大鼠肝癌早期癌变壮癌基因特点与影像诊断关系的实验研究

目的：探讨大鼠肝癌的癌基因特点与影像诊断的关系。方法：选用SD雄性大鼠40只，以50PPM的二乙基亚硝胺喂水诱癌，分别于6－20周进行MRI、彩超检查，然后与P53原位杂交，H－ras、N－ras、K－ras、免疫组化检测结果对照。结果：诱癌第8周H－ras和N－ras开始有表达，第10周P53和K－ras开始有阳性，12周以后阳性率明显增高。I级癌灶中P53、H－ras、N-ras阳性率达50％－68.75％，II－IV级癌灶为33.33％－55.56％，增生结节P530％，H-ras、N-ras为27.27％－45.45％。MRI检测88.89％的癌灶和68.75％的早期癌灶，明显高于彩超（P＜0.05）。II－IV级癌灶在MRI有典型表现，I级癌灶和增生结节MRI表现有重叠。MRI检测病灶晚于癌基因表达1个月，MRI和彩超检出病灶的癌基因阳性率高于病理检出的病灶，但两者间无显著差别（P＞0.05）。结论：P53、H－ras、N-ras参与早期肝癌癌变过程，定期MRI是检测早期癌变的有效方法，MRI表现结合P53、H－ras、N－ras基因变化能提高早期肝癌癌灶的定性能力。     

PCNA在甲状腺肿瘤中的表达及意义

应用免疫组化技术对18例甲状腺癌包托13例乳头状癌和5例滤泡性癌及20例甲状腺瘤的PCNA表达进行研究，结果发现，PCNA在甲状腺及甲状腺瘤细胞核上的表达，两者表达率分别为77．8％及35％，两者阳性表达率差异有显著性（P〈0．01）。乳头状癌及滤泡性癌PCNA阳性表达率分别为84．6％及80％，两者阳性表达率差异无显著性（P〉0．05），提示PCNA在肿瘤细胞异常增殖过程中起重要作用。     

肝癌组织中肠道病毒表达的初步研究

目的 研究肠道病毒在肝癌及非肝癌组织中的表达。方法：采用增强免疫组化方法检测11例肝细胞性肝癌和6例非肝细胞性肝癌病人的肝脏组织中肠道病毒的表达情况。并比较了肝癌与癌周组织中肠道病毒表达的差异。结果：肝细胞性肝癌组阳性率54．54％，非肝细胞肝癌组阳性率0％，两者之间有显著差异(P=0．043)。11例肝细胞肝癌中，6例癌组织肠道病毒表达阳性，癌周围组织中肠道病毒表达3例阳性，两者之间无显著差异(P=0．387)结论：肝癌病人存在肠道病毒感染。EV感染是以整个肝脏组织为靶器官，与肝癌组织无特殊亲和力。EV与肝硬化无关。     

胚胎肝干细胞癌变实验

背景:目前针对肝癌是起源于成熟肝细胞的去分化还是肝干细胞的成熟受阻这一问题仍存在争议.目的:观察胚胎肝干细胞癌变的可能性.设计、时间和地点:随机对照动物实验,于2006-01/12在中山大学动物实验中心完成.材料:6～8周龄BALB/c雌性小鼠70只,体质量20～25 g,随机分为3组:空白对照组10只、模型组30只、实验组30只.另取孕14 d胎鼠用于制备胚胎肝细胞.方法:3组小鼠麻醉后均行2/3肝切除.模型组诱导肝癌,在饮水中加入100 μg/L二乙基亚硝胺,连续饮用12周.实验组在诱导肝癌的基础上行肝干细胞移植,即分离的胚胎肝细胞经肠系膜静脉注射到肝脏,每只小鼠移植1×106个细胞.空白对照组仅行肝干细胞移植,同时饮正常水.6个月后处死小鼠,制备肝脏标本,取肝癌结节做连续切片进行指标检测.主要观察指标:采用免疫组化或免疫荧光方法检测Y染色体性别决定区域蛋白、甲胎蛋白、胎盘型谷胱苷肽转移酶或细胞角蛋白19的表达,以分析肝癌的细胞来源和特征.结果:6个月后,实验组有8只小鼠成功诱癌,其中7只为肝细胞性肝癌,1只为胆管细胞性肝癌;模型组有7只小鼠成功诱癌,其中6只为肝细胞性肝癌,1只为胆管细胞性肝癌;两组诱癌率、肿瘤病理类型比较均无明显差异(P>0.05).实验组17.1%的肝细胞癌结节Y染色体性别决定区域蛋白染色阳性,胆管细胞癌结节Y染色体性别决定区域蛋白染色均为阴性.肝细胞癌结节表达甲胎蛋白和谷胱苷肽转移酶,而不表达细胞角蛋白19;胆管细胞癌结节不表达甲胎蛋白和谷胱苷肽转移酶,而表达角蛋白19.结论:在诱导肝癌过程中移植的肝干细胞有癌变的潜能,并保持了胚胎肝干细胞未成熟的特征,仍表达谷胱苷肽转移酶和甲胎蛋白.     

肝癌中Survivin表达与PCNA和AFP的关系及意义

目的 :探讨Survivin在原发性肝细胞癌 (HCC)组织中的表达及与PCNA和AFP的关系。方法 :采用Westernblot和RT -PCR检测 4 3例肝癌组织、2 0例癌旁组织和 11例正常肝组织中Survivin蛋白和mRNA的表达情况。免疫组化 (SP法 )检测Sur vivin、PCNA和AFP蛋白的表达情况。结果 :4 3例HCC标本中分别有 30例表达Survivin蛋白 (6 9.8% ) ,除 1例癌旁组织外 ,其它癌旁组织和正常肝组织中未见Survivin蛋白表达。Survivin表达与肝癌的病理分级、临床分期和AFP的表达等无明显相关。Survivin表达与肝癌细胞增殖活性 (PCNA -LI)显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Survivin在肝癌组织中高表达 ,提示Survivin在肝癌的发生、发展过程中起重要作用 ;Survivin的表达与肝癌细胞增殖活性 (PCNA -LI)显著相关 ,提示Survivin可能促进肝癌细胞的恶性增殖     

肾细胞癌VEGF、PCNA表达与CT征象关系的初步研究

目的探讨肾细胞癌相关基因VEGF、PCNA表达与CT征象的关系.方法随机选取经手术切除、病理证实且CT资料完整的肾细胞癌40例和正常肾组织10例,用免疫组化染色(S-P法)检测VEGF、PCNA阳性表达率.结果①VEGF阳性表达率与肿瘤直径,瘤体坏死、液化、囊变,增强程度,边界,肾周脂肪浸润,淋巴结肿大,静脉侵犯,邻近器官侵犯或/和远处转移有关(P＜0.05);②PCNA阳性表达率与肿瘤直径,增强程度,边界,肾周脂肪浸润有关(P＜0.05);而与瘤体内坏死、液化和囊变,淋巴结肿大,静脉侵犯,邻近器官侵犯或/和远处转移无关(P＞0.05);③肿瘤病理分级增加,VEGF、PCNA阳性表达率升高(P＜0.05).结论 RCC的CT表现与VEGF、PCNA的表达存在内在关系,据此可术前评价其生物学行为与恶性程度.     

老年胃癌前期病变的干预治疗分析

目的:研究胃癌前期病变幽门螺杆菌(HP)感染与增殖细胞核抗原(PCNA)、肿瘤基因P53、P21的关系及干预治疗对其影响。方法:针对胃癌前期病变我们采用分子生物学的方法进行老年胃癌前期病变的不同阶段幽门螺杆菌(HP)、PCNA、肿瘤基因P53、P21的检测及根除幽门螺杆菌的治疗,全部病例给予中、西药干预治疗,然后再检测以上指标并对比分析。结果:HP感染与胃癌前期病变有明显相关性,与PCNA、P53、P21过度表达有相关性;根除HP并系统干预治疗后PCNA、P53、P21的表达明显下降。结论:胃癌前期病变早期积极的根除HP并系统的干预治疗对阻断癌前期病变的发展,促使病变逆转有积极作用。     

卵巢肿瘤组织谷胱甘肽S转移酶－π的表达及其临床意义

目的研究卵巢肿瘤组织中谷胱甘肽S转移酶 -π(GST -π)的表达及其临床意义。方法用免疫组化链霉菌素亲生物素过氧化酶法 (S -P法 )测定 10例良性卵巢肿瘤、40例恶性肿瘤组织中GST -π的表达 ,及其与组织学类型、病理分级、临床分期及术前化疗的关系。结果10例良性肿瘤GST -π无阳性表达 ,40例恶性肿瘤阳性表达 2 6例 (6 5 % ) ;GST -π的表达与组织学类型和术前化疗无关系 (P >0 .0 5 )。GST -π阳性表达在低分化癌中占 85 .71% ,高于高、中分化癌 (33.33% ,P <0 .0 1) ;在上皮性肿瘤Ⅰ～Ⅱ期中占 2 0 % ,Ⅲ～Ⅳ期占 71.4% ,有随着分期升高而升高的趋势。GST-π阳性者缓解期短 ,易近期内复发。结论免疫组化测定GST -π在卵巢恶性肿瘤中的表达对判定化疗疗效 ,克服耐药、估计预后具有一定的临床价值。GST -π阳性者属非P -糖蛋白耐药 ,化疗疗效及预后差。     

急诊病人肝脏P53、PCNA的检测及意义

目的：分析急诊创伤病人肝脏结节中P53、PCNA的表达和肝癌的关系。方法：应用免疫组织化学方法,检测88例腹部创伤及急腹症病人肝脏结节中上述两种蛋白的表达,并HE染色病理分类,结果：39例为肝癌组织,P53和PCNA阳性率分别为43．58％和82．05％;33例证实为肝硬变组织,P53和PCNA阳性率分别为39．39％和45．45％;45例为癌旁肝组织,P53和PCNA阳性率分别为25．00％和75．00％;12例为正常肝组织,P53及PCNA阳性率分别为8．38％和75．00％。结论：P53表达异常及细胞及细胞增殖异常与肝脏的早期癌变有关,P53改变可促使肝细胞增殖。P53及PCNA表达改变,可能成为急诊临床（含剖腹探查）病人判定肝脏结节异常增殖及癌变的分子生物学标记。     

二甲基亚硝胺肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子1基因表达的动态变化

目的：观察肝纤维化过程中TIMP－1基因表达的动态变化，探讨肝纤维化的发生发展机理，以及中药复方861的抗纤维化机制。方法：100只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组和复方861预防组。模型组用二甲基亚硝胺（DMN）腹腔内注射诱导大鼠发生肝纤维化，共计6周，第1周注射3次，其它周均注射2次，观察8周；复方861预防组大鼠则在用DMN腹腔注射的同时，每天接受中药灌胃1次，直至实验结束；政党对照组以生理盐水代替DMN腹腔内注射。分别于第1、4、10、17、28、42、56天分批处死动物，取出肝脏，以半定量RT－PCR法检测肝组织中TIMP－1 mRNA。结果：从动态发展来看，正常对照组大鼠肝组织TIMP－1 mRNA的表达水平基本稳定不变；模型组大鼠肝组织TIMP－1 mRNA的表达从第4天开始升高，10天后一直维持高水平表达直至动物实验结束；复方861预防组TIMP－1 mRNA的表达变化不大。从组间比较来看，模型组肝组织TIMP－1 mRNA的表达水平从第4天开始即比正常对照组明显增高，此后升高更显直至实验结束；861预防组从第10天开始比正常对照组有所增高，但比模型组明显低，从28天开始以后则比模型组降低越发显。结论：TIMP－1的表达在肝纤维化的发展过程中逐渐增高。它以抑制纤维胶原降解，因而在促进肝纤维化发展的进程中起重要作用。中药复方861具有抑制TIMP－1表达的作用，这是其抗纤维化的机制之一。     

甲醛熏染模型大鼠肝脏组织增殖细胞核抗原表达与三七复方合剂的干预

背景：甲醛作为一种有毒物质可给人体带来严重的损害,同时又缺少有效的防治方法。目的：观察中药三七复方合剂对甲醛熏染大鼠肝细胞增殖的影响。方法：将SD大鼠随机分成对照组、甲醛组和三七治疗组。对照组不做任何处理;甲醛组每天置于静态熏染箱内行甲醛熏染,连续8周;三七治疗组处理同甲醛组,但自第5周起,每日给予三七复方合剂灌胃1次。结果与结论：苏木精-伊红染色结果显示,甲醛熏染8周甲醛组大鼠肝组织肝小叶形态结构紊乱、肝细胞呈现明显的增殖现象,窦间隙缩窄,而三七治疗组肝组织的形态结构明显恢复。免疫组织化学结果显示,甲醛组大鼠肝组织增殖细胞核抗原阳性细胞数明显多于对照组（P〈0.01）,而三七治疗组与甲醛组相比则明显降低（P〈0.01）。结果证实,三七复方合剂能够降低由甲醛诱发的肝组织增殖细胞核抗原的表达,可有效减缓由甲醛诱发的大鼠肝细胞增殖。     

Preventive effect of JTE-522, a selective cyclooxygenase-2 inhibitor,on DEN-induced hepatocarcinogenesis in rats

Background

Chemopreventive effect of a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor JTE-522 on diethylnitrosamine (DEN)-induced hepatocarcinogenesis was evaluated in Wistar rats.

Methods

Animals in the control group (G1) were injected with phosphate buffered saline (PBS), those in hepatocellular carcinoma (HCC) group (G2) were injected with DEN with regular foods for 14 weeks, and those in the treatment groups were injected with DEN for 14 weeks fed with JTE-522 for 7 (G3) and 14 weeks (G4), respectively. Proliferation and precancerous lesions were evaluated by expression levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and glutathione S-transferase-P (GST-P), respectively by immunohistochemistry and Western blot analysis. Apoptosis and oxidative stress were evaluated by TdT-mediated dUTP-biotin nick-end labeling (TUNEL) and 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine (8-OHdG) staining, respectively.

Results

After 14 weeks of the treatment, HCC was developed in G2, G3, and G4 showing no significant differences in gross appearance and histology of the liver among the three groups. There were no significant differences in the expression levels of PCNA and numbers of TUNEL and 8-OHdG positive cells in the liver among the three groups. However, GST-P positive area was significantly suppressed in G3 and G4 compared to G2.

Conclusion

Our data revealed that JTE-522 had a modest inhibitory effect on hepatocarcinogenesis in rats in a manner independent of induction of apoptosis and inhibition of oxidative stress.     

Effect of Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Astroglial Proliferation and Scar Formation after Focal Cerebral Infarction in Rats

Background:Astrocytes become reactive following many types of CNS injuries.Excessive astrogliosis is detrimental and contributes to neuronal damage.We sought to determine whether inhibition of cell cycle could decrease the proliferation of astroglial cells and therefore reduce excessive gliosis and glial scar formation after focal ischemia.Methods:Cerebral infarction model was induced by photothrombosis method.Rats were examined using MRI,and lesion volumes were estimated on day 3 post-infarction.The expression of glial fibrillary acidic protein(GFAP) and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was observed by immunofluorescence staining.Protein levels for GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 were determined by Western blot analysis from the ischemic and sham animals sacrificed at 3,7,30 days after operation.Results:Cell cycle inhibitor olomoucine significantly suppressed GFAP and PCNA expression and reduced lesion volume after cerebral ischemia.In parallel studies,we found dense astroglial scar in boundary zone of vehicle-treated rats at 7 and 30 days.Olomoucine can markedly attenuate astroglial scar formation.Western blot analysis showed increased protein levels of GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 after ischemia,which was reduced by olomoucine treatment.Conclusion: Our results suggested that astroglial activation,proliferation and subsequently astroglial scar formation could be partially inhibited by regulation of cell cycle.Cell cycle modulation thereby provides a potential promising strategy to treat cerebral ischemia.     

解毒通络保肾法抑制糖尿病肾病炎症发病机制的研究

目的:研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:将实验动物分为正常对照组、DM组、解毒通络保肾胶囊中药实验组和苯那普利阳性对照组。检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、血脂、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量和肾脏肥大指标的变化,应用RT-PCR检测MCP-1mRNA,免疫组化检测肾内纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白、PCNA蛋白、NF-κBp65蛋白、MCP-1蛋白、ED-1蛋白表达水平。结果:中药实验组较DM组血糖水平显著降低(P<0.01),UAER明显减少(P<005),尿素氮和血肌酐水平下降,肾脏肥大指标改善(P<0.01);明显降低AngⅡ含量,PCNA、FN和ColⅣ蛋白表达显著低于DM组(P<001)。RT-PCR结果表明,DM大鼠肾皮质MCP-1mRNA表达升高,中药实验组MCP-1mRNA低于DM组(P<0.05)。结论:解毒通络保肾胶囊对DM肾脏病变有保护作用,其机制可能是通过减少肾组织中AngⅡ含量,下调DM大鼠NF-kB,减少MCP-1表达,从而抑制肾内炎症的反应。     

中药复方861对肝星状细胞的增殖和胶原合成的影响

目的 研究中药复方861对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的肝星状细胞增殖、细胞内钙浓度及胶原合成的影响。方法 体外实验对象为肝星状细胞系(HSC—T6)。细胞增殖采用甲基-^3H胸腺嘧啶核苷(-^3H—TdR)掺人法，细胞内钙浓度测定用Fluo-3／AM(乙酰氧甲基酯)标记后共聚焦显微镜下测定荧光光密度值。培养上清液中I型胶原(CoL—I)用酶联免疫吸附(ELISA)法测定，Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)的浓度用放免法检测。HSC-T6细胞CoL—Ⅰ及Ⅲ型胶原(CoI一Ⅲ)mRNA的水平用RT—PCR方法检测。结果 AngⅡ可促进HSC-T6细胞的增殖和细胞内钙浓度的增加，复方861可阻断这些变化。复方861也可降低HSC—T6细胞CoL—Ⅰ及PⅢP的分泌和CoL—Ⅰ及CoL—Ⅲ mRNA的水平。结论 复方861通过作用于血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抑制肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成，这可能是其抗纤维化的机理之一。     

胃癌组织GST-π基因表达检测及临床意义分析

目的 探讨胃癌组织中多药耐药基因谷胱甘肽S转移酶(GST)-π的表达及临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应检测53例胃癌组织标本和15例正常胃黏膜组织标本GST-π基因的表达,分析其与胃癌病理特征的关系.结果 癌组织GST-π基因相对表达值为0.56±0.27,高于正常胃黏膜组织(0.18±0.13)(t=5.30,P<0.05);不同分化程度胃癌组织GST-π基因表达程度差异具有统计学意义(t=2.67,P＜0.05).结论 GST-π基因高表达可能导致胃癌产生多药耐药性,GST-π检测对制订化疗方案有一定指导意义.     

肿节风对辐射损伤后小型猪腮腺细胞凋亡与增殖的影响

目的:探讨单次15Gy60Coγ射线照射对小型猪腮腺细胞凋亡与增殖的影响以及肿节风对其损伤的防护作用。方法:45只小型猪随机分成空白组、单照组与药照组3个大组,每组分成a、b、c三个平行组。药照组在照射前1周开始给药,空白组与单照组给予等量生理盐水。照射组在麻醉条件下给予15Gy60Coγ射线照射,空白组同等麻醉下予0Gyγ射线照射。a、b、c三个平行组分别于照射后第10天、40天、90天取双侧腮腺,以TUNEL法检测细胞凋亡,以免疫组织化学法检测细胞PCNA的表达。结果:单照组与药照组在各时间点腮腺细胞凋亡率均高于空白组,与空白组相比差异均有统计学意义(P≤0.01);第10天,药照组凋亡率低于单照组,差异有统计学意义(P≤0.01)。单照组与药照组PCNA表达率在各时点均高于空白组,与空白组相比差异均有统计学意义(P≤0.01);而各时点比较,药照组PCNA表达率均高于单照组,差异有统计学意义(P≤0.01)。结论:电离辐射可能通过诱导腮腺细胞凋亡而致使腮腺受损,同时机体可能通过增殖代偿以修复损伤。而使用肿节风有助于降低凋亡率,促进增殖修复。     

原发性肺癌^99Tc^m—MIBI显像与谷胱甘肽S转移酶π及DNA拓朴异构酶Ⅱa表达的关系

目的探讨原发性肺癌^99Tc^m-甲氧异丁基异氰（^99Tc^m-MIBI）显像与肺癌组织中谷胱甘肽s转移酶π（GST-π）、DNA拓扑异构酶IIa（TopoⅡa）表达的关系。方法对34例原发性肺癌患者术前行早期与延迟^99Tc^m-MIBI显像,应用免疫组织化学方法检测术后标本中多药耐药蛋白GST-π、TopoⅡa的表达水平。比较早期摄取比值（EUR）、晚期摄取比值（DUR）及放射性清除指数（WR）与GST-π、TopoⅡa表达的关系。结果^99Tc^m-MIBI早期、延迟显像阳性率分别为89．5％、82．4％,GST-π、TopoⅡa表达阳性率分别为78．5％、61．7％,GST-π、TopoⅡa表达阳性组和阴性组间EUR、DUR、WR差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论^99Tc^m-MIBI显像与肺癌组织中GST-π、TopoⅡa表达无相关性,不具有检测肺癌患者肿瘤组织中GST-π、TopoⅡa表达的价值。     

Cullin-1和Skp2在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达

目的：探讨细胞周期蛋白Cullin-1（Cul-1）和S期激酶相关蛋白2（Skp2）在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达及意义,同时对比它们在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达水平,比较二者的分布情况,找出其差异性及相关关系。方法应用免疫组化方法检测Cul-1和Skp2蛋白在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的表达。结果在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中Cul-1的平均阳性表达率分别为76%、77%、54%;阳性表达值分别为1.63±0.7、1.62±0.68、1.15±0.64, Cul-1在2种鼻咽癌中的表达高于癌前病变,差异有统计学意义（P〈0.05）,2种鼻咽癌之间无差异;Skp2在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的平均阳性表达率为32%、41%、33%,平均阳性表达值分别为0.53±0.49、0.82±0.54、0.72±0.43,无统计学差异。对20例分化型鼻咽癌标本Cul-1、Skp2阳性表达值进行相关关系分析,两者相关性不显著。结论 Cul-1参与了鼻咽癌发生、发展,Skp2则可能参与了鼻咽癌的发生过程,它参与的细胞周期调节可能是鼻咽癌发生的早期事件;两种蛋白因子在细胞周期调控中的关系有待进一步验证。