缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞凋亡

目的:研究缬草波春诱导胃癌细胞凋亡,探讨其诱导凋亡与半胱氨酸酶(Caspase)及生存素(Survivin)mRNA、P53蛋白、Survivin蛋白表达的关系.方法:以100 mg/L的缬草波春作用于加Caspase-3抑制剂、Caspase-8抑制剂、Caspase-9抑制剂和未加Caspases抑制剂培养的MKN-45细胞24,48和72 h,用流式细胞仪分别检测细胞凋亡率;不同浓度的缬草波春(5,10,25,50,100 mg/L)作用MKN-45细胞不同时间(24,48,72 h)后,用tripure提取液提取细胞RNA,用RT-PCR法,检测Survivin mRNA的表达.不同浓度缬草波春(50和100 mg/L)作用MKN-45胃癌细胞株24 h后,用免疫组化的方法,检测P53蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:单用Caspase抑制剂组,作用24,48和72 h对MKN-45细胞凋亡率无明显影响,与对照组比较差异无显著意义.Caspase-3抑制剂、Caspase-9抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h使MKN-45细胞凋亡率高于对照组(24 h:5.73%,5.41% vs 4.38%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 4.35%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 4.54%,P＜0.01),低于缬草波春组(24 h:5.73%,5.41% vs 8.14%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 12.31%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 26.41%,P＜0.01),与对照组及缬草波春组比较差异均有显著意义(P＜0.01).Caspase-8抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h MKN-45细胞凋亡率明显增加,与对照组比较差异有显著意义(8.02% vs 4.38%,P＜0.01;11.05% vs 4.35%,P＜0.01;24.86% vs 4.54%,P＜0.01),与单用缬草波春组比较差异无显著意义.缬草波春降低MKN-45胃癌细胞株Survivin mRNA的表达,并有浓度依赖性和时间依赖性,而且使MKN-45胃癌细胞株P53蛋白表达增加,Survivin蛋白表达降低,均有浓度依赖性.结论:缬草波春可诱导MKN-45细胞凋亡,其作用可部分被Caspase-3,Caspase-9抑制剂所抑制,但不能被Caspase-8抑制剂所抑制.缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞株凋亡与P53蛋白表达提高及Survivin mRNA和Survivin蛋白低表达降低有关.     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡过程中Caspase-3的表达

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用及其诱导凋亡的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将质量浓度为0、200、400、800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)和细胞免疫组织化学方法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果不同浓度(200、400、800μg/ml)五味子多糖作用裸鼠胶质瘤细胞48 h后,与对照组相比较,五味子多糖组培养上清中Caspase-3蛋白表达水显著升高(P<0.01);细胞免疫组化结果显示,200、400、800μg/ml多糖组Caspase-3蛋白表达阳性率均明显升高(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过激活Caspase-3而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

放疗对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨放疗对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。方法采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,检测DNA-LADDER的形成,Western印迹方法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果照射后48h,2、4、6Gy剂量组出现明显DNA降解（梯形结构）,但对照组及8、10Gy剂量组无“梯形结构出现”。Western印迹方法分析发现照射后48h,2、4、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白表达明显增高,与假照射对照组（0Gy）比较,差异具有显著性（P〈0.05,P〈0.01）。结论X射线能在体外诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过激活Caspase-3蛋白表达实现的。     

细胞色素C释放与Caspase-3表达在脊髓损伤后神经元细胞凋亡过程中的作用

目的 探讨细胞色素C(Cyt-C)释放和Caspase-3表达在脊髓损伤(SCI)后神经元细胞凋亡过程中的作用及意义.方法 采用改良Allen's法制备大鼠SCI模型,于损伤后5个时间点取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,原位末端标记法对凋亡细胞进行标记,免疫组化法对Cyt-C释放和Caspase-3表达进行规律性观察.结果 大鼠SCI后8 h凋亡细胞开始出现,3 d达高峰,灰质和白质均有表达;Cyt-C及Caspase-3阳性细胞8 h即有表达,Cyt-C 1 d达高峰,Caspase-3 3 d达高峰,后均逐渐减少;Cyt-C、Caspase-3表达的阳性细胞与TUNEL标记阳性凋亡细胞出现的时限相似.结论 SCI后存在细胞凋亡,Cyt-C释放和Caspase-3表达参与了SCI细胞凋亡的调节.     

小牛血清去蛋白注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-12表达的影响

目的 探讨小牛血清去蛋白注射液(DCSI)对脑缺血再灌注后大鼠海马Caspase-12表达的影响.方法 健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组和DCSI组.DCSI组于术前1 w开始给药,每日大鼠尾静脉注射DCSI 80 mg/kg,末次给药5 h后建立脑缺血再灌注模型.分别在脑缺血再灌注后的5个时间点进行神经行为学观察,海马病理学、细胞凋亡、Caspase-12蛋白及mRNA表达指标的检测.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损明显,海马细胞呈明显凋亡表现,Caspase-12蛋白及mRNA表达上调,尤以24h时明显(P＜0.01);DCSI组与模型组相比,功能缺损评分和细胞凋亡相对较轻,Caspase-12蛋白及mRNA表达也相对下凋(P＜0.01,P＜0.05).结论 DCSI对缺血再灌注损伤大鼠大脑具有保护作用,其机制可能与其有效抑制脑组织Caspase-12 mRNA转录水平及蛋白表达、阻断内质网应激启动的凋亡通路有关.     

需肌醇酶1介导的内质网应激在暴发性肝功能衰竭肝细胞凋亡中的作用及其意义

目的 探讨需肌醇酶1(IRE1)介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在暴发性肝功能衰竭中的作用及意义.方法 雄性Wistar大鼠共60只,暴发性肝功能衰竭模型组30只腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)+脂多糖(LPS),对照组30只腹腔注射0.9％氯化钠溶液,应用流式细胞技术观察两组大鼠肝细胞凋亡情况,分别采用免疫组织化学法及RT-PCR法动态观察肝组织中Caspase-12、IRE1蛋白及mRNA表达情况.多个独立样本采用Kruskal-Wallis H检验,同一时间点两两比较采用Mann-Whitney U检验,相关性分析采用秩相关.结果 模型组2、4、8和12h肝细胞凋亡率随着给药时间延长呈上升趋势(x2=25.475,P＜0.01),明显高于对照组(U=0,P＜0.01);模型组随着给药时间的延长肝细胞胞质Caspase-12、IRE1α蛋白表达增多,对照组无表达;模型组Caspase-12、IRE1α mRNA表达随着给药时间的延长而增加,8h达高峰,以后逐渐下降,各时间点的差异均有统计学意义(x2=23.983,x2=24.820;均P＜0.01),明显高于对照组(U =0,P＜0.01);IRE1与Caspase-12、细胞凋亡率均呈正相关(r=0.733,P＜0.01;r=0.715,P＜0.01),Caspase-12与肝细胞凋亡率呈正相关(r=0,586,P＜0.01).结论 IRE1介导的内质网应激肝细胞凋亡与暴发性肝功能衰竭的发生发展密切相关,早期干预内质网应激途径对防治肝功能衰竭可能具有保护作用.     

通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨受损的心肌微血管内皮细胞对大鼠心肌细胞凋亡的影响及通心络的干预作用。方法:制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液:正常心肌微血管内皮细胞(RCMECs)条件培养液,同型半胱氨酸(Hcy)诱导损伤的RCMECs条件培养液和通心络干预的RCMECs条件培养液。将大鼠胚胎H9c2心肌细胞分为4组:(1)正常对照组:弃去原培养基,换为无血清细胞培养基(DMEM);(2)N-CM组:弃去原培养基,换为正常RCMECs条件培养液;(3)H-CM组:弃去原培养基,换为Hcy诱导损伤的RCMECs条件培养液;(4)T-CM组:弃去原培养基,换为通心络干预的RCMECs条件培养液。JC-1试剂检测细胞线粒体膜电位(MMP);流式细胞仪检测细胞活性氧簇(ROS)水平;活细胞成像系统动态观察各组心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞色素-C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞白血病淋巴瘤-2相关x蛋白(Bax)和B细胞白血病/淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与正常对照组的心肌细胞比较,N-CM组心肌细胞MMP、ROS、Cyt-C蛋白表达及凋亡无明显变化(P0.05);与N-CM组比较,H-CM组心肌细胞MMP降低,ROS生成增加,凋亡增加,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达上调(P均0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P0.01);与H-CM组比较,T-CM组细胞MMP升高,ROS生成减少,凋亡减少,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达下调(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达上调(P0.01)。结论:损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液可诱导心肌细胞凋亡,通心络可抑制该过程。     

艾灸促进胃黏膜细胞HSP70表达上调对细胞凋亡线粒体信号转导途径的影响

目的:探讨艾灸预处理抑制细胞凋亡、保护胃黏膜损伤的机制.方法:32只健康Wister大鼠随机分为4组,即捆绑组(A组)、模型组(B组)、艾灸穴位组(C组)和艾灸非穴组(D组),每组8只.艾灸穴位组和艾灸非穴组大鼠艾灸预处理8 d,捆绑组和模型组大鼠只捆绑,不艾灸.除捆绑组外,其余各组采用无水乙醇灌胃法制备大鼠急性胃黏膜损伤模型.采用Western blot法检测大鼠胃黏膜细胞色素C(Cyt-C)的表达,免疫组织化学方法检测大鼠胃黏膜HSP70、胃黏膜细胞凋亡、凋亡活化因子1 (Apaf-1)、Caspase-9和Caspase-3的表达.结果:与A组相比,B组大鼠胃黏膜HSP70表达,胃黏膜细胞凋亡指数(AI),胞质Cyt-C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3含量明显增加(2.93±0.29vs 2.51±0.22,3.52±0.77vs 2.25±0.53,1.63±0.36vs 0.75±0.23,4.32±0.67vs 3.44±0.86,4.05±1.01vs 3.76±0.82,3.55±0.86vs 2.35±0.71,P＜0.01或0.05).与B组相比,C组大鼠胃黏膜HSP70表达(3.93±0.36)明显增加(P＜0.01),而细胞凋亡指数(1.53±0.45),胞质Cyt-C(0.97±0.26)、Apaf-1(2.244±0.49)、Caspase-9(2.43±0.73)、Caspase-3(1.97±0.61)均显著降低(P＜0.01).与C组相比,D组大鼠胃黏膜HSP70表达(3.35±0.34)显著降低(P＜0.01),而凋亡指数(3.06±0.81),Cyt-C(1.45±0.29),Apaf-1(3.16±0.66),Caspase-9(3.33±0.76),Caspase-3(2.98±0.86),显著升高(P＜0.01或0.05).结论:艾灸通过上调大鼠胃黏膜细胞HSP70表达,继而作用于凋亡线粒体信号转导途径相关靶点,由此抑制胃黏膜细胞凋亡,达到保护胃黏膜损伤的作用,且这种保护作用具有一定的穴位特异性.     

重组蜂毒肽对胶质瘤SHG44细胞的抑制作用及对STAT3、VEGF表达的影响

目的 探讨重组蜂毒肽对胶质瘤SHG44细胞生长的抑制作用及对细胞信号转导和转录活化蛋白3(STAT3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 对人胶质瘤SHG44细胞株进行体外培养后,分为对照组及重组蜂毒肽低、中、高剂量组,治疗组分别给予相应浓度的重组蜂毒肽(20、40、80 mg/L),采用MMT法于24、48、72 h分别测定SHG44细胞的生长情况；并采用Western印迹法测定不同浓度重组蜂毒肽作用72 h后SHG44细胞STAT3及VEGF蛋白表达的情况.结果 与对照组比较,不同浓度的重组蜂毒肽作用于细胞24h后,细胞生长情况无明显变化；但48、72 h后,低、中、高剂量组细胞的生殖活性均有不同程度的降低,生长抑制率增高(P＜0.01,P＜0.05)；同时,中、高剂量重组蜂毒肽作用72 h后,胶质瘤细胞的STAT3、VEGF蛋白表达水平均有不同程度的降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 重组蜂毒肽对SHG44胶质瘤细胞的生长和STAT3、VEGF蛋白的表达均有明显的抑制作用,因此重组蜂毒肽可能通过抑制STAT3、VEGF的表达来抑制胶质瘤的生长.     

红花对AngⅡ诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞凋亡和Caspase-3表达的影响

目的 观察中药红花对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠动脉平滑肌细胞增殖和Caspase-3表达的影响.方法 培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,将经3次传代生长良好的大鼠平滑肌细胞用无血清的DMEM/F-12培养基培养24h,随机分为模型组、红花组、DMSO对照组、空白对照组.模型组、红花组均加AngⅡ、DMSO,同时红花组加入红花,DMSO组仅加入DMSO,空白对照组加入等剂量培养基;采用原位末端标记技术检测凋亡细胞,免疫组化法检测Caspase-3表达.结果 模型组、红花组、DMSO对照组、空白对照组细胞凋亡率分别为4.44％ ±1.81％、19.94％ ±3.92％、3.96％±1.77％、0,红花组与其他三组比较,P均＜0.01,模型组、DMSO对照组与空白对照组比较,P均＜0.05.模型组、红花组、DMSO对照组、空白对照组Caspase-3表达的灰度值分别为134.29±16.86、147.87±12.43、136.20±15.21、130.19±14.32,四组间两两比较,P均＞0.05.结论 红花可以显著促进AngⅡ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞凋亡作用,其促进凋亡的途径与Caspase-3蛋白表达无明显关联.     

ClC-3、BK型离子通道与胶质瘤的侵袭性生长关系

目的观察ClC-3与BK离子通道在大鼠胶质瘤细胞中的表达,推测ClC-3与BK在胶质瘤细胞侵袭性生长中的作用。 方法常规建立Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型,随机分为5组（荷瘤模型组、荷瘤模型+ ClC-3阻断剂Chlorotoxin组、荷瘤模型+BK阻断剂Iberiotoxin组、假手术组及空白对照组）,免疫组织化学技术检测ClC-3与BK在荷瘤动物模型中的表达情况,并进一步观察荷瘤动物在分别给予相应离子通道特异性阻滞剂后各个时间点（7、14、21 d）成瘤体积的变化情况。 结果C6胶质瘤系高度表达ClC-3离子通道,而BK离子通道在该系中的表达相对较低;应用Chlorotoxin后荷瘤动物各个时间点成瘤体积与对照组相比显著降低（P<0.05）,而应用Iberiotoxin后荷瘤动物的成瘤体积与对照组相比无显著变化（P>0.05）。 结论ClC-3离子通道在胶质瘤侵袭性生长发挥重要作用,可作为未来治疗胶质瘤的新靶标。     

Inhibition of FGF receptor activity in glioma implanted into the mouse brain using the tetracyclin-regulated expression system

We have investigated growth and vascularization of malignant glioma in mice upon conditional inhibition of fibroblast growth factor (FGF) receptor activity. C6 rat glioma cells were transfected with a dominant-negative fibroblast growth factor receptor-2 (FGFR2-DN) cDNA under the control of a tetracycline-regulated expression promoter (tet off) and implanted in the brain of immunodeficient mice. Magnetic resonance imaging analysis showed a significant decrease in tumor growth 14 days after implantation when FGFR2-DN was expressed compared to control. This size difference disappeared after 20 days. However, after 20 days, tumor and endothelial cells apoptosis were higher in the FGFR2-DN group and consequently angiogenesis was decreased whereas tumor cells were similarly associated with blood vessels at the tumor periphery. Pericyte coverage was not different between the two groups but a higher amount of pericytes not associated with vessels was found in the FGFR2-DN expressing group. This demonstrates, that conditional expression of inhibitor of FGF receptor activity in gliomas implanted in the brain of immunodeficient mice can be achieved efficiently, and that FGFs are major players in glioma development and in glioma angiogenesis.     

缓激肽对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白分布和表达的影响

目的研究缓激肽（BK）对血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白（ZO-1）分布和表达的影响,以及蛋白激酶C（PKC）在BK开放紧密连接中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和BK 5、10、15、30、60 m in组共6组。建立C6大鼠胶质瘤模型,颈动脉给药,应用W estern b lot法检测脑肿瘤微血管上ZO-1和PKC表达水平的变化;应用免疫组织化学法检测脑肿瘤微血管上ZO-1的分布和表达水平变化。结果与对照组相比,BK组紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平显著降低,BK 15 m in组降低最明显（P〈0.01）;BK作用后PKC表达水平明显增加,BK 10 m in组增加最显著（P〈0.01）。结论缓激肽可通过下调ZO-1的表达开放紧密连接,PKC可能是BK开放紧密连接的调节机制之一。     

In vivo expression of insulin-like growth factor-binding protein-2 in human gliomas increases with the tumor grade

Human central nervous system tumors and glioma cell lines highly express the insulin-like growth factor-binding protein (IGFBP)-2. As IGFBP-2 can affect tumor growth, we studied the relationship between IGFBP-2 expression and the malignancy of brain tumors in vivo. To do so, we investigated by immunohistochemistry the accumulation of IGFBP-1, -2, and -3 in 50 human gliomas classified by the WHO Malignancy Scale. Double labeling using anti-CD68 (monocytes/macrophages), antiglial fibrillary acidic protein, and anti-CD3 (T cells) antibodies was performed to further characterize the IGFBP-1, -2, and -3(+) cells. The expression of IGFBP messenger RNAs (mRNAs) was tested by RT-PCR in tumor samples from nine gliomas of different grades and in eight cell lines representing the cellular composition of human glioma. As controls, the accumulation of IGFBP-2 was investigated in normal brain and in the rat C6 glioblastoma model. IGFBP-1 and -3 accumulated in endothelial and macrophage/microglial cells. IGFBP-2(+) macrophage/microglial and glioma cells clustered in the immediate vicinity of focal necrosis of the human gliomas as well as of the rat C6 glioblastoma. The labeling score of IGFBP-1 accumulation in endothelial cells correlated negatively (P: = 0.0229), and that of IGFBP-2 accumulation in glioma cells correlated positively (P: < 0.0006) with the tumor grade of the gliomas. In addition, RT-PCR analysis confirmed mRNA expression of IGFBP-1, -2, and -3 by the gliomas and glial cells. Small amounts of IGFBP-1 and -3 mRNA, but high amounts of IGFBP-2 mRNA, were detectable in macrophage-like and glioma cell lines. The results suggest cell type-specific accumulation of IGFBP-1, -2, and -3 in human glial tumors of the brain. The increase in IGFBP-2 expression with this malignancy suggests a role of IGFBP-2 in the biology of human gliomas.     

Chromic-P32 phosphate treatment of implanted pancreatic carcinoma： Mechanism involved

AIM: To study the effects of chromic-P32 phosphate (32P colloids) interstitial administration in Pc-3 implanted pancreatic carcinoma, and investigate its anticancer mechanism. METHODS: Ninety-eight tumor bearing nude mice were killed at different time points after the injection of 32P colloids to the tumor core with observed radioactivity. The light microscopy, transmission electron microscopy (TEM) and immuno-histochemistry and flow cytometry were used to study the rates of tumor cell necrosis, proliferating cell nuclear antigen index, the micro vessel density (MVD). The changes of the biological response to the lymphatic transported 32P colloids in the inguinal lymph node (ILN) were dynamically observed, and the percentage of tumor cell apoptosis, and Apo2.7, caspase-3, Bcl-2, Bax-related gene expression were observed too. RESULTS: The half-life of effective medication is 13 d after injection of 32P colloids to the tumor stroma, in 1-6 groups, the tumor cell necrosis rates were 20%, 45%, 65%, 70%, 95% and 4%, respectively (F= 4.14-105.36, P<0.01). MVD were 38.5±4.0,28.0±2.9,17.0±2.9,8.8±1.5, 5.7±2.3 and 65.0±5.2 (t=11.9-26.1,P<0.01),respectively. Under TEM fairly differentiated Pc-3 cells were found. Thirty days after medication, tumors were shrunk and dried with scabs detached, and those in control group increased in size prominently with plenty of hypodermic blood vessels. In all animals the ILN were enlarged but in medicated animals they appeared later and smaller than those in control group.The extent of irradiative injury in ILN was positively correlated to the dosage of medication. Typical tumor cell apoptosis could be found under TEM in animals with intra-tumoral injection of low dosed 32P colloids. The peak of apoptosis occurred in 2.96 MBq group and 24 h after irradiation. In the course of irradiation induced apoptosis,the value of Bcl-2/Bax was down regulated; Apo2.7 and caspase-3 protein expression were prominently increased dose dependently. CONCLUSION: 32P colloids intra-tumor injection having prominent anticancer effectiveness may reveal the ability of promoting cell differentiation. The low dose 32P colloids may induce human pancreatic carcinoma Pc-3 implanted tumor cell apoptosis; Apo2.7, caspase-3, Bcl-2 and Bax protein participated in regulating the process of irradiation induced cell apoptosis.     

EGFR抑制剂AG1478对胶质瘤C6细胞增殖及凋亡的影响

[目的]观察表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响.[方法]C6细胞中分别加入5、10、25、50 mol/L的AG1478,作用48 h.用MTT法测算C6细胞生长抑制率,倒置显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞术测算细胞凋亡率.[结果]AG1487能够抑制C6细胞的增殖,其抑制作用呈剂量—效应依赖关系.在50 μmol/L的AGI478作用下,C6细胞变圆、细胞突起减少,贴壁瘤细胞数量明显减少,排列稀疏.25 μmol/L的AG1478作用C6细胞48h,细胞凋亡率显著增加.[结论]EGFR抑制剂AG1478可抑制胶质瘤C6细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中的作用及机制探讨

目的 观察Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡中的作用,并探讨其机制.方法 将U87细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h.用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot法分别检测U87细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白.结果 培养24、48、72、96 h,A组细胞A值分别为0.185±0.007、0.398±0.012、0.735±0.015、1.083±0.031,B组分别为0.102±0.003、0.130±0.004、0.161±0.006、0.194±0.003,C组分别为0.167±0.005、0.265±0.008、0.496±0.011、0.737±0.016,A、B组与C组比较,P均＜0.05.A、B、C组细胞凋亡率分为0.96％±0.17％、26.51％±3.74％、8.76％±1.40％,A、B组与C组比较,P均＜0.05.与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均＜0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均＜0.05).结论 Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hes1、抗凋亡蛋白Bcl-2表达有关.     

人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222表达变化及意义

目的观察人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222的表达变化,探讨其与肿瘤放射敏感性的相关性。方法根据Trizol试剂盒说明书,从体外培养的人胶质瘤细胞系U87、U251、A172、LN229和60例胶质瘤组织(手术切除获得)中提取其总RNA,采用RT-PCR法测定miRNA-221及miRNA-222,以正常脑组织为对照。60例胶质瘤患者术后均予以放疗,治疗后MRI检查随访,分析胶质瘤患者的放疗疗效。采用克隆形成实验测算X线照射后(照射剂量为2 Gy)的胶质瘤细胞存活率(SF),以胃黏膜上皮细胞(ges)为对照。结果与对照组织及细胞相比,胶质瘤组织及细胞中miRNA-221、miRNA-222呈高表达(P<0.05),其中高度恶性胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222均明显高于低度恶性者(P<0.05)。X线照射后胶质瘤细胞SF明显高于ges(P均<0.05),胶质瘤各细胞中miRNA-221、miRNA-222表达量与X线照射后胶质瘤SF呈正相关(r=0.673、0.696,P均<0.01)。胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222高表达的患者较低表达者生存时间短(P均<0.05)。结论人胶质瘤细胞及组织中miRNA-221、miRNA-222均呈高表达。miRNA-221、miRNA-222表达量与胶质瘤细胞的放射抗性呈正相关关系,胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222表达量与患者生存时间呈负相关关系。     

抗脑抗体对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的观察抗脑抗体对脑胶质瘤细胞C6的增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法将C6细胞分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的抗脑抗体,对照组不加抗脑抗体;分别采用MTT法、流式细胞术及Boyden小室测算C6增殖抑制率、细胞凋亡率及穿膜细胞数。结果实验组加抗脑抗体5、10、20、30、400μml处理后,C6增殖抑制率分别为16．3％±4．4％、18．7％±3．2％、22．6％±3．0％、27．7％±1．4％、39．9％±3．3％,对照组为0;实验组加抗脑抗体5、40μg/ml处理后,C6细胞凋亡率分别为17．257％±5．964％、28．677％±6．748％,对照组为6．043％±0．421％;实验组加抗脑抗体5、20、30μg/ml处理后,C6穿膜细胞数分别为（3266．67±251．66）、（7133．33±305．51）、（15000．00±2000．00）个,对照组为（1533．33±152．75）个。实验组各浓度间相比,P均〈0．05;与对照组相比,P均〈0．05。结论抗脑抗体可抑制脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭,并诱导其凋亡。     

缓激肽B2受体在脑胶质瘤患者肿瘤组织中的表达及临床意义

目的 观察脑胶质瘤患者肿瘤组织内缓激肽B2受体表达水平,为临床治疗提供理论依据。方法采用WesternBlot方法测定26例脑胶质瘤患者肿瘤组织（观察组）及3份正常脑组织（对照组）的缓激肽B2受体表达水平（以整合密度表示）,并分析其与肿瘤病理级别之间的关系。结果缓激肽B2受体在对照组无表达;观察组表达水平显著高于对照组（P〈0．01）,病理分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级者表达水平依次升高,两两比较,P均〈0．01。结论缓激肽B2受体在脑胶质瘤患者肿瘤组织中的表达明显升高,且与肿瘤病理分级明显相关;检测缓激肽B2受体表达水平可作为RMP-7临床疗效评估的重要指标。