五种天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖效应比较

目的：对五种天然药物姜黄素（curcumine,Cur）、榄香烯（elemene,Ele）、三氧化二砷（arsenite trioxide,As2O3）、雷公藤内酯醇（triptolide,Tfi）、莪术（rhizoma curcumae,Rc）抑制重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（lens epithelial cell,LEC）增殖效应进行比较。方法：将rhbFGF诱导体外培养的LEC发生增殖,并用Cur、Ele、As2O3、Tri、Rc分别与其共同孵育后,用MTT法检测LEC的活性：用流式细胞术（flow cytometer,FCM）检测LEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达。结果：增殖组LEC活性、PCNA蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）;Cur组、Ele组、As2O3组、％组、Rc组的LEC活性、PCNA蛋白表达均比增殖组显著降低（P〈0．01）。其中Cur、Ele的作用最强,As2O3的作用次之,Tri作用较弱,Rc作用最弱（P〈0．01）。Cur和Ele的作用相近（P〉0．05）。结论：五种天然药物Cur、Ele、As2O3、Tri、Rc均可抑制LEC增殖。Cur和Ele的作用最佳,有希望成为防治后发性白内障的有效药物。     

五种天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖效应比较

目的：对五种天然药物姜黄素（curcumine,Cur）、榄香烯（elemene,Ele）、三氧化二砷（arsenitetrioxide,As203）、雷公藤内酯醇（triptolide,Tri）、莪术（rhizomacureumae,Re）抑制重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（1ensepithelial cell,LEC）增殖效应进行比较。方法：将rhbFGF诱导体外培养的LEC发生增殖,并用Cur、Ele、As20,、Td、Rc分别与其共同孵育后,用MTT法检测LEC的活性;用流式细胞术（flow cytometer,FCM）检测LEC增殖细胞核抗原（prolif-erating cell nuclear antigen,PcNA）表达。结果：增殖组LEC活性、PCNA蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）;Cur组、Ele组、As,O,组、Tri组、Rc组的LEC活性、PCNA蛋白表达均比增殖组显著降低（P〈0．01）。其中Cur、Ele的作用最强,A鄢O,的作用次之,畅作用较弱,Rc作用最弱（P〈0．01）。Cur和Ele的作用相近（P〉0．05）。结论：五种天然药物Cur、Ele、As,Q、％、Rc均可抑制LEC增殖。Cur和Ele的作用最佳,有希望成为防治后发性白内障的有效药物。     

榄香烯抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的：研究榄香烯（elenene，Ele）抑制重组人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）诱导的晶状体上皮细胞（lens epithelium cell，LEC）增殖时对细胞内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）的影响，探讨其抑制增殖的细胞信号转导机制。方法：采用rhEGF诱导LEC增殖后，用荧光分光光度法检测LEC内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨Ele的影响。结果：（1）Ele组LEC内[Ca^2＋]i；比增殖组显著增高（P〈0．01）；（2）增殖组LEC内cAMP浓度比对照组明显下降、cGMP浓度比对照组明显升高（P〈0．01）；（3）Ele组LEC内cAMP浓度比增殖组显著升高、cGMP浓度比增殖组显著降低（P〈0．01）。结论：Ele抑制LEC增殖的作用是通过细胞内[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及多条信号转导途径的相互作用实现的，这可能是Ele抑制LEC增殖、防治后发性白内障的细胞和分子生物学机制。     

榄香烯抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和PCNA基因表达的研究

目的研究榄香烯(elemene)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖和抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的抑制作用,同时观察时间—效应关系,并求出半数致死浓度(IC50);免疫组化法检测IC50浓度榄香烯作用0、24和48h的U251细胞中PCNA蛋白表达差异;RT-PCR检测不同浓度或不同作用时间的榄香烯抑制PCNA基因的表达。结果榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062g·L-1。榄香烯对U251细胞内PCNA蛋白表达有明显的抑制作用;RT-PCR分别证实榄香烯抑制PCNA基因的表达,其PCNA基因mRNA表达值随药物浓度增加或作用时间延长增加而不断下降,呈剂量和作用时间的依赖性。结论榄香烯能有效下调PCNA基因表达,从而抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,对抗人脑胶质瘤具有广阔的前景。     

苦参碱对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察苦参碱（Matrine，Mat）对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法：采用体外培养技术，通过细胞形态、MTT实验、细胞周期测定观察Mat对U937细胞及HUVECs增殖的影响。结果：Mat（0．2～0．5mg／mL）作用24h后对U937细胞均有增殖抑制作用（P〈0．05或P〈0．01），在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性，其作用U937细胞48h的半数抑制浓度（IC50）约为0．4mg／mL，有效作用时间为1d；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用24、48、72h后对HUVECs增殖无明显抑制作用，亦无剂量和时间依赖性（P〉0．05）；Mat（0．2～0．5mg／mL）作用U937细胞48h后，S期细胞比例增加，细胞发生S期阻滞（P〈0．05或P〈0．01）；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用HUVECs 48h后，对细胞周期无明显影响（P〉0．05）。结论：一定浓度Mat对U937细胞具有增殖抑制作用，呈时间-剂量依赖关系。Mat在一定浓度和时间下不能抑制HUVECs增殖，对其细胞周期亦无明显影响。     

阿糖胞苷对白血病飚62细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨阿糖胞苷对诱导入白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测不同剂量的阿糖胞苷作用于K562细胞24h、48h、72h增殖影响,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。结果各浓度阿糖胞苷对K562细胞的生长具有明显抑制作用。在同一浓度下,抑制增殖作用随阿糖胞苷作用时间的延长而增强,呈现出剂量和时间效应关系。阿糖胞苷作用于K562细胞后,G0／G-期细胞所占比例随着阿糖胞苷作用时间的延长而增加,S期与G2／M期细胞所占比例则呈时间依赖性下降。阿糖胞苷作用于K562细胞后,凋亡的K562细胞所占比例随着药物浓度和作用时间的增加而增加,呈现对阿糖胞苷的时间．浓度依赖性。结论阿糖胞苷对人自血病细胞株K562细胞的增殖有明显的抑制作用,并可以时间和浓度依赖方式促进K562细胞的凋亡。     

银杏叶提取物对AGEs诱导的大鼠HSC增殖的抑制作用

目的：探讨不同浓度晚期糖基化终产物（AGEs）对体外培养的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖的影响,并观察不同浓度银杏叶提取物（EGb）对其增殖有无抑制作用。方法体外合成AGEs,MTT法观察不同浓度的AGEs对HSC增殖的影响及不同浓度EGb对AGEs促HSC增殖的抑制作用。结果当培养液中AGEs浓度≥50mg/L时,12～48h内检测发现HSC较正常对照组增殖明显并呈时间及剂量依赖性（P＜0.05）,而6h内及低浓度AGEs组未观察到其对HSC增殖有明显影响。EGb在培养48h时对AGEs刺激的HSC的增殖有显著抑制作用（P＜0.05）,且呈明显的剂量依赖性。结论 AGEs可以促进HSC增殖,呈时间、剂量依赖性;在作用时间充分的前提下,EGb可抑制AGEs诱导的HSC增殖,呈剂量依赖性。     

银杏叶提取物对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的研究银杏叶提取物（EGB）对SW480结肠癌细胞生长增殖的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞后,给予不同浓度（100,200,300,400,500 mg·L^-1）银杏叶提取物干预后,采用CCK-8检测人结肠癌SW480细胞的增殖抑制率,选择最佳作用浓度;随后,在此作用浓度下观察EGB作用不同时间对人结肠癌SW480细胞增殖抑制率的影响,并通过Western blot检测人结肠癌SW480细胞内Ki67和PCNA的表达情况。结果银杏叶提取物可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,且随着作用浓度增加和作用时间的延长其抑制作用逐渐增强;300 mg·L^-1银杏叶提取物对结肠癌SW480细胞增殖的抑制效果最明显。银杏叶提取物干预的结肠癌SW480细胞内Ki67和PCNA的表达均明显下调。结论银杏叶提取物可呈浓度和时间依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的增殖。     

金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌 K1细胞三叶因子3表达变化的影响

目的：探讨金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌K1细胞增殖抑制作用及三叶因子3（TFF3）表达变化。方法不同浓度金莲花总黄酮作用于体外培养K1细胞24、48、72 h,MTT检测细胞生长抑制率,Western blotting 和Real-time PCR检测不同浓度总黄酮对K1细胞TFF3蛋白及mRNA表达的影响。结果 MTT实验结果表明,同一时间总黄酮对K1细胞生长增殖抑制率随着药物浓度的增高而升高（ P ＜0?．05）,同一浓度总黄酮对K1细胞抑制率随时间延长而升高（ P ＜0．05）。 Western blot及QPCR结果显示随着金莲花总黄酮浓度的升高K1细胞TFF3蛋白及mRNA水平下降（ P ＜0．05）。结论金莲花总黄酮对人甲状腺乳头癌细胞具有抑制作用,并能抑制TFF3的表达。     

骨肉瘤常用化疗药物作用的分子机制及用药方法选择

目的 研究常用骨肉瘤化疗药物作用的分子机制,对临床用药方式提供指导.方法 将骨肉瘤细胞混悬液与不同浓度吡柔比星、顺铂、卡铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺分别作用24、48、72 h后,用倒置显微镜观察细胞生长情况.用MTT法测定每一孔的吸光度值OD,制作生长曲线,并求出药物的IC50.用IC50浓度的药物分别作用于骨肉瘤细胞24、48和72 h后用流式细胞仪进行细胞周期分析,了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性.免疫印迹技术观察细胞的PCNA、Bcl-2、Bax、cyclin D1、cyclin E的表达.结果 在倒置显微镜下观察不同药物浓度作用于的骨肉瘤细胞,比较细胞死亡数量于时间关系.MTT实验:不同时间组及不同浓度组与对照组相比,对MG-63细胞的生长抑制作用差异均具有显著性(P＜0.05),呈现不同剂量-时间效应关系.细胞周期分析:在细胞各期可见明显凋亡峰,细胞周期各期所占比例无明显变化,抑制作用呈剂量依赖性.蛋白免疫印迹:PCNA在不同药物组骨肉瘤表达与对照组相比明显不同,不同药物组Bax表达与对照组明显增加,Bcl-2表达减少.cyclin D1、cyclin E的表达明显减少.结论 吡柔比星对MG-63细胞的抑制率和时间关系密切,和浓度有一定的关系.同样剂量吡柔比星5d的效果比3d好.卡铂具有与顺铂类似的效应,但卡铂如果替代顺铂在化疗中的作用,卡铂的量必须是顺铂的25倍以上.甲氨蝶呤作用于骨肉瘤细胞MG-63后,随着药物浓度的增加和时间的延长,作用逐渐增强,尤其是用量和效果有明显关系.异环磷酰胺在体外对骨肉瘤细胞无明显抑制作用.     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的：研究车前子对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将H2O2与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果：H2O2组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i的升高（P〈0.01）,呈时间-效应关系。H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖

目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(Ch ina cobra venomactive factor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pu lmona-lis vascu lar endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth musc le cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24 h IC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72 h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133 mg.L-1,24 h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg.L-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10 mg.L-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24 h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24 h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810 mg.L-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。     

NF-κβp65反义寡核苷酸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究．

目的：研究NF-κβp65反义寡核苷酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用。方法人工合成NF-κβp65A-SODN,通过脂质体转染法转染人胃癌细胞系SGC-7901,在转染后不同时间不同浓度,采用MTT法测定NF-κβp65 ASODN对胃癌细胞增殖的影响;光镜观察药物作用后细胞凋亡的形态学变化;通过免疫细胞化学技术检测NF-κβp65蛋白的表达。结果（1）MTT法检测显示：不同浓度的NF-κβp65 ASODN均可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性;（2）HE染色显示：NF-κβp65 ASODN处理SGC-7901细胞48h后,光镜下可见细胞缩小变圆,呈凋亡改变。（3）免疫细胞化学结果显示：NF-κβp65 ASODN处理SGC-7901细胞48h后,NF-κβp65蛋白的表达水平较对照组显著下降（P＜0.05）。结论 NF-κβp65 ASODN在体外可以较明显的抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导SGC-7901细胞凋亡。     

塞来昔布对膀胱癌细胞T24 增殖的影响

目的观察塞来昔布对人膀胱癌细胞T24增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法不同浓度塞来昔布（25、50、100和200μmoL·L^-1）分别作用于人膀胱癌细胞T24不同时间（24h、48h和72h）,MTT检测T24细胞增殖抑制率,半定量RT-PCR和Western-blot检测T24细胞中COX-2表达的变化。结果塞来昔布对膀胱癌T24细胞抑制作用存在剂量、时间依赖性,200μmoL·L^-1塞来昔布作用72h时抑制率达75.7±1.9%,明显高于其它各组（P〈0.05或0.01）;半定量RT-PCR和Western-blot方法显示塞来昔布可显著降低T24细胞中COX-2mRNA和蛋白水平（P〈0.05）,且呈时间依赖性。结论塞来昔布可通过减少COX-2的表达抑制人膀胱癌细胞T24的增殖,并呈时间和剂量依赖性。     

丙戊酸钠对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖及HPA、PCNA表达的影响

目的探讨丙戊酸钠(VPA)对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖抑制作用及对乙酰肝素酶(HPA)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响及机制。方法肝癌细胞株SMMC-7721分对照组和实验组。对照组细胞常规培养,实验组细胞施加VPA干预,设浓度梯度和时间梯度。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性;RT-PCR半定量法测定细胞HPA及PCNA mRNA表达的变化;Western-blot法测定细胞HPA及PCNA蛋白含量。结果 VPA对SMMC-7721细胞的生长具有明显的增殖抑制作用,且表现为时间依赖性和浓度依赖性(P<0.05);当药物浓度增加至≥2.0mmol/L时,其HPA和PCNA mRNA及蛋白的表达量较对照组明显下调,且呈时间依赖性(P<0.05)。结论 VPA对肝癌SMMC-7721细胞有明显的增殖抑制作用,且能够在核酸和蛋白水平上下调HPA及PCNA的表达,从而抑制肿瘤的增殖、侵袭和转移。     

溶血卵磷脂对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的观测溶血卵磷脂(LPC)对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响,从而探讨动脉硬化发生的机制。方法取体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在含不同浓度LPC(5、10、20mg/L)的培养基中分别培养6、12、24、48h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪、荧光显微镜观测血管内皮细胞增殖及凋亡的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系,但随着LPC浓度增加,细胞凋亡增加的同时细胞死亡比例也增加。结论LPC抑制血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,可能是其致动脉粥样硬化机制之一。     

L-精氨酸对人肾系膜细胞增生及胞外基质产生的影响

目的:研究L-精氨酸(L-arg)对人肾系膜细胞增生和胞外基质成分胶原产生的影响。方法:采用MTT法、细胞免疫化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达以及流式细胞仪等方法观察L-arg对系膜细胞增殖的影响;L-arg对系膜细胞胞外基质产生的影响分别采用放免法、羟化脯氨酸比色法以及RT-PCR等方法测定前胶原Ⅲ、总胶原以及胶原Ⅳ mRNA的表达。结果:L-arg呈剂量和时间依赖性抑制人系膜细胞增殖;细胞免疫化学法显示L-arg导致细胞总数下降,但PCNA阳性比例相对增高,用流式细胞仪进一步证实L-arg治疗组细胞主要处于细胞周期的S及G_2-M期。另外,L-arg显著抑制培养的系膜细胞上清液中总胶原和前胶原Ⅲ合成(分别为P<0.05和P<0.01)以及细胞对胶原Ⅳ mRNA的表达(P<0.01)。结论:L-arg可抑制人肾系膜细胞增生和胞外基质成分产生,此提示L-arg对慢性肾脏纤维化可能有潜在的治疗价值。