钾离子通道阻滞剂4-AP 对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响

目的：检测4-氨基啶（4-AP）对 Tca8113细胞株增殖的影响。方法：采用 CCK-8法检测不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株12、24、48 h 后对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测各组细胞周期变化。采用 SPSS19．0软件对数据进行统计学分析。结果：随着4-AP 浓度的增加和干预时间的延长,Tca8113细胞形态发生改变。在浓度5～100 mmol／L 范围内作用于细胞12～48 h,4-AP 浓度和时间依赖性地抑制了 Tca8113细胞的增殖（P ＜0．01）。不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株24 h后,G0／G1期的细胞所占的比例显著升高（P ＜0．01）;S 期细胞所占的比例显著降低（P ＜0．01）;4-AP 阻滞 Tca8113细胞株于G0／G1期。结论：4-AP 可能通过调控细胞周期抑制 Tca8113细胞株的增殖对细胞株分布有影响。     

EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

PD184352对舌鳞状细胞癌细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的:体外观察PD184352对人舌癌细胞Tca8113细胞增殖及ERK蛋白表达的影响。方法:采用MTT比色试验法观察PD184352对Tca8113细胞增殖的影响,免疫细胞化学观察ERK蛋白的表达。结果:随着PD184352作用浓度和作用时间的增加,其对舌癌细胞增殖抑制率显著增高(P<0.05)。当100μmol/L的PD184352刺激Tca8113细胞72h后,对舌鳞状细胞癌细胞抑制率达到69.2%。加入PD184352后ERK蛋白在舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113中表达降低(P<0.05),随着浓度的增加而更为明显。结论:体外PD184352对Tca8113细胞增殖有抑制作用,该作用可能与及抑制ERK蛋白表达有关。     

岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:观察岩黄连总碱对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度的岩黄连总碱分别处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后的细胞增殖抑制情况,Hochest33258染色及DNA ladder检测细胞凋亡,并用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)原位检测细胞凋亡及细胞凋亡率。结果:岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),且呈现出一定的时间和浓度依赖性;Hochest33258检测发现岩黄连总碱作用48 h后可见凋亡细胞;DNA ladder检测可见凋亡特有的180～200 bp整数倍DNA条带;TUNEL结果显示岩黄连总碱处理组细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。结论:岩黄连总碱能抑制Tca8113细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;同时能诱导Tca8113细胞凋亡,且诱导凋亡的作用也呈时间和浓度依赖性。     

β-胡萝卜素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的 观察β-胡萝卜素对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞的细胞毒性、细胞周期、细胞凋亡以及端粒酶活性的影响.方法 四唑蓝法检测30、 50、 60和70 μmol/L 4种浓度β-胡萝卜素对Tca8113细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察β-胡萝卜素处理后Tca8113细胞周期改变及细胞凋亡,端粒重复片段扩增银染法检测细胞端粒酶活性的变化.结果 从50 μmol/L开始,随β-胡萝卜素浓度的提高,对Tca8113细胞增殖抑制作用越来越强.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞4 d后,抑制率超过50%,细胞生长曲线的"S"形趋于平缓.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞3 d后,流式细胞仪检测未出现亚二倍体的"凋亡峰".与空白对照组相比,实验组S期细胞减少约50%(P<0.05),G0/G1期细胞同时显著增加(P<0.05),G2/M期细胞变化无统计学意义(P>0.05).β-胡萝卜素处理Tca8113细胞后,端粒酶活性显著下调.结论 β-胡萝卜素可以通过减少DNA合成,阻滞细胞于G0/G1期,抑制舌癌Tca8113细胞的增殖,抑制效果随浓度的增加而明显.作用机制可能与下调肿瘤细胞端粒酶活性、导致细胞死亡有关.     

丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及p27Kip1蛋白表达的影响

目的 通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖影响及p27Kip1蛋白表达改变,探讨丁酸钠调控人口腔癌细胞增殖的分子机制.方法 人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞经不同浓度丁酸钠[0 mmol/L(空白对照组),2、4、6、8 mmol/L(4个实验组)]作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白的表达.结果 丁酸钠能够呈时间剂量依赖性抑制Tca8113细胞的增殖,丁酸钠处理后的Tca8113细胞出现了凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0～G1期,丁酸钠2 mmol/L组G0～G1期达(63.2±2.4)%,4 mmol/L组G0～G1期达(77.2±3.8)%,空白对照组G0～G1期达(48.1±2.4)%,P＜0.05;p27Kip1蛋白表达水平明显上调.结论 丁酸钠能够抑制人口腔癌细胞的增殖,该作用可能与p27KiP1蛋白表达上调及G0～G1期细胞周期阻滞有关.     

岩黄连总碱抑制Tca8113细胞及其端粒酶活性的实验研究

目的:研究中草药岩黄连总碱(yanhuanglian total alkalions,YHL-TA)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响及其抗癌机制。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测YHL-TA浓度分别为0.200、0.100、0.050、0.025g/L和空白对照组Tca-8113细胞增殖的情况,同时用以PCR为基础的TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性的改变。所有数据采用SPSS13.0进行统计学分析。结果:岩黄连总碱能明显抑制Tca8113细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050、0.025g/L岩黄连总碱组细胞增殖抑制率分别为(66.0±4.0)%、(57.5±3.2)%、(45.3±3.3)%、(37.9±5.5)%。72h时,0.100、0.050g/L组端粒酶活性低于空白对照组(P<0.05)。结论:岩黄连总碱可以明显抑制Tca8113细胞株的增殖及其端粒酶活性,抑制端粒酶活性可能是岩黄连总碱抗舌癌的机制之一。     

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。     

骨形态发生蛋白-2基因转染对舌癌细胞增殖活性的影响

分别以感染复数(MOI)为0、50、100的腺病毒为载体的BMP-2基因转染体外培养的舌癌Tca8113细胞。采用荧光倒置显微镜观察转染前后Tca8113细胞形态的变化,Western blot法检测Tca8113细胞BMP-2的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Tca8113细胞增殖能力,并绘制生长曲线。结果:MOI为100时转染率最高,转染前后Tca8113细胞形态变化不大,Western blot检测到Tca8113细胞BMP-2的表达,转染后Tca8113细胞的增殖活性降低。结论:腺病毒介导的人BMP-2在体外能够抑制舌癌Tca8113细胞的增殖活性。     

表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞Tca8113的抑制增殖作用

目的:了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞的抑制增殖作用。方法:应用不同浓度(0、50、100、200nmol/L)的AG1487处理培养的舌鳞癌细胞Tca8113,采用MTT方法和流式细胞技术测定AG1487对细胞生长曲线和细胞周期分布的影响。结果:经不同浓度AG1487处理的肿瘤细胞,随抑制剂浓度的增加,其生长曲线逐渐向下移动,即随浓度的增加,抑制细胞增殖的作用逐渐增强。同时,AG1487使细胞周期的分布发生改变,G1期细胞显著增加,而S期细胞则明显减少;AG1487对细胞周期的影响具有明显的时间和剂量依赖关系。结论:表皮生长因子受体抑制剂AG1487可对舌鳞癌细胞产生明显的增殖抑制作用。     

姜黄素和Dickkopf-1联用对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:探讨姜黄素和分泌蛋白DKK1(Dickkopf-1)联用对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:CCK8实验检测0、5、10、20、40、80μmol/L的姜黄素作用于人口腔鳞状细胞癌CAL27、Tca8113、SCC-4细胞24、48、72 h的细胞增殖情况,计算IC50值;实验分为对照组、姜黄素组、Dickkopf-1组、姜黄素+Dickkopf-1组,各组细胞处理48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、CyclinD1蛋白表达。结果:不同浓度的姜黄素作用于CAL27、SCC-4、Tca8113细胞24、48、72 h后的细胞抑制率均显著高于0h时的细胞抑制率,且随着时间延长及浓度增加细胞抑制率增加(P<0.01),根据IC50值选择Tca8113细胞及30μmol/L的姜黄素作为后续研究。结论:姜黄素和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂Dickkopf-1均能抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和促进凋亡,两者联用的效果强于单独用姜黄素或Dickkopf-1。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞增殖的影响

目的研究嗜酸乳杆菌对人舌癌细胞Tca8113增殖及细胞周期的影响。方法体外培养Tca8113细胞,分别将不同稀释度（原液和4、16倍稀释）的嗜酸乳杆菌上清液、灭活菌液和无细胞提取物与Tca8113细胞共培养,采用倒置显微镜观察细胞形态并行细胞计数,磺酰罗丹明B（SRB）法测定细胞增殖率,流式细胞术分析嗜酸乳杆菌各组分对Tca8113细胞增殖及细胞周期的影响,激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）检测细胞内自由基和Ca2+含量。结果嗜酸乳杆菌各组分作用于Tca8113细胞48 h后,在倒置显微镜下观察,细胞由菱形、多角形、铺路石状变为细长形。细胞计数与SRB实验分析：在不同稀释度同一培养时间与不同培养时间同一稀释度培养条件下,嗜酸乳杆菌各组分均可明显抑制Tca8113细胞增殖,抑制力随稀释度增加而降低,随培养时间延长而增强。流式细胞术分析：嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后,细胞增殖指数降低（P<0.01）。CLSM检测：嗜酸乳杆菌各组分作用Tca8113细胞48 h后细胞内自由基和Ca2+含量均升高（P<0.01）。结论嗜酸乳杆菌代谢产物、灭活菌液、无细胞提取物均可抑制Tca8113细胞增殖,可能与菌体及其代谢产物引起细胞内自由基含量增多、Ca2+超载有关。     

加热联合黄体酮对人舌癌耐药细胞株Tca8113/BLM耐药性的影响

目的:研究加热(hyperthermia, HT)联合黄体酮(progresterone, Prog)对人舌癌细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM耐药性的影响.方法:采用MTT法检测加热41 ℃ 1 h后联合Prog对人舌癌亲本细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM化疗药物的敏感性;流式细胞仪(FCM)检测细胞内阿霉素(ADM)浓度聚积以及细胞膜上P-gp和MRP的表达.结果:与黄体酮作用细胞相比,加热41 ℃ 1 h联合2 μmol/L Prog作用细胞后,Tca8113和Tca8113/BLM细胞的IC_50显著下降(P<0.01),且各组之间均有显著差异(P<0.01),ADM浓度聚积在2 种细胞中明显增加(P<0.01),细胞膜上的P-gp 和MPR荧光强度显著下降(P<0.01).结论:加热联合Prog能协同增加细胞内药物浓度的聚积,显著提高细胞对化疗药物BLM的敏感性,其二者协同作用与降低细胞膜上的P-gp和MRP的表达有关.     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。