siRNA干扰LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭的影响及机制

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制胃癌细胞中LOXL2的表达情况,并探讨LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭能力影响及机制.方法 QRTPCR及蛋白印迹(Western blot)技术检测人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1中LOXL2表达;合成针对LOXL2的siRNA,并转染胃癌细胞株BGC823;应用Transwell实验检测BGC823细胞侵袭能力;检测转染前后BGC823侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化.结果 LOXL2在BGC823细胞中的表达明显高于胃上皮细胞株(P<0?.01);与未转染和转染阴性对照质粒组相比转染组胃癌细胞BGC823中LOXL2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),侵袭实验显示LOXL2-siRNA转染组胃癌细胞BGC823穿膜细胞数显著低于阴性对照质粒组和未转染组(P<0.05);转染后BGC823中MMP-2、MMP-9表达均较转染前降低(均P<0.05).结论 抑制胃癌细胞BGC823 LOXL2表达可降低细胞的侵袭能力.     

苦参碱促进胃癌细胞凋亡及对STAT3、Cleaved-caspase3、MMP-2蛋白表达的影响研究

目的　探讨苦参碱对胃癌细胞凋亡的影响及对信号转导与转录活化因子3（STAT3）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Cleaved-caspase 3）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达的影响。方法　以胃癌细胞SGC-7901、BGC823 为研究对象,用0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL浓度的苦参碱作用于胃癌细胞48 h,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况,并计算出半数抑制浓度为1 mg/mL。用1 mg/mL苦参碱作用胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,MTT 检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测苦参碱作用后胃癌细胞的凋亡情况。Western blot 检测苦参碱对胃癌细胞STAT3、Cleaved-caspase 3、MMP-2 蛋白表达的影响。结果　不同浓度（0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL）苦参碱作用于胃癌细胞后,细胞存活率均显著下降。1 mg/mL苦参碱作用于胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h后,细胞增殖均受到抑制,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1 mg/mL苦参碱作用48 h 后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 凋亡率明显增加,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.01）。1 mg/mL苦参碱作用后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 中STAT3 蛋白表达无显著变化（P>0.05）,p-STAT3、MMP-2 蛋白表达明显下降,Cleaved-caspase 3 蛋白表达明显增加,与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论　苦参碱可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞中p-STAT3、MMP-2 蛋白表达,促进Cleaved-caspase 3 蛋白表达。     

抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究

目的研究针对胰岛素基因增强结合蛋白1（ISL1）的小干扰RNA（siRNA）对人胃癌干细胞特性的影响。方法体外合成ISL1的siRNA,转染人胃癌细胞系BGC823和BGC-S,逆转录酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法检测ISL1基因和蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞存活率。结果构建的针对ISL1基因的siRNA能够显著抑制靶基因ISL1 mRNA和ISL1蛋白的表达。转染48h后BGC823和BGC-S细胞的存活率明显下降。结论 siRNA能明显抑制胃癌细胞BGC823和BGC-S的ISL1表达,从而对进一步研究胃癌干细胞奠定了基础。     

胃癌中MTLC基因的表达

为研究MTLC(c-myc target from laryngeal cancer cells)基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞系BGC823生长的影响，用RT—PCR法检测了MTLC mRNA在胃癌组织及配对对照组织中的表达，并将表达载体pcDNA3．1-MTLC用脂质体转染BGC823细胞，G418筛选后手工计数，绘制生长曲线，用TUNEL法检测细胞凋亡。结果表明，15例胃癌组织中有9例(60％)MTLCmRNA表达下调。表达MTLC的BGC823细胞生长速度与对照细胞无明显差异，但细胞凋亡显著增加。结论：MTLC基因在大多数胃癌中表达下调并可促进胃癌细胞凋亡，提示MTLC可能在胃癌发生过程中起重要作用。     

力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖，诱导细胞凋亡，降低细胞VEGF蛋白的表达，抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg·kg^-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。     

大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.     

5-Aza-CdR与低浓度CDDP联合用药对胃癌细胞系生长及DAPK1的影响

目的研究5-Aza-CdR与低浓度CDDP联合用药对胃癌细胞系生长及DAPK1的影响。方法选择CDDP(1×10-6 mol/L)与1×10-6 mol/L的5-Aza-CdR分别处理体外培养的BGC823细胞与SCG7901细胞,5-Aza-CdR与CDDP联合处理体外培养的细胞后,用MTT法检测药物处理后的细胞增殖活性;RT-PCR法检测用药前后细胞中DAPK1的mRNA表达的变化。结果与单独用药组比较,胃癌细胞在药物联合作用组生长增殖活性明显被抑制。联合用药组DAPK-1基因的mRNA表达明显增加。结论 5-Aza-CdR与CDDP联用对胃癌细胞的生长抑制具有协同作用。     

番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白Srebp-1、Caveolin-1表达的影响

目的:研究番茄红素对巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及其相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1(Srebp-1)、小凹蛋白1(Caveolin-1)表达的影响。方法:建立巨噬细胞源性荷脂细胞模型,采用高效液相色谱法考察不同浓度(12.5、25、50μmol/L)番茄红素作用于荷脂细胞24h及25μmol/L番茄红素作用于荷脂细胞不同时间(12、24、48、72h)后细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;蛋白印迹法检测番茄红素(25μmol/L、24h)组及其与Srebp-1蛋白抑制剂ALLN(20μmol/L、24h)联用组对荷脂细胞中Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达的影响。另设立正常巨噬细胞组和荷脂细胞组进行比较。结果:与正常巨噬细胞组比较,荷脂细胞组细胞内TC、FC、CE含量均明显升高,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显减弱(P<0.05);与荷脂细胞组比较,番茄红素组荷脂细胞内TC、FC、CE含量均明显降低且呈一定的浓度和时间依赖性,Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达明显增强(P<0.05);与番茄红素组比较,联用组细胞内Srebp-1、Caveolin-1蛋白表达均明显减弱(P<0.05)。结论:番茄红素能引起巨噬细胞源性荷脂细胞内TC、FC、CE含量降低,且可能与Srebp-1及Caveolin-1蛋白的表达上调有一定关系。     

二烯丙基二硫抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及相关机制

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌SGC7901细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SGC7901细胞迁移与侵袭能力的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS作用SGC7901细胞后MMP-9和TIMP-3表达。结果划痕实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞迁移。Transwell实验结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,穿膜细胞数分别为(31.9±0.46)、(23.5±0.52)个,较未处理组的(51.6±0.68)、(41.3±0.72)个明显减少(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞侵袭能力。RT-PCR结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,MMP-9 mRNA表达明显下调(P<0.05),而TIMP-3 mRNA表达明显上调(P<0.05)。Western blot结果显示,15 mg.L-1DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h、48 h后,MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),而TIMP-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 DADS可抑制人胃癌SGC7901细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP-3有关。