抗纤灵方对体外培养肾成纤维化细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路干预的实验研究

目的:观察抗纤灵含药血清对大鼠成纤维细胞TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的抑制作用。方法:将抗纤灵方煎至含原药材2g/ml,氯沙坦钾配成含药0.33mg/ml,给大鼠灌胃(正常组给予蒸馏水灌胃),制备抗纤灵血清、氯沙坦钾血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、TGF-β1组、抗纤灵组、抗纤灵组+TGF-β1、氯沙坦钾组和氯沙坦钾+TGF-β1组。以大鼠的成纤维细胞为材料,采用Westernblot法检测大鼠成纤维细胞p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达。结果:加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及氯沙坦钾含药血清可明显抑制其表达。结论:抗纤灵含药血清可以通过抑制大鼠的成纤维细胞TGF-β1的表达,减少细胞外基质p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。     

抗纤灵方对阿霉素肾病大鼠肾纤维化作用机制的研究

目的观察抗纤灵方对阿霉素肾病模型大鼠肾纤维化的作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为7组,每组8只。其中正常组不做处理,假手术组仅于右侧肾切除,注射0.9%NaCl溶液,余下40只SD大鼠均采取右侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制备大鼠阿霉素肾病模型。将造模成功后的大鼠分成模型组,科素亚组,抗纤灵低、中、高剂量组,分别给予相应药物共8周。观察大鼠血清肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)表达,HE染色观察肾组织病理。结果抗纤灵方能抑制模型大鼠α-SMA的表达,并减少FN的生成,差异有统计学意义(P0.05);同时降低24 h蛋白尿,降低血清肌酐、尿素氮,改善肾功能,延缓肾纤维化发展,差异有统计学意义(P0.05);随着抗纤灵剂量增加,其抗纤维化效应更明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗纤灵方能降低24 h尿蛋白定量,改善肾功能,使肾脏病理组织形态学改善,并且呈剂量效应。其机制可能是通过下调α-SMA的表达,抑制FN的生成,从而改善肾纤维化。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠肾功能及肾组织ECM表达的影响

目的:探讨抗纤灵方对5/6肾切除诱导肾纤维化模型大鼠肾功能及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=7),假手术组(n=7),手术组(n=36)。手术组建立5/6肾切除肾纤维化模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg~(-1))及抗纤灵方(21 g·kg~(-1))灌胃治疗,其余正常组、假手术组、模型组都用等体积的生理盐水干预,24周后测定各组肾功能,24 h尿量及24 h尿蛋白定量,免疫组化测定肾脏组织Ⅰ型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(ColⅢ)表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肾脏组织ColⅠ,ColⅢ蛋白表达水平。结果:与正常组和假手术组比较,模型组血肌酐,尿素氮,24 h尿量,24 h尿蛋白定量及肾组织ColⅠ,ColⅢ表达水平均明显升高(P 0. 01);与模型组比较,抗纤灵方组和氯沙坦钾组血肌酐,尿素氮,24 h尿蛋白及肾组织ColⅠ,ColⅢ蛋白表达水平显著下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:抗纤灵方能下调肾脏组织ColⅠ,ColⅢ表达,从而抑制ECM的积聚,发挥延缓肾脏纤维化和保护肾功能的作用。     

抗纤灵对5/6肾切除大鼠骨髓来源的成纤维细胞表型转化的影响

目的观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠骨髓来源的成纤维细胞表型转化的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组以5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,1周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组、福辛普利组和抗纤灵组。各给药组给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,8周后采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法测定各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原和CD45基因及蛋白的表达。结果模型组大鼠表达α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA和CD45mRNA水平较假手术组明显升高（P〈0.001或P〈0.05）,抗纤灵组与模型组比较均明显下降（P〈0.01或P〈0.05）;模型组大鼠表达α-SMA、Ⅰ型胶原和CD45蛋白水平较假手术组明显升高（P〈0.001）,抗纤灵组与模型组比较均显著下降（P〈0.001）。结论抗纤灵可降低Ⅰ型胶原和CD45的表达,抑制骨髓来源的成纤维细胞表型转化,从而延缓肾纤维化进程,保护残肾功能。     

抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾组织纤维化作用机制研究

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及机制研究。方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术。术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组(0.1,0.2,0.4 mg·kg~(-1))及雷帕霉素组(0.16μg·kg~(-1)),各组10只。各组于术后2周分别给予0.5 mL生理盐水、雷帕霉素及抗纤灵煎剂灌胃。治疗8周后处死小鼠,在处死小鼠前1 d收集24 h小便测24 h尿蛋白(UPRO)定量,眼眶采血测血肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取残肾应用免疫荧光法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;系用Western blot法检测肾组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达均有所下降(P0.05)。结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h UPRO定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生,其机制可能与下调α-SMA表达,抑制肾脏Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达相关。     

抗纤灵方对5/6肾切除大鼠肾纤维化及ACE-AngⅡ-AT1R轴的影响

目的:探讨抗纤灵方对SD大鼠肾纤维化及肾素血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)轴的影响。方法:将50只SD大鼠随机分成正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化手术组(n=30)。术后2周,将手术组大鼠随机分成模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组,各组10只。抗纤灵组给予抗纤灵方(21 g·kg~(-1)),氯沙坦钾组给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg~(-1)),其他组给予等体积的生理盐水,每天1次,持续16周。测定生化指标血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理改变;马松(Masson)染色观察肾纤维化程度;免疫组化检测ACE1,AT1R表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定ACE1,AngⅡ,AT1R蛋白表达水平。结果:与正常组和假手术组比较,模型组的血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白均显著增加(P 0. 01);与模型组比较,抗纤灵组及氯沙坦钾组血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白水平均明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01)。HE及Masson染色显示,与模型组相比较,抗纤灵组及氯沙坦钾组肾脏纤维化程度都减轻。Western blot显示抗纤灵组及氯沙坦钾组ACE1,AngⅡ,AT1R明显低于模型组,差异有统计学意义(P 0. 01);免疫组化结果显示,ACE1,AT1R水平显示出与Western blot一样的变化。结论:抗纤灵方可延缓5/6肾切除大鼠肾纤维化的进展,该机制与抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴的激活密切相关。     

抗纤灵方对5/ 6肾切除小鼠p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的影响

目的观察抗纤灵方对慢性肾衰模型小鼠酪氨酸磷酸化蛋白激酶/核转录因子p65(p38MAPK/NF-κBp65)介导的炎症因子的影响。方法 56只C57BL/6J雄性小鼠,随机选取10只作为假手术组,余46只采用5/6肾切除制备慢性肾衰模型,2周后将造模成功的33只小鼠按照肌酐水平分层分为模型组、雷帕霉素组及抗纤灵方组,每组11只。雷帕霉素、抗纤灵方组每日分别给予雷帕霉素(0.13 mg/100 g)及抗纤灵方组(2 g/100 g)各0.5 m L灌胃治疗,模型组及假手术组灌胃等量蒸馏水,连续用药8周后处死小鼠,采用免疫组化法观察中性粒细胞表达水平;应用免疫印迹法(Western blot)及real-time PCR法检测肾脏组织p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组中性粒细胞阳性细胞数增多,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平增高(P0.05,P0.01);与模型组比较,雷帕霉素及抗纤灵方组中性粒细胞阳性细胞数减少,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平降低(P0.05,P0.01)。雷帕霉素除在降低p38MAPK蛋白表达方面优于抗纤灵方组(P0.05)外,余指标比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论抗纤灵方参与p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的调控,对肾纤维化所致的肾衰有一定的改善作用。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

抗纤灵方药物血清对骨髓来源成纤维细胞表型转化的影响

目的探讨抗纤灵方对肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法将抗纤灵方煎至含生药3.2g/ml、福辛普利0.33mg/ml给大鼠灌胃,正常组给予等量蒸馏水灌胃,分别制备抗纤灵方血清、福辛普利血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、转化生长因子-β1(TGF-β1)组、TGF-β1+福辛普利组和TGF-β1+抗纤灵组。体外培养大鼠肾组织骨髓来源的成纤维细胞(FBS),采用酶联免疫吸附法和双重荧光定量法检测骨髓来源的FBS表型转化标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)及其mRNA表达。结果 TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ及α-SMAmRNA、CollagenⅠmRNA表达水平较正常血清组明显增强(P<0.05或P<0.01),TGF-β1+福辛普利组和TGF-β1+抗纤灵组α-SMA、CollagenⅠ及α-SMAmRNA、CollagenⅠmRNA表达水平均低于TGF-β1组(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤灵方药物血清可以通过抑制骨髓来源的FBS的表型转化拮抗RIF。     

抗纤灵方有效单体对5/6肾切除大鼠细胞外基质成分的影响

目的观察抗纤灵方有效单体对5/6肾切除模型大鼠肾功能及细胞外基质成分的影响,为抗肾纤维化有效中药的筛选提供依据。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、大黄酚组、丹参多酚酸A组、齐墩果酸组、氯沙坦钾组。采用手术方法建立大鼠肾纤维化模型,各给药组给予相应药物干预2个月后,观察肾脏病理变化,检测大鼠肾功能水平,并采用实时定量PCR法检测大鼠肾组织的层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(C-Ⅲ)、Ⅰ型胶原(C-Ⅰ)mRNA的表达。结果模型组大鼠尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)显著升高,与正常组比较差异有统计学意义(P0.01);丹参多酚酸A组大鼠SCr、BUN显著下降,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01);丹参多酚酸A组与氯沙坦组比较,BUN明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。各单体组能不同程度降低C-Ⅲ、C-Ⅰ、LN的表达。结论抗纤灵方有效单体可通过降低细胞外基质成分的表达而起到抗纤维化、改善肾功能作用。     

采供血中心输血病人的血液标本的质量控制

对输血前检验的血液标本的严格要求,是安全输血的关键性措施之一,必须严格遵循《临床输血技术规范》,做到标本的唯一性和可追溯性。     

活血化瘀法治疗支气管哮喘

目的：探讨活血化瘀法对支气管哮喘的研究进展。方法：查阅近10年国内外有关文献并进行综述。结果：活血化瘀法在哮喘的发作期、缓解期均有较好的治疗效果。结论：活血化瘀法在哮喘治疗中占有重要地位,是哮喘临床治疗中不可忽视的一治疗大法。     

小檗碱对糖脂调节作用的研究进展

小檗碱（berbefine，BBR）是从毛茛科黄连属植物黄连、黄柏的根茎中提取的异喹啉类生物碱，属季铵类化合物，也称黄连素，具有多种药理学作用，如抗肠道细菌感染、抗肿瘤、抗心律失常、扩张冠状血管等，现代研究认为小檗碱具有良好的降糖、降脂、提高胰岛素敏感性及改善胰岛素抵抗的作用，现就其降脂、降糖方面作用作一综述。     

高血压患者动态血压监测的诊治及应用

目的：进一步认识动态血压监测在高血压诊断和治疗中的作用;意义：使24小时动态血压监测成为临床高血压病确诊、评估、预后和指导评价降压治疗的重要手段之一。     

自拟“血瘀性头痛汤”治疗血瘀型头痛48例观察

目的：探讨中药医疗头痛的途径.方法：血瘀性头痛汤.结果：用于外伤性颅脑损伤,脑出血,脑血栓后遗症及辩证属血瘀范围的一般头痛,总有效率达98.5%.     

小儿连续性血液净化中动态血监测临床护理分析

目的：观察小儿连续性血液净化中动态血监测对于临床疗效的分析。方法：选取2010年1月—2011年1月我市两所医院使用连续性血液净化治疗的42例重症感染的患儿。应用PHILIPSV6多功能监护仪进行动态监测护理。从患儿的血压、血氧饱和度、氧合指数分别进行动态监测。结果：动态血监测可以观察治疗过程中存在低血压以血氧饱和度及氧合指数的变化。结论：不但能对病情演变进行客观判断,且可以有效的指导血管活性药物剂量及补液量、速度进行调整,并维持内环境的稳态,改善患儿的血流动力学,在临床中值得推广。     

运用活血化瘀法治疗小儿哮喘的体会

以中医辨证施治治疗小儿哮喘 ,并认为在传统辨证治疗难以奏效时 ,加用活血化瘀药治疗可取得较好的疗效。     

活血化瘀中药治疗银屑病进展

近十年来,医学界研究发现银屑病与中医的“血瘀证”密切相关,认为银屑病以血瘀为本质,这些研究结果为活血化瘀治疗银屑病提供了理论基础.现将1995-2004年有关以活血化瘀中药为主治疗银屑病的研究进展综述如下.