细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞凋亡中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,为阐明血管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液(10-6mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hochest33258荧光染色观察凋亡细胞形态学的变化,利用RT-PCR法分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01),与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,18 h达到高峰(P<0.01),24 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论 ERK1/2信号转导途径参与血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

血管紧张素Ⅱ、血管紧张素(1-7)对NIT-1细胞胰岛素信号通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ、血管紧张素(1-7)对胰岛β细胞胰岛素信号通路的影响.方法 小鼠胰岛β细胞株NIT-1予(1)0、10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L浓度血管紧张素Ⅱ处理24h;(2)0、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L浓度血管紧张素(1-7)处理24h;(3)血管紧张素Ⅱ、血管紧张素(1-7)联合处理24h,分为对照、10-5 mol/L血管紧张素Ⅱ、10-6 mol/L血管紧张素(1-7)、10-5 mol/L血管紧张素Ⅱ+10-6 mol/L血管紧张素(1-7)组.Western印迹检测胰岛素受体β亚基酪氨酸磷酸化(IR-β-Tyr)及蛋白激酶β丝氨酸磷酸化(Akt-Ser)水平.结果 血管紧张素Ⅱ浓度10-5和10-4mol/L时,胰岛素刺激的IR-β-Tyr、Akt-Ser表达显著降低;不同浓度血管紧张素(1-7)作用下,胰岛素刺激的IR-β-Tyr、Akt-Ser表达与对照组相比无差异;加入血管紧张素(1-7)共同孵育可逆转血管紧张素Ⅱ对Akt-Ser表达的抑制,而血管紧张素Ⅱ对IR-β-Tyr表达的抑制无效应.结论 在β细胞中,血管紧张素Ⅱ抑制胰岛素信号传导,血管紧张素(1-7)可拮抗血管紧张素Ⅱ对胰岛素刺激的Akt-Ser的抑制.     

赛格列酮能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人内皮细胞表面粘附分子上调

目的研究赛格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1上调的影响。方法以不同浓度的赛格列酮(0.1μmol/L、1μmol/L1、0μmol/L和100μmol/L)预处理人脐静脉内皮细胞24 h,再与10-7mmol/L血管紧张素Ⅱ共孵育12 h。通过半定量逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1 mRNA和蛋白表达的情况。结果与血管紧张素Ⅱ组相比,0.1μmol/L和1μmol/L赛格列酮预处理24 h组对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1 mRNA上调无抑制作用(1.107±0.091比1.104±0.081和1.062±0.051,P>0.05),而10μmol/L和100μmol/L组则有明显的抑制作用(0.814±0.016和0.766±0.026,P<0.01和P<0.001);细胞间粘附分子1蛋白表达分别下调52.9%和55.5%(P<0.01和P<0.001)。而不同浓度的赛格列酮(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)使血管细胞粘附分子mRNA表达分别下调14.2%、19.5%、45.1%和60.7%(0.1μmol/L时P<0.01,余P<0.001);蛋白表达分别下调17.8%、33.8%、54.5%和58.9%(0.1μmol/L时P<0.01,余P<0.001)。结论赛格列酮抑制血管紧张素Ⅱ上调人脐静脉内皮细胞表达血管细胞粘附分子1,并呈浓度依赖效应;但对细胞间粘附分子1无论是mRNA还是蛋白水平,在低浓度(0.1μmol/L和1μmol/L)时无抑制作用,在较高浓度(10μmol/L和100μmol/L)可有较明显的抑制作用。     

血管紧张素(1-7)阻断细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路影响泡沫细胞内胆固醇含量

目的研究血管紧张素(1-7)对THP-1源性泡沫细胞中细胞外信号调节激酶1/2及核因子κB信号转导通路的影响,以进一步探讨血管紧张素(1-7)促进胆固醇逆转运的调节机制以及细胞外信号调节激酶1/2与核因子κB信号通路之间是否相互影响。方法采用体外培养的THP-1单核细胞构建泡沫细胞模型,用不同的干预方法处理细胞72 h,将细胞分为单核细胞(空白对照)组、泡沫细胞组、分别预先经10-6mol/L血管紧张素(1-7)、10μmol/L核因子κB特异性阻断剂、10μmol/L细胞外信号调节激酶1/2特异性阻断剂、10-6mol/L血管紧张素(1-7)+10μmol/L核因子κB特异性阻断剂、10-6mol/L血管紧张素(1-7)+10μmol/L细胞外信号调节激酶1/2特异性阻断剂干预的泡沫细胞组。油红O染色后显微镜下观察细胞形态;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化;免疫组化法检测细胞内核因子κB(p65)活性的表达;免疫印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达。结果血管紧张素(1-7)显著降低了泡沫细胞内胆固醇的含量,下调了磷酸化细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB(p65)活性的表达(P0.05),细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路被特异性阻断后泡沫细胞内胆固醇含量降低(P0.05);血管紧张素(1-7)联用细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路的特异性阻断剂后泡沫细胞内胆固醇含量显著降低(P0.01);核因子κB信号通路被阻断后核因子κB(p65)活性表达显著降低(P0.01),而磷酸化细胞外信号调节激酶1/2活性表达无明显降低(P0.05),细胞外信号调节激酶1/2信号通路被阻断后磷酸化细胞外信号调节激酶1/2和核因子κB(p65)活性表达均降低(P0.05)。结论血管紧张素(1-7)可能通过降低磷酸化细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB(p65)的活性,减少细胞内胆固醇的蓄积;细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB信号通路被特异性阻断后可减少泡沫细胞内胆固醇的含量;细胞外信号调节激酶可能是核因子κB(p65)信号通路的上游信号。     

血管紧张素Ⅱ上调血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ对培养鼠血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响及其可能的转导通路。方法组织贴块法培养血管平滑肌细胞,血管紧张素Ⅱ处理平滑肌细胞15min、30min、60min、180min,PD98059在血管紧张素Ⅱ刺激细胞前1h加到培养基中,用逆转录聚合酶链反应和Westernblotting检测分析富含半胱氨酸蛋白61的表达。结果逆转录聚合酶链反应分析显示用1μmol/L血管紧张素Ⅱ刺激细胞培养15min、30min富含半胱氨酸蛋白61的表达与对照组相比明显增加;同时细胞外信号调节激酶1/2活性高于对照组(P<0.01),60min时仍有表达,180min时减弱;细胞外信号调节激酶1/2特异性抑制剂PD98059(20μmol/L)能阻断血管紧张素Ⅱ上调富含半胱氨酸蛋白61的表达并抑制增加的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2活性。结论血管紧张素Ⅱ通过细胞外信号调节激酶1/2促进血管平滑肌细胞上调富含半胱氨酸蛋白61表达,这可能是血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的一个重要机制。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及可能的机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第4～8代细胞进行实验.用终浓度为1 μmol/L血管紧张素Ⅱ诱导6 h,随机分成对照组(含10% FBS的DMEM培养基)、1 μmol/L血管紧张素Ⅱ组、不同浓度罗格列酮(20、30、40及50μmol/L) 干预组,30 μmol/L罗格列酮干预不同时间组 (6、12、18及24 h).分别采用MTT和流式细胞术观察血管平滑肌细胞增殖和增殖周期的变化;逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定不同干预条件下血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ组吸光值明显高于对照组(P<0.01),20、30、40及50μmol/L罗格列酮干预12 h及30μmol/L 罗格列酮干预6、12、18及24 h后,吸光值明显降低(P<0.05或P<0.01);血管紧张素Ⅱ组增殖指数和S期细胞分数明显高于对照组(P<0.01).随着罗格列酮干预浓度的增加或干预时间的延长,增殖指数、S期细胞分数及处于S期分数均明显下降(P<0.05或P<0.01).与血管紧张素Ⅱ组相比,不同浓度(20、30及50μmol/L)罗格列酮干预12 h及同一浓度(30μmol/L)干预不同时间(6、12及24 h)显著升高血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮至少部分通过上调血管紧张素Ⅱ2型受体表达,阻止血管平滑肌细胞从G0/G1期向S期、G2/M期转化,从而抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移,发挥血管保护作用.     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞骨架的损伤作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ对内皮细胞肌动蛋白骨架的影响及其作用机制。方法血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)处理人脐静脉内皮细胞不同时间(0、5、15、30及60 min)。激光共聚焦显微镜下观察细胞纤维状肌动蛋白骨架的形态学变化。Western blotting检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平。结果正常组内皮细胞的纤维状肌动蛋白主要富集于细胞膜周边,分布均匀。血管紧张素Ⅱ处理组细胞膜周边的纤维状肌动蛋白消失,胞浆中出现密集的应力纤维,细胞间隙形成,且呈明显的时间依赖性。血管紧张素Ⅱ上调p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和热休克蛋白27的磷酸化水平,但对细胞外信号调节激酶无明显影响。p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580阻断血管紧张素Ⅱ引起的纤维状肌动蛋白重排和细胞间隙形成。c-Jun氨基末端激酶特异性抑制剂SP600125则无明显作用。结论血管紧张素Ⅱ通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶/热休克蛋白27信号通路引起内皮细胞的纤维状肌动蛋白重排,导致细胞骨架损伤。     

降钙素基因相关肽抑制血管平滑肌细胞能量代谢的AMP激活蛋白激酶信号通路

目的观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖过程中能量代谢的影响及机制,探索细胞外信号调节激酶和AMP激活蛋白激酶相关信号蛋白在该作用中的地位。方法组织贴块法体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,取第3～10代用于实验。分别用降钙素基因相关肽或/和血管紧张素Ⅱ处理细胞。MTT法及细胞计数法观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;詹纳斯绿B染色观察细胞线粒体形态及体积;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;Western Blotting检测细胞磷酸化AMP激活蛋白激酶的表达。结果降钙素基因相关肽预处理能降低血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05),同时拮抗血管紧张素Ⅱ引起细胞内线粒体肿胀、ATP水平升高,在此过程中伴随细胞内磷酸化AMP激活蛋白激酶表达下调(P<0.05);降钙素基因相关肽受体拮抗剂CGRP8-37能拮抗降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ促增殖和促代谢的抑制作用(P<0.05);细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059能部分拮抗降钙素基因相关肽对磷酸化AMP激活蛋白激酶的抑制作用(P<0.05)。结论降钙素基因相关肽能显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的能量代谢,其细胞内信号通路可能涉及到降钙素基因相关肽/降钙素基因相关肽1型受体-丝裂原细胞外激酶/细胞外信号调节激酶-磷酸化AMP激活蛋白激酶信息传递链。     

细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞衰老中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化。方法制备AngⅡRPMI1640培养液(10-6 mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT测定内皮细胞存活率,β-gal染色、细胞周期分析鉴定细胞衰老,透射电子显微镜观察衰老细胞超微结构。细胞免疫化学染色法分析Bcl-2、Bax蛋白表达变化,Western印迹测定磷酸化ERK1/2水平。结果 AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的〔(81.9±0.04)%,P<0.01)〕;约80%的细胞呈现β-gal阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;透射电子显微镜可见AngⅡ诱导组衰老的细胞体积较大,核形不规则,细胞核染色质浓缩和凝聚。与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低,Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,24 h达到高峰(P<0.01),36 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论ERK1/2信号转导途径参与AngⅡ诱导内皮细胞衰老的发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶的激活

目的　探讨血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶 (proteintyrosinekinase,PTK)活性变化的关系。方法　用不同浓度的血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )刺激培养的VSMCs,利用γ 3 2 P同位素参入法测定细胞胞浆PTK活性变化 ;自制改良的BoydenChamber检测VSMCs迁移。结果　基础状态下可观测到很少量的VSMCs迁移。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 、1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时细胞迁移数分别比对照组升高了3 7、4 6、5 9、6 6和 6 3倍 ,存在组间差异 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 ,1× 10 - 9,1× 10 - 8,1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时胞浆PTK活性分别增高了 1 0、1 7、2 4、3 2和 2 4倍 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。统计分析显示AngⅡ诱导的VSMCs迁移与胞浆PTK激活效应显著正相关 (r=0 96 ,P <0 0 1)。 2 5 μmol L、40 μmol L的PTK抑制剂Genistein均可显著地减少AngⅡ诱导的VSMCs迁移 (与单纯 1× 10 - 7mol LAngⅡ组比较 ,P <0 0 1)。结论　激活酪氨酸激酶信号链可能是AngⅡ诱导VSMCs迁移的胞内信号转导机制之一。     

缺氧—复氧诱导ECV304细胞与中性粒细胞粘附的分子机制

为探讨缺氧-复氧诱导人脐静脉内皮细胞ECV304与中性粒细胞粘附的信号转导机制，以缺氧-复氧诱导粘附为模型，采用比色法检测粘附率，流式细胞术检测ECV304细胞表面粘附分子E选择素、细胞问粘附分子1的表达，Western blot法检测ECV304细胞亲环素A、磷酸化细胞外信号调节激酶、总细胞外信号调节激酶、磷酸化D70核糖体S6激酶、总p70核糖体S6激酶蛋白的表达。结果发现，经缺氧-复氧处理后，ECV304细胞E选择素、细胞间粘附分子1的表达上调，其表面中性粒细胞粘附增加。总细胞外信号调节激酶、总p70核糖体S6激酶蛋白表达无明显改变，亲环素A蛋白表达明显上调，细胞外信号调节激酶和p70核糖体S6激酶显著活化。亲环素A抑制剂环孢霉素A以及亲环素A反义寡核苷酸均明显减轻缺氧-复氧诱导的细胞外信号调节激酶和p70核糖体S6激酶激活，显著减少ECV304细胞与中性粒细胞粘附。p70核糖体S6激酶阻断剂雷帕霉素显著抑制p70核糖体S6激酶的激活，中性粒细胞与ECV304细胞的粘附亦明显减少。细胞外信号调节激酶信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV304细胞与中性粒细胞粘附。结果提示，亲环素A-细胞外信号调节激酶-p70核糖体S6激酶信号通路介导缺氧-复氧诱导的ECV304细胞与中性粒细胞粘附。     

Small-molecule therapeutics in rheumatoid arthritis: Scientific rationale,efficacy and safety

Rheumatoid arthritis (RA) remains a formidable clinical challenge. This is despite remarkable recent advances in our understanding of pathogenesis and the introduction of a variety of novel agents, particularly biologic therapeutics that are potent inhibitors of extracellular immune pathways. Whereas the latter have brought substantial improvements in efficacy and thus outcomes, there remain significant numbers of non- or partial responders to current standard of care. The discovery of key intracellular pathways, particularly kinases that subserve the function of these pivotal cytokine and immune cell receptors implicated in RA pathogenesis, has facilitated the advent of a new phase of RA drug development. Thus, a range of kinase inhibitors has entered clinical trials and one agent has been licenced for use in some regions. Herein we summarise the chequered history of kinase inhibitor development in RA, describing successes and failures alike, and thereafter examine future trends in this exciting field.     

RKIP和MMP-9在结直肠癌中的研究进展

Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族成员之一,可抑制肿瘤细胞转移,与肿瘤的发生、发展密切相关。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是一种能降解细胞外基质的内肽酶,在肿瘤侵袭、转移过程中发挥重要作用。本文就RKIP和MMP-9在结直肠癌中的研究进展作一综述。     

酪氨酸激酶和蛋白激酶C参与高铁血红素诱导的抗大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的研究酪氨酸激酶和蛋白激酶C参与高铁血红素诱导血红素氧合酶1在对抗心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法离体大鼠心脏行Langendorff灌流,给予30min缺血和2h再灌注,观察心室收缩功能、乳酸脱氢酶、肌酸激酶和心肌梗死面积等指标。结果腹腔注射高铁血红素24h后,可明显改善缺血再灌注心脏的收缩功能,减少再灌注期乳酸脱氢酶和肌酸激酶释放,缩小心肌梗死面积。在腹腔注射高铁血红素前给予酪氨酸激酶抑制剂Genistein和蛋白激酶C抑制剂Chelerythrine可阻断高铁血红素引起的心肌梗死面积缩小和心功能的改善。结论高铁血红素可诱导血红素氧合酶1活性增加并对抗心肌缺血再灌注损伤,其作用与酪氨酸激酶和蛋白激酶C的激活有关。     

心脏营养素1对培养的心肌细胞心房钠尿肽mRNA表达的影响及机制

目的观察心脏营养素1在诱导培养心肌细胞心房钠尿肽基因表达中的作用及其机制,以进一步明确心脏营养素1诱导心肌肥大的作用。方法差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞,利用逆转录聚合酶链反应技术检测心房钠尿肽mRNA表达量。结果(1)在培养的心肌细胞中分别加入10-91、0-8和10-7mol/L心脏营养素1,72h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.18±0.14、1.58±0.20和2.03±0.30,其中10-8和10-7mol/L心脏营养素1与对照组(1.08±0.15)相比有显著性差异,呈剂量依赖性。(2)用10-8mol/L心脏营养素1刺激心肌细胞,24h7、2 h和120 h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.16±0.18、1.47±0.17和1.97±0.24,与同时间段对照组相比,72 h和120 h组有显著性差异,呈明显的时间依赖性。培养120 h与培养72 h相比,差异也有显著性统计学意义(P<0.05)。(3)在心肌细胞培养基中分别加入细胞外信号调节激酶1/2选择性抑制剂PD098059(50μmol/L)和蛋白激酶C抑制剂Calphostin C(10μmol/L),30 min后再加入10-8mol/L心脏营养素1,前者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.94±0.15,与对照组(1.04±0.17)相比有极显著性差异(P<0.01),与单纯心脏营养素1组相比也有显著性差异;后者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.27±0.17,与对照组(1.04±0.17)相比无显著性差异。结论心脏营养素1呈剂量和时间依赖性增加心房钠尿肽mRNA表达的作用,此作用是通过丝裂原激活蛋白激酶信号通路介导而实现的,蛋白激酶C可能不直接参与介导心脏营养素1诱导心肌细胞心房钠尿肽mRNA的表达。     

Ethanol Inhibition of Insulin Signaling in Hepatocellular Carcinoma Cells

Chronic ethanol toxicity impairs liver regeneration, inhibits DNA synthesis, and mutes cellular responses to growth factor stimulation. Previous studies demonstrated that the adverse effects of ethanol are mediated by inhibition of tyrosyi phosphorylation of the insulin receptor and the insulin receptor substrate-type 1 (IRS-1). However, overexpression of IRS-1 leads to increased DNA synthesis and cellular transformation due to constitutive activation of mitogen-activated protein (MAP) kinase. The present study examines the effects of ethanol on insulin signaling through IRS-1 in FOCUS hepatocellular carcinoma cells, which overexpress IRS-1, to determine whether such ceils were resistant to the inhibitory effects of ethanol. The results demonstrated that ethanol treatment (100 mM) caused 30 to 50% reductions in the levels of insulin-stimulated tyrosyi phosphorylation of the insulin receptor β-subunit, tyrosyi phosphorylation of IRS-1, phosphorylation of Erk2, association of phosphatidylinositol-3 kinase with tyrosyl-phosphorylated IRS-1, and MAP kinase and phosphatidylinositol-3 kinase activities. In contrast, ethanol treatment had no effect on epidermal growth factor-stimulated tyrosyi phosphorylation of She. Corresponding with the pronounced inhibition of MAP kinase, ethanol treatment resulted in 30 to 50% reductions in the expression levels of two important insulin-responsive genes: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The findings suggest that, in FOCUS hepatocellular carcinoma cells, which overexpress IRS-1, ethanol treatment substantially inhibits IRS-1 and MAP kinase signaling and growth-associated gene expression, but has no effect on She phosphorylation, which activates p21^ras through an IRS-1 independent pathway.     

Ethanol Attenuates the HFS-Induced, ERK-Mediated LTP in a Dose-Dependent Manner in Rat Striatum

Background: The striatum has been implicated to play a role in the control of voluntary behavior, and striatal synaptic plasticity is involved in instrumental learning. Ethanol is known to alter synaptic plasticity, in turn altering the behavior of human and animals. However, it remains unclear whether the striatum plays a role in the effects of ethanol on the central nervous system. The objective of this investigation was to study the effects of acute perfusion of ethanol on long‐term potentiation (LTP) to elucidate the mechanisms of addictive drugs in the striatum. In addition, we investigated the contribution of intracellular extracellular signal regulated protein kinase (ERK) signaling pathway to corticostriatal LTP induction. Methods: The stimulation evoked population spikes (PS) were recorded from the dorsomedial striatum (DMS) slices of rat using the extracellular recording technique. The LTP in DMS slices was induced by high‐frequency stimulation (HFS). The ERK level of the DMS was assessed with the Western blot technique. Results: U0126, the inhibitor of ERK, eliminated or significantly attenuated the LTP induced by HFS of the PS in the DMS. MK801 and APV, N‐methyl‐d ‐aspartic acid receptor (NMDAR) antagonists, inhibited the induction of striatal LTP, and HFS‐induced ERK activation decreased in the slices treated with MK801 in the DMS. Clinically relevant concentrations of ethanol (22 to 88 mM) dose‐dependently attenuated the HFS‐induced striatal LTP and ERK activation in this brain region. Conclusions: The LTP of the PS in the DMS is, at least partly, mediated by the ERK pathway coupling to NMDARs. Ethanol attenuated the HFS‐induced, ERK‐mediated LTP in a dose‐dependent manner in this brain region. These results indicate that ethanol may change the synaptic plasticity of corticostriatal circuits underlying the learning of goal‐directed instrumental actions, which is mediated by an intracellular ERK signaling pathway associated with NMDARs.     

SP600125对1型糖尿病小鼠颈动脉内皮功能及单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125对1型糖尿病小鼠颈动脉内皮功能及单核细胞趋化蛋白1表达的影响。方法本研究分5组。第1组为C57BL/6野生型雄性小鼠,喂养8周;第2组为INS2AK ITA雄性小鼠,每日腹腔注射生理盐水50μL,共8周;第3、4、5组为INS2AK ITA雄性小鼠,每日各腹腔注射SP600125 10、20和30 mg/kg;连续8周。8周后麻醉处死动物,取静脉血检测血清髓过氧化物酶、丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合酶;取双侧颈总动脉分别行凝胶迁移或电泳迁移率实验检测颈动脉信号转导子和转录激活子1活性,行W estern b lot检测p-JNK、JNK、单核细胞趋化蛋白1蛋白表达,行免疫组化检测颈动脉内皮单核细胞趋化蛋白1表达。结果与野生型雄性小鼠相比,1型糖尿病小鼠血清髓过氧化物酶、丙二醛明显增高,而血清一氧化氮合酶、一氧化氮明显减低(P<0.01)。给予1型糖尿病小鼠SP600125不同剂量干预后,髓过氧化物酶浓度较1型糖尿病组明显减低,而一氧化氮、一氧化氮合酶浓度明显增高,且SP600125剂量越高,一氧化氮、一氧化氮合酶浓度增加越明显(P<0.05)。...     

Leads for antitubercular compounds from kinase inhibitor library screens

Discovering new drugs to treat tuberculosis more efficiently and to overcome multidrug resistance is a world health priority. To find antimycobacterial scaffolds, we screened a kinase inhibitor library of more than 12,000 compounds using an integrated strategy involving whole cell-based assays with Corynebacterium glutamicum and Mycobacterium tuberculosis, and a target-based assay with the protein kinase PknA. Seventeen "hits" came from the whole cell-based screening approach, from which three displayed minimal inhibitory concentrations (MIC) against M. tuberculosis below 10μM and were non-mutagenic and non-cytotoxic. Two of these hits were specific for M. tuberculosis versus C. glutamicum and none of them was found to inhibit the essential serine/threonine protein kinases, PknA and PknB present in both bacteria. One of the most active hits, VI-18469, had a benzoquinoxaline pharmacophore while another, VI-9376, is structurally related to a new class of antimycobacterial agents, the benzothiazinones (BTZ). Like the BTZ, VI-9376 was shown to act on the essential enzyme decaprenylphosphoryl-β-D-ribose 2'-epimerase, DprE1, required for arabinan synthesis.     

系统性红斑狼疮外周血细胞钙／钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ表达模式的研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）外周血细胞钙／钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）的表达模式。方法采用多次半巢式RT—PCR法,检测31例SLE患和18例健康对照者外周血单个核细胞CaM KⅡα,β,γ,δ亚型的mRNA表达状态及其表达模式。结果SLE患者和健康对照者外周血细胞均不表达CaMKⅡα和B亚型;与对照组比较,SLE患者均优势表达CaMKⅡγ,δ亚型,阳性表达率分别为96．8％和87．1％（P均〈0．05）;CaMKⅡ在外周血细胞主要表达的剪接变异体为γB、γC、γC。结论CaMKⅡγ,δ8亚型在SLE患者外周血细胞表达增加,并呈现部分变异体优势表达,可能参与调节异常钙信号转导。