白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

目的：PCRI地扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌Wolbachia 16S rRNA序列，分析其种系发生关系及传播方式。方法：从单只雌蚊中提取DNA，PCR法扩增16S rRNA序列，扩增产物进行克隆及测序。结果：从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16S rRNA序列，并克隆入pGEM-T载体，测序证明两序列长度分别为897bp.结论：成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列，测序和同源性分析表明，它们之间的同源性为99．9％，提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株易感性的初步观察

了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。 方法 通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。 结果 两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论 白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠乙脑病毒分离株。     

蚊防御素基因的克隆及序列分析

目的克隆我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物,进行PCR和RT-PCR。结果分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段,将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较,显示埃及伊蚊和白纹伊蚊的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性,而中华按蚊的扩增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低,且不具备特征性的6 个半胱氨酸序列。结论克隆出埃及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因,蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。     

蚊防御素基因的克隆及序列分析

目的：克隆是我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法：分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物，进行PCR 和RT－PCR。结果：分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段，将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较，显示埃及伊蚊和白纹伊纹的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性，而中华按蚊的拉增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低，且不具备特征性的6个半胱氨酸序列。结论：克隆出运行及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因，蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。     

两种蚊虫钠通道基因kdr突变点附近序列的研究

目的 分析白纹伊蚊和致倦库蚊钠离子通道基因kdr突变位点附近的核苷酸序列，为进行抗药性监测奠定基础。方法 根据献报道的两种蚊虫钠离子通道基因序列设计引物，分别以白纹伊蚊和致倦库蚊基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得包含击倒抗性突变位点和一个内含子的钠通道基因片段，将其核苷酸序列与蚊虫钠通道基因cDNA序列进行比较，确定内含子的位置及序列。结果 两种蚊虫的内含子序列变异较大，它们在kdr突变位点附近的序列很保守。结论 该内含子序列的变异并不影响用PCR方法检测这两种蚊虫的拟除虫菊酯抗性。     

白纹伊蚊及致倦库蚊对蝙蝠乙型脑炎病毒分离株的易感性分析

摘要：目的了解蝙蝠乙脑病毒分离株GD1和HN2株对白纹伊蚊和致倦库蚊的易感性。方法通过病毒液饲喂法使白纹伊蚊和
致倦库蚊经口感染蝙蝠乙脑病毒GD1株和HN2株,采用TaqMan real-time RT-PCR方法,检测GD1株和HN2株感染白纹伊蚊及
致倦库蚊后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天病毒存在情况与病毒载量的动态变化。结果两株蝙蝠乙脑病毒在感染白纹伊蚊、
致倦库蚊后4~20 d内均能被检测到。Ct值的动态变化规律显示白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染乙脑病毒GD1株和HN2株,但致
倦库蚊的易感性高于白纹伊蚊;两株毒株的毒力可能不同,HN2株毒力大于GD1株。结论白纹伊蚊和致倦库蚊均能感染蝙蝠
乙脑病毒分离株。
     

白纹伊蚊防御素基因的体外扩增及鉴定

目的 克隆白纹伊蚊的防御素基因并对其进行序列分析。方法 提取白纹伊蚊基因组DNA，根据埃及伊蚊防御素基因序列设计合成引物，PCR产物克隆到T载体中进行测序和分析。结果 从白纹伊蚊基因组DNA中扩增出了约375bP的片段，PCR产物经测序后与已发表的埃及伊蚊防御素基因比较，具有很高的同源性。结论 克隆了白纹伊蚊的防御素基因，为下一步蚊虫防御素蛋白的研究莫定了基础。     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6 cDNA片段克隆、鉴定

根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,从白纹伊蚊四龄期活体幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T-A克隆法,将获得的基因片段克隆人pGEM-T easy载体。经限制性内切酶酶切和PCR鉴定证明重组成功。将筛选的阳性克隆经序列测定及同源性分析,表明共获得CYP6家族中9个的新cDNA序列。为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成的分子机制打下基础。     

致倦库蚊Cecropin基因克隆及序列分析

目的:克隆致倦库蚊Cecropins基因序列,并进行生物信息学分析.方法:选取致倦库蚊成虫,提取其DNA并以此为模板,设计一对引物,采用PCR技术扩增出Cecropins基因,应用相关生物信息学软件分析其序列.结果:克隆出致倦库蚊Cecropins基因,并测定其扩增产物序列,经同源对比确认,进行了相关序列分析.结论:获得致倦库蚊Cecropins基因序列,基因长度为259 bp,与尖音库蚊一致性为97%.     

四川省自贡市主要媒介蚊虫密度及其对杀虫剂抗药性监测

目的 了解自贡市媒介蚊虫的种群构成、密度及季节变化规律,并对自贡市致倦库蚊和白纹伊蚊对常见杀虫剂的抗药性测定,为科学选择和使用杀虫剂,防控蚊媒传染病提供科学依据。方法 在全市范围内采集致倦库蚊和白纹伊蚊,经实验室饲养后,采用成蚊接触筒法分别测定试虫对几种常用杀虫剂的抗药性,利用Excel 2010软件对2018—2020年自贡市媒介蚊虫监测数据进行统计分析。结果 2018—2020年自贡市监测点年均蚊密度分别为1.11、10.71、4.81只/（灯·h）,2018—2020年自贡市全年蚊密度季节消长趋势均呈现单峰型,7月最高,不同生境间蚊密度差异明显,牲畜棚蚊密度最高。白纹伊蚊和致倦库蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯、马拉硫磷、杀螟硫磷、毒死蜱、残杀威、噁虫威24 h致死率分别为70.71%和3.85%、26.53%和1.68%、19.79%和1.94%、40.80%和0.81%、97.98%和3.85%、100.00%和7.52%、100.00%和66.34%、96.15%和33.60%、100.00%和71.43%。白纹伊蚊对高效氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯产生抗药性,对马拉硫磷、残杀威产生可疑抗性,对毒死蜱、杀螟硫磷、噁虫威敏感;致倦库蚊对所有杀虫剂均产生不同程度的抗药性。结论 白纹伊蚊、致倦库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂均产生较高抗药性。应加强爱国卫生运动,减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用,轮换使用不同类型的杀虫剂,以延缓抗药性的产生,提高蚊密度控制效果。     

实验室内白纹伊蚊和致倦库蚊养殖方法

通过对实验室内蚊虫饲养器具的设计和饲养条件、方法的优化组合,在室内成功饲养白纹伊蚊和致倦库蚊,根据文献报道方法和平时饲养心得总结形成了一套较为高效、经济和实用的白纹伊蚊和致倦库蚊养殖方法。     

成都双流国际机场2005年6月~2006年5月对疟疾、登革热传染病媒介生物的监测与分析

目的:本文报告了2005年6月~2006年5月,成都双流国际机场对疟疾、登革热传染病媒介生物-蚊虫的监测:采用了电动吸蚊器吸捕室内成蚊和在室外布罐设点容器法采集蚊幼虫,并采取定人、定时、定点、定方法监测蚊密度。结果全年监测共捕获蚊虫11478只,经分类属库蚊亚科,库蚊属,致倦库蚊、三带喙库蚊、贪食库蚊、拟态库蚊;伊蚊属,白蚊伊蚊;阿蚊属,骚扰阿蚊;按蚊亚科,按蚊属,中华按蚊,共计捕获二亚科4属7种。其中优势种为白纹伊蚊占94.28%,致倦库蚊数占3.72%,骚扰阿蚊占0.84%,三带喙库蚊占0.19%,中华按蚊占0.07%,贪食库蚊占0.009%,拟态库蚊占0.009%。不同采集方法蚊种差异很大,布罐监测以白纹伊蚊为优势种,和用电动吸蚊器监测室内以致倦库蚊为优势种。蚊虫季节消长,蚊幼虫季节消长全年最高峰是在6月和9月蚊密度为37%,阳性罐平均为7.94只在1、2月蚊幼密度为0进入越冬期;室内成蚊季节消长,成蚊密度最高峰是6月密度为32.29%只/人工小时,其次是在11月密度为31.56%只/人工小时,最低是3月密度为0.89%只/人工小时,到次年4-5月随气温计回升蚊密度逐渐升高,该机场深入开展爱国卫生运动,加强了科学灭蚊工作,未发现疟疾、登革热蚊媒传染。今后必须坚持科学灭蚊,积极创建国际卫生机场。     

三地理株白纹伊蚊与致倦库蚊贵州株蛋白质分析

目的：比较海南、北京、贵州三地理株白纹伊蚊和贵州株致倦库蚊蛋白质含量的差异。方法：用凯氏定氮法测定羽化后第5天白纹伊蚊和致倦库蚊（雌蚊）蛋白质含量，并比较地理株和种间的差异。结果：海南株蛋白质分别与北京株及贵州株蛋白质有显著差异（P＜0．01），但北京株与贵州株之间无显著差异（P＞0．05）；贵州株和北京株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间无显著差异（P＞0．05）；海南株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间有显著差异（P＞0．01）。结论：不同地理株白纹伊蚊蛋白质含量可有差异，同一地区的不同蚊种之间蛋白质可无差异。     

二氧化碳与BG-lure引诱剂诱蚊效果比较研究

目的 比较BG-trap捕蚊器在现场使用CO₂和BG-lure引诱剂（BG）的诱蚊效果。方法 2020年8—9月,设置2处现场,间隔100 m,每个现场设置2个点位,分别布放1个BG-trap捕蚊器,彼此间隔 5 m。每个点位设置不同流量CO₂及不同数量BG,次日同一现场2个捕蚊装置交换位置。收集各捕蚊器所捕捉的蚊虫,分类和记录捕获的蚊虫种类、性别和捕获数,并进行统计。结果 BG +/ CO₂ -和BG -/ CO₂ +捕获白纹伊蚊密度分别为14只和31只,淡色库蚊分别 2只和16只,差异均有统计学意义（t=-2.675,-4.873,P<0.05）。在BG +条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂ -组的2.6（25/9.5）、12.0（12/1）和3.0（12/4）倍,差异均有统计学意义（t=-4.119,-4.592, -3.284,P<0.01）,提示吸引白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊CO₂更有效;在BG -条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂-组的1.8（18/10）、15.5（15.5/1.0）和2.0（9.0/4.5）倍,差异均有统计学意义（t=-2.868,-5.259,-2.508,P<0.05）;在CO₂ +条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊密度分别是BG -组的1.4 （43.5/31）和0.78（12.5/16.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.943,0.709,P>0.05）;在CO₂ -条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊是BG-组的1.0（14/14）和2.0（2.0/1.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.500,-1.000,P>0.05）;在BG -条件下,添加0、 1和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊密度分别为10只、17.5只和18只,三组差异有统计学意义（F=3.942,P<0.05）,捕获淡色库蚊雌蚊分别为1只、13只和18只,三组差异有统计学意义（F=13.881,P<0.05）,但添加1份和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊和淡色库蚊雌蚊,差异无统计学意义（t=0.112,-0.540,P>0.05）;在CO₂ -条件下,添加0、1和2份BG捕获白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊分别为10只、10只、9.5只和1只、1只、1.5只,三组差异无统计学意义（F=0.120,0.477,P>0.05）。 结论 使用BG-trap捕蚊器监测中,CO₂诱蚊效果优于BG引诱剂,且用100 mL/min流量CO₂能更节省使用成本。     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定

目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。方法 根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。结果 获得了1条长240　bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%～46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为33.3%、32.9%和29.9%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。结论 该序列为CYP6家族中某一成员的结构基因片段。     

从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子

目的筛选登革Ⅱ病毒（DENV-2）识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子。方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总
蛋白,用SDS-12% PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验（VOPBA）筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接
DENV-2分子。结果VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示：幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分
子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子。DEN-2结
合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子。VOPBA检测不同发育
时期致倦库蚊：幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的
多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子。结论35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关。
     

表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试

目的 构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用.方法 分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果.结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性.表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107 cells/mL,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果.当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4:1、1:1和1:4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002).结论 表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果.