老化红细胞膜表面抗原的研究

红细胞的老化是一个复杂的问题,对其老化机制争论较多,最近有人提出老化红细胞表面可结合自身IgG,然后被巨噬细胞及网织内皮细胞识别而清除,但缺乏直接的证据。本文用过氧化物酶标记Protein A与年轻及老化红细胞保温,老化红细胞结合的IgG是年轻者的两倍多。用FITC标记IgG抗体在流式细胞荧光检测仪测定,结果与酶标者一样。如用神经氨酸酶处理年轻红细胞,可提高酶标记及荧光标记的量,再用β-半乳糖苷酶水解,其标记量下降。实验结果说明老化红细胞表面确有IgG结合,其结合与半乳糖基有关。     

用蛋白质A-琼脂糖珠亲和层析提纯免疫球蛋白

提纯免疫球蛋白的方法很多。使用蛋白A-琼脂糖珠(Protein A-Sepharose)可直接从血清中分离纯化IgG,是一种快速简便的方法。 蛋白质A是从葡萄球菌细胞膜中分离出来的。它具有能与马、狗、猪、兔、山羊、绵羊和牛的IgG分子的Fc部分结合的特性,当与交联基质(Sepharose CL-4B)偶联后,可用作亲和层析,直接从抗血清中提取IgG。具体方法如下:     

抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体的大量制备及纯化

背景：极低密度脂蛋白受体被认为是一种“瑞士军刀”样多功能受体,对该受体的研究很广泛,但其商品化抗体种类较少,价格偏贵。 目的：获得研究可用的抗极低密度脂蛋白受体的单克隆抗体。 方法：为了获得抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体,选用可分泌针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体的杂交瘤细胞IgG 6A6。通过将杂交瘤细胞IgG 6A6注入Balb/c小鼠腹腔内,2周后收集腹水,分别通过盐析法(正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法)初步纯化和亲和层析进一步纯化目的蛋白,获得针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其相对分子质量和纯度,酶联免疫吸附实验检测其活性。 结果与结论：未纯化腹水Western Blotting结果显示条带较多,背景不干净;而经正辛酸-饱和硫酸铵法初步纯化的腹水、经Protein A进一步纯化得到的抗体均可特异识别极低密度脂蛋白受体。提示经盐析法和Protein A Agarose纯化可获得较纯和有活性的单克隆抗     

链球菌G蛋白的特性及应用前景

链球菌G蛋白（Streptococcal Protein G,SPG）是一种能与抗体IgG的Fc片段结合的蛋白质。它可与人IgG4种亚类.以及许多哺乳动物的单克隆、多克隆IgG有较强的结合力,具有与SPA显著不同的特性和更强的IgG亲和力,更广的结合谱,在免疫学上具有广泛的应用价值。本文对SPG的特性及应用前景进行简述。     

用含A蛋白的葡萄球菌提取人血清IgG的初步探讨

自从1966年Forsgren阐明葡萄球菌A蛋白(SPA)能与人IgG分子的Fc段结合之后,开拓了其在免疫学中应用的新途径。1972年Hjelm采用IgG-Sepharose亲和层析柱分离SPA以及用SPA-Sepharose层析柱提纯IgG,由此简化了IgG的提纯方法。加之Sjholm证明和SPA结合的IgG可     

小鼠血清免疫球蛋白G、M和单克隆抗体的分离提纯

结合几种生化技术从C_(57)BL/6J小鼠分离得纯度好的IgG和IgM。由单克隆抗体经亲和层析柱和A蛋白—琼脂糖也分离得产量高、纯度好的小鼠IgG_1和IgM。用分离的IgG免疫得兔抗小鼠IgG血清可用为淋巴细胞杂交瘤技术中的试剂。     

用PPA试纸检测青菜叶片内的有关病毒

<正> 作者曾报道用酶标试纸检测青菜叶片内的RMV,并指出:如果制备了抗抗体的酶标试纸,在一定条件下,则可检测任一抗原。进一步结合过氧化物酶交联金黄色葡萄球菌A蛋白(Peroxidase-Protein A,PPA)的应用,有可能得到更好的结果。金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)具有与多数哺乳动物血清IgG Fc段共价结合的性质,因此,可以用SPA代替抗IgG抗体(即抗抗     

对类风湿因子具有高反应活性的热聚IgG的制备

目的 :优化热聚IgG的制备条件 ,提高对RF的检测灵敏度。方法 :利用高效液相凝胶色谱和酶联免疫吸附技术研究加热条件对热聚IgG分子量分布及其对类风湿因子结合能力的影响。结果 :将IgG溶液 (10mg/ml)在 6 2℃热聚 30min ,其优势聚合度为 11左右 ,此时它对类风湿因子的结合能力最强。结论 :应用高效液相凝胶色谱与ELISA技术 ,对热聚IgG体系进行分离测定和活性分析 ,缩短了测定时间 ,提高了结果的灵敏度和准确性。     

豚鼠过敏抗体的分离纯化及在PCA试验中作用规律的初步研究

目的 建立豚鼠Ⅰ型过敏反应模型,对致敏血清中过敏抗体(IgE、IgG)进行初步分离纯化,并探讨过敏抗体的作用特点.方法 以卵白蛋白(OVA)和Al(OH)_3作为免疫原制备豚鼠Ⅰ型过敏反应模型,ELISA法检测抗体含量,用饱和硫酸铵沉淀、Protein A柱亲和层析的方法 对致敏血清中IgE、IgG抗体进行初步分离纯化,以豚鼠连续被动皮肤过敏试验分别观察两种抗体在致敏后不同时间激发时引起皮肤蓝斑的变化情况.结果 模型组和对照组血清中IgE抗体含量分别为719.3750ng/ml、2.5250 ng/ml,IgG抗体吸光度(A)值分别为0.9921、0.0174,模型组两种抗体含量均比对照组显著升高(P<0.05).豚鼠9 d连续被动皮肤过敏试验中,IgE抗体在5 d PCA时产生的蓝斑直径达到最大,之后持续存在;IgG抗体在2 d PCA时产生蓝斑直径最大,之后迅速下降.结论 成功将致敏血清中两种过敏抗体进行了初步分离纯化,IgE和IgG抗体均参与了豚鼠Ⅰ型过敏反应,IgG抗体较IgE抗体可能作用更为迅速、短暂,有可能成为疫苗Ⅰ型过敏反应毒理学评价的另一主要指标.     

溶菌、煮沸、亲和层析(LBA)三步法提取SPA

SPA(Staphylococcal Protein A)是金黄色葡萄球菌胞壁上的一种主要成份,能与人及其他一些动物IgG的Fc结合,此特性被广泛应用于免疫学技术中。提取方法常用的有溶葡素法,煮沸法、溶菌酶法。前者产量稍高但试剂不易获得;后二法产量较低且需一定条件和设备。为此,我们建立了LBA三步法,与煮沸法和溶菌酶法比较,其产量可提高一倍且活性较高,用于ELISA试验已获满意结果,现报道如下。     

葡萄球菌甲蛋白(SPA)及其在免疫学中的应用

葡萄球菌细胞壁成分甲蛋白(Staphylococcal Protein A,SPA)具有能与人及多种哺乳动物血清中的IgG的Fc段非特异性结合的特点,引起免疫学家们的广泛兴趣,已在医学微生物学、免疫学、肿瘤学及细胞学等领域中应用,并已开始与放射免疫测定、免疫荧光及免疫电镜等技术相结合,进一步提高了SPA在免疫学上的价值。它具有特异性高、灵敏度强、操作简便、经济等优点。国内尚未见有关这方面的系统介绍及实验报     

吩嗪甲酸硫酯对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的人红细胞某些生化指标的影响

为探讨葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（C6PD）缺乏的人红细胞在在作用下的变化情况。通过测定在作用前后G6PD缺乏人红细胞变形能力，高铁血红蛋白生成，过氧化氢酶活力，还原型谷胱甘肽（GSH），还原型三磷酸吡啶核苷（NADPH）的浓度，并与正常红细胞比较。结果显示G6PD缺乏红细胞在氧自由基作用下变形能力，过氧化氢酶活力，GSH及NADPH水平与正常红细胞相比显著下降（P＜0．01），而高铁血红蛋白生成显著增加（P＜0．01），从而得出G6PD缺乏红细胞氧化易感性增强导致细胞损伤，变形能力下降是其易发溶血的主要原因的结论。     

人红细胞老化过程中花生凝集素和Con A受体电镜细胞化学研究

目的　观察人血液中 ,老化红细胞膜上花生凝集素 (PNA)和刀豆凝集素 (Con A)受体细胞化学反应的变化。　方法　应用金标花生凝集素 (PNAg)和刀豆凝集素 (Con Ag) ,对早期和老化红细胞膜上 PNA和 Con A受体进行电镜细胞化学显示 ,并用计算机图像分析系统对电镜照片进行定量处理。　结果　与早期红细胞相比 ,老化红细胞膜上 PNAg颗粒和 Con Ag颗粒均有明显增多。　结论　老化红细胞膜上唾液酸的丢失导致半乳糖基和甘露糖基暴露的相应增加 ,这种变化可能与巨噬细胞对老化红细胞的识别和吞噬机制有关     

RFC—SpA法在检测EHF病人血清中IgG抗体的研究

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal pr-otein A,SpA)具有与人及多种哺乳动物血清中IgG结合的能力,据此将IgG致敏SpA菌体可用于多种病原微生物的鉴定、疾     

红细胞酶测定法及中国人正常值 Ⅲ.谷胱甘肽还原酶

红细胞谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)为谷胱甘肽代谢中一个重要的酶,它催化以下反应: GSSG NADPH H~ (?)2GSH NADP~ GSH(还原型谷胱甘肽)参与红细胞的氧化还原反应,对于保护红细胞不受氧化性损害,维持红细胞膜的稳定性具有重要的作用。已有人报导,GR缺乏者出现药物性溶血,而且GR缺乏还同再生障碍性贫血、白细胞减少症、血小板减少症、急性白血病、I型血友     

老化红细胞变形能力与膜钙依赖中性蛋白酶活性的关系

研究表明,老化红细胞变形能力明显降低,且其降低与血红蛋白浓度增高及膜弹性降低有关［１］。红细胞膜钙依赖中性蛋白酶（Ｃａｌｐａｉｎ）和它的内源性抑制剂（Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ）形成红细胞中一个蛋白水解系统,参与红细胞中的信号传导,调节细胞形状、体积和细胞膜通透性,与高血压、细胞老化等生理、病理现象密切相关。Ｃａｌｐａｉｎ可限制性水解红细胞膜骨架蛋白和其它膜内蛋白,导致红细胞损伤［２,３］。而老化红细胞变形能力降低与Ｃａｌｐａｉｎ的关系尚不清楚,为此我们检测了４２例健康人老化及年轻红细胞变形能力、Ｃ…     

红细胞中的巯基化合物及其功能

红细胞的细胞膜和血红蛋白,以及游离的还原型谷胱甘肽中都含有巯基。红细胞中许多酶类如己糖激酶,甘油醛-3-磷酸脱氢酶,酸性磷酸酶等。其活性都受二硫化合物,氧化型谷胱甘肽(GSSG)的抑制,很可能GSSG和酶的巯基形成混合二硫化合物(酶-S-S-G)。说明这些酶活性中心含有     

红细胞老化过程中囊泡化作用的探讨

红细胞存活120天,在体内老化的过程中,不断产生囊泡,膜脂及膜蛋白随囊泡丢失,红细胞逐渐形成球形,易破溶而消亡。本文用密度梯度方法将年轻及老化红细胞分离,加Ca~(2+)及钙离子载体(A_(23187))诱导红细胞囊泡化,比较年轻及老化红细胞囊泡化后及释放出的囊泡膜蛋白的变化,观察囊泡化后红细胞的变形性、溶血度及被吞噬细胞吞噬的能力。实验结果发现在Ca~(2+)诱导下年轻红细胞比老化者更易囊泡化;释放的囊泡中主要含区带3蛋白及少量区带4.5及4.9,另外,区带7及Hb明显增多,囊泡化后的红细胞膜有聚集。囊泡化后的红细胞变形性明显降低,易溶血及被吞噬细胞吞噬的量明显增多。     

辣根过氧化物酶结合物的质量鉴定

辣根过氧化物酶(HRP)和抗HBs(山羊IgG)按戊二醛二步法、苯醌法和改良过碘酸盐法交联反应分别制成酶结合物,用琼脂扩散、二氨基联苯胺染色法对酶结合物定性,并测定其HRP浓度和活性、羊IgG浓度和抗HBs免疫活性,阐明标记率(A403nm/A280nm)的含义,通过ELISA检测表明标记率可作为评价酶结合物质量的指标,且其计算简便。     

母婴ABO合并Rh-ccdee/ccDEe血型不合HDN实验诊断与鉴别诊断的研究

目的：探讨母婴ABO合并Rh血型不合和Rh两座位3位点表型不合HDN实验诊断与鉴别诊断,为临床早期防治提供实验依据。方法：用吸收放散和直抗作为实验诊断,用A-c、B-c和O-c阴性红细胞鉴别诊断,O型Rh-ccdEe、O型Rh-CCDee及A型Rh-CCdee组合谱细胞鉴别两座位多位点表型不合Rh-HDN,盐水法鉴定抗体性质。结果：①母婴ABO/Rh血型：母婴1血型鉴定为 O-A及Rh-ccdee/ccDEe交叉不合、母婴2鉴定为A-A及Rh-ccdee/CcDEe两座位3位点表型不合;②抗体筛选：母婴1不规则抗体均为强阳性（4+）;母2为不规则抗体强阳性（4+）、婴儿2为阳性（+）。③抗体鉴定与鉴别诊断：母1为 IgG抗A合并IgG抗D,IgG抗E缺失,IgG抗A效价 256,IgG抗D效价128;母2为IgM抗E合并IgG抗D,IgM抗C缺失,IgG为抗D效价128,IgG抗E及抗C缺失。④鉴别诊断：婴儿1证实为IgG抗A合并IgG抗D-HDN;婴儿2 证实为Rh抗D-HDN,IgG抗E及抗C缺失。结论：用A-c、B-c、O-c阴性红细胞和Rh单特异性组合谱细胞,可以鉴别诊断ABO合并Rh HDN以及Rh单一性或混合性HDN。