雷公藤甲素对Caspase诱导人肝细胞L-02凋亡机制的研究

目的：研究雷公藤甲素诱导正常人肝细胞株L-02细胞凋亡的机制。方法：体外培养L-02细胞。MTT法检测雷公藤甲素的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测雷公藤甲素对L-02细胞的凋亡诱导作用;测定细胞基质中半胱天冬氨酸酶（Caspase）8、Caspase9与Caspase3活性的变化及加入Caspase抑制剂Z-DEVD-FMK后对细胞凋亡的影响。结果：雷公藤甲素能显著诱导L-02细胞的凋亡,其作用呈明显的量效关系与时间依赖性;120nmol·L-1雷公藤甲素作用L-02细胞24h使Caspase3的活性显著增强;加入Z-DEVD-FMK后,能有效抑制雷公藤甲素诱导的细胞凋亡。结论：雷公藤甲素体外诱导正常人肝细胞株L-02细胞凋亡可能与上调Caspase3、9的活性有关。     

雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的机制

目的:探讨雷公藤甲素对人正常肝细胞L-02细胞的凋亡诱导作用及细胞线粒体呼吸链复合体抑制剂对细胞凋亡的影响。方法:采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测雷公藤甲素对L-02细胞的凋亡作用,JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化,线粒体呼吸链复合体抑制剂对细胞活性氧释放及细胞凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示,雷公藤甲素对细胞增殖的抑制作用与浓度、时间呈正相关;JC-1染色可见经雷公藤甲素作用的细胞线粒体膜电位降低;加入细胞线粒体呼吸链抑制剂后,与单用雷公藤甲素组比较,雷公藤甲素+rotenone组细胞活性氧释放水平显著降低(P<0.05),同时抑制剂合用组细胞凋亡百分率显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤甲素体外可诱导L-02细胞凋亡,机制可能是与公藤甲素上调经线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ产生的活性氧有关。     

雷公藤甲素诱导人肝细胞凋亡的机制

目的 探讨雷公藤甲素诱导人肝细胞L-02凋亡的机制.方法 将L-02细胞分为对照组和雷公藤甲素50 nM实验组,处理48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)的荧光强度,试剂盒检测细胞色素C的浓度以及半胱天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)和Caspase-3的活性,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)的表达.结果 与对照组相比,实验组细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,Bcl-2表达下调,Bax表达、细胞色素C浓度、ROS荧光强度、Caspase-9和Caspase-3活性均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 雷公藤甲素可以抑制L-02细胞的存活,通过激活线粒体凋亡途径促进L-02细胞凋亡,下调Bcl-2与Bax比率,促进细胞色素C释放,诱导ROS生成,进一步破坏线粒体膜,增加细胞色素C的释放,激活Caspase-9和Caspase-3介导的细胞凋亡通路,最终诱导细胞凋亡.     

雷公藤甲素对人肝细胞L-02肝药酶活性的影响

目的:研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞的损伤作用及其对肝CYP3A及CYP2E1蛋白表达量的影响。方法:体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的损伤,试剂盒测定培养基上清液中AST、ALT及AKP活性,Western-blot测定细胞中CYP3A及CYP2E1蛋白的含量。结果:雷公藤甲素对L-02细胞有损伤作用,且随雷公藤甲素浓度的增加或孵育时间的延长,其损伤作用增强,同时,培养基中AST、ALT及AKP的活性增强;雷公藤甲素诱导细胞中CYP3A蛋白表达减弱,CYP2E1蛋白表达增强。结论:雷公藤甲素体外对人正常肝细胞L-02细胞有损伤作用,且能影响肝CYP450酶系的表达。     

雷公藤甲素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究雷公藤甲素对人肺腺癌‰细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人肺腺癌A谢细胞增殖的影响，运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带检测细胞凋亡，采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-9，3的活化。结果：雷公藤甲素对体外培养的A谢细胞具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示雷公藤甲素可以显著诱导‰细胞凋亡，DNA电泳显示雷公藤甲素作用于A谢细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。雷公藤甲素作用后‰细胞caspase-9，caspase-3活性明显升高。结论：雷公藤甲素可能通过线粒体信号通路抑制肺腺癌A谢细胞的生长并诱导其凋亡。     

雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡作用

目的探讨雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用及机制。方法 MTT测定雷公藤甲素对CNE-2Z细胞的抑制作用;碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色测定雷公藤甲素对鼻咽癌细胞凋亡的影响;Western blot测定葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP-78)、Akt的表达及Akt的磷酸化水平;ROS荧光探针-二氢乙啶测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。结果 MTT显示,雷公藤甲素对鼻咽癌细胞CNE-2Z的抑制作用随浓度增加及时间延长而增强;PI结果显示,雷公藤甲素能明显诱导鼻咽癌细胞的凋亡,25、50和100 nmol·L-1的雷公藤甲素作用细胞24 h,CNE-2Z细胞的凋亡率分别为14.0%、26.9%和34.4%;Western blot显示,雷公藤甲素对CNE-2Z细胞GRP-78表达无明显影响,但可减弱Akt的表达及磷酸化水平;氧化应激实验结果表明,雷公藤甲素作用4 h后,能增加鼻咽癌细胞CNE-2Z内ROS的水平。结论雷公藤甲素具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的作用,且具有浓度与时间依赖性。其机制可能是雷公藤甲素通过诱导氧化应激,抑制细胞内Akt的表达及其磷酸化,调节下游的信号通路,进而促进CNE-2Z细胞的凋亡。     

基于狗肾小管上皮细胞的雷公藤甲素体外肾毒性研究

目的:观察雷公藤甲素对狗肾小管上皮细胞(MDCK细胞)的毒性作用,并初步探讨其对氧化应激的影响。方法:以马兜铃酸A为阳性对照,用0.5,5,50和500 nmol·L-1的雷公藤甲素与MDCK细胞共同孵育24 h后,MTT法检测细胞抑制率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤以及倒置显微镜观察雷公藤甲素对细胞形态的改变。用500 nmol·L-1雷公藤甲素分别与MDCK细胞作用30 min、1 h、2 h、4 h和6 h后,用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞的活性氧自由基(ROS)水平。结果:与阴性对照组比较,雷公藤甲素组的细胞抑制率明显升高(P<0.01);LDH相对释放率明显增加(P<0.01)。雷公藤甲素处理组的细胞形态出现皱缩,呈现为球形,并有部分细胞脱落。雷公藤甲素与MDCK细胞作用30 min后ROS水平达到最高值,然后ROS逐渐减少(P<0.01)。结论:雷公藤甲素可诱导MDCK细胞的毒性作用,其毒性作用机制可能和氧化应激反应有关。     

7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨7,8-二羟基-4-甲基香豆素(Dhmc)对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤凋亡模型,给予Dhmc处理后,MTT法检测细胞增殖;化学检测法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;采用荧光法检测活性氧(ROS)的生成;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 Dhmc可显著降低由谷氨酸诱导的细胞损伤,提高了细胞存活率,减少LDH漏出量,降低MDA含量,增加SOD活性,抑制ROS的生成,维持线粒体膜电位水平,下调Bcl-2/Bax比率,减少Cyt C的释放,降低Caspase-3活性。结论 Dhmc具有减轻由谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化应激和减轻线粒体损伤有关。     

低温联合还原型谷胱甘肽对肝细胞缺血-再灌注损伤中bcl-2及bax的影响作用

目的观察低温联合还原型谷胱甘肽对缺血-再灌注诱导的L02肝细胞凋亡的影响,并探索相关分子机制。方法M1T11比色法检测低温联合还原型谷胱甘肽对细胞活力的影响;试剂盒检测低温联合还原型谷胱甘肽对细胞丙二醛（MDA）水平、乳酸脱氢酶（LDH）释放及超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响;激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧簇（ROS）生成;Westernblot法检测低温联合还原型谷胱甘肽对bcl-2及bax蛋白表达水平的影响。结果低温联合还原型谷胱甘肽能明显抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞活力降低（P〈0．05）;低温联合还原型谷胱甘肽处理细胞能明显抑制缺血-再灌注诱导的L｜02肝细胞MDA生成增加、LDH水平增高及SOD活力降低（P〈0．05）;低温联合还原型谷胱甘肽处理细胞能明显抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞内bcl-2蛋白表达水平降低及bax蛋白表达水平增高（P〈0．05）。结论低温联合还原型谷胱甘肽可能通过上调bcl-2的表达及下调bax的表达抑制缺血-再灌注诱导的L02肝细胞凋亡发生。     

丹皮酚对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用(英文)

目的探讨丹皮酚对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞内活性氧含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果PC12细胞经H2O2100μmol.L-1处理10 h可致细胞存活率下降,并能诱导细胞凋亡,LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量明显增加;丹皮酚(12,25和50μmol.L-1)预处理1 h可提高细胞存活率,减少细胞凋亡、LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量。结论丹皮酚对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

环维黄杨星D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究环维黄杨星D对纯化培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定细胞凋亡率、caspase-3、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率明显增高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01);CVB-D(1×10-5mol.L-1)组降低LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率,提高SOD活性,与缺氧/复氧组比较各实验指标均差异具有显著性(P<0.05)。结论CVB-D对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制与清除氧自由基,抗脂质过氧化及降低细胞凋亡率有关。     

川芎嗪对LPS致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨川芎嗪对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞损伤及NF-κB核移位的影响。方法采用原代培养SD乳鼠心肌细胞,经终浓度分别为40、80、120μmol·L-1川芎嗪预处理后,用10 mg·L-1LPS处理6 h,处理完成后检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞法检测ROS生成,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量及细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性、Western blot法检测核蛋白中NF-κB p65的变化情况。结果不同剂量川芎嗪(40、80、120μmol·L-1)预处理3 h后可明显降低LDH活性,增加细胞存活率,降低ROS生成,减少MDA含量,升高SOD、GSH-Px活性,抑制NF-κB p65在细胞核中的表达,且呈剂量依赖性。结论川芎嗪可抑制LPS所致的心肌损伤,其机制与减少脂质过氧化、增强抗氧化酶系、降低ROS生成、抑制NF-κB p65核移位有关。     

黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为10、30、100mg·mL-1的APS,观察APS对细胞上清液中缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量、MDA含量、SOD活性。用MTT法检测APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。用流式细胞仪测定APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果 APS可明显减少缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量(P<0.05或P<0.01);降低MDA含量,提高SOD活性(P<0.05或P<0.01);明显提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,并能明显抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡。结论 APS对培养心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,作用机制与其增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。     

l-Theanine prevents alcoholic liver injury through enhancing the antioxidant capability of hepatocytes

l-Theanine is a unique amino acid in green tea. We here evaluated the protective effects of l-theanine on ethanol-induced liver injury in vitro and in vivo. Our results revealed that l-theanine significantly protected hepatocytes against ethanol-induced cell cytotoxicity which displayed by decrease of viability and increase of LDH and AST. Furthermore, the experiments of DAPI staining, pro-caspase3 level and PARP cleavage determination indicated that l-theanine inhibited ethanol-induced L02 cell apoptosis. Mechanically, l-theanine inhibited loss of mitochondrial membrane potential and prevented cytochrome c release from mitochondria in ethanol-treated L02 cells. l-Theanine also prevented ethanol-triggered ROS and MDA generation in L02 cells. l-Theanine restored the antioxidant capability of hepatocytes including GSH content and SOD activity which were reduced by ethanol. In vivo experiments showed that l-theanine significantly inhibited ethanol-stimulated the increase of ALT, AST, TG and MDA in mice. Histopathological examination demonstrated that l-theanine pretreated to mice apparently diminished ethanol-induced fat droplets. In accordance with the in vitro study, l-theanine significantly inhibited ethanol-induced reduction of mouse antioxidant capability which included the activities of SOD, CAT and GR, and level of GSH. These results indicated that l-theanine prevented ethanol-induced liver injury through enhancing hepatocyte antioxidant abilities.     

红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。结果与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01)。结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。     

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯(HTG)血清致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HUVEC,终浓度为100 mg.L-1、200 mg.L-1、400 mg.L-1的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育16 h,通过检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内活性氧(ROS)水平的变化,观察SSTF的保护作用,并通过RT-PCR法检测NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA表达,Western blot法检测NOX4蛋白表达。结果各浓度组的SSTF均可明显升高HTG氧化损伤的HUVEC的SOD活性,明显降低MDA含量,减少HUVEC内ROS水平,下调NOX4mRNA表达和蛋白表达(P<0.01)。结论 SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤具有保护作用,其可能通过抑制NADPH氧化酶表达进而减少ROS的生成来发挥它的抗氧化作用。     

3,6-(二甲氨基)-二苯骈碘杂六环葡萄糖酸盐对培养的脑皮质神经元和缺血再灌注大鼠脑脂质过氧化的拮抗作用(英文)

目的:观察3,6-(二甲氨基)-二苯骈碘杂六环葡萄糖酸盐对培养的脑皮质神经元和缺血再灌注大鼠脑脂质过氧化的拮抗作用。方法:原代培养大鼠胎鼠脑皮质神经元并制做可逆性不开颅大鼠大脑中动脉梗塞模型,测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的溢出,神经元内和脑匀浆中丙二醛(MDA)含量,脑匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性,脑水肿指数和形态学变化。结果:I-93 10-40μmol·L~(-1)剂量依赖性抑制H_2O_2引起的神经元LDH外漏和MDA升高。I-93 0.5mg·kg~(-1)改善脑组织结构损害,减轻脑水肿,降低脑匀浆中MDA含量并提高SOD活性。结论:I-93通过提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化对H_2O_2引起的神经毒性和缺血再灌注引起的脑损伤产生保护作用。