近红外量子点连接的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段荧光探针对口腔鳞状细胞癌的活体可视化成像

目的 探索用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽段连接的近红外量子点荧光探针对口腔鳞状细胞癌（OSCC）的原位可视化成像情况。方法 将含有RGD序列的肽段与发射波长为800 nm的近红外量子点（QD800）偶联,制备QD800-RGD荧光探针。将人颊鳞状细胞癌BcaCD885细胞植入裸鼠颊部皮下建立OSCC模型。用QD800-RGD探针和CD105单克隆抗体对OSCC冰冻切片行直接免疫荧光双重染色,用激光扫描共聚焦显微镜观察QD800-RGD探针与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。将QD800-RGD探针通过尾静脉注射入OSCC模型动物,在不同时间点通过活体成像观察QD800-RGD对OSCC活体原位可视化动态成像情况。在12 h后处死荷瘤鼠取出肿瘤,检测QD800-RGD在体内与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。结果 QD800-RGD探针在体内和体外均能与OSCC肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3特异性靶向结合。静脉注射QD800-RGD探针后能对体内OSCC进行清楚地可视化成像,在注射QD800-RGD后0.5~6 h内肿瘤成像最完整,信噪比最高,9 h时肿瘤荧光强度显著减低,但在12 h时仍能看到明显的肿瘤成像。结论 以肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3为靶点,利用QD800-RGD探针经静脉注射后能对OSCC进行清晰地可视化成像,在OSCC的诊断和个体化治疗等方面有巨大的发展前景。     

肽段连接的近红外荧光量子点对人颊鳞癌BcaCD885细胞侵袭和转移能力的影响

目的 研究肽段连接的近红外荧光量子点(QDs)对人颊鳞癌BcaCD885细胞的生长、侵袭、黏附和趋化运动能力的影响.方法:1)用表面连接穿膜肽段最大发射波长为800nm的近红外荧光量子点(QD800)标记BcaCD885细胞(BcaCD885/QD800),用流式细胞仪检测QD800对BeaCD885细胞的标记率,用激...     

近红外荧光量子点对颊癌可视化活体成像研究

目的 观察用最大发射波长为800 nm近红外荧光量子点(quantum dots,QD800)标记的昆明小鼠鳞状细胞癌U14细胞在体内颊部的可视化成像情况,为癌症的早期诊断、可视化观察和个体化治疗提供依据.方法 用具有穿膜作用肽段连接的QD800通过内吞标记U14细胞(U14-QD800),将含有不同细胞数的U14-QD800分别注射于裸鼠和昆明小鼠颊部黏膜下,在不同时间行活体成像,观察用QD800标记对U14细胞非侵入体内检测的敏感性和动态成像情况.结果 活体成像对裸鼠和昆明小鼠颊部可视化检测到的最少U 14-QD800细胞数分别为1×104和1×105个.1×104、1×105和1×106个U14-QD800细胞在裸鼠颊部能可视化成像持续的时间分别为3、7和16 d,1×105和1×106个U14-QD800细胞在昆明小鼠颊部能可视化成像持续的时间分别为3和10 d.结论 由于近红外荧光量子点对组织具有强的穿透力,在癌症的早期诊断、可视化观察和个体化治疗方面具有较大的发展前景.

Abstract：

Objective To examine the in vivo visual imaging of buccal carcinoma with the nearinfrared fluorescent quantum dots. Methods The U14 cells were labeled by endocytosis with QD800 (U14/QD800) which was linked with cell-penetrating peptide. Different number of U14/QD800 was injected under the buccal mucosa of nude mice and Kunming mice separately and imaged at different time to detect the in vivo sensitivity and dynamic imaging of U14/QD800. Results The minimum number of U14/QD800 cells which could be detected by in vivo imaging system was 1 × 104 in nude mice's cheek and 1 × 105 in Kunming mice's. The time for visual imaging of 1 × 104, 1 × 105 and 1 × 106 U14/QD800 cells in nude mice was 3, 7 and 16 d separately, and 3 and 10 d separately in Kunming mice. Conclusions Due to its strong tissue penetration, near-infrared fluorescent quantum dots have great prospects in cancer early diagnosis, visual observation and individual treatment.     

量子点荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠模型早期下颌下淋巴结转移的研究

目的 利用量子点标记的特异性细胞角蛋白抗体QDs605-CK（AE1/AE3）免疫荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠早期下颌下淋巴结转移率及微转移率,并与传统的免疫组织化学（IHC）染色及苏木精-伊红（HE）染色方法进行比较,为舌鳞状细胞癌的早期诊断与治疗提供一种新的检测方法。方法 传代培养人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞,接种于18只裸鼠舌体内（不过中线）,建立人舌癌荷瘤裸鼠下颌下淋巴结转移模型。接种6周后,处死裸鼠,解剖下颌下淋巴结,将同一淋巴结分为两份。一份作石蜡包埋半连续切片,行HE染色和IHC检测;另一份即刻液氮冷冻,制作冰冻切片行QDs605-CK（AE1/AE3）荧光探针检测。分别计算3种方法检测出的淋巴结转移率和微转移率。结果 量子点标记的免疫荧光染色检测出裸鼠下颌下淋巴结转移率为66.7%,其中微转移率为38.9%;IHC染色检测的淋巴结转移率为61.1%,其中微转移率为33.3%;HE染色检测的淋巴结转移率为27.8%。经统计学分析,3种方法的差异有统计学意义（χ2=6.379,P<0.05）,量子点标记的免疫荧光染色和IHC检测都优于HE染色,但是量子点标记的免疫荧光染色和IHC染色间的差异无统计学意义（χ2=0.120,P>0.05）。结论 量子点标记的QDs605-CK（AE1/AE3）免疫荧光探针能准确定位于下颌下淋巴结转移的肿瘤细胞的细胞质内,发出红色荧光,其特异性强,分辨率高,背景清晰,能够用于淋巴结转移灶及微转移灶的检测。     

中文文摘

1．量子点荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠模型早期下颌下淋巴结转移的研究 传代培养人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞，接种于18只裸鼠舌体内（不过中线），建立人舌癌荷瘤裸鼠下颌下淋巴结转移模型。接种6周后，处死裸鼠，解剖下颌下淋巴结，将同一淋巴结分为两份。一份作石蜡包埋半连续切片，行 HE染色和 IHC 检测；另一份即刻液氮冷冻，制作冰冻切片行QDs605-CK（AE1／AE3）荧光探针检测。分别计算3种方法检测出的淋巴结转移率和微转移率。结果：量子点标记的免疫荧光染色检测出裸鼠下颌下淋巴结转移率为66．7％，其中微转移率为38．9％；IHC 染色检测的淋巴结转移率为61．1％，其中微转移率为33．3％；HE 染色检测的淋巴结转移率为27．8％。经统计学分析，3种方法的差异有统计学意义（P ＜0．05），量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 检测都优于 HE 染色，但是量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 染色间的差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论：量子点标记的QDs605-CK（AE1／AE3）免疫荧光探针能准确定位于下颌下淋巴结转移的肿瘤细胞的细胞质内，发出红色荧光，其特异性强，分辨率高，背景清晰，能够用于淋巴结转移灶及微转移灶的检测。     

奥沙利铂对口腔鳞状细胞癌的时辰治疗

目的 比较奥沙利铂（L-OHP）在昼夜4个不同时间治疗口腔鳞状细胞癌的疗效和不良反应的差异,并分析其昼夜生物节律特征。方法 将75只裸鼠置于12 h光照/12 h黑暗交替的环境中,将人颊鳞状细胞癌BcaCD885细胞注入裸鼠颊部建立口腔颊鳞状细胞癌模型,3周成瘤后随机分为5组（4个实验组,1个对照组）每组15只。4个实验组分别在24 h内的4个不同时间点,即灯亮后4、10、16、22 h（4 HALO、10 HALO、16 HALO、22 HALO）分别静脉注射L-OHP（17 mg·kg-1）,对照组静脉注射相同体积的生理盐水。给药后观察比较各组的疗效（抑瘤率和生存时间）、不良反应（体重、白细胞计数和肛周肿胀）情况,并用余弦分析法检验疗效和不良反应是否具有昼夜节律性。结果 在4、16和22 HALO时间注射L-OHP均获得较好的抑瘤率,但只有在16和22 HALO两个时间给药显著延长了荷瘤鼠的生存时间;在16和22 HALO时间给药,荷瘤鼠的不良反应显著小于4和10 HALO给药;余弦分析表明不同给药时间对小鼠的生存时间、体重和白细胞计数的改变具有明显的昼夜节律变化特征,其中14.88 HALO注射L-OHP荷瘤鼠的生存时间最长。结论 用L-OHP对口腔鳞状细胞癌患者化疗应考虑时间因素,以增效减毒、提高患者生存率和生存质量。     

Tca8113和BcaCD885对口腔癌靶向隐形顺铂聚乳酸纳米粒的敏感性研究

目的：观察口腔鳞癌细胞系（Tca8113和BcaCD885）对口腔癌靶向顺铂聚乳酸聚乙二醇纳米粒（CDDP—PLA—PEG—NP，或称隐形聚乳酸纳米）的敏感性，并与顺铂（CDDP）对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性进行对比观察。方法：用四唑盐显色法（MTr法）检测CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP在1～8d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性，计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果：CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用，其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论：经改型后的CDDP—PLA—PEG—NP对口腔鳞癌细胞Tca8113和BcaCD885仍有强大的杀伤作用，为以后进一步的体内实验提供了依据。     

OK-432对人口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885药物敏感性研究

目的    探讨OK-432对人口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885的药物敏感性。方法    采用四基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同剂量OK-432在5个时间点（1、2、3、4、5 d）对Tca8113和BcaCD885的生长抑制作用,计算不同时间点OK-432的半数抑癌率（IC50）和生长抑制率,选择药物作用后第4天观察量效关系。结果    OK-432 能明显抑制Tca8113和BcaCD885细胞的增殖生长,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,其抑制效应随药物浓度升高而增高。结论    OK-432能显著抑制Tca8113和BcaCD885增殖,对Tca8113的敏感性比BcaCD885强。     

口腔鳞状细胞癌中COX-2、VEGF和EGFR的表达及意义

目的 研究环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子受体（EGFR）在口腔鳞状细胞癌中的表达及相互关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测28例口腔鳞状细胞癌组织、15例正常口腔粘膜组织中COX-2、VEGF、EGFR蛋白的表达情况。结果 口腔鳞状细胞癌组织中COX-2的高表达率为60．71％，与正常口腔粘膜的表达比较有统计学意义，但与患者的性剐，年龄，肿瘤的部位及病理学分级无关（P〉0．05）。在口腔鳞状细胞癌中VEGF的阳性表达率为53．57％。EGFR高染表达率为67．86％，均与COX-2表达成正相关趋势（P〈0．05）。结论 COX-2蛋白可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展中起作用。并且与VEGF、EGFR的表达成正相关趋势，VEGF、EGFR可能是COX-2在口腔鳞状细胞癌发生发展作用机制中的环节。     

颈外动脉灌注化疗治疗中晚期头颈部鳞状细胞癌的近期疗效观察

目的探讨颈外动脉灌注化疗治疗中晚期头颈部鳞状细胞癌的疗效及影响疗效的因素。方法本组67例患者,全部经病理学检查证实为头颈部鳞状细胞癌患者。采用Seldinger技术,选择性地将导管插入颈外动脉的肿瘤供应支,经导管分次灌注化疗药物。结果67例患者近期临床疗效总有效率（CR＋PR）为73.1%,其中多次治疗疗效（79.4%）优于单次治疗（66.7%）,多血管型肿瘤的疗效（76.7%）优于少血管型肿瘤（66.7%）。结论中晚期头颈部鳞状细胞癌患者,采用颈外动脉灌注化疗疗效显著,全身副作用小,可以作为中晚期头颈部癌瘤综合治疗的一种重要治疗手段。治疗中要注意肿瘤的血供类型及强调肿瘤的治疗次数。     

平阳霉素-活性炭纳米微粒对口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885细胞体外的杀伤作用

目的探讨平阳霉素-活性炭纳米微粒（PYM-CH-NP）对人舌鳞癌细胞系Tca8113和颊鳞癌细胞系Bca-CD885的药物敏感性。方法采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测不同剂量的PYM-CH-NP和平阳霉素（PYM）在7个时间点（1～7 d）对Tca8113和BcaCD885的杀伤效应,计算各时间点2种剂型的半数抑癌率浓度值（IC50）、抑癌率和药物抗肿瘤作用强度的相对值（RAA）,选择药物作用后第5天观察量效关系。结果PYM-CH-NP和PYM对Tca8113和BcaCD885均有较强的抑癌作用,其抗癌效应与药物浓度和作用时间相关。结论改型后的PYM-CH-NP保留了PYM的抗癌活性,且具有缓释性,作用于肿瘤时可以维持周围有效的浓度和作用时间,有效地杀伤肿瘤细胞。     

不同 HNSCC 细胞系对全反式维甲酸的反应性差异

目的：研究全反式维甲酸（All—transRetinoicAcid,ATRA）在头颈部肿瘤和癌前病变临床实验中抗肿瘤效果的个体差异。方法：采用常规剂量和高浓度两种剂量的ATRA处理4种头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞系,观察不同细胞系的生长情况,探索个体差异的机制。结果：4种HNSCC细胞系中JHU-028表现出一定的药物抵抗作用,Ca127、JHU一022和Fadu细胞系对维甲酸有一定敏感性,在常规剂量下的生长抑制率分别为22．6％、28．5％和17．4％。结论：在某些HNSCC中ATRA可以抑制细胞生长,但有的细胞系表现出维甲酸抵抗。不同部位来源的HNSCC细胞系对ATRA细胞生长抑制程度存在反应性差异,为未来个体化治疗HNSCC提供理论依据。     

头颈部鳞状细胞癌干细胞的研究进展

肿瘤干细胞假说认为,只有一小部分细胞可维持肿瘤的生长,这一小部分细胞被称为“肿瘤干细胞”,其他的大部分细胞只有有限的或根本没有生长潜能。在头颈部鳞状细胞癌在内的多种肿瘤中已经初步鉴定和分离出了肿瘤干细胞。本文就CD44阳性细胞、醛脱氢酶阳性细胞、侧群细胞和八聚体4／nanog／CD133阳性细胞等与头颈部鳞状细胞癌干细胞相关的研究现状作一综述。     

Melanoma-associated antigen A11 reduces erlotinib and afatinib efficacy in head and neck cancer

Melanoma-associated antigen A (MAGE-A) proteins are members of the cancer/testis antigens (CTA), and the expression of these proteins is almost exclusively limited to malignant cells, making them an attractive treatment target. MAGE-A expression is correlated with poor overall survival in several cancers, including head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Among others, MAGE-A11 was found to be associated with resistance to different antineoplastic and targeted compounds, such as epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors (TKIs). We searched The Cancer Genome Atlas (TCGA) database with a focus on MAGE-A and found that MAGE-A overexpression is a common event in HNSCC (27.5%). Furthermore, MAGE-A overexpression was correlated with significantly reduced overall survival (35.45 months vs. 64.78 months, P = 0.0173). In particular, MAGE-A11 overexpression was found in 9% of specimens. We then examined MAGE-A11 expression, the efficacy of EGFR and the EGFR mutational status and the effects of the pan-HER (human EGFR) TKIs erlotinib and afatinib in HNSCC cell lines. Next, we used a model of stable MAGE-A11 overexpression to demonstrate that MAGE-A11 impaired the efficacy of erlotinib and afatinib. In summary, our study provides evidence that MAGE-A11 contributes to erlotinib and afatinib resistance in head and neck cancer cell lines.     

The epidemiology and risk factors of head and neck cancer: a focus on human papillomavirus

Head and neck cancer was the eighth leading cause of cancer death worldwide in 2000. Although the incidence of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) in the United States is relatively low, survival is poor and has not improved for several decades. While tobacco and alcohol are the primary risk factors for HNSCC development, epidemiological studies report a strong association with human papillomavirus (HPV) in a subset of HNSCC. More than 95% of cervical squamous cell carcinomas are linked to persistent HPV infection; evidence demonstrates that HPV is a necessary carcinogen. Not all HPV-positive HNSCC express the viral oncogenes (E6 and E7), which suggests that HPV may function as a carcinogen in a smaller proportion of HNSCC. This review presents our current understanding of the relationship between HPV and HNSCC, and describes future research directions that may lead to a better understanding of the involvement of HPV in head and neck cancer.     

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的:探讨人口腔鳞癌细胞系(Tca8113和BcaCD885)对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒(CuBE- PLA-NP)的敏感性。方法:用四唑盐显色法(MTT法)检测用不同剂量的CuBE-PLA-NP和CuBE在1~8 d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性,计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果:CuBE-PLA-NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论:经改型后的淋巴靶向CuBE-PLA-NP没有降低CuBE成份的抗癌活性,同时,由于CuBE-PLA-NP具有淋巴靶向性,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。