地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用

目的 试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法 给SD大鼠腹腔注射地非三唑，采用Trizol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1, 2及4 d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平。结果 地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加，空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040, 诱导1, 2及4 d的吸光度比值分别为0.343±0.055, 0.417±0.045及0.603±0.083；空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189, 而诱导1，2及4 d的吸光度比值分别为1.510±0.226, 3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加，细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加，诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论 地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。     

细胞色素P450 CYP4A的组织和细胞表达特异性

目的确定细胞色素P450 CYP4A在组织和细胞水平表达是否具有特异性。方法采用Western印迹法分析细胞色素P450 CYP4A蛋白在培养的牛肺动脉内皮细胞、平滑肌细胞及牛肾动脉内皮细胞的表达;采用原位杂交法检测细胞色素P450 CYP4A mRNA在大鼠肺支气管内皮和血管内皮细胞的表达;以14C标记的花生四烯酸(AA)作为反应底物,用荧光高效液相色谱法(HPLC)通过检测牛肺动脉内皮细胞催化外源性AA生成20-羟基廿碳四烯酸(20-HETE)的反应,确定肺动脉内皮细胞是否存在细胞色素P450 CYP4A;将肺动脉内皮细胞破碎并用乙酸乙酯萃取,用荧光物质标记萃取物,用荧光HPLC检测内源性20-HETE,从代谢产物水平确定细胞色素P450 CYP4A的功能蛋白质表达。结果①Western印迹法分析结果表明,细胞色素P450 CYP4A蛋白在牛肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞中均有表达,在肺动脉内皮细胞中的表达明显高于平滑肌细胞(积分吸光度值分别为10182±279,5249±167);在牛肾动脉内皮细胞中也有表达,但明显低于肺动脉内皮细胞的表达(积分吸光度值分别为12173±171,17863±207)。②原位杂交结果显示,细胞色素P450 CYP4A mRNA可在大鼠肺支气管内皮细胞和大鼠肺血管内皮均有表达。③用HPLC在牛肺动脉内皮细胞中检测到20-HETE,表明细胞色素P450 CYP4A在肺动脉内皮细胞存在。结论细胞色素P450 CYP4A有其特定的组织和细胞分布,在牛和大鼠肺脏动脉内皮细胞有高表达。     

重组人胸腺肽α1对大鼠肝组织细胞色素P450基因表达的影响

目的评价重组人胸腺肽α₁（rh-Tα₁）对大鼠肝组织细胞色素P450（CYP450）基因表达的影响。方法SD大鼠经腹腔注射不同剂量的rh-Tα₁（150、300和600μg/kg）,14 d后从肝组织中提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CYP3A1、CYP1A2和CYP2E1 mRNA的表达。结果与空白对照组相比,rh-Tα₁可显著诱导CYP3A1、CYP 1A2和CYP 2E1的基因表达。结论rh-Tα₁通过诱导CYP450酶系的mRNA表达影响其活性。     

丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏CYP450酶的影响

目的 研究丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏细胞色素P450主要亚型mRNA及蛋白表达水平的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、丁香酸组、柠檬苦素组和苯巴比妥组,连续灌胃给药2周,末次给药后处死,提取小鼠肝脏总RNA及肝微粒体,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术和蛋白质免疫印迹(Western blot)测定CYP450酶主要亚型mRNA和蛋白表达水平.结果 在mRNA水平上,丁香酸对Cyp1a2、Cyp2c37、Cyp2d9 mRNA表达没有明显作用,柠檬苦素对Cyp1a2 mRNA的表达有显著诱导作用;在蛋白水平上,丁香酸对CYP1A1、CYP1A2、CYP3A、CYP2D和CYP2E1蛋白的表达有明显的诱导作用,柠檬苦素对CYP1A1、CYP1A2、CYP2A、CYP2D和CYP2E1有显著的诱导,对CYP2B和CYP2C蛋白表达产生抑制作用.结论 丁香酸和柠檬苦素对细胞色素P450主要亚型均具有不同程度的诱导和抑制作用.     

注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用(英文)

目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用。②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg·kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg·kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1A2和CYP3A的诱导作用。③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂。结果①CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12μmol·L-1vs 840μmol·L-1;CYP2C9:3.362μmol·L-1vs 704μmol·L-1;CYP2C19:3.236μmol·L-1vs 306μmol·L-1;CYP2D6:0.117μmol·L-1vs 2660μmol·L-1;CYP3A4:0.078μmol·L-1vs 1780μmol·L-1)。②与空白对照组(86.4±6.3)nmol·g-1.min-1相比,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP1A2活性分别为83.4±6.6,82.5±4.0和(83.4±6.6)nmol·g-1.min-1。与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1.min-1比较,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9±1.0)nmol·g-1.min-1,无显著性差异。③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g.L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75μmol·g-1.min-1),无显著性差异。结论SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物。     

淫羊藿苷对不同月龄大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的 揭示淫羊藿苷(Ica)对大鼠肝微粒体细胞色素P450的含量及部分亚型的影响,并比较月龄的差异.方法 ig给予6月龄和18月龄的♂SD大鼠Ica( 60 mg· kg -1),4周后取肝脏,用钙沉淀法提取肝微粒体,BCA法测定微粒体蛋白浓度;用一氧化碳还原差示光谱法测定CYP450的含量;用ELISA法测定CYP1 A1、CYPb5的含量;用比色法测定苯胺羟化酶(反映CYP2E1活性)和红霉素-N-脱甲基酶(反映CYP3A活性)的活性;用real - time RT - PCR检测CYP1 A1、CYP2A3、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2和CYP4B1 mRNA的表达.结果 60 mg· kg-1 Ica明显增加了CYP450的总酶和CYP1 A1的含量、CYP3A的活性及CYP1 A1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA的表达,降低了CYP2E1的活性及其mRNA的表达;但Ica对上述各指标的诱导或抑制作用在大鼠月龄方面差异不明显;Ica对CYPb5的含量及CYP2A3、CYP4B1 mRNA的表达未见明显影响.结论 Ica对大鼠肝微粒体CYP450总酶、CYPI A1和CYP3A具有诱导作用,对CYP2E1具有抑制作用,该作用未见明显月龄差异.     

慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A_2和CYP2E_1的影响

目的:观察慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A2和CYP2E1的影响。方法:♂SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组分别低氧3、7、14、28d。采用酶法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,分光光度法测定大鼠肝微粒体红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝脏细胞色素P4503A2、2E1的mRNA表达水平。结果:慢性间断性低氧对血清ALT和AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肘脏ERD和ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155.5%和42.2%;同时CYP3A2和CYP2E1mRNA的表达水平也分别增加了220.5%和102.8%。结论:慢性间断性低氧能显著增加大鼠肝脏ERD(CYP4503A2)和ANH(CYP2E1)活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP4503A2和CYP2E1的基因表达水平有关。     

心血管药物速效救心丸和通心络胶囊对大鼠细胞色素P450酶的影响

目的:观察速效救心丸和通心络胶囊对大鼠药物代谢酶细胞色素P450(CYP450)的影响。方法:给予大鼠试验药物后制备肝及小肠微粒体,CO还原差示光谱法测定肝微粒体CYP450含量,蛋白免疫印迹法检测肝微粒体中CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A和肠微粒体中CYP3A蛋白的表达量。结果:速效救心丸组和通心络胶囊组与空白对照组比较,大鼠肝脏CYP450含量无显著变化(P>0.05);但是West-ern blotting实验对肝脏和肠道中多种CYP450酶表达量测定的结果显示,速效救心丸可诱导肝脏CYP1A2表达,但抑制肝脏CYP2C11和肠道CYP3A表达(P<0.05);通心络胶囊可诱导大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1蛋白表达(P<0.05)。结论:速效救心丸和通心络胶囊对大鼠肝脏CYP450酶总量无影响,但是,在蛋白质水平对特定亚型蛋白的表达量有影响,由此可能引发的药物相互作用不容忽视。     

五味子乙素对CYP450药物代谢酶诱导作用的体外研究

目的 研究五味子乙素对细胞色素P450(CYP450)酶活性和mRNA表达是否有诱导作用.方法 采用底物法测定人肝原代细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的活性,荧光定量PCR检测mRNA的表达.结果 五味子乙素对CYP1A2和CYP3A4的酶活性均低于阳性对照的40%,高浓度的五味子乙素对CYP2B6的酶活性均高于阳性对照的40%;五味子乙素对CYP1A2的mRNA表达小于阴性对照的4倍,高浓度的五味子乙素对CYP2B6和CYP3A4的mRNA表达大于阴性对照的4倍.结论 五味子乙素对CYP1A2和CYP3A4的酶活性没有诱导作用,对CYP2B6的酶活性有潜在诱导作用;五味子乙素对CYP1A2的mRNA表达没有诱导作用,对CYP2B6和CYP3A4的mRNA表达有潜在诱导作用.     

地塞米松对大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450的诱导效应

目的:观察地塞米松(dexamethasone,DEX)对细胞色素P-450(cytochrome P450,CYP450)的诱导效应,并探讨其诱导机制.方法:雄性Wistar大鼠分别以DEX 0,25,50和100mg·kg-1·d-1诱导处理(ip)4d后,测定大鼠肝脏总CYP450含量,CYP3A1,CYP3A2和CYP2B 1/2的mRNA及蛋白的表达水平,肝脏ERD(CYP3A活性),PROD(CYP2B活性)和BROD(总CYP450活性).结果:CYP450含量、ERD、PROD和BROD活性在DEX多次诱导后都有升高.CYP3A1 mRNA表达水平、蛋白含量和酶活性有明显的升高,剂量效应关系明显;CYP3A2蛋白明显升高,但mRNA表达水平却无明显变化.PROD和CYP2B1/2的mRNA表达水平以及总CYP450含量均在50mg·kg-1·d-1剂量组达到最高值.结论:DEX对雄性大鼠主要诱导CYP3A1和CYP3A2两个CYP450成员表达上调,对CYP2B1/2也有一定的诱导作用,其诱导作用主要表现在酶活性、酶蛋白含量和mRNA表达水平的升高.CYP3A1和CYP3A2的诱导方式可能不同.     

中国汉族人群中CYP3AP1基因型与CYP3A活性的相关性研究

目的:研究中国汉族人群中CYP3AP1基因型的分布特征及其与CYP3A活性的相关性.方法:以口服7.5mg咪哒唑仑后1小时血浆中1′-羟化咪哒唑仑与咪哒唑仑的比值作为CYP3A活性的衡量指标,测定191名中国汉族健康受试者的CYP3A活性,并利用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对已知CYR3A活性受试者的DNA进行CYP3AP1基因分型.结果:CYP3AP1不同基因型个体的CYR3A活性存在显著差异(P<0.05).A_(-44)等位基因纯合子个体的CYP3A活性低于A_(-44)G杂合子,而G_(44)等位基因纯合子个体的CYP3A活性最高.结论:CYP3AP1基因型与体内CYP3A活性的增加存在相关性.     

酒精性肝损伤大鼠细胞色素P450 CYP2E1和细胞色素P450 CYP3A的代谢活性

目的观察酒精性肝损伤对大鼠细胞色素P450CYP3A(CYP3A)和细胞色素P450CYP2E1(CYP2E1)代谢活性的影响。方法采用ig给予白酒制备大鼠酒精性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,采用HE染色法光镜下观测酒精对肝脏损伤程度。大鼠ip给予CYP3A探针药物咪达唑仑10mg·kg-1或ig给予CYP2E1探针药物氯唑沙宗50mg·kg-1后,采用高效液相色谱法测定不同时间点大鼠血浆中咪达唑仑和氯唑沙宗的血药浓度,并应用3P87软件计算其药代动力学参数,以考察CYP2E1和CYP3A的代谢活性的变化。大鼠ig给予氯唑沙宗80mg·kg-1后,热板方法测定大鼠添足次数和添足反射潜伏期。结果酒精性肝损伤可致大鼠肝小叶结构不清,肝索排列紊乱,肝细胞体积增大,呈弥漫性中度水变性,肝窦受压,大部分肝细胞胞浆内见大小不等的脂肪空泡;与正常对照组相比,酒精性肝损伤组大鼠GPT和GOT活性分别增加了16.0%和20.0%(P<0.05,P<0.01)。酒精性肝损伤致大鼠CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了38.0%,30.5%和35.0%(P<0.05);酒精肝损伤组大鼠氯唑沙宗镇痛效果明显降低;酒精性肝损伤致大鼠CYP3A对探针药物咪达唑仑的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了122.6%,54.9%和56.9%(P<0.01,P<0.05)。结论酒精性肝损伤可使大鼠CYP2E1和CYP3A代谢活性增强。     

细胞色素P450的工具药选择及种属差异的研究进展

药物对代谢酶的影响以及代谢产生的药物相互作用与药物安全性密切相关。细胞色素P450(CYP)是参与内、外源性化合物I相代谢反应的重要超家族酶系。特异性探针、诱导剂、抑制剂以及实验动物模型广泛应用于CYP介导的代谢途径以及药物相互作用研究。已知CYP底物存在明显重叠性,且表达调控机制种属差异显著,故研究中选择适当的实验动物以及特异性的探针、诱导剂和抑制剂,成为影响数据外推的关键问题。本文简要综述了CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4/5的常用体内外探针、诱导剂、抑制剂以及动物种属表达调控的差异。     

体外研究人细胞色素P450在雌二醇代谢中的作用(英文)

目的:研究雌二醇在cDNA表达的P450和人肝微粒体中的代谢机制,为在体内研究细胞色素P450活性与肿瘤发生的关系提供依据。方法:用HPLC-ECD法测定雌二醇的代谢产物。通过雌二醇在不同cDNA表达的P450中代谢,13例人肝微粒体中相关性研究,抑制剂对代谢的影响以及微粒体中17β-羟基脱氢化和2-羟基化代谢的催化动力学的研究来推断雌二醇的代谢机理。结果:在cDNA表达的P450中,催化2-羟基化代谢的P450按活性排列依次为CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9。CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8均具有较高的催化17β-羟基脱氢化活性。抑制CYP1A2与抑制CYP3A4对2-羟基化代谢产物生成的影响相似,可认为CYP1A2和CYP3A4在人肝微粒体中催化2-羟基化代谢的作用相近。雌二醇代谢的途径与底物浓度有关,低浓度时(1,10μmol/L)17β-羟基脱氢化为主要代谢途径;高浓度时(100μmol/L),2-羟基化成为主要代谢途径。结论:高底物浓度时,雌二醇主要由CYP1A2和CYP3A4催化代谢为2-羟基化产物。低底物浓度时,主要由CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8催化生成17β-羟基去氢化产物。     

中国人肝微粒体中细胞色素P450酶含量和活性的个体间差异(英文)

目的:比较不同中国人肝微粒体中几种重要细胞色素P450(CYP)的酶含量和活性。方法:运用West-ern斑点分析和光密度扫描,对17个汉族、17个壮族和8个苗族受试者肝微粒体中的细胞色素P4501A2(CYP1A2)、2C9及3A4进行定量;非那西丁、甲磺丁脲、异喹胍和奥美拉唑分别用于体外测量CYP1A2、2C9、2D6及3A4的活性。结果:CYP1A2、2C9及3A4的含量和活性具有很大的个体间变异,另外CYP2D6的活性在各样本间也有很大差异;CYP3A4(32％)是中国人肝微粒体中含量最丰富的CYP,CYP2C9(19％)和CYP1A2(16％)的含量也很可观;除了CYP1A2的含量和活性具有一定的种族和性别差异外,未发现其它CYP具有种族和性别差异;CYP1A2、2C9和3A4的酶蛋白含量分别和它们的活性具有很好的相关性。结论:我们的结果为在中国人中进行药物代谢研究提供了非常有价值的信息。     

芳基烃受体及其转录调控的细胞色素P4501A在环境污染物所致毒性中的作用

芳基烃受体属于碱性螺旋-环-螺旋蛋白超家族的转录因子。环境污染物激活芳基烃受体,上调cyp1a的表达,诱导自身的Ⅰ相代谢,增加代谢中间体的生成,代谢中间体与生物大分子结合,造成机体损伤。环境污染物同时可激活芳基烃受体并改变一系列与细胞增殖、细胞周期进程和凋亡相关基因的表达,导致机体损伤并诱发肿瘤。     

心肌缺血再灌注损伤对大鼠肝细胞色素P450酶代谢的影响

目的探讨心肌缺血再灌注状态下,大鼠肝代谢功能和相关的氧化/抗氧化能力变化。方法雄性SD大鼠随机分为5组,除假手术组外,制备在体心肌缺血再灌注模型,并于缺血40min、再灌注15,60和180min分别处死大鼠,检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;以红霉素N-脱甲基酶、五氧基异噁唑O-脱乙基酶和苯胺羟化酶法为探针测定肝细胞色素P450(CYP)3A,CYP2B1和CYP2E1催化功能;RT-PCR法检测肝Ⅰ相药物代谢酶CYP3A1,CYP2B1/2,CYP2E1,以及Ⅱ相解毒酶NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)及其上游因子NF-E2相关因子(Nrf2)mRNA水平。结果再灌注60 min,肝匀浆MDA含量升高(P<0.05),SOD活力下降(P<0.01);再灌注180 min时,血浆ALT和AST活性升高(P<0.05)。Nrf2基因于再灌注60 min时显著激活(P<0.05),下游因子NQO1 mRNA于再灌注180 min时明显上调(P<0.05)。CYP3A催化功能和mRNA水平分别于再灌注60和180 min开始明显降低(P<0.05);CYP2B1/2 mRNA和催化功能水平分别于再灌注15和180 min开始明显降低(P<0.05);CYP2E1催化功能无明显改变。结论大鼠心肌缺血再灌注可引起肝组织氧化应激及并导致功能损伤。在再灌注早期,具有抗氧化功能的NQO1在转录水平显著上调,其机制可能与上游因子Nrf2被激活相关;CYP3A和CYP2B催化功能在转录和(或)转录后水平明显下调。