瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法体外培养大鼠的主动脉VSMC,按照不同浓度瘦素的处理方法将细胞分为对照组、小剂量组(瘦素40μg/L)、中剂量组(瘦素80μg/L)、高剂量组(瘦素100μg/L)及联合组(瘦素100μg/L+脂联素30mg/L),对照组细胞不做任何处理。孵育24h检测VSMC活性、VSMC凋亡率及增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达水平。结果与对照组比较,小、中、大剂量各组及联合组VSMC的增殖率与PCNA mRNA表达水平明显升高、VSMC凋亡率与caspase-3mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。小、中、大剂量各组VSMC的增殖率和PCNA mRNA表达水平逐渐升高、VSMC凋亡率和caspase-3mRNA表达水平逐渐降低(P0.05)。中剂量组与大剂量组VSMC的增殖率明显高于联合组,VSMC凋亡率明显低于联合组,差异有统计学意义[(17.9±1.0)%和(19.3±1.0)%vs(16.9±4.0)%,(2.5±0.6)%和(1.5±0.4)%vs(4.0±0.4)%,P0.05]。Spearman相关分析显示,血清瘦素水平与VSMC的增殖呈正相关(r=0.37,P0.05),与VSMC的凋亡率呈负相关(r=-0.19,P0.05)。结论瘦素可以促进平滑肌细胞的增殖,抑制平滑肌细胞凋亡,这一作用可以被脂联素所抑制。     

消退素D1在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究。方法 SPF级雄性小鼠40只,随机分成对照组、RvD1组、β氨基丙腈(BAPN)组和BAPN+RvD1组,每组10只,BAPN组和BAPN+RvD1组构建BAPN饮食诱导的小鼠主动脉夹层模型,对照组和RvD1组饲喂普通的小鼠维持饲料,RvD1组和BAPN+RvD1组腹腔注射RvD1 3μg/(kg·d),对照组和BAPN组注射等量生理盐水。用苏木精-伊红和血管弹力纤维染色(EVG)观察主动脉和弹力纤维的形态和结构,用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1、IL-17、TNF-α和γ干扰素水平,采用RT-PCR法检测主动脉组织IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达。结果对照组和RvD1组均未出现主动脉夹层,而BAPN+RvD1组小鼠主动脉夹层发生率和病死率显著低于BAPN组,差异有统计学意义(20.0%vs 70.0%,10.0%vs 40.0%,P0.05);苏木精-伊红染色和EVG结果提示,BAPN组小鼠血管壁增厚,伴假腔形成,同时中膜弹力纤维出现明显的断裂或中断,而BAPN+RvD1组血管壁仅轻度增厚,未见假腔形成;与对照组比较,BAPN组小鼠血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素mRNA表达水平明显升高(P0.05,P0.01),而BAPN+RvD1组血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素水平和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达明显低于BAPN组,差异有统计学意义(P0.05,P0.05)。结论RvD1可显著降低循环和主动脉炎症,防止中膜弹力纤维和主动脉的断裂,降低主动脉夹层的发生。     

人参皂甙Rg3对血管平滑肌细胞衰老的影响及机制

目的探讨人参皂甙Rg3对D-半乳糖诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)衰老的影响及机制。方法取SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养VSMC,选取3~6代VSMC,通过D-半乳糖共孵育的方法诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色和透射电镜鉴定衰老VSMC;VSMC随机分成对照组、D-半乳糖组、Rg3高浓度组、Rg3低浓度组,Western blot方法检测p16、p21和p53蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组比较,D-半乳糖组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显升高[(58.67±2.52)%vs(4.67±0.58)%,P<0.05]。电镜下表现为细胞核膜内折,细胞线粒体肿胀,脂褐素堆积;p16、p21和p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞周期停滞在G0/G1期。与D-半乳糖组比较,Rg3低浓度组和Rg3高浓度组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显减少,p16、p21和p53蛋白表达水平明显降低,G0/G1期细胞数明显减少(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3可抑制VSMC衰老,其机制可能部分通过抑制细胞生长周期p16INK4a/Rb、p53-p21Cip1/Waf1信号通路来实现。     

富含亮氨酸重复结构域蛋白3炎症小体在高血压大鼠主动脉夹层模型形成中的作用

目的建立高血压大鼠主动脉夹层(AD)模型,探讨富含亮氨酸重复结构域蛋白(NLRP)3炎症小体在高血压促AD形成中的作用及相关分子机制。方法 40只雌性SD大鼠(3周龄,体质量60g左右)随机分为4组,每组10只:对照组:正常喂食饮水;β-氨基丙腈(BAPN)组(AD模型组):0.25%BAPN喂食;醋酸去氧皮质酮(DOCA)组:0.25%BAPN喂食,并皮下注射DOCA油剂;左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME)组:0.25%BAPN喂食,饮含l-NAME水。记录各组大鼠饮水、体质量及血压;动物死亡后(对照组大鼠为处死,模型组为自然死亡)分离主动脉行Masson三色染色及EVG染色,分别观察主动脉内胶原纤维、弹力纤维的变化情况,行免疫组化染色观察主动脉中NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、Caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)]的表达情况,采用实时聚合酶链反应及Western blot法分别检测主动脉内NLRP3炎症小体相关蛋白的基因及蛋白表达情况。结果与对照组比较,BAPN喂养2周后大鼠体质量明显减轻,DOCA组大鼠饮水量明显增加。DOCA组、l-NAME组大鼠血压较BAPN组明显升高[干预第2周平均动脉压:(95.4±10.1)、(110.0±9.9)比(70.4±2.9)mm Hg;干预第3周平均动脉压:(128.4±13.8)、(118.5±8.1)比(76.4±5.3)mm Hg,均P0.01]。Masson三色染色显示:DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中胶原纤维较BAPN组明显增多(均P0.05)。EVG染色显示:DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中弹力纤维较BAPN组明显增多(均P0.05),且排列更加紊乱,断裂情况更加严重。免疫组化显示:与BAPN组比较,DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中NLRP3炎症小体相关蛋白表达增加(NLRP3:6.63±0.51、6.78±0.47比3.32±0.39;Caspase-1:5.22±0.45、6.19±0.31比3.36±0.30;IL-1β:5.51±0.53、5.80±0.40比3.18±0.35;均P0.05)。与BAPN组比较,DOCA组及l-NAME组大鼠主动脉内NLRP3炎症小体相关蛋白在基因水平、蛋白水平的表达显著增加(均P0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与高血压促大鼠AD的形成。     

着色性干皮病基因B对白介素-6介导的血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨着色性干皮病基因B(xeroderma pigmentosum B,XPB)对白介素-6(IL-6)介导人血管平滑肌细胞( VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载质粒pcDNA3.1稳定转染VSMC,然后给予100 U/ml的IL-6孵育48 h.实验分为6组:(1)空白对照组;(2) pcDNA3.1组;(3) pcDNA3.1-XPB组;(4)IL-6组;(5) IL-6+ pcDNA3.1组;(6)IL-6+ pcDNA3.1-XPB组.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化;用比色法(MTT)观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 重组质粒pcDNA3.1-XPB转染使细胞XPB表达增高(P＜0.05或P＜0.01),同时Bcl-2表达降低、Bax和wt-p53表达增高(P＜0.05或P＜0.01),抑制IL-6促进VSMC的Bcl-2高表达、Bax和wt-p53降表达(P＜0.05或P＜0.01);XPB高表达抑制了细胞增殖活力(q=2.95,P＜0.05),并抑制IL-6促进VSMC增殖,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组VSMC存活率分别为(102.6±6.2)％和(124.5+7.9)％(q=3.49,P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示,XPB高表达引起细胞G0/G1期增加、S期减少、凋亡率增加(q值分别为2.99、5.39、3.05,P＜0.05或P＜0.01),并抑制IL-6促进VSMC G0/G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组分别为(70.9±6.7)％与(54.8±2.9)％、(20.2±3.6)％与(36.4±7.2)％、(5.9±2.1)％与(0.3±0.1)％(q值分别为6.91、8.54、7.53,均P＜0.01).结论 XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点.     

基于平滑肌细胞衰老探讨Notch信号通路在小鼠胸主动脉夹层形成中的作用

目的 探讨Notch信号对小鼠胸主动脉夹层形成的作用和潜在机制。方法 利用β-氨基丙腈（BAPN）饲喂建立小鼠胸主动脉夹层模型,给予Notch信号通路抑制剂N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基]-S-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）。3周龄雄性C57BL/6J小鼠38只,按随机数表完全随机分为三组：对照组（8只）,BAPN组（15只）,BAPN+DAPT组（15只）。BAPN饲喂3周后统计胸主动脉夹层的形成和破裂;EVG染色评估弹力纤维紊乱;免疫组织化学染色检测衰老标志物P16的表达。分离小鼠主动脉平滑肌细胞,给予DAPT处理,荧光定量PCR(q PCR)检测P16以及衰老分泌表型相关基因白细胞介素6(IL6)和趋化因子配体2(CCL2)的m RNA表达变化;利用RNA干扰技术敲低Notch1表达,检测P16的mRNA表达变化。结果BAPN饲喂3周后,BAPN+DAPT组与BAPN组相比增加了小鼠胸主动脉夹层的形成和严重程度,促进夹层破裂导致的小鼠死亡,加剧了小鼠胸主动脉弹力纤维的断裂降解;进一步BAPN+DAPT组主动脉中层P16阳性细胞的数量增加。qPCR结果显示,DAPT...     

激活瞬时受体电位香草醛亚家族1改善平滑肌源性泡沫细胞形成机制研究

目的探讨瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)在血管平滑肌细胞(VSMC)泡沫化过程中的作用及可能的机制。方法将野生型C57BL/6J雄性小鼠来源主动脉VSMC不加任何试剂刺激作为对照组,另将野生型C57BL/6J雄性小鼠和Toll样受体(TLR4)基因敲除(TLR4-/-)雄性小鼠来源主动脉VSMC使用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)80μg/ml刺激72h,建立oxLDL细胞模型,依次作为oxLDL组、辣椒素组(造模前预先用辣椒素50μmol/ml刺激VSMC 12h)和TLR4-/-组,每组5例。采用油红O染色观察VSMC内脂质聚积情况;检测VSMC内胆固醇、TRPV1、TLR4蛋白及炎性因子白细胞介素6(IL-6)和TNF-α表达。结果与对照组比较,oxLDL组VSMC泡沫化程度、胆固醇水平明显升高,TLR4及其介导的IL-6[(44.03±3.76)ng/L vs (25.64±4.84)ng/L]、TNF-α表达[(155.64±13.32)ng/L vs (89.86±9.18)ng/L]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而TLR4-/-组和辣椒素组VSMC泡沫化程度、胆固醇水平、TLR4及其介导的IL-6、TNF-α表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与oxLDL组比较,辣椒素组VSMC中TRPV1蛋白表达明显上调,同时伴随VSMC泡沫化程度、胆固醇水平、TLR4及其介导的IL-6、TNF-α表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活TRPV1可通过干扰TLR4介导的炎性反应抑制VSMC泡沫化。     

微小RNA-206促进神经细胞凋亡参与阿尔茨海默病的机制研究

目的探究微小RNA-206(miR-206)通过调节脑源性神经营养因子(BDNF)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,促进神经元凋亡参与阿尔茨海默病(AD)的机制。方法将大鼠海马神经细胞分为对照组、AD组、miR-206抑制剂组(抑制剂组)、抑制剂+siBDNF组和siBDNF组(n=3),除对照组外,其他4组建立AD模型,抑制剂组和抑制剂+siBDNF组通过转染miR-206抑制剂质粒以抑制miR-206,抑制剂+siBDNF组和siBDNF组转染BDNF质粒沉默BDNF。在转染48 h后,检测miR-206、BDNF mRNA和蛋白表达水平。结果 AD组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5及Ser404/tau-5水平明显高于对照组和抑制剂组,BDNF mRNA和蛋白表达、细胞活力、磷酸化PI3K/PI3K及磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于对照组和抑制剂组(P0.05)。siBDNF组细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K、磷酸化Akt/Akt表达明显低于AD组,miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5、Ser404/tau-5蛋白表达明显高于AD组(P0.05)。抑制剂+siBDNF组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5和Ser404/tau-5蛋白水平明显高于抑制剂组[(1.79±0.18)vs(1.20±0.14),(14.37±1.72)%vs(6.84±0.48)%,(1.40±0.15)vs(0.89±0.09),(2.45±0.26)vs(1.12±0.12),P0.05],细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K和磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于抑制剂组(P0.05)。结论下调miR-206表达,会通过促进BNDF的水平激活PI3K/Akt通路,并提高AD模型细胞活力,抑制凋亡,这可能是治疗AD的新思路。     

白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察白藜芦醇 (resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响 ,并探讨其机制。方法　体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Res组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;HE染色 ,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡。结果　与对照组比较 ,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少 ,3H TdR掺入率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性。结论　Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用 ,可能是通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡等途径发挥作用     

内质网应激通路相关蛋白ATF4及CHOP在主动脉夹层中的表达以及意义

目的探讨主动脉夹层(AD)患者环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP和活性转录因子4(ATF4)的表达及其意义。方法选取2017年3月至2018年4月于武汉大学人民医院确诊为StanfordⅠ型夹层并行胸主动脉夹层全弓置换患者为AD组(n=13),另选取5例于武汉大学人民医院接受心脏移植的患者作为Donor组(此5例患者均无大血管疾病,其在心脏移植术中取下的主动脉血管可作为相对正常主动脉血管组织)。通过Masson染色、间苯二酚染色研究两组患者主动脉血管结构变化,通过TUNEL染色明确主动脉夹层发病后平滑肌细胞凋亡情况;通过RT-PCR及Western-blot分别在mRNA水平及蛋白水平检测ATF4及CHOP的变化情况。在动物实验方面,20只SD大鼠随机分为两组:Control组(n=10)及AD组(n=10)。Control组给予大鼠维持饲料,AD组给予含0.3%的β-异氨基丙腈酯(BAPN)的大鼠维持饲料进行主动脉夹层动物模型构建。动物模型构建成功后,取两组大鼠主动脉组织做石蜡包埋,标本切片后处理步骤及检测指标同人体标本。结果在人体标本中,Masson染色及间苯二酚染色发现,AD组患者主动脉血管标本胶原沉积较Donor组明显增多,弹力纤维断裂程度也更加严重;TUNEL凋亡染色发现,AD组患者主动脉血管组织较Donor组正常血管组织细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义(P0.01);RT-PCR及Western-blot实验发现,AD组患者主动脉血管ATF4、CHOP的表达在RNA水平及蛋白水平均较Donor组正常主动脉血管明显增高,差异均有统计学意义(P0.05)。在动物实验中,Masson染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组胶原沉积明显增多;间苯二酚染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组弹力纤维断裂程度明显加重,Control组基本无弹力纤维断裂;TUNEL凋亡染色发现,AD组大鼠主动脉血管较Control组细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR及Western-blot实验亦发现,AD组大鼠主动脉血管ATF4、CHOP的表达在RNA水平及蛋白水平均较Control组明显增高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 CHOP和ATF4与内质网应激关系密切,CHOP及ATF4在人主动脉夹层标本及主动脉夹层动物模型标本中均显著升高,说明在主动脉夹层中内质网应激水平较高,这或许是主动脉血管平滑肌细胞发生凋亡的重要原因之一,进而在一定程度上参与主动脉夹层的发生发展。     

Convection and permeation and albumin between plasma and interstitium.

Nonequilibrium thermodynamics is combined with compartmental analysis to interpret albumin sieving and tracer experiments in terms of a permeability-surface product PS (permeation) and a solvent drag reflection coefficient σ_f (convection) for various blood-tissue barriers. The human whole-body albumin data of Lassen, Parving, and Rossing (Lassen, Parving, and Rossing, Microvasc. Res.7, i–iv (1974)), modified for nonliver tissues by Johnson and Levitt (Johnson &; Levitt, Microvasc. Res.9, 141 (1975)) lead to P ～ 1.8 × 10^?8 cm sec^?1 (based on a surface area per unit plasma volume of 700 cm^?1) and to σ_f ～ 0.9, which imply, in agreement with Johnson and Levitt, that permeation is the dominant nonliver blood-tissue transport mechanism for albumin in the normal resting human. Similar values are derived from the dog paw muscle data of Garlick and Renkin (Garlick and Renkin, Amer. J. Physiol.219, 1595–1605 (1970)). The Casley-Smith (Casley-Smith, Microvasc. Res.9, 43–48 (1975)) mechanism of uphill albumin transport is verified as possible. It is tentatively inferred that lymph formation in resting tissue does not result from a small difference between a large fluid (volumetric) filtration and an almost equally large fluid reabsorption, either in the same capillary (Starling) or between different capillaries (Zweifach) (Zweifach, Circ. Res.34, 858–866 (1974)). Rather, reabsorption is negligibly small relative to filtration, and lymph flow is comparable to volumetric filtration.     

ERCP and MRCP--when and why

Since the introduction of endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) in the 1970s, gastroenterologists have a wide spectrum of diagnostic and therapeutic options in the biliopancreatic ductal system at their disposal. With its arrival in the 1990s, magnetic resonance cholangiopancreatography (MRCP) developed as a potent diagnostic tool in biliopancreatic pathology. Currently, MRCP is widely replacing diagnostic ERCP and thereby avoiding complications related to endoscopic technique.We summarize evidence-based data and demonstrate indications and differential indications for MRCP and ERCP in pancreatic disease. Complications related to the procedures and possible medical prevention are discussed. The feasibility of interventional endoscopy in pancreatic disease is reported in detail. The role of gastroenterologists in performing MRCP is outlined on the basis of practical examples.