竹节参总皂苷通过调节TGF-β1/Smad3通路改善衰老大鼠心肌纤维化的作用研究

研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicas,SPJ)对衰老大鼠心肌纤维化的改善作用及作用机制。将18月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只;衰老模型组,SPJ低、高剂量组分别灌胃给予等量的生理盐水,SPJ 10,60 mg·kg^-1·d^-1,每周6次,持续灌胃6个月至24月龄;另取10只6月龄大鼠作为青年对照组。处死动物后,采用HE染色观察各组大鼠心肌形态;Masoon染色观察各组大鼠胶原沉积的变化;RT-PCR法检测各组大鼠心脏组织中胶原相关蛋白COL1α2,COL3α1,肌成纤维细胞标记物α-SMA和基质金属蛋白酶MMP9,MMP2的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,p-Smad3,IL-1β,TNF-α的蛋白表达。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维紊乱程度,减少炎性细胞浸润,降低衰老大鼠胶原蛋白沉积;能明显下调衰老心脏组织中COL1α2,COL3α1,α-SMA和MMP9,MMP2的mRNA表达水平;同时,能有效抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3,TNF-α,IL-1β蛋白的表达量。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维化程度,其作用机制与抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3蛋白表达,降低心肌炎症反应有关。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤大鼠核因子-κB通路及心肌自噬、凋亡的影响

目的观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠核因子(NF)-κB通路及心肌自噬、凋亡的影响,探讨该方抗MI/RI作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)干预组及痰瘀同治组。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min、再灌注2 h复制MI/RI模型。造模前,痰瘀同治组每日予痰瘀同治方水煎液灌胃,其他各组给予生理盐水灌胃,连续3周。RT-PCR检测各组大鼠心肌NF-κB、自噬基因Beclin-1表达,Western blot检测心肌促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌NF-κB、Beclin-1 m RNA及Bax蛋白表达均显著增强,且Bcl-2蛋白降低(均P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能抑制再灌注后NF-κB、Beclin-1 m RNA及Bax蛋白高表达(均P0.01),且作用与PDTC干预组相当(P0.05),痰瘀同治组能显著上调心肌Bcl-2表达,且作用优于PDTC干预组(P0.01)。结论痰瘀同治方通过抑制NF-κB活化,改善心肌细胞凋亡,抑制自噬而达到保护心肌的作用。     

养心康片通过(Akt/AMPK)-mTOR通路抑制心梗后心力衰竭模型兔心肌细胞凋亡的机制

目的:观察养心康片通过[蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated kinase,AMPK)]-乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路对心梗后心力衰竭模型兔心肌细胞凋亡的影响。方法:应用结扎冠脉的方法建立心梗后心力衰竭兔模型,随机分为模型组,养心康组,AMPK抑制剂组(10 mg·kg-1Compound C腹腔注射,每日2次),Akt抑制剂组(10 mg·kg-1casodex灌胃,每日2次)和mTOR抑制剂组(0.5 mg·kg-1rapamycin灌胃,每日2次),并设立正常组,每组5只,共30只。给予养心康片0.51 g·kg-1灌胃,每日1次,正常组和模型组给予等体积的蒸馏水灌胃,共4周。心脏彩超检测心功能,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。结果:与正常组比较,模型组的左室射血分数(LVEF)值降低(P0.01),Bcl-2,Bax蛋白表达量增高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax降低(P0.01),心肌细胞凋亡率升高(P0.01);与模型组比较,养心康组的LVEF值升高(P0.01),Bax蛋白表达量降低(P0.01),Bcl-2/Bax升高(P0.01),心肌细胞凋亡率降低(P0.01)。与抑制剂各组比较,养心康组的LVEF值升高(P0.01),Bcl-2/Bax升高(P0.01),心肌细胞凋亡率降低(P0.01)。结论:养心康片可通过干预(Akt/AMPK)-mTOR通路调控心肌细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平减少心肌细胞凋亡,改善心梗后心衰模型的心脏功能。     

葛根素通过调控AMPK/GSK-3β/β-catenin信号通路缓解糖尿病大鼠心肌损伤北大核心

目的:观察葛根素对糖尿病大鼠心肌损伤的影响,并探讨葛根素对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用。方法:雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、葛根素低剂量(20 mg/kg)组、葛根素高剂量(40 mg/kg)组、葛根素高剂量+Compound C(AMPK抑制剂,1 mg/kg)组,每组15只,除正常对照组外其余各组大鼠均采用1%链脲佐菌素构造糖尿病模型,测定大鼠左心室LVESD、LVEDD、EF、FS;检测大鼠FBG、FINS、HbA1c水平,并计算HOMA-IR;检测大鼠血清CK-MB、cTnⅠ水平;对大鼠心肌组织进行HE染色及Masson染色观察大鼠心肌病理学变化;TUNEL法观察大鼠心肌细胞凋亡;Western Blot法检测大鼠AMPK/GSK-3β/β-catenin通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞形态不规则、排列紊乱、局部肌纤维横纹消失,可见心肌细胞水肿,纤维增生明显,少量心肌细胞变性、坏死,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著升高,EF、FS及心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平和核β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,葛根素各剂量组大鼠心肌损伤现象好转,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著降低,EF、FS及心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平和核β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与葛根素高剂量组比较,葛根素高剂量+Compound C组大鼠心肌损伤加重,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著升高,EF、FS和心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平及核β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:葛根素可通过激活AMPK/GSK-3β/β-catenin信号通路改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗与心肌损伤。     

心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:观测心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:H9c2细胞随机分为对照组、模型组、心肌片低中高剂量组,预给药24h后,建立心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)模型。检测细胞存活率,LDH释放水平,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cyt-C蛋白的表达以及AMPK磷酸化水平。结果:与模型组比较,心肌片提高细胞存活率,减少LDH水平,稳定线粒体膜电位,减少Bax,Caspase-3以及Cyt-C蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。进一步研究发现,这些保护作用被AMPK抑制剂Compound C取消。结论:心肌片能减轻心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路实现的。     

九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤的作用

目的研究九龙藤总黄酮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的影响及作用机制。方法建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,给予不同剂量九龙藤总黄酮(终质量浓度分别50、100、200 mg·L-1)预处理,倒置显微镜下观察心肌细胞形态学变化;酶联免疫法测定肿瘤坏死因子活性;免疫组化方法观察Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白的表达;Annex v-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率。结果与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理能减轻心肌细胞损伤,降低肿瘤坏死因子-α、诱导型一氧化氮合酶、维持内皮型一氧化氮合酶水平,上调Bcl-2、下调Bax、NF-κβ蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡(P<0.01或P<0.05)。结论九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤具有保护作用,其机制可能与调节诱导型一氧化氮合酶、核转录因子-κβ信号通路,上调Bcl-2、下调Bax和核转录因子-κB蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关。     

从内质网应激途径探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用

目的:研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法:将40只18月龄雄性SD大鼠随机分为4组,即自然衰老组及竹节参总皂苷低、中、高剂量组,以6月龄大鼠作为青年对照组,每组10只。竹节参总皂苷低、中、高剂量组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10、30、60 mg/kg的竹节参总皂苷,青年对照组和自然衰老组大鼠灌胃等体积生理盐水。灌胃持续6个月,每周连续灌胃6 d,停药1 d。HE染色观察大脑皮层的形态,TUNEL法检测各组大鼠大脑皮层中细胞凋亡情况,Western blot检测大脑皮层中GRP78、p-JNK、JNK、CHOP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与自然衰老组比较,竹节参总皂苷各剂量组大脑皮层组织形态结构有所改善,且细胞凋亡数量减少;竹节参总皂苷还能显著升高自然衰老组大脑皮层中Bcl-2蛋白表达,抑制GRP78、CHOP、Bax和p-JNK蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,减少脑细胞凋亡有关。     

三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为9月龄组(9M),24月龄组(24M),PNS低、中、高剂量组,每组10只。大鼠从18个月开始,PNS低、中、高剂量组分别灌胃给予PNS 10,30,60 mg·kg^(-1),灌胃至24个月,每周灌胃6 d,周日停1 d,连续灌胃6个月。末次给药并禁食不禁水12 h后,处死大鼠,迅速取出睾丸组织。苏木精-伊红(HE)染色法观察睾丸组织形态学变化,Western Blot检测睾丸组织中P21^(WAF1/CIP1)(P21)、核转录因子(NF-κB)以及下游炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶2(COX2)蛋白的表达和凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE染色观察发现,与9M比较,24M大鼠睾丸生精小管形态结构发生明显变化,生精细胞层数减少,细胞稀疏,各级生精细胞脱落。与24M比较,PNS低、中、高剂量组均能在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与9M比较,24M大鼠睾丸组织P21、NF-κB及其下游炎症因子IL-1β、TNF-α、COX2的表达显著上调(P<0.01),PNS低、中、高剂量组可显著下调其表达(P<0.05,P<0.01)。24M大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax显著升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01),PNS可显著升高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,升高Bcl-2/Bax比值(P<0.05,P<0.01);与9M比较,24M大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多,PNS低、中、高剂量组可明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 PNS能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应,显著减少睾丸生殖细胞凋亡。     

三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为9月龄组(9M),24月龄组(24M),PNS低、中、高剂量组,每组10只。大鼠从18个月开始,PNS低、中、高剂量组分别灌胃给予PNS 10,30,60 mg·kg~(-1),灌胃至24个月,每周灌胃6 d,周日停1 d,连续灌胃6个月。末次给药并禁食不禁水12 h后,处死大鼠,迅速取出睾丸组织。苏木精-伊红(HE)染色法观察睾丸组织形态学变化,Western Blot检测睾丸组织中P21~(WAF1/CIP1)(P21)、核转录因子(NF-κB)以及下游炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶2(COX2)蛋白的表达和凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE染色观察发现,与9M比较,24M大鼠睾丸生精小管形态结构发生明显变化,生精细胞层数减少,细胞稀疏,各级生精细胞脱落。与24M比较,PNS低、中、高剂量组均能在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与9M比较,24M大鼠睾丸组织P21、NF-κB及其下游炎症因子IL-1β、TNF-α、COX2的表达显著上调(P0.01),PNS低、中、高剂量组可显著下调其表达(P0.05,P0.01)。24M大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.01),促凋亡蛋白Bax显著升高(P0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.01),PNS可显著升高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,升高Bcl-2/Bax比值(P0.05,P0.01);与9M比较,24M大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多,PNS低、中、高剂量组可明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 PNS能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应,显著减少睾丸生殖细胞凋亡。     

山精胶囊对心肌缺血大鼠NF-κB信号通路相关凋亡蛋白表达的影响

目的:研究山精胶囊对心肌缺血大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),抗细胞凋亡B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2),促细胞凋亡Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)表达的影响,探讨其对心肌缺血的保护作用和机制。方法:采用冠状动脉结扎法造模,4周后进行心电图检测,提示慢性心肌缺血模型成功,并筛选分组。山精胶囊低、中、高剂量组ig给药剂量分别为283.5,850.5,1 701.0 mg·kg-1;阳性药心安胶囊ig给药剂量为324.0mg·kg-1。假手术组和模型组ig给予同等剂量的0.9%的氯化钠注射液。每日ig给药1次,连续给药10 d。以心电图法观察其对大鼠心电图ST段的影响,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),天冬氨酸转氨酶(AST)的含量,免疫组化法检测心肌组织中NF-κB,Caspase-3,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组ST段显著抬高(P0.05),LDH,CK和AST活性显著升高(P0.05),心肌组织中的NF-κB,Caspase-3,Bax的蛋白表达水平显著增高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型组比较山精胶囊能明显抑制心肌缺血大鼠的ST段抬高,降低血清心肌酶LDH,CK,AST的活性(P0.05),显著降低NF-κB,Caspase-3,Bax蛋白表达(P0.05),提高Bcl-2的蛋白表达(P0.05)。结论:山精胶囊可能是通过调控NF-κB信号通路相关凋亡蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡,减少缺血缺氧对心肌细胞的病理损害,起到对心肌的保护作用。     

烟酸对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2和Fas表达的影响

目的研究大鼠心肌缺血/再灌注损伤时心肌凋亡以及烟酸的干预作用。方法采用结扎左冠状动脉前降支方法制备大鼠缺血/再灌注模型。健康Sprage-Dawley大鼠60只随机分成4组:正常对照组(A组,n=15),心肌缺血/再灌注组(B组,n=15),心肌缺血/再灌注+生理盐水组(C组,n=15),心肌缺血/再灌注+烟酸组(D组,n=15),心电图记录肢体Ⅱ导联ST段的变化。光镜和电镜检测大鼠心肌缺血再灌注损伤形态学凋亡,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。Western Blot方法和RT-PCR方法检测凋亡相关基因蛋白Bax,Bcl-2,Fas的表达。结果B组光镜和电镜可以发现心肌的凋亡,B组心肌凋亡率较A组有显著性差异(P0.05),Bax增高,Bcl-2下降,Bcl-2/Bax下降及Fas升高(P均0.01),C组各项指标与B组比较均无显著性差异。D组的各项指标较B组明显改善,心肌细胞凋亡减少,Bax下降,Bcl-2升高,Bcl-2/Bax升高及Fas下降。结论心肌再灌注损伤引起心肌细胞凋亡增多,Bax增高,Bcl-2下降及Bcl-2/Bax下降,Fas升高;烟酸能够减轻以上变化,说明烟酸对心肌缺血/再灌注损伤有保护作用。     

疏肝活血中药对骨髓间充质干细胞移植心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的观察疏肝活血中药对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植心肌缺血再灌注损伤(IRI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其保护心肌的作用机制。方法制备心肌IRI模型,分离、培养BMSCs,且移植于IRI大鼠,SD大鼠随机分为假手术组、IRI组、BMSCs组、疏肝活血中药+BMSCs组(联合组)。联合组以疏肝活血中药灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水,4周后取心肌组织,采用TUNEL法和免疫组化法检测心肌细胞凋亡及心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与IRI组比较,BMSCs组和联合组心肌细胞凋亡、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.01);与BMSCs组比较,联合组心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论疏肝活血中药对BMSCs移植IRI大鼠心肌细胞凋亡的抑制具有促进作用,进而保护心肌细胞。     

血腑逐瘀胶囊对缺血心肌细胞SIRT1信号转导通路的干预作用

目的:观察血腑逐瘀胶囊对大鼠缺血心肌细胞Sirt1信号通路的干预作用,探讨该中药复方的作用机制。方法:将70只健康成年雌性Wistar大鼠随机分成正常组,假手术组(以蒸馏水10 m L·kg-1灌胃),模型组(以蒸馏水10 m L·kg-1灌胃),血腑逐瘀高、中、低剂量组(0.03,0.02,0.01 g·kg-1),L-NAME组(按2 mg/只腹腔注射),采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)技术检测各组心肌组织沉默信息调节因子1(Sirt1),p53及核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,模型组缺血心肌细胞Sirt1 mRNA表达水平明显降低(P0.05),缺血心肌细胞p53,NF-κB mRNA表达水平增高(P0.05);与模型组比较,血腑逐瘀高、中、低剂量组大鼠缺血心肌细胞Sirt1 mRNA表达水平明显增高(P0.05),血腑逐瘀高剂量组大鼠缺血心肌细胞p53,NF-κB mRNA表达水平明显降低(P0.05)。结论:血腑逐瘀胶囊可延长缺血心肌细胞寿命,其机制可能是通过激活Sirt1信号通路,抑制p53,NF-κB基因的表达而发挥作用。     

鹿茸多肽对缺血动物模型心肌细胞线粒体凋亡相关基因蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨鹿茸多肽对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达蛋白的影响.方法:采用冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌缺血模型.随机分为假手术组,模型组,维生素c阳性对照组和鹿茸多肽高、中、低剂量组,每组10只.造模后灌胃给药21 d,用Bcl-2及Bax表达蛋白包被的酶联免疫试剂盒测定大鼠心肌细胞线粒体中Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果:鹿茸多肽组与模型组比较,Bcl-2蛋白的表达量增加,而Bax蛋白的表达量减少,Bcl-2/Bax比值升高.结论:鹿茸多肽对心肌缺血大鼠有一定的保护作用,其抗心肌凋亡机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白的表达有关.     

山精胶囊对心肌缺血大鼠NF-κB信号通路调控机制探讨

目的:探讨山精胶囊对心肌缺血大鼠能量代谢、氧自由基及细胞凋亡相关基因的作用及其机制。方法:选取Wista大鼠采用冠状动脉结扎法,建立慢性心肌缺血模型。将筛选出来的大鼠随机分为山精胶囊低、中、高剂量组(283.5,850.5,1 701.0 mg·kg~(-1))和阳性药组(心安胶囊324.0 mg·kg~(-1)),假手术组和模型组灌胃给予同等剂量的0.9%的氯化钠注射液,给药10 d。紫外可见分光光度计检测血清及组织中乳酸(LD),游离脂肪酸(NEFA),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),一氧化氮(NO)及三磷酸腺苷酶(ATP)水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织中核转录因子-κB(NF-κB),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LD,NEFA,MDA明显升高(P0.05),NO,Na~+-K~+-ATP,Ca~(2+)-ATP酶,SOD,GSH-Px明显降低(P0.05),心肌NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达明显上调(P0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调(P0.05);与模型组比较,山精胶囊能显著降低LD,NEFA,MDA(P0.05),NO,Na~+-K~+-ATP,Ca~(2+)-ATP酶,SOD,GSH-Px显著升高(P0.05),明显下调NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达(P0.05),明显上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达(P0.05)。结论:山精胶囊可能通过调控NF-κB信号通路,提高心肌缺血大鼠清除氧自由基能力,改善心肌细胞能量代谢,调节凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制了心肌细胞凋亡,减少缺血缺氧对心肌细胞的病理损害,起到保护心肌的作用。     

新加生脉饮对阿霉素所致心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的通过观察新加生脉饮对阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡的逆转和防治作用,为阿霉素心肌损伤的临床治疗奠定实验基础。方法利用阿霉素的心脏毒性诱导心肌细胞凋亡大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分成4组:对照组、阿霉素模型组、卡托普利(10 mg/kg)组、新加生脉饮(3.75 g/kg)组,ig给予相应药物,每日1次,共给药6周。实验过程中观察大鼠的精神、活动、进食、毛色等情况,治疗6周后测定心功能、大鼠左室肥厚指标,HE染色观察心肌病理变化,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测心肌Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠心功能显著降低。与模型组比较,各药物治疗后可不同程度改善大鼠心功能情况,其中新加生脉饮组疗效显著。与对照组比较,模型组大鼠心体比、左室肥厚指数、心肌细胞凋亡指数均明显升高。与模型组比较,卡托普利及新加生脉饮可不同程度地改善大鼠心肌肥厚及心肌细胞凋亡情况。与对照组比较,模型组大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高;与模型组比较,卡托普利及新加生脉饮可不同程度地增加大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平,减低Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结论新加生脉饮能改善心肌细胞凋亡大鼠心功能情况,通过降低心肌细胞中Caspase-3蛋白的表达或抑制其活性,增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达,上调Bcl-2/Bax,从而抑制心肌细胞凋亡。     

三七总皂苷与淫羊藿总黄酮联合对自然衰老大鼠睾丸生殖功能衰退的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)与淫羊藿总黄酮(TFE)联合对自然衰老大鼠睾丸生殖功能衰退的影响,探讨其作用机制。方法将30只18月龄SD大鼠随机分为自然衰老组和PNS+TFE低、高剂量组,每组10只。另取10只2月龄大鼠为青年对照组。PNS+TFE低、高剂量组大鼠分别给予10 mg/kg PNS、TFE和20 mg/kg PNS、TFE灌胃,自然衰老组和青年对照组大鼠给予生理盐水灌胃。每周连续给药6 d,共4个月。末次给药后24 h,大鼠称重后处死,取睾丸组织,称取质量,计算睾丸指数。HE染色观察睾丸组织形态,TUNEL法检测大鼠生殖细胞凋亡,Western blot检测睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。结果与自然衰老组比较,PNS+TFE低、高剂量组衰老大鼠睾丸质量和睾丸指数均明显升高,生精小管组织形态明显改善,睾丸生精细胞凋亡数量明显减少,睾丸组织Bcl-2蛋白表达显著上调,Bax和γ-H2AX蛋白表达显著下调,Bax/Bcl-2比值降低。结论 PNS与TFE联合给药可延缓自然衰老大鼠生殖功能衰退,其机制可能与抑制睾丸生殖细胞的凋亡和DNA损伤有关。     

苦参素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的研究苦参素(OMT)对大鼠心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法120只大鼠随机分为假手术组,模型组,OMT(25、50、100 mg/kg)组和地尔硫(1 mg/kg)组;通过夹闭冠状动脉30 min后松夹的方法制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型;再灌注后立即通过腹腔注射给药治疗(每天1次,疗程7 d),假手术组和模型组给予等体积生理盐水。通过TTC染色分析计算心肌梗死面积,测定心肌组织中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,测定血清中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量,HE染色观察心肌组织病理性形态学变化,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡状况并计算凋亡指数(AI);RT-PCR法测定心肌组织中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法测定心肌组织中Caspase-3、NF-κB蛋白表达。结果经OMT(50、100 mg/kg)治疗7 d能够显著降低心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织梗死面积,改善心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT活性并降低MDA含量,降低血清中AST、CPK、LDH含量,改善心肌组织病变,抑制心肌细胞凋亡、降低AI,上调Bcl-2 mRNA表达、下调Bax mRNA表达,提高Bcl-2/Bax比值,降低心肌组织中Caspase-3、NF-κB蛋白表达;与模型组比较,上述差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 OMT能够降低心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织梗死面积、抑制心肌组织病变和心肌细胞凋亡、改善心功能,提示OMT对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用;作用机制可能与OMT能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,调节凋亡相关基因表达以及降低NF-kB蛋白表达有关。     

天麻素对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠TLR4/NF-κB信号通路影响的研究

目的:探讨天麻素对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠的脑保护作用及其作用机制。方法:72只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、天麻素组、Toll样受体4 (TLR4)激活剂脂多糖(LPS)组、天麻素+LPS组,每组12只。采用腹腔注射毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型。双抗体夹心酶联免疫法检测大鼠血清和海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)水平,TUNEL染色法检测海马组织细胞凋亡数,Western blot分别检测海马组织活化半胱氨酸基天冬氨酸酶-3 (CleavedCaspase-3)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、兔抗大鼠p-核因子-κB亚基p65亲和肽(p-NF-κBp65)和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκB-α)表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠脑电频率显著降低(P<0.05),波幅显著升高(P<0.05);血清和海马组织TNF-α和IL-1β水平,海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4和p-NF-κBp65蛋白明显升高(P<0.05);IL-10水平,Bcl-2和p-IκB-α蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药组、天麻素组和天麻素+LPS大鼠脑电频率显著升高(P<0.05),波幅显著降低(P<0.05),血清和海马组织TNF-α和IL-1β水平,海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4和p-NF-κBp65蛋白明显降低(P<0.05),IL-10水平,Bcl-2和p-IκB-α蛋白表达显著升高(P<0.05);LPS组大鼠脑电频率、血清及海马组织IL-10水平、Bcl-2蛋白显著降低(P<0.05),血清与海马组织TNF-α与IL-1β水平、海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4、p-NF-κBp65和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,天麻素+LPS组大鼠脑电频率显著升高(P<0.05),波幅显著降低(P<0.05);血清及海马组织TNF-α与IL-1β水平、海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4、p-NF-κBp65蛋白表达均明显降低(P<0.05),IL-10水平、Bcl-2及p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:天麻素可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠发挥脑保护作用。     

淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠睾丸细胞凋亡及p-P53、p-P38表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨淫羊藿总黄酮对自然衰老雄性大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响及其延缓睾丸衰老的作用机制。方法:将30只18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组及淫羊藿总黄酮低、高剂量组,每组各10只,10只3月龄SD大鼠作为青年对照组。淫羊藿总黄酮低、高剂量组分别以10、20 mg/kg剂量灌胃给药,同时青年对照组和自然衰老组大鼠均灌胃给予1%羧甲基纤维素钠,共持续给药6个月。HE染色观察各组大鼠睾丸组织形态,TUNEL法检测各组大鼠睾丸细胞凋亡情况,Western Blot检测各组大鼠睾丸组织中Bcl-2、Bax、p-P53、p-P38蛋白表达情况。结果:与自然衰老组大鼠比较,淫羊藿总黄酮低、高剂量组大鼠睾丸的形态结构均有明显改善,且发生凋亡的生殖细胞数明显减少。此外,淫羊藿总黄酮还可显著升高自然衰老组睾丸组织中Bcl-2蛋白表达,显著降低Bax、p-P53、p-P38蛋白表达。结论:淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠睾丸细胞凋亡有较好的保护作用,其机制可能是通过抑制p38活化进而减少P53磷酸化,从而减少睾丸内生殖细胞的凋亡,以延缓睾丸衰老。