型,同时选取28只建立Ⅱ期骨折愈合模型SD大鼠作为对照,分别于骨折后10、20、40 d进行取材,分别对骨痂进行HE染色及采用免疫组化法检测骨细胞CD44及纤连蛋白,观察各自分布情况。结果在骨质疏松性骨折SD大鼠的不同时间段其CD44及纤维表达具有一致性,且随着骨折愈合,其表达逐渐增加,接近正常SD大鼠组织水平。结论骨质疏松性骨折SD大鼠骨细胞CD44和纤连蛋白均显著减少,且随着骨折的恢复,水平逐渐上升。提示骨细胞CD44和纤连蛋白在骨细胞中的表达减少可能是造成骨质疏松性骨折的原因之一,为骨质疏松型骨折的临床治疗提供基础。     

TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β(TGF-β)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/c小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL/c受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β实验组。TGF-β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β1(1μg/kg)。结果显示:TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组(p<0.01),TGF-β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF-β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高,但远低于移植对照组;TGF-β实验组血清IL-10浓度明显高于移植对照组。结论:TGF-β能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的aGVHD发生,提高移植后存活率。TGF-β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌,同时促进了Th2类细胞因子IL-10的表达,降低aGVHD的发生。     

半夏泻心汤对胃溃疡大鼠生长因子表达的影响

目的探讨半夏泻心汤促进胃溃疡愈合的机制。方法采用乙酸胃腔内注射方法制备大鼠胃溃疡模型,用RT-PCR技术检测半夏泻心汤治疗后胃组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况。结果中药大、中、小剂量组大鼠TGF-β1 mRNA、VEGF mRNA的表达上调明显。结论半夏泻心汤可通过上调TGF-β1、VEGF mRNA等生长因子表达,促进血管新生,组织修复,促进溃疡愈合。     

转化生长因子-β、碱性成纤维生长因子和血小板衍生生长因子在骨折愈合中的表达

目的:观察转化生长因子-β(TGF-β)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)在骨折愈合中的表达和分布情况,进而探讨其作用机制。方法:选用SD大鼠制作胫骨骨折愈合模型,伤后不同时期处死取材,分别进行组织学和TGF-β、bFGF和PDGF免疫组化染色观察。结果:(1)伤后3d开始形成原始骨痂。1周时肉芽组织中的间质细胞开始分化为软骨细胞,软骨形成后再进行软骨内化骨。4周时形成连接骨折端的桥接骨痂。(2)伤后早期血肿中炎性细胞表达bFGF、PDGF。伤后1周骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、骨端骨细胞以及原始骨痂成骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。伤后2周软骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。结论:TGF-β、bFGF和PDGF有着各自的表达和分布特点,并共同调解骨原细胞的增殖和成骨细胞、软骨细胞的分化,最终完成骨折愈合。     

活血化瘀汤对骨折早期血管内皮细胞因子活性的影响

目的：探讨活血化瘀汤对骨折早期局部血管内皮生长因子(vascular endotllelial growth factor，VEGF)表达的影响。方法：72只雄性SD大鼠建立闭合骨折髓内固定动物模型，分活血化瘀汤组、生理盐水组。分别在24，48，72h，5，7，14d取骨折区组织，通过RT-PCR方法进行半定量分析VEGF的表达。结果：VEGF在前24h表达开始增强；实验组24，48，72h VEGF表达较生理盐水组弱(P&;gt;0．05)，5，7，14d活血化瘀汤组表达较生理盐水组强(P&;lt;0．05)；5，7d VEGF表达到峰值(P&;lt;0．01)。结论：骨折早期活血化瘀汤促进VEGF表达增强。     

骨折愈合修复过程中血管内皮生长因子的表达及其动态改变

目的：通过研究骨折愈合过程中骨痂组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)的基因表达水平的动态变化，探讨VEGF对骨折愈合的影响。方法：实验于2004-01／10在南通大学实验动物中心完成。采用RT-PCR方法检测大鼠骨折不同阶段(3，6，12，24，48d)骨痂组织中VEGF基因的表达及动态变化。结果：VEGF mRNA在骨折后3d开始表达，24d达到高峰，其与B—actin表达量比值在骨折后3，6，12，24，48d分别为0．654-0．22，0．784-0．23，3．814-1．04，5．204-2．15，0．984-0．46，其中12d组、24d组与3d组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，48d组与3d组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：VEGF参与调节骨折愈合的修复并可能在骨愈合中起重要作用.     

周围神经损伤修复中感觉神经元内转化生长因子β1变化的作用

目的：观察大鼠坐骨神经损伤后背根神经节内转化生长因子β1(TGF．β1)表达的变化，探讨。TGF-β1在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法：实验于2001-08／2002一05在第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室完成。35只雄性SD大鼠，造成右侧坐骨神经挤压伤。分别于正常及术后1，3，5，7，14，21d取材，行组织学、免疫组织化学观察。结果：免疫组织化学染色结果，神经挤压后TGF-β1表达逐渐升高，5d时达到高峰，以后TGF-β1表达的量有所减少。结论：TGF-β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变，在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

基底膜蛋白多糖抗体可抑制体外培养成骨细胞合成及分泌转化生长因子β1

背景：到目前为止,堆底膜蛋白多糖仡骨折愈合的作用机制、调节转化生长因子β1时成骨细胞增殖的作刚尚少见报道。目的：观察基底膜篮自多糟对胎鼠颅骨成骨细胞合成分泌转化生长洲β1的影响。方法：分离并培养SD胎鼠颅盖骨成骨样细胞,采用碱性磷酸酶染色法及茜素红染色法攀定细胞后,随即分对照组、基底膜蛋白多糖阻断组,应用免疫组化和酶联免疫吸附试验检测基底膜蛋白多糖埘成骨细胞分泌转化生长因子β1的情况。结果与结论：与对照组比较,培底膜蛋白多糖阻断组转化生长因子β1浓度降低,麓异何显著性意义（P〈0．05）。说明基底膜蛋白多精抗体能消除其促进成骨细胞分泌合成转化生长因了β1的作用,使转化生长因子β1浓度降低。     

反义转化生长因子β1抑制Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕形成的实验研究

背景：瘢痕的形成涉及多种因素，其中之一是转化生长因子β1(TGFβ1)的高表达，为达到抑制TGFβ1过度表达的目的，尝试用反义TGFβ1抑制瘢痕形成的方法，将基因治疗技术运用于临床医学。目的：探讨反义TGFβ1对Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕生成的抑制作用。设计：随机对照、重复测量设计。地点和对象：在上海第二医科大学生物化学教研室完成。清洁级雄性SD大鼠105只，体质量(250&;#177;20)g，购于中科院上海实验动物中心。干预：SD大鼠Ⅲ度烫伤后，分3组进行处理：①反义TCFβ1脱氧寡核苷酸。②反义TGFβ1重组质粒。③空白对照。分别于烫伤后l，3，5，14dRT-PCR、免疫组化检测TGFβ1 mRNA和蛋白质的表达。烫伤后5，14，2l，28，60d原位杂交检测I型胶原mRNA的表达变化，病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况。主要观察指标：①烫伤后l，3，5，14dRT-PCR，TGFβ1 mRNA和蛋白质的表达。②烫伤后5，14，21，28，60dI型胶原mRNA的表达变化。③病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况。结果：反义ODN组和反义重组质粒组在烫伤后第1天TGFβ1 mRNA表达水平与对照组相比无降低，14d分别为0．176&;#177;0．014和0．213&;#177;0．071，表达均减少。反义作用组TGFβ1蛋白质的表达在烫伤后3周内均为低表达。原位杂交显示对照组在14dⅠ型胶原mRNA开始表达，28d达到高峰，随后减少，反义作用组无此现象，一直保持低表达。病理染色显示反义作用组炎性细胞浸润少，炎性反应低，胶原合成减少。结论：反义TGFβ1可抑制Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕的形成。     

TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β（TGF—β）对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响，用C57BL／6小鼠作为供鼠，BABL/c小鼠为受鼠，建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL／c受鼠随机分为4组：空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF—β实验组。TGF—β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF—β1（1μg/kg）。结果显示：TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组（P〈0．01），TGF—β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF—β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高，但远低于移植对照组；TGF—β实验组血清IL—10浓度明显高于移植对照组。结论：TGF—β能够减轻或抑制小鼠allo—BMT后致死性的aGVHD发生，提高移植后存活率。TGF—β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移，抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌，同时促进了Th2类细胞因子IL—10的表达，降低aGVHD的发生。     

中药骨康调控成骨细胞核内结合因子α1的表达

背景：中药骨康在临床上治疗骨质疏松疗效明确,但其具体作用途径尚不清晰。目的：假设中药骨康通过调节核内结合因子 a1 水平,控制其下游基因核因子κB受体活化因子配体和骨保护素表达,起到调控成骨细胞生长发育的作用。方法：新生 24 h 内的 SD 乳鼠用于成骨细胞的分离培养。成年 SD 雌性大鼠用于制备药物血清,随机分为正常血清组和中药骨康组。2 组大鼠按体表面积的方法给予中药骨康方的提取药物和生理盐水灌胃,连续给药 1周。最后一次用药后 2 h 行心脏采血,分离血清。原代培养并传至第 3 代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为 2 组,以上述血清处理 72 h,MTT 法检测成骨细胞的增殖率,ELISA 方法检测碱性磷酸酶分泌量并以相应吸光度值进行纠正,运用 RT-PCR 检测 2 组成骨细胞核内结合因子α1 及其下游核因子κB受体活化因子配体和骨保护素 mRNA 表达情况。结果与结论：中药骨康组成骨细胞骨保护素和核内结合因子 a1 mRNA 水平显著高于正常血清组,核因子κB受体活化因子配体蛋白和 mRNA 水平显著低于正常血清组（P 〈 0.01）。实验结果证实,中药骨康可通过影响核内结合因子 a1 表达,调控其下游基因核因子κB受体活化因子配体和骨保护蛋白表达和分泌,进而发挥治疗骨质疏松的作用。