溶血对荧光定量PCR检测不同含量HBV DNA的影响

目的 研究不同程度溶血IL对荧光定量PCR检测不同含量HBV DNA的影响.方法 利用荧光定量PCR方法研究溶血对其检测不同含量HBV DNA的影响,并利用SPSSI7.0对结果进行统计学分析.结果 极重度溶血组(12.0 g/LHb)分别与高、中、低3个拷贝程度(106～107 IU/mL、104～105 IU/mL...     

三种HBV DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果影响的比较

目的 研究3种核酸提取方法对黄疸、溶血和脂血标本HBV DNA荧光定量结果的影响,为进一步提高临床检验质最和改进检测技术提供理论依据.方法 采用目前临床常用的多聚糖病毒沉淀浓缩法(PEG法)、碱液直接裂解和微量核酸释放剂(Micro-Nucleic-Releaser,MNR)等3种核酸提取方法,对含有HBV的黄疸、溶血和脂血标本进行荧光定量PCR检测,研究不同标本对荧光PCR定量结果和扩增效率的影响.选择酚一氯仿提纯法作为核酸提取对照方法.结果 黄疸、溶血和脂血标本,对3种不同核酸提取方法的荧光PCR定量结果和扩增效率都产生不同程度的影响,其中完全溶血的标本对PCR扩增效率的影响最大,如定量值为4×103拷贝/ml的低拷贝完全溶血标本,MNR法测定结果为2.21×103拷贝/ml,PEG法为1.02×103拷贝/ml,碱性直接裂解法的定量值为阴性,临床自然溶血较重的标本对荧光定量检测影响较小,脂血和黄疸标本对荧光定量PCR扩增效率有明显抑制作用,但对实际定最值无明显影响;其中,MNR法在不同标本的定量重复性和荧光PCR扩增效率最好,碱液直接裂解法较差.酚.氯仿提纯法虽然获得较高的扩增效率,但存在大约有1个数量级的核酸丢失.结论 基于MNR核酸提取方法的荧光定量PCR检测,对不同的临床标本均可获得较好的扩增效率、敏感性和重复性,操作简便、快速且无核酸丢失和污染,适合临床检验应用.     

磁珠分离纯化技术在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用

目的 评价磁珠分离纯化技术(简称磁珠法)提取核酸的重复性、提取效率一致性、线性范围、灵敏度及抗干扰性,初步探讨其在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用价值.方法 采用磁珠法提取HBV DNA log值分别为4.16,5.23和7.04的质控血清进行重复性试验,HBV DNA阳性血清10倍梯度稀释的系列标本评价其提取效率一致性,HBV DNA强阳性血清作10倍系列稀释后检测其线性范围,HBV DNA标准血清与含干扰成分(溶血、黄疸和脂血)的HBV DNA 阴性血清,按4∶0,3∶1,2∶2,1∶3和0∶4比例分别混合成5个不同浓度标本用于干扰试验.以提取方法为沉淀煮沸法的PCR 荧光诊断试剂作对照,应用磁珠法及配套扩增试剂检测288份乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,并比较测定结果.结果 磁珠法批内和批间平均变异系数分别为3.66%和4.75%;HBV DNA含量不同的血清提取效率均在98%以上;在1.28×102IU/L～1.28×109IU/L之间有良好的线性关系;最低检出限为60.5 IU/L;不同浓度的黄疸和脂血对扩增曲线和实验结果无明显影响;血清中血红蛋白浓度至50 g/L时,HBV DNA结果相差约0.5～1.0个数量级.磁珠法和沉淀煮沸法的阳性率分别为88.19%和82.64%.当沉淀煮沸法检测结果log值处在2.699～4.000之间时,两法检测相应标本结果差异有统计学意义.结论 磁珠法高效、快速和易于自动化,应用于HBV DNA检测对乙型肝炎患者的临床诊断和疗效监测将有十分重要的意义.     

两种核酸提取方法对HBV DNA定量检测结果的影响

目的研究磁珠法和煮沸法两种核酸提取方法对血浆乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测结果的影响。方法采用磁珠法和煮沸法同步处理106例"小三阳"或"大三阳"乙型肝炎患者血浆,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)定量检测,比较两种方法的阳性率、定量检测结果并分析两者的关系。结果 106例乙型肝炎患者血浆经磁珠法和煮沸法处理后的HBV DNA阳性率分别为81.1%和71.7%,其中"小三阳"患者的HBV DNA阳性率分别为76.9%、66.7%,"大三阳"患者的阳性率分别为92.8%、85.7%;磁珠法中HBV DNA荧光定量PCR测得其载量为(3.93±2.43)log10copies/mL,而煮沸法为(3.35±2.76)log10copies/mL,且"小三阳"和"大三阳"患者标本经磁珠法提取均明显高于煮沸法提取的PCR检测结果;上述结果经统计学分析差异均有意义(P0.05);此外,两种核酸提取方法处理条件下的HBV DNA载量呈较好的线性关系(R2=0.869 3,P0.05)。结论磁珠法提取核酸阳性率高,检测灵敏度高,值得实验室推广,可用于临床诊断。     

慢性乙型肝炎患者外周血T、B淋巴细胞变化与其HBV-DNA的水平相关性探讨

目的 观察慢性乙肝病毒(HBV)感染者免疫功能的变化,探讨病毒复制程度与免疫功能的关系.方法 应用流式细胞仪检测91例慢性乙肝病毒感染者,31例正常对照外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞百分率;用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV感染者HBV-DNA病毒拷贝数,根据HBV感染者血清中HBV-DNA病毒拷贝数,将它们分为DNA阴性组(<103IU/ml)、低拷贝组(10-105IU/ml)、高拷贝组(>106IU/ml).结果 低拷贝组、高拷贝组的CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+比值比对照组明显减低;DNA阴性组、低拷贝组、高拷贝组的CD19+比对照组明显增高;低拷贝组、高拷贝组的CD3+cD4+、CD4+/CD8+比值比DNA阴性组明显减低.而CD3+CD8+、CD3+、CD19+在低、高拷贝组及DNA阴性组之间没有明显差异存在(P>0.05).结论 HBV感染可导致感染者免疫功能的改变,随着HBV-DNA复制增加,慢性HBV感染者淋巴细胞免疫功能紊乱加重.     

两种方法检测HBV基因分型比较及基因型检出率与HBV DNA定量的关系

目的分析磁珠法与煮沸法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的优势,进一步分析基因型检出率与HBV DNA定量的关系。方法选取2013年10月至2016年7月、2017年1月至2018年1月该院感染病科就诊的1 943例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。其中2013年10月至2016年7月采用提取HBV DNA,进一步采用荧光探针聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎基因分型。2017年1月至2018年1月采用Abbot m2000提取的HBV DNA(磁珠法),进一步采用荧光探针PCR检测乙型肝炎基因分型。比较两种检测方法的结果差异。根据基因分型结果分析基因分型的检出率与HBV DNA定量水平的关系。结果磁珠法提取的HBV基因型检出率显著提高(P0.05),但是磁珠法检测C型检出率降低,B、D型检出率更高(P0.05)。HBV基因型检出率随着HBV DNA水平的升高而升高(P0.05)。结论相对于煮沸法提取的HBV DNA,磁珠法更能够提高乙型肝炎基因分型阳性率,并且能够提高非C型以及低病毒载量的患者检出率,更值得应用于临床。     

浓缩裂解煮沸法在荧光定量PCR测定HBV DNA中的应用

目的探讨浓缩裂解液煮沸法提取乙型肝炎病毒（HBV）DNA对荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV DNA的影响。方法通过浓缩裂解液煮沸法和直接裂解液煮沸法同时提取血清HBV DNA,在不同浓度梯度比较FQ-PCR测定结果的差异。结果浓缩裂解液煮沸法所得HBV DNA量高于直接裂解液煮沸法,二者差异有统计学意义（P〈0．05）,比例约为（20-40）：1。结论浓缩裂解液煮沸法较直接裂解液煮沸法具有更高的灵敏度,在低浓度范围内与临床上的诊断较相符。     

慢性乙型肝炎患者HBVDNA含量与T淋巴细胞亚群变化的分析

目的：研究慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量与外周血T淋巴细胞亚群变化的关系,探讨慢性乙型肝炎患者体内病毒含量与细胞免疫功能的关系。方法采用流式细胞术检测63例慢性乙型肝炎患者和30例体检健康者的外周血T淋巴细胞亚群;应用荧光定量聚合酶链反应检测慢性乙型肝炎患者血清 HBV DNA的含量。结果慢性乙型肝炎患者 HBV DNA阴性组、HBV DNA阳性组与健康对照组比较,CD4＋和CD4＋/CD8＋与健康对照组比较逐渐降低（P＜0．01）。HBV DNA阳性组与 HBV DNA阴性组比较,CD4＋/CD8＋减少（P＜0．05）。HBV DNA低拷贝组、HBV DNA高拷贝组与健康对照组比较,CD4＋和CD4＋/CD8＋明显降低（P＜0．01）。 HBV DNA高拷贝组CD8＋高于健康对照组（P＜0．05）。 HBV DNA高拷贝组的CD4＋低于 HBV DNA低拷贝组（P＜0．05）,CD4＋/CD8＋比值明显降低（P＜0．01）。结论慢性乙型肝炎患者因乙型肝炎病毒感染可导致体内 T 淋巴细胞亚群的改变,HBV DNA高拷贝可加重患者细胞免疫功能的紊乱,使患者的免疫功能持续下降。     

基于高通量测序下低拷贝乙型肝炎病毒检测方法的应用分析

目的建立一种针对临床低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)的检测方法。方法选取2017年1-10月该院收治的乙型肝炎患者30例作为研究对象。采集患者血清样本进行HBV病毒基因组提取,通过HBV DNA定量检测试剂盒[聚合酶链反应(PCR)荧光探针法]对HBV DNA样本进行定量检测。选择HBV4×103 copy/mL的病毒DNA 6例,分别进行全基因组一步法建库及巢式PCR扩增法建库。采用Illumina Miseq平台对构建好的文库进行测序。通过生物信息学方法对所得数据进行分析。结果与HBV B型参考基因组比对,全基因组一步法建库匹配率很低,且数据产量低。巢式PCR扩增法建库匹配率达75.61%,且样本覆盖率及测序深度较好。6例低拷贝HBV样本共发现29个宿主内iSNV,且存在15个低频突变。结论巢式PCR扩增HBV全基因组建库进行高通量测序可用于低拷贝HBV的检测,且能发现低频突变。     

ABI-7000荧光定量PCR检测HBV-DNA影响因素的探讨

荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA具有适时,闭管,全自动,防污染的优点,我们就溶血、脂血标本,枸橼酸钠、肝素抗凝标本;用浓缩裂解法和直接裂解法两种核酸提取方法,对HBV—DNA含量(拷贝数),用ABI-7000PCR检测HBV—DNA结果影响做一些探讨。1材料与方法1.1标本阳性标本为一例临床已确诊乙肝且HBV—DNA含量为106拷贝/ml以上无高血脂病人;阴性标本为一例无乙肝病史且HBV—DNA阴性的健康体检者和一例无乙肝病史且HBV-DNA阴性的高血脂体检者。1.2试剂HBV—DNA荧光定量PCR试剂为上海申友生物技术公司产品。1.3仪器A…     

The characteristics of interpretation of results of analysis of protein amount in urine of pregnant women

The adequacy of implementation of present proteinuria diagnostic thresholds under examination of pregnant women was examined. The analysis was applied to all urine samples of pregnant women from December 2009 to March 20010. The amount of protein in urine was concurrently evaluated by turbidimetric analysis with sulfosalicylic acid, colorimetric analysis with pyrogallol red, "dry chemistry" technology (the diagnostic strips). It is established that the mentioned techniques of analysis of protein in urine provide independent results. The results of colorimetric analysis are characterized by better precision and adequacy. However, in case of pregnant women the diagnostic threshold of protein concentration should be shifted from 0.120 to 0.150 g/l.     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。     

《中国内镜杂志》主编雷光华教授简介

雷光华男,1970年12月生,骨科学博士,一级主任医师,二级教授,博士生/后导师。国家"万人计划"领军人才,教育部"长江学者"特聘教授,科技部"中青年科技创新领军人才",国家卫生计生突出贡献中青年专家,享受国务院政府特殊津贴专家,国家临床重点专科骨科和运动医学学科带头人,全国青年岗位能手,湖南省"芙蓉学者"特聘教授,湖南省科技领军人才和骨科学科领军人才,湖南省普通高校学科带头人,湖南省首届"优秀科技工作者",中南大学"湘雅名医"。     

超声诊断主动脉窦瘤

本文报告31例主动脉窦瘤患者,全部用二维超声(2DE)和多普勒超声检查。其中手术治疗24例,超声符合22例,符合率为92％。误诊2例,误诊率为8％。故超声实际诊断主动脉窦瘤29例中右冠窦瘤18例(62％),无冠窦瘤7例(24％),二叶瓣型主动脉窦瘤4例(14％)。窦瘤破入/膨入右室和右房内的例数分别为16例和13例。本病主要的合并症为主动脉瓣关闭不全和室缺。通过分析我们认为二维加多普勒超声是诊断主动脉窦瘤最有价值的无创技术。